Traducido del inglés al español - www.onlinedoctranslator.

com

Vea discusiones, estadísticas y perfiles de autores para esta publicación en: https://www.researchgate.net/publication/335436029

Medición de carbohidratos disponibles, almidón digerible y resistente en

ingredientes y productos alimenticios.

Artículo en Química de los cereales · Agosto 2019

DOI: 10.1002 / cche.10208

CITACIÓN LEE
1 318

4 autores, incluyendo:

Barry V McCleary Ciara McLoughlin

Megazima Megazyme International Irlanda

193 PUBLICACIONES 6,965 CITACIONES 2 PUBLICACIONES 1 CITACIÓN

VER EL PERFIL VER EL PERFIL

Lucie Charmier
Megazyme International Irlanda

5 PUBLICACIONES 7 CITACIONES

VER EL PERFIL

Algunos de los autores de esta publicación también están trabajando en estos proyectos relacionados:

Medición de almidón Ver Proyecto

Descubrimiento y caracterización de sitios de unión a la superficie en enzimas convertidoras de polisacáridos Ver Proyecto

Todo el contenido que sigue a esta página fue subido por Barry V McCleary el 02 de octubre de 2019.

El usuario ha solicitado una mejora del archivo descargado.

Recibido: 14 de julio de 2019 | Revisado: 19 de agosto de 2019 | Aceptado: 20 de agosto de 2019

DOI: 10.1002 / cche.10208

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN

Medición de carbohidratos disponibles, almidón digerible y resistente en

ingredientes y productos alimenticios.

Barry V. McCleary | Ciara McLoughlin | Lucie MJ Charmier | Paraic McGeough

Megazyme, Bray, Irlanda

Abstracto

Correspondencia Trasfondo y objetivos: La importancia de medir selectivamente los carbohidratos disponibles y no

Barry V. McCleary, Megazyme, Bray Business
disponibles en la dieta humana se ha reconocido durante más de 100 años. Los niveles de
Park, Southern Cross Road, Bray, Condado de
carbohidratos disponibles en las dietas pueden estar directamente relacionados con las principales
Wicklow, Irlanda.
Correo electrónico: barry@megazyme.com enfermedades del mundo occidental, a saber, la diabetes tipo II y la obesidad. La metodología para

medir el total de carbohidratos por diferencia se introdujo en la década de 1880, y esto constituye la

base de la determinación de carbohidratos en los Estados Unidos. En el Reino Unido, en la década de

1920 se introdujo un método para medir directamente los carbohidratos disponibles para ayudar a los

pacientes diabéticos con la selección de alimentos. El objetivo del trabajo actual fue desarrollar

métodos simples, específicos y confiables para los carbohidratos disponibles y el almidón digerible (y

el almidón resistente). El componente principal de los carbohidratos disponibles en la mayoría de los

alimentos es el almidón digerible.

Recomendaciones: Se han desarrollado métodos simples para medir el almidón de digestión

rápida, el almidón de digestión lenta, el almidón digerible total, el almidón resistente y los

carbohidratos disponibles, y se ha estudiado en detalle la digestibilidad del almidón reticulado

con fosfato. El procedimiento de almidón resistente desarrollado es una actualización de los

procedimientos actuales e incorpora condiciones de incubación con α-amilasa pancreática (PAA)

y amiloglucosidasa (AMG) que son paralelas a las utilizadas en el Método AOAC 2017.16 para la

fibra dietética total. Los carbohidratos disponibles se miden como glucosa, fructosa y galactosa,

después de la hidrólisis completa y selectiva del almidón digerible, maltodextrinas, maltosa,

sacarosa y lactosa a glucosa, fructosa y galactosa. La sacarosa se hidroliza con una enzima

sacarasa específica que no tiene acción sobre los fructooligosacáridos (FOS).

Conclusiones: El método de "carbohidratos disponibles" actualmente descrito junto con el

método de fibra dietética total (Método AOAC 2017.16) permite la medición de todos los

carbohidratos en los productos alimenticios, incluido el almidón digerible.

