Seminario 1: PCR anidada

“Validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y

gag mediante reacción en cadena de la polimerasa anidada en pacientes
pediátricos con infección por Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 y su
confirmación por secuenciación”

Integrantes: Marcela Alvarado, Romina Clavería, Fernando Godoy,

Carla Morales, Teresa Quijada y Valentina Vallejos
Ramo: Laboratorio Biología Molecular y Genética
Docente: Katherine Araya
Introducción
Antecedentes del Problema: A través de la reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) anidada es
posible detectar los dos genes principales del VIH-1: env y gag, pero la especificidad y eficacia de esta
PCR depende en gran medida de los cebadores por lo que la validación de estos es esencial.

Pregunta de Investigación : ¿Los cebadores específicos previamente reportados en la literatura son

útiles para la detección de los genes del VIH-1, env y gag?

Objetivo: Validar los cebadores específicos previamente reportados en la literatura y que se utilizan en
la detección de dos genes principales del VIH-1, env y gag
PCR anidada

● 2 pares de cebadores
● 1era reacción= cebadores
externos
● 2da reacción = cebadores
internos
● Gran especificidad
 Método
PCR anidada

1) Se desnaturaliza a 94º C
● ADNg paciente positivo de VIH-1 2) 55ºC (env) / 50ºC (gag)
3) 72º C en ambos genes

● ADNg de la línea celular 8E5/LAV → 2da ronda, se aplican las

(8E5) mismas condiciones

Purificación de productos
y secuencia automatizada:
-Electroforesis en geles de agarosa
Resultados

Gen env Gen gag

Banda 300 pb 800 pb

Cebadores específicos Sí Sí

Coincide con fragmento de Sí Sí

ADN

Especificidad analítica 100% 100%

Sensibilidad analítica 10 cels/mm3 10 cels/mm3

 Discusión y Conclusión

Las pruebas tradicionales no son ● Se validó los cebadores y se comprobó que

útiles en pacientes pediátricos. Por
esto, la técnica PCR anidada cobra
gran importancia.
Concordancia con otros estudios.
Diferencia explicada por la alta
tasa de mutación del VIH-1.
la técnica tiene un límite.
● La determinación de los genes incide en los
niveles de sobrevida de los pacientes.
● Este estudio puede servir como referencia
adicional.

Se confirma que los cebadores presentan una buena especificidad y eficiencia; y pueden ser
utilizados en la estandarización de pruebas de PCR anidada para el diagnóstico
Bibliografía

● Frango, A., Ramírez, A., Duarte, M., Alejos, M., Valladares, S., Eleizalde, M., Rangel, H., &
Convit, A. (2020). Validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y
gag mediante reacción en cadena de la polimerasa anidada en pacientes pediátricos con
infección por Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 y su confirmación por secuenciación.
Gaceta Médica de Caracas, 128(4), 525–536. https://doi.org/10.47307/gmc.2020.128.4.8