NORMA VENEZOLANA

ALIMENTOS
DETERMINACIÓN DE COBRE

1 NORMAS COVENIN A CONSULTAR

Esta norma es completa.
2 OBJETO Y CAMPO DE APLICAIÓN
Esta norma establece el método de ensayo para la determinación del cobre presente en
alimentos.
3 PRINCIPIO DEL ENSAYO
El método consiste en la digestión acida de la muestra y asilamiento del cobre presente en
ella mediante la adición de Dietilditiocarbamato de sodio y un agente quelante, el EDTA, se
forma asi un complejo cúprico coloreado el cual se extrae con tetracloruro de carbono,
midiéndose luego la intensidad del color de la solución obtenida en un espectrofotómetro a
400mm.
4 EQUIPO DE ENSAYO
4.1 MATRACES AFORRADOS, DE 100, 200, 250, 500 y 1000 ml.
4.2 MATRACE ERLENMEYES, DE 125 ml.
4.3 VIDIRIOS DE RELOJ.
4.4 MATRACES KJELDAHL, de vidrio borosilicato, de 800 ml.
4.5 PIPETAS AFORADAS, de 1, 2, 5, 10, 15, 20 y 25 ml.
4.6 PIPETA GRADUADA, de 5 ml (1/10)
4.7 EMBUDO DE SEPARACIÓN, de vástago corto, de 100 ó 250 ml. Para lubricar los
tapones de lo embudos se puede usar vaselina.
4.8 BALANZA ANALITICA, con apreciación de 0,1 mg.
4.9 PAPEL DE FILTRO.
4.10 REJILLA DE ASBESTO, de 5 cm de diámetro.
4.11 ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO, calibrado a una longitud de onda de
400 mm con cubetas de 1 cm (ópticamente calibradas).
4.12 BAÑO-MARÍA.
NOTA:
El material de vidrio debe limpiarse con ácido nítrico en caliente.
5 REACTIVOS
2
5.1 DIETILDITIOCARBAMATO DE SODIO, [ SC ( S ) N ( C2 H 5 ) Na ], para análisis.

5.1.1 Solución de dietilditiocarbamato de sodio (solución de carbamato). Se disuelve 1 g de

la sal en agua, se diluye a 100 ml y se filtra. Se mantiene refrigerado y debe prepararse
semanalmente.