Importancia y novedad: Este artículo describe un método simple y específico para medir los

carbohidratos disponibles en cereales, alimentos y piensos. Este es el primer método que

proporciona la medición correcta de almidón digestible y sacarosa en presencia de FOS. Dicha

metodología es esencial para el etiquetado preciso de los productos alimenticios, lo que

permite a los consumidores tomar decisiones informadas en la selección de alimentos.

Este es un artículo de acceso abierto bajo los términos de la Licencia de Atribución Creative Commons, que permite el uso, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el trabajo original se cite

correctamente.

© 2019 Megazyme. Cereal Chemistry publicado por AACC International, Inc.

Química de los cereales. 2019; 00: 1–24. wileyonlinelibrary.com/journal/cche |1

2 |
PALABRAS CLAVE
carbohidratos disponibles, fibra dietética, almidón digerible, Fibersym®, almidón resistente
1 | INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos disponibles se han definido como la suma de
azúcares libres (glucosa, fructosa, galactosa, sacarosa, maltosa,
lactosa y oligosacáridos) y carbohidratos complejos (dextrinas,
almidón y glucógeno). Estos son carbohidratos que se digieren y
absorben, y son glucogénicos en humanos (Anon, 2003). En la
“Actualización científica de la FAO / OMS sobre los carbohidratos en
la nutrición humana” (Mann et al., 2007), se propuso que el término
“fibra dietética” se limitara a los polisacáridos que son intrínsecos a la
pared celular de las plantas, y los métodos para medir la fibra
dietética son aquellos que pueden cuantificar de manera confiable
los polisacáridos componentes. Se recomendó la medición química
directa sobre los métodos gravimétricos empíricos para este
propósito. El almidón resistente (RS) no se consideró fibra dietética.
En las tablas de composición de alimentos recopiladas en "The
Composition of Foods" de McCance y Widdowson (Anon, 2003), la
fibra dietética se determina como polisacáridos sin almidón (NSP),
según la definición de Englyst, Wiggins & Cummings (1982), Englyst y
Hudson (1987). ) y Englyst y Cummings (1988). Sin embargo, en la
definición de fibra dietética adoptada en junio de 2009 por la
Comisión del Codex Alimentarius (CAC) (2010), la definición incluye
polímeros de carbohidratos que no son hidrolizados por las enzimas
endógenas en el intestino delgado de los humanos y, por lo tanto,
incluye RS.
En la mayoría de los alimentos de origen vegetal, el principal
contribuyente a los carbohidratos disponibles es el almidón digerible.
El almidón digestible fue subcategorizado por Englyst, Kingman y
Cummings (1992) como almidón de digestión rápida (RDS; ese
almidón hidrolizado por niveles saturados de α-amilasa pancreática
[PAA] y amiloglucosidasa [AMG] en 20 min) y almidón de digestión
lenta (SDS) , almidón digerido por PAA y AMG entre 20 y 120 min). El
resto, el almidón no hidrolizado, se denominó RS. Sin embargo,
varios estudios (Deiteren et al., 2010; Geboes, Luypaerts, Rutgeerts y
Verbeke, 2003; Geypens et al., 1999; Miller et al., 1997; Sadik,
Abrahamsson, Bjornsson, Gunnarsdottir y Stotzer, 2003; Stotzer y
Abrahamsson, 2010; Zarate et al., 2010) indican que el tiempo de
residencia de los alimentos en el intestino delgado humano es de
aproximadamente 4 horas (no 2 horas). Por esta razón, introducimos
el término "almidón digerible total, TDS", que es el almidón que se
digiere saturando los niveles de PAA y AMG a 37 ° C y pH 6,0 en 4
horas. El almidón que no se hidroliza en 4 horas se denomina RS. De
acuerdo con la definición de fibra dietética del Codex Alimentarius,
