Difracción experimental

INAARA OLIVIA CANTO BARONA

NAHUM ALEJANDRO ALVARADO BETANCOURT
 Método de Laue.
Usó radiación continua (con todas las longitudes de onda
posibles) incidiendo sobre un cristal estacionario. De este
modo, el cristal generaba un conjunto de haces que
representan la simetría interna del cristal.
En estas condiciones, y teniendo en cuenta la ley de
Bragg, las constantes del experimento son los
espaciados d y la posición del cristal respecto al haz
incidente, y las variables son longitud 𝝀 de onda y un
numero entero n.

𝑛𝜆 = 2𝑑𝑠𝑖𝑛 𝜃 (1)

Max Laue. Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

Por lo tanto, para un mismo espaciado d, el patrón de
difracción contendrá los diferentes haces difractados que
corresponderán con el primer orden de difracción (n=1) para
esa longitud de onda (λ), con el segundo orden (n=2), que
corresponderá a la longitud de onda mitad (λ/2), con el tercer
orden (n=3), que corresponderá a la longitud de onda λ/3, y así
sucesivamente. Por lo tanto, el diagrama de Laue es
simplemente una proyección estereográfica de los planos del
cristal
Diagrama de Laue de un cristal

Diagrama . Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

Modo transmisión Modo reflexión

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

Método de Weissenberg

 Basado en la cámara de Weissenberg, consta de

un cilindro metálico que contiene en su interior una
película fotográfica sensible a os rayos X. El cristal se
monta sobre un eje coaxial con dicho cilindro y se hace
girar según el modelo de Ewald, de tal modo que los
puntos recíprocos que intersectan la superficie de la
esfera de Ewald son los responsables de los haces de
difracción.

 Estos haces generan manchas sobre la película

fotográfica que, cuando se extrae del cilindro metálico.

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 El tipo de diagramas que se obtienen se denominan de rotación o
de oscilación, dependiendo de que el giro del cristal sea completo
(360º), o parcial (aprox. 20º), respectivamente.
 Los diagramas de oscilación se utilizan para centrar el cristal, es
decir, para conseguir que el eje de giro del cristal coincida
exactamante con un eje directo, es decir que los planos recíprocos
generan manchas alineadas en la película fotográfica.
 Los diagramas de rotación completa se utilizan para evaluar el
valor del eje directo del cristal, que coincide con la separación
entre las líneas de manchas del diagrama.

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 Cada línea horizontal de puntos representa la proyección sobre la placa
fotográfica de un plano recíproco perpendicular al eje de giro.
 La distancia entre las líneas de puntos horizontales proporciona información
sobre el periodo de repetición del cristal en la dirección vertical de la foto.
 La separación entre las líneas que contienen las manchas de difracción es
proporcional a la distancia entre planos de puntos recíprocos. Sin
embargo, cada plano recíproco queda representado sobre una línea de
manchas de la película, dando lugar a solapamiento entre manchas.

Este problema quedó resuelto cuando a las cámaras se les añadió la

libertad de traslación del cilindro, en la dirección paralela a su eje,
acoplada al giro del cristal y seleccionando mediante dos cilindros internos
el cono de difracción que origina uno solo de los planos recíprocos.

Sin embargo, como consecuencia se origina una deformación en la

distribución de las manchas (intesidades de difracción).
Deformación geométrica

 El aspecto de un diagrama de este tipo, en estas condiciones, y

teniendo en cuenta dicha deformación, es posible medir
aisladamente cada haz de difracción. Y modificando
adecuadamente la posición de la rendija que permite la salida de los
conos de difracción, se pueden recoger todos los planos recíprocos
del cristal.