5.2 CITRATO DE AMONIO DIBASICO, [ (NH 4 ) ₂ HC 6 H 5 O 7 ], para análisis.

5.3 ETILENDIAMINOTETRACETATO DISODICO, ( Na2 EDTA) para análisis.

5.4 TETRACLORURO DE CARBONO, (CCL 4) para análisis.

5.5 SOLUCIÓN DE CITRATO – EDTA.
Se disuelven 20 g de citrato de amonio dibasico (5.2) y 5 g de etilendiaminotetracetato
disodico (5.3) en agua y se diluye a 100 ml. Se remueven las trazas de cobre agregando 0,1
ml de solución de carbamato (5.1.1) y se extrae con 10 ml de tetracloruro de carbono (5.4).
Se repite la extracción hasta que el extracto de tetracloruro sea incoloro.
5.6 ACIDO NITRICO CONCENTRADO, ( HNO¿¿ 3 d=1,40 g/ml)¿ para análisis.
5.6.1 Solución de ácido nítrico (1:4). Se diluye un volumen de ácido nítrico (5.6) con 4
volúmenes de agua destilada.
5.7 HIDROXIDO DE AMONIO, ( NH ¿¿ 4 OH )¿ para análisis.
Este reactivo debe purificarse como se indica en 5.5.
5.7.1 Solución de Hidróxido de amonio 6N
5.8 HIDROXIDO DE SODIO, NaOH ¿ para análisis
5.8.1 Solución de Hidróxido de sodio 0,1 N y 1 N.
5.9 SOLUCIÓN INDICADORA DE AZUL DE TIMOL, al 0,1%. Se disuelven 0,1 g de
azul de timol en agua, se añade suficiente cantidad de solución de hidróxido de sodio 0,1 N
(5.8.1) hasta que el color cambie a azul, en un matraz aforado de 100 ml y se lleva a
volumen.
5.10 SOLUCIÓN DE CIANURO DE POTASIO, (KNC) al 5%.
5.11 ACIDO SULFURICO CONCENTRADO, ( H 2 SO4 d =1,84 g /ml) para análisis.
5.11.1 Solución de Ácido sulfúrico 2 N.
5.12 SOLUCIÓN PATRON DE COBRE, (1mg/ml). Se colocan 0,2000 g de alambre o
papel de cobre en matraz Erlenmeyer de 125 ml, Se agregan 15 ml de solución de ácido
nítrico (5.6.1), se cubre el frasco con un vidrio de reloj y se deja disolver el cobre
calentando hasta disolución completa. Se hierve para eliminar los vapores; se enfría, se
transvasa aun matraz aforado de 200 ml y se lleva a volumen con agua destilada.
5.13 SOLUCION INTERMEDIA DE COBRE, (100 µg/ml). Se diluyen 20 ml de la
solución patrón (5.12) en un matraz aforado de 200 ml y se lleva a volumen con agua
destilada.
5.14 SOLUCION DE TRABAJO, (200 µg/ml). Se diluyen 5 ml de la solución intermedia
(5.13) en un matraz aforado de 250 ml y se lleva a volumen con solución de ácido sulfúrico
(5.11.1).
5.15 SOLUCIÓN SATURADA DE OXALATO DE AMONIO
NOTA:
El agua y el ácido nítrico deben purificarse por destilación en vidrio borosilicato.
6 PROCEDIMIENTO
6.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
6.1.1 Se pesa una cantidad de muestra tal, que contenga 20 g o menos de sólidos,
dependiendo del contenido de cobre esperado.
6.1.2 Si la muestra contiene menos de 75% de agua, se le agrega agua hasta obtener esta
dilución.
6.1.3 Se añade un volumen inicial de ácido nítrico aproximadamente igual a dos veces el
peso de la muestra seca y 5 ml de ácido sulfúrico, o tantos mililitros de ácido sulfúrico
como gramos de muestra seca se tengan pero que sea igual o mayor a 5 ml.
6.1.4 Digestión
6.1.4.1 Las muestras se colocan en matrace Kjeldahl (4.4)
6.1.4.2 Se añade la cantidad inicial de ácido nutrido calculada según 6.1.3 y luego se añade
cuidadosamente la cantidad de ácido sulfúrico calculada según 6.1.3.
6.1.4.3 Se coloca cada matraz sobre la rejilla de asbesto, se calienta ligeramente y se
descontinua el calentamiento si la espuma producida se hace excesiva.
6.1.4.4 Cuando la reacción haya disminuido, se calienta el matraz con mucho cuidado y se
rota ocasionalmente para evitar que la muestra se apelmace sobre el vidrio expuesto a la
llama. Las condiciones de oxidación en el matraz deben mantenerse en todo momento
durante la digestión, añadiendo cuidadosamente pequeñas cantidades de ácido nítrico cada
vez que la mezcla se torne marrón o se oscurezca.
6.1.4.5 Se continua la digestión hasta que la materia orgánica se destruya y los vapores de
SO3 se produzcan en forma copiosa (la solución final debe ser incolora o de un ligero color
de paja seca)
6.1.4.6 Se enfría, se agregan 75 ml de agua y 25 ml de solución saturada de oxalato de
amonio para ayudar a eliminar óxidos de nitrógeno de la solución.
6.1.4.7 Se evapora nuevamente hasta que aparezcan vapores de SO 3 en el cuello del matraz.
Se enfría y se diluye en un matraz aforado de 100 ml y se lleva a volumen con agua
destilada. Esta dilución es mayor si la cantidad de cobre presente es muy elevada.
6.1.4.8 Cuando la muestra contiene grandes cantidades de grasa se procede de la siguiente
forma:
6.1.4.8.1 Se hace una digestión parcial con ácido nítrico hasta que solo la grasa este sin
disolver.
6.1.4.8.2 Se enfría, se filtra para eliminar la grasa sólida, se lava el residuo con agua, se