este RS se incluye como parte de la fibra dietética.
En 2007 se publicó un método para medir la fibra dietética,
generalmente consistente con la definición del Codex (McCleary,
2007), y este método, siguiendo una extensa
METROClimpio Et AL.
evaluación interlaboratorio, se adoptó como Métodos AOAC 2009.01 y 2011.25, y Métodos AACCI 32-45.01 y
32-50.01 (McCleary et al., 2010). Posteriormente, se identificaron varias limitaciones de este método, en particular
el hecho de que se empleó un tiempo de incubación de 16 h, que se consideró con bastante razón que no era
fisiológicamente relevante. En el desarrollo de los métodos AOAC 2009.01 y 2011.25, se eligió un tiempo de
incubación de 16 h para mantener la coherencia con el método oficial para medir el almidón resistente (método
AOAC 2002.01; AOAC, 2012) y varios otros métodos publicados (Akerberg, Liljeberg, Granfeldt, Drews y Bjorck,
1998; Champ, 1992, Champ, Martin, Noah y Gratas, 1999; Faisant et al., 1995; Goni, Garcia ‐ Diz, Manas y Saura ‐
Calixto, 1996; Muir y O'Dea, 1992). En respuesta a esta limitación, El método TDF integrado se modificó reduciendo
el tiempo de incubación con PAA / AMG de 16 a 4 horas, y las concentraciones de enzima aumentaron
adecuadamente para asegurar que los valores de almidón resistente obtenidos para varios materiales de
referencia estuvieran en línea con los obtenidos con los métodos AOAC 2002.02 (McCleary, McNally y Rossiter,
2002) y 2009.01, así como datos de ileostomía (Champ et al., 1999). Esta actualización (McCleary, Sloane y Draga,
2015) se sometió con éxito a una evaluación interlaboratorios bajo los auspicios de AOAC International e ICC para
convertirse en el Método AOAC 2017.16 y el Método ICC 185 (McCleary 2018; McCleary, Cox, Ivory y Delaney, 2018).
y las concentraciones de enzima aumentaron adecuadamente para asegurar que los valores de almidón resistente
obtenidos para varios materiales de referencia estuvieran en línea con los obtenidos con los métodos AOAC
2002.02 (McCleary, McNally y Rossiter, 2002) y 2009.01, así como los datos de ileostomía (Champ et al. al., 1999).
Esta actualización (McCleary, Sloane y Draga, 2015) se sometió con éxito a una evaluación interlaboratorios bajo los
auspicios de AOAC International e ICC para convertirse en el Método AOAC 2017.16 y el Método ICC 185 (McCleary
2018; McCleary, Cox, Ivory y Delaney, 2018). y las concentraciones de enzima aumentaron adecuadamente para
asegurar que los valores de almidón resistente obtenidos para varios materiales de referencia estuvieran en línea
con los obtenidos con los métodos AOAC 2002.02 (McCleary, McNally y Rossiter, 2002) y 2009.01, así como los datos
de ileostomía (Champ et al. al., 1999). Esta actualización (McCleary, Sloane y Draga, 2015) se sometió con éxito a
una evaluación interlaboratorios bajo los auspicios de AOAC International e ICC para convertirse en el Método
AOAC 2017.16 y el Método ICC 185 (McCleary 2018; McCleary, Cox, Ivory y Delaney, 2018).
En el artículo actual, la metodología empleada en el Método
AOAC 2017.16 se ha adaptado para permitir la medición
específica del almidón digerible y resistente y los carbohidratos
disponibles. Se ha hecho especial referencia a la medición del
almidón reticulado con fosfato (RS4). En esta metodología, los
carbohidratos disponibles se definen como glucosa, fructosa,
galactosa, maltosa, lactosa, sacarosa, maltodextrinas y almidón
digerible total. Tenga en cuenta que el almidón se mide como
almidón digerible en lugar de almidón total, y la sacarosa se
mide específicamente en presencia de fructooligosacáridos (FOS)