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Método de precesión
Desarrollado por Martin J. Buerger.
Se trata de un método en el que cristal se mueve, pero el movimiento
del cristal (y como consecuencia el de los planos recíprocos solidarios) es
como el de precesión de los planetas, de ahí su nombre. La película
fotográfica se coloca sobre un soporte plano y se mueve solidariamente
con el cristal. El cristal debe orientarse de tal modo que el plano
recíproco que se desee recoger sea perpendicular al haz directo de los
rayos X, es decir, que un eje directo coincida con la dirección de los rayos
X incidentes.
 Geometría Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

El ángulo μ es el ángulo de precesión del plano recíproco seleccionado del cristal y de la película fotográfica,
que se mantiene paralela al plano recíproco y solidaria en movimientos al cristal.
Cámaras diseñadas para el efecto. Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html
 Este tipo de diagramas son mucho más simples
de interpretar que los de Weissenberg, ya que
muestran el aspecto de un plano recíproco sin
distorsión. La separación de un plano recíproco
determinado se consigue mediante el uso de
pantallas que seleccionan los haces difractados
de dicho plano. Del mismo modo a como ocurre
en el caso de Weissenberg, se pueden medir las
distancias recíprocas y las intensidades de
difracción. Sin embargo, aquí es mucho más facil
observar los elementos de simetría del espacio
recíproco.

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

La desventaja del método de precesión es consecuencia de que la película es
plana en lugar de cilíndrica, y el ángulo sólido explorado es menor. Este
método se ha usado con éxito durante muchos años, incluso para el caso de
macromoléculas como las proteínas
Método de Oscilación.
Cuando se llegó a experimentar con redes directas con periodos de
traslación grandes, es decir, con puntos recíprocos muy cercanos, los
tiempos de recogida se disparaban y por lo tanto se recurrió al
método de oscilación con ángulos pequeños.
 Permite recoger varios niveles recíprocos a la vez sobre cada
posición del cristal. Repitiendo estos diagramas, a distintas
posiciones de partida del cristal, se conseguían buenos datos.
 Con generadores de ánodo rotatorio o sincrotrones, y detectores
de área, que aumentan la intensidad de los máximos de difracción
y reducen los tiempos de recogida con gran fiabilidad, se ha
impuesto este método para los estudios de macromoléculas, en
particular de proteínas.
Esquema de la geometría de las condiciones de máximo de difracción en
el método de oscilación.

Sobre la pantalla del detector, la geometría de oscilación produce

máximos de difracción procedentes de diferentes niveles de la red
recíproca y formando lúnulas sobre el diagrama.

Obtenido de:
https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/p
arte_06.html
Goniometría de cuatro círculos

Difractómetros automáticos de cuatro círculos. Estos equipos,

disponen de un sistema goniométrico, con una mecánica muy precisa,
que mediante tres giros permite colocar el cristal en cualquier
orientación del espacio, provocando así que se cumplan los
requerimientos de la construcción de Ewald para que se produzca la
difracción. En estas condiciones, un cuarto eje de giro, que sustenta el
detector electrónico se coloca en condiciones de recoger el haz
difractado. Todos estos movimientos se pueden programar para que se
realicen de un modo automático, con una mínima intervención del
operador.
Entre este tipo de goniómetros se pueden distinguir dos geometrías
goniométricas que se han usado con excelente éxito durante muchos
años. En el goniómetro de geometría Euleriana, el cristal se orienta
mediante los tres ángulos de Euler, Φ que representa el giro sobre el
eje de la cabeza goniométrica, χ que le permite el balanceo sobre el
círculo cerrado, y ω que permite el giro total del goniómetro. El cuarto
círculo lo representa el giro del detector, 2θ. Esta geometría, presenta
la ventaja de la estabilidad mecánica, pero por contra restringe la
accesibilidad al cristal para equipos externos de baja o alta
temperatura.
Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html
Izquierda: Esquema y aspecto de un goniómetro de cuatro círculos con geometría Euleriana
Derecha: Rotaciones en un goniómetro de cuatro círculos con geometría Euleriana
La geometría alternativa a la Euleriana es la denominada geometría Kappa que no dispone de un
círculo cerrado equivalente al χ. En su lugar, su función la cumplen los llamados ejes κ (kappa) y ωκ,
de tal modo que con una combinación de ambos se pueden obtener χ eulerianos en el intervalo de -
90 a +90º. La ventaja principal de esta geometría es la amplia accesibilidad al cristal. Los
ángulos Φ y 2θ son idénticos al los de la geometría euleriana:

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

Detectores de Área

 Son una alternativaa los detectores "puntuales",permiten

la detección de muchos haces de difracción
simultáneamente, ahorrando con ello tiempo en el
experimento.
 Es de especial utilidad para el caso de las proteínas y en
general de cualquier material que pueda deteriorarse
durante su exposición a los rayos X, ya que la detección
de cada una de las imágenes que se recogen (con varios
cientos o miles de reflexiones) se hace en un tiempo
mínimo, del orden de los segundos.

Obtenido de:
https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_0
6.html
 Uno
de los detectores de área mas comunmente usado se basa en los
denominados CCD's (del inglés Charge Coupled Device).
 Los detectores del tipo CCD se instalan normalmente sobre equipos
goniométricos con geometría Kappa (κ) y por su rapidez, su uso
está ampliamente extendido en el ámbito de la Cristalografía de
proteínas, asociados a generadores de ánodo rotatorio o en las
grandes instalaciones de sincrotón.

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

  Otro tipo de detectores usados en la Cristalografía de proteínas es
el llamado Image Plate Scanner que generalmente se montan
sobre un goniómetro relativamente rudimentario, cuya única
libertad de giro corresponde a la del cristal sobre su eje de
montaje.
 Este es una placa circular de material sensible a los rayos X que se
interpreta, después de la exposición, mediante un laser capaz de
digitalizar las intensidades.

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html


La tecnología más moderna implica el uso de detectores de área
basados en la denominada
tecnología CMOS (complementary metal-oxide semiconductor:
semiconductor de óxido metálico complementario) que permite un
tiempo de lectura muy corto, lo que conduce a un aumento
considerable de la tasa de obtención de imágenes de difracción
durante el proceso de recogida de datos.

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

 La recogida de un patrón de difracción completo consiste en la
obtención de multitud de imágenes como la que se muestra más
abajo, y que posteriormente serán analizadas para obtener la
métrica del cristal (constantes reticulares), su simetría (grupo
espacial) e intensidades de difracción.

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

•el fotón sale de la fuente en donde se producen los rayos X,
•pasa por los diferentes elementos ópticos que lo encauzan por
el camino adecuado (espejos, rendijas y colimadores),
•incide sobre el cristal único, y
•finalmente genera los efectos de difracción sobre un detector

Obtenido de:
https://www.xtal.iqfr.csic.es/Crist
alografia/parte_06.html
Equipo de enfriamiento
 Con objeto de obtener el mejor (y mayor) conjunto de datos de la
red recíproca se debe usar un equipo de enfriamiento de la
muestra, que proporciona una corriente de nitrógeno seco a
temperatura de unos 100 K (es decir aproximadamente a -170
ºC). De este modo, los cristales (y especialmente los de
macromoléculas) son más estables y resisten mejor la radiación X.
 Con ello se consigue, además, reducir los factores de vibración
térmica de los átomos y por lo tanto facilitando su localización.

Obtenido de:
https://www.xtal.iqfr.csi
c.es/Cristalografia/part
e_06.html
 Para montar los cristales en el flujo de nitrógeno frío suelen usarse
unos pequeños lazos que sirven para "pescar" el cristal en una
matriz que sea transparente a los rayos X.

Esto es importante en el caso de los cristales de proteína, en los que

dicha matriz es un crio-protector (anti-congelante) que se dispersa
por los canales interiores del cristal y reemplaza las moléculas de
agua por las del crio-protector; de no hacerse de este modo, la
congelación del agua interna provocaría la ruptura del cristal.

Obtenido de: https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html

Referencias:

[1] Ripoll, M. M. (s. f.). Cristalografía. Difracción. Difracción experimental.

Recuperado 18 de octubre de 2021, de
https://www.xtal.iqfr.csic.es/Cristalografia/parte_06.html