añade ácido sulfúrico al filtrado y se completa la digestión como antes (ver punto 6.1.4.1)
6.1.4.8.3 Después de la digestión, se enfría, se agregan 25 ml de agua y se elimina el ácido
nitrosilsulfurico calentando hasta el desprendimiento de vapores. Se repite la adición de 25
ml de agua y el calentamiento hasta la producción de vapores.
6.1.4.8.4 Si después del enfriamiento y dilución, hay materia insoluble presente, se filtra a
través de papel lavado con ácido y se enjuaga el papel con agua, se diluye en un matraz
aforado de 100 ml y se lleva a volumen con agua destilada.
6.1.4.9 En forma similar debe prepararse un blanco de reactivos.
6.2 AISLAMIENTO Y DETERMINACIÓN DE COBRE
6.2.1 Con una pipeta se transfieren 25 ml de solución de muestra (6.1.3) a un embudo de
separación y se le agregan 10 ml de la solución de citrato – EDTA (5.5)
6.2.2 Se agregan dos gotas de solución indicadora de azul de timol. (5.9) y solución de
hidróxido de amonio (5.7.1) en gotas hasta que la solución se torne verde o azul verdoso.
6.2.3 Se enfría, se añade 1 ml de solución de carbamato (5.1.1) y 15 ml de tetracloruro de
carbono (5.4) m, se agita vigorosamente por 2 min, se dejan separar las capas y se decanta
la capa de tetracloruro a un tubo o frasco de vidrio (con tapón esmerilado) a través de un
tapón de algodón, al abrigo de la luz.
6.2.4 Se determina la absorbancia o la transmitancia, de la solución en el espectrofotómetro
o colorímetro previamente calibrado con el blanco de reactivos, a una longitud de onda de
400nm, El complejo coloreado es estable por 2 h en a la oscuridad y por 1 h expuesto a la
luz (protegido de la luz solar).
6.2.5 Debido a que el Bismuto y el teluro también dan carbamatos coloreados a Ph 8,5 (se
descomponen a compuestos incoloros con solución de hidróxido de sodio 1 N), se
determina si están o no presentes, regresando la solución de tetracloruro de carbono al
embudo de separación, se le agregan 10 mol de solución de Cianuro de potasio (5.10) y se
agita por 1 min.
6.2.6.1 Si la capa de tetracloruro se vuelve incolora quiere decir que el Bismuto y el Teluro
están ausentes.
6.2.6.2 Si la prueba resuelta positiva, se desarrolla el color en otra alícuota de 25 ml como
se indicó anteriormente (sin el cianuro de potasio). Se decanta la capa de tetracloruro de
carbono a un segundo embudo de separación, se le agregan 10 ml de solución de hidróxido
de sodio 1 N (5.8.1) y se agita durante 1 min. Se dejan separar las capas y se decanta la
capa de tetracloruro de carbono a un tercer embudo de separación. Se lava nuevamente el
extracto de tetracloruro de carbono con 10 ml de solución de hidróxido de sodio 1 N
(5.8.1), se determina la absorbencia o transmitancia de la capa tetracloruro de carbono y se
convierte a µg de cobre (7).
6.3 PREPARACIÓN DE LA CURVA PATRON
6.3.1 Se transfieren 0;1;2;5;10;15;20; y 25 ml de solución de trabajo (5.14) a embudos de
separación y se les agrega solución de ácido sulfúrico (5.11.1) para llevar el volumen a 25
ml.
6.3.2 Se agregan 10 ml de solución de citrato – EDTA (5.5) y se proceds tal como se indica
a partir del punto 6.2.2 en adelante.
6.3.3 Con los valores de absorbancia obtenidos para los patrones se construye un gráfico de
absorbancia contra microorganismos de cobre en papel milimetrado. Si las lecturas son en
porcentaje de transmitancia se usa papel semilogaritmico y se representa gráficamente
transmitancia sobre la escala logarítmica. Como generalmente hay alguna desviación de la
linearidad, las lecturas para la muestra deben hacerse en la parte recta de la curva.
7 EXPRESION DE LOS RESULTADOS
7.1 Con el valor de transmitancia o absorbancia obtenida para la muestra, a partir de la
curva patrón (6.3), se determina el contenido de cobre que le corresponde.
7.2 El contenido de cobre en la muestra se calcula mediante la siguiente expresión:
µg de Cu CxVx 100
=
100 g de muestra AxP

Donde:
C=microgramos de cobre leídos en la curva patrón, para la muestra
V= volumen de la solución de muestra, en mililitros.
A= alícuota de la solución de muestra, en mililitros.
P= masa de la muestra, en gramos.
8 INFORME
El informe del ensayo deberá contener como mínimo la siguiente información:
8.1 Ensayo realizado según la Norma COVENIN N° 1215
8.2 Fecha en la cual se realizó el ensayo
8.3 Identificación de la muestra
8.4 Resultados del ensayo
8.5 Observaciones
8.6 Realizado por:
BIBLIOGRAFIA

ISO 3094-1974. Fruit and vegetable products. Determination of copper content.

Photometric method
A.O.A.C 1980 Official methods of Analysis 12 th edition.
Association of Official Analytical chemists.
Washington D.C pág. 391 sección 25.038