por hidrólisis con una enzima sacarasa que no tiene acción sobre
el FOS.
2|
MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 | Materiales
2.1.1 | Sustancias químicas y reactivos
D/l‐Ácido maleico (M ‐ 0375), albúmina sérica bovina (A ‐
2153), dimetilsulfóxido (D ‐ 8779) y azida sódica (S ‐ 8032)
fueron de Sigma ‐ Aldrich Ireland Ltd. Ácido acético (glacial)
METROClimpio Et AL.
GR, hidróxido de sodio y cloruro de calcio (CaCl2.2H2O) eran de
Merck. Amiloglucosidasa (AMG: E ‐ AMGFR y E ‐ AMGDF), α ‐
amilasa pancreática (PAA: E ‐ PANAA), mezcla de PAA / AMG (PAA
40 KU / g más AMG 17 KU / g; E ‐ PAAMG), termoestable α ‐
amilasa (E ‐ BLAAM), α ‐ amilasa termoestable (E ‐ BSTAA),
proteasa (E ‐ BSPRT), kit de análisis de almidón total (K ‐ TSTA), kit
de análisis de almidón resistente (K‐ RSTAR), almidón resistente
(rápido ) kit de ensayo (K ‐ RAPRS), kit de ensayo de almidón
digestible / almidón resistente (K ‐ DSTRS), kit de ensayo de
carbohidratos disponible (K ‐ AVCHO), kit de ensayo de α ‐
amilasa (Ceralpha®; K ‐ CERA), kit de análisis rápido integrado
TDF (K ‐ RINTDF), Amberlite FPA53 (OH−; G ‐ AMBOH) y Amberlite
200C (H+; G ‐ AMBH) se obtuvieron de Megazyme.
2.1.2 | Muestras de almidón puro
El almidón de maíz regular (RMS Lot 60401) era de Penford
Australasia. Hylon VII® (Ref. 98GH8401), Novelose 330®
(Ref. AH17529) y Novelose 240® (Ref. 96LF10063) eran de
National Starch and Chemical Company. Estas empresas ahora
forman parte de Ingredion. El almidón de patata nativo era de
Avebe (Foxhol, Países Bajos). ActiStar® (almidón de yuca / tapioca
modificado con enzimas; patente de EE. UU. 6.043.229) era de
Cerestar (ahora Cargill Bélgica). La amilosa de patata (A ‐ 9262),
el almidón de trigo (S ‐ 5127) y el almidón soluble ACS (S ‐ 9765)
eran de Sigma Chemical Company.
2.1.3 | Alimentos procesados y cereales para el desayuno
Uncle Ben's Ready Rice, blanco, extra se obtuvo del
profesor William Park, Texas A & M University, College
Station, Texas, EE. UU. Pan integral Brennans, Heinz®
frijoles horneados, Kellogg's® hojuelas de maíz, Kellogg's® All Bran®,
Weetabix®, Kellogg's® Especial K®, Kellogg's® Frosties de azúcar®,
habas de mantequilla enlatadas, garbanzos enlatados, guisantes de
jardín enlatados, frijoles rojos enlatados, plátano semigreen, Ryvita®
galletas saladas y Roma® La pasta de macarrones se obtuvo en un
supermercado local.
2.1.4 | Frijoles y verduras frescas
Maíz dulce, papas, guisantes, frijoles rojos, garbanzos, repollo
fresco, brócoli, coliflor, nabo, pimiento rojo, champiñones,
plátano maduro, frijoles rojos crudos y soja, cebolla roja, apio,
batata, plátano semirrío, zanahorias , y la papa se obtuvieron en
un supermercado local. La papa se cocinó en agua hirviendo
durante 30 minutos, se trituró y se liofilizó. Todas las verduras
frescas se cortaron en rodajas finas, se liofilizaron, se molieron
para pasar una pantalla de 0,5 mm y se almacenaron en Duran.®
Botellas herméticas a temperatura ambiente. Los frijoles y
verduras enlatados se vertieron en un colador y se lavaron con
agua desmineralizada, se liofilizaron,
|3
y se muele para pasar una pantalla de 0,5 mm. Los cereales secos para el desayuno se
molieron para pasar una pantalla de 0,5 mm y se almacenaron en Duran hermético.®
botellas.
2.2 |
métodos analíticos
2.2.1 |
Preparación de muestras de prueba
Las muestras con alto contenido de humedad (> 25%) se liofilizaron.
Muestras ca. Se trituraron 50 g en un molino, para pasar un tamiz de 0,5
mm. Todos los materiales se transfirieron a un frasco de plástico de boca
ancha, se sellaron y se mezclaron bien agitando e invirