“Año del Bicentenario del Perú:

200 años de Independencia”

INFORME PRACTICO

TÍTULO: COLORACIONES: IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO

ESTRUCTURAL DE LA CÉLULA

EAP: INGENIERÍA AMBIENTAL

INTEGRANTES: QUILICHE DÍAZ, ROSMERY

ASIGNATURA: BIOLOGÍA

DOCENTE: ROXANA POITIERS MANTILLA HUARIPATA

Cajamarca, Perú 2021

BIOLOGÍA
I. INTRODUCCIÓN:
Los colorantes son sustancias que tienen la capacidad de transmitir su color a otros
cuerpos, en la Biología son sumamente importantes debido a que nos permite
estudiar las diferentes estructuras a nivel celular. Erlich, clasifica a los colorantes
en dos grupos:

a. Por su origen en:

- Naturales: Son los que derivan de animales y vegetales: Ejm.
Hematoxilina, carmín, tornasol, azafrán, etc.
- Artificiales: Se obtiene por destilación fraccionada de la hulla, se les
conoce también con el nombre de colorantes sintéticos Ejm. Violeta de
genciana

b. Por su constitución o afinidad tintórica:

- Básicos: Fucsina básica, violenta de genciana, Hematoxilina; azul de
metileno, etc.
- Ácidos: Eosina, fucsina ácida, ácido pícrico, etc.
- Neutros: Wright, Leishman, Giemsa, etc.
- Indiferente: Sudan III

En el desarrollo de la presente práctica, se describen dos técnicas básicas de

coloración: simple y doble, utilizadas en el estudio morfológico-estructural de los
organismos a nivel celular, especialmente de bacterias.

Para la coloración simple estaremos utilizando azul de metileno, y otros mientras

que para la doble o compuesta, se emplea más de un colorante, tal es el caso de la
coloración de gram, diferenciándose en gram (+), cuando el yodo del lugol
produce mayor fijación que el violeta de genciana, observándose una coloración
violácea, y gram (-) cuando cede el color violáceo por acción del alcohol acetona,
mostrándose el color rojizo de la safranina.

II. Objetivo:
 Identificar algunas coloraciones y colorantes
 Determinar la importancia de las coloraciones en el estudio estructural de
la célula.
 Diferenciar entre un frotis y una extensión

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 III. MATERIALES Y MÉTODOS:

MATERIALES:

Por la cátedra:
- Microscopios
- Violeta de genciana, lugol, eosina, safranina, azul de metileno, hematoxilina
- Alcohol acetona
- Aceite de cedro

POR EL ALUMNO:
- Mucosa labial
- Sarro dentario
- Sangre
- Lancetas estériles
- Mondadientes
- Equipo mínimo (Individual)

IV. METODOS:

Los pasos generales para una coloración son:

- Extensión o frotis: De acuerdo a la Fig. N° 1 ó Fig. N° 2 se coloca la muestra
en lámina portaobjetos.
- Fijación: Dejando secar la muestra al medio ambiente o con fuego (mechero)
lento
- Tinción: Utilizando el colorante o los colorantes de acuerdo a los que se desea
observar.
- Lavado: Mediante una corriente de agua suave se lava la muestra fijada y
coloreada.
- Secado: Al ambiente o a calor moderado.
- Observación: Para la cual debe tenerse en cuenta que las láminas preparadas
estén totalmente secas, en especial para hacer una observación en inmersión.

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Fig. N° 1: Representación esquemática de: Extensión de una muestra.

Fig. N° 2: Representación esquemática de un frotis.

V. PROCEDIMIENTO:

A. Coloración simple: Aquella que se utiliza un solo colorante

1. Con colorante básico

a. Se extrae una muestra de mucosa labial
b. Se realiza un frotis de la muestra
c. Fijación: Se seca la muestra al medio ambiente o calor moderado.
d. Se agrega 2 gotas de azul de metileno, dejar reposar 5 min.
e. Se lava en agua corriente a chorro lento, se deja secar al medio
f. Se observa y esquematiza a diferentes aumentos.

2. Con colorante neutro

a. Se desinfecta la pulpa del dedo mayor izquierdo con alcohol yodado,
luego con una lanceta estéril realice una punción, descarte la primera
gota de sangre.

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 b. Se realiza un frotis
- Se coloca la gota de sangre en el extremo de una lámina porta objetos
- Se coloca encima de la muestra el borde de otra porta objetos,
formando un ángulo de 45°.
- Luego se observa que la sangre se extiende por todo el borde de la
porta objetos superior, se desliza hacia el otro extremo mediante un
movimiento rápido y firme, tratando de obtener un frotis fino y
uniforme.
- Secar al medio ambiente, luego se cubre la muestra con dos gotas de
colorante Wright y se agrega el doble de gotas de agua.
- Dejar reposar durante 5min
- Se lava con agua, de caño, el exceso de colorante y dejar secar al
medio ambiente o fuego lento
- Se observa la muestra a mayor aumento e inmersión.

B. Coloración compuesta: Es aquella en la que se emplea más de 02

colorantes.
1. Cloración de Gram
- Con ayuda de un mondadientes se extrae una muestra de sarro
dentario
- Se coloca el sarro dentario en la parte central de la porta objetos y se
realiza una extensión con el mondadientes o estilete.
- Fijación: Se deja secar la muestra al medio ambiente o con calor
moderado
- Se coloca sobre la muestra dos gotas de violeta de genciana, dejar en
reposo por 5 min, lavar con agua a chorro lento.
- Se agrega dos gotas de lugol, y se deja reposar por 5 min.
- Se lava en agua de caño a chorro lento.
- Se decolora con alcohol acetona, hasta que ya no desprenda
colorante. - Lavar nuevamente.
- Se agrega 2 o 3 gotas de safranina (contraste), dejar en reposo dos
minutos.
- Lavar y dejar secar al medio ambiente o fuego moderado
- Se observa la muestra a mayor aumento e inmersión.

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 VI. RESULTADOS:
Esquematice a mediano y mayor aumento de células epiteliales con coloración
simple – con colorante básico.

Membrana
celular

Membrana
celular

100x 400xn (color azul)

Esquematice a mayor aumento e inmersión de células sanguíneas con

coloración Neutra.

Citoplasma

Linfocito neut . rofelo Neutrofelo

n

Membrana
plasmática

100x 400x

Esquematice bacterias en sarro dentario con coloración compuesta: Coloración

de Gram

Núcleo
Núcleo

100x 400x

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 VII. DISCUSIÓN:
Se hará en base al siguiente cuestionario:

1. ¿Qué importancia tiene la utilización de colorantes?

- Intensifican la tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el

colorante. también se pueden utilizar para producir un engrosamiento de
ciertas estructuras celulares externas, como los flagelos, que debido a su
delgadez no podrían ser visualizados de otra forma.

Permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos

para retener (o no) determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga
de la célula y del colorante.

Estos colorantes pueden ser de distintos tipos:

- Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de
las células y las tiñen. Ejemplos: Azul de metileno, Cristal violeta, Safranina.
- Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que
no tiñen las células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa.
Ejemplos: Eosina, Nigrosina.
- Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: Negro
sudán

Por otro lado las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos.
 Simples: Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen
una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se
comportan de forma diferente frente a un colorante.
 Diferenciales: Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta
composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una
tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según
su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia
taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia de
Ziehl-Neelsen.
 Selectivas: Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen
distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos
colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos
meta cromáticos.

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2. Indica las diferencias entre los colorantes naturales y artificiales.
Colorantes naturales Colorantes artificiales o
sintéticos
- Son aquellos que están - Se obtienen mediante una
contenidos en los animales, serie de procesos químicos
Diferencias principalmente insectos o
invertebrados y en las plantas el
color rojo del jitomate; el naranja
de las zanahorias o las naranjas;
el amarillo del mango; el morado
del betabel; o el verde de las
hojas.

3. Considerando la afinidad tintórica de los colorantes ácidos, básicos y neutros:

Qué colorantes usarías:

 Para colorear citoplasma: Se necesitan colorantes neutros. Ejm: Eosina

que tiñe de rosado.
 Para colorear núcleo: Se necesita un colorante básico. Ejm: la
hematoxilina tiñe azul el núcleo.
 Para observar estructuras citoplasmáticas: se necesitan colorantes
ácidos. Ejm: azul de metileno.

4. ¿Qué diferencia encuentras entre una extensión y un frotis?

Extensión Frotis
consiste en La extensión que se realiza
la extensión de una gota sobre un portaobjetos de una
de sangre sobre la muestra o cultivo con
superficie de un objeto de separar lo más
Diferencias portaobjetos o de un posible los microorganismos,
cubreobjetos, con el fin ya que si aparecen agrupados
de analizarla en la preparación es muy difícil
posteriormente al obtener una imagen clara y
microscopio. nítida

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5. Indica algunos colorantes de origen animal.
 COLORANTES NATURALES DE ORIGEN ANIMAL:
Insecto cochinilla (rojo)
Orina de vaca (amarillo Indio)
Insecto laca (rojo, violeta)
Cañadilla Murex brandaris (púrpura)
Pulpo sepida (marrón sepia)

 COLORANTES NATURALES DE ORIGEN VEGETAL:

Catechu o Clutch tree (café)
Gutagamba (amarillo mostaza obscuro)
Raíz de rubhada del Himalaya (amarillo)
Planta Indigofera (azul)
Árbol Kamala (amarillo-naranja, amarillo-dorado)
Planta Consolida Larkspur (amarillo)
Raíz de granza o rubia tinctorum (rojo, rosa, naranja)
Fruto de Myrabolan (amarillo, verde, negro)
Cáscara de Punica granatum (amarillo)

 COLORANTES NATURALES DE ORIGEN MINERAL:

Arsénico (verde)
Arcilla (ámbar)
Cadmio (verde, rojo, amarillo, naranja)
Carbón (negro)
Cromo (amarillo, verde)
Cinabrio (bermellón)
Cobalto (azul)
Cobre (verde, azul, púrpura)
Óxido de hierro]] hidratado (ocre)
Plomo (blanco, amarillo-rojo)
Limonita (siena)
Titanio (blanco, beige, amarillo, negro)
Zinc (blanco)

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6. Indica en que consiste la coloración con hematoxilina – Eosina y los pasos que
se siguen.

- Método de laboratorio común en el que se usan dos tintes llamados

hematoxilina y eosina para observar mejor las diferentes partes de la célula
al microscopio. La hematoxilina tiñe de violeta azulado intenso los
ribosomas, la cromatina (material genético) dentro del núcleo y otras
estructuras. La eosina tiñe de rosa anaranjado o rojizo el citoplasma, la
pared celular, el colágeno, el tejido conjuntivo y otras estructuras que
rodean y sostienen la célula. La tinción con hematoxilina y eosina ayuda a
identificar diferentes tipos de células y tejidos, y a obtener información
importante sobre las características, la forma y la estructura celular de una
muestra de tejido. Se usa para el diagnóstico de enfermedades como el
cáncer. También se llama tinción H y E.

VIII. CONCLUSIONES:

o Con la investigación y la explicación de la profesora he podido identificar

algunos colorantes como, por ejemplo: la Orina de vaca el cual da una

coloración de amarillo indio, también el carbón que es de color negro y
así entre otros, todo estos como son naturales son fácil de encontrar y muy
beneficiarios.
o La coloración es muy importante en el estudio de la estructura de la célula

ya qué nos permite identificar todas las partes de la célula estudiada y

encontrar o descartar algunas enfermedades.

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IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: (Coloqué en orden alfabético la
literatura que utilizó para el desarrollo la discusión

- César Cabezas Sánchez, (2013), Procedimiento de laboratorios.

Recuperado de: http://bvs.minsa.gob.pe/local/MINSA/2660.pdf
- Esther Baltazar Encarnación, (2007), Morfología Celular. Recuperado de:
https://www.emagister.com/uploads_courses/Comunidad_Emagister_690
65_69065.pdf
- Instituto nacional de cáncer, (2016), tinción con hematoxilina y eosina.
Recuperado de:
https://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/diccionarios/diccionario-
cancer/def/tincion-con-hematoxilina-y-eosina
- Jazina Ruiz Hernades,(2017) Uso de colorantes y reactivos en el
procesamiento de muestras. Recuperado de:
https://issuu.com/jazinaruizhernandez/docs/unidad_4._uso_de_colorantes
_y_react
- Viridiana Sal Pér, (2021), Colorantes Naturales. Recuperado de:
https://viridianasalper.com/colorantes-naturales/

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