Biología General Dr.

César Cevallos
Columbus

UNIVERSIDAD NACIONAL “JORGE BASADRE GROHMANN”

FACULTAD DE CC. SS – E.P DE ENFERMERÍA
PRACTICA Nº 04

TÉCNICAS DE COLORACIÓN: OBSERVACIÓN DE CÉULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

I. INTRODUCCIÓN

La Teoría Celular establece que la célula es la unidad morfológica y funcional presente en todo ser vivo. Según el número de
células que posean los organismos estos pueden ser: unicelulares como, por ejemplo: las bacterias y protistas o pluricelulares
como los vegetales, animales y hongos.

Existen dos modelos básicos de células y estas son: procariotas y eucariotas. Las células procarióticas, son estructuralmente
más simples, presentan su material genético concentrado en una región determinada del citoplasma no definida por una
membrana, esta región se denomina “nucleoide”, la mayoría no presenta sistema de endomembranas pero si el organelo
ribosoma. Un ejemplo de estas células encontramos en las bacterias.

Las células eucariotas pueden ser vegetales y animales. Sus características principales son: tener un núcleo rodeado de una
membrana nuclear, citoesqueleto, sistema de endomembranas y organelos.

Para colorear la célula se emplea diferentes técnicas o procedimientos de coloración que emplean colorantes. Los colorantes,
como hemos mencionados, son compuestos orgánicos que portan y trasmiten color. Tiene afinidad particular por sustancias
celulares específicas. Las soluciones empleadas para teñir a las bacterias son generalmente acuosas.

En la presente práctica se emplearán diferentes técnicas de coloración que nos permitirán observar las células procariotas y
eucariotas (células animal y vegetal).

II. OBJETIVO

1. Desarrollar algunas técnicas básicas de preparación de muestras para observación microscópica.

2. Observar al microscopio ejemplos de células eucariotas y procariotas.
3. Reconocer y caracterizar las estructuras básicas que existen en todas las células.

III. MATERIALES

 Microscopios  Láminas portaobjetos  Ron de quemar (alcohol

 Mecheros  Laminillas portaobjetos para mecheros)
 Asa de Kolle  Aceite de inmersión  Pipetas Pasteur
 Set colorantes Gram  Alcohol isopropílico  Guardapolvo
 Colorante Wrigth  Alcohol metílico  Guantes
 Colorantes: Eosina y azul de metileno  Lancetas o agujas N° 21  Gorros
 Solución Salina Fisiológica estériles  Mascarillas
 Solución amortiguadora tamponada  Alcohol de 70 grados  Algodón
(pH a 7.2)  Abatelengua  Fósforos y otros
 Pizetas con agua destilada

IV. PREPARACIÓN DE EXTENDIDOS Y COLORACIÓN

I. ESTUDIO DE LAS CÉLULAS PROCARIAS (BACTERIAS)

Preparación de frotis a partir de una muestra obtenida por raspado faríngeo

 Con un hisopo estéril proceder a tomar una muestra de la región oro faríngeo de un estudiante. Ayudarse con un abate
lengua.
 Extender la muestra en una lámina porta objetos
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 Fijar al calor del mechero o al aire libre

 Proceder a colorear con Gram

I. Coloración de Gram: Se trata de una tinción diferencial muy utilizada que distingue las bacterias por las características de su
pared celular.

1. Rotular convenientemente cada uno de los portaobjetos.

2. Preparar extendidos de los microorganismos indicados por el docente. Tomar material de la colonia elegida, con un ansa
previamente esterilizada a la llama y suspender este material en una gota de agua colocada en la mitad del portaobjetos.
Extender el material sobre toda la superficie del portaobjeto.
3. Fijar con calor pasando el preparado por sobre la llama SIN QUEMARLO.
4. Cubrir el extendido con una solución del colorante cristal violeta. Dejar en contacto 60 segundos.
5. Decantar el colorante. Cubrir con solución de lugol. Dejar en contacto durante 2 minutos.
6. Decolorar con alcohol-acetona (exhaustivamente). Lavar con agua.
7. Cubrir con safranina (colorante básico de contraste). Dejar en contacto 20 segundos. Lavar con agua.
8. Secar y observar al microscopio óptico con objetivo de inmersión.

Estreptococo (G+) Diplocococo (G+) Diplocococo (G-)

Bacilo (G-) Bacilo (G-) Bacilo (G+)

Figura 1. Observación de diferentes células bacterianas (células procariotas). Fuente Propia.

II.
III. ESTUDIO DE CÉLULAS EUCARIAS (CÉLULAS SANGUÍNEAS)

Técnica de coloración Wrigth

Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba.

1. Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el
frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el
portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a
evaporar.
2. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la
formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
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Bacillus anthracis
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3. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple
vista.
4. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.
5. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión.

Figura 2. Izq. Ejemplo de cómo se hace un frotis; al centro: frotis con coloración Giemsa y Wrigth; Der. Representación de un
frotis. (Fuente.https://www.ehu.eus; https://www.franrzmn.com/frotis-sanguineo/; https://www.vivo.colostate.edu).
FIGURA 3. CLASES Y TIPOS DE CÉLULAS SANGUÍNEAS

Resultados:

 Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado.

 El citoplasma de los monocitos presentará una tonalidad azul grisácea con gránulo rojizos bastante finos y sus vacuolas
características. El citoplasma de los linfocitos presentará varias tonalidades azules.
 Los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color púrpura oscuro. Los núcleos de los monocitos de color
púrpura algo más claros (lila).
 Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso. Los gránulos de los basófilos púrpura azulado muy
oscuro. Los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos.
 Las plaquetas toman coloración violeta o púrpura

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Figura 4. Diferentes tipos de leucocitos y sus variables formas en cada tipo de leucocito.
(Fuente. https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com)

IV. CUESTIONARIO

1. Indique cuáles son los componentes del colorante de Wright y como se prepara.
2. ¿Qué soluciones pueden utilizarse como amortiguador para la tinción de Wright y cuál es el pH que debe tener?
3. ¿Qué sucede cuando se evapora el colorante?
4. Establecer las diferencias estructurales entre célula procaria y célula eucaria.
5. ¿En qué estructura bacteriana reside el carácter de ser Gram positivo o Gram negativo? Explique.

Tacna, mayo 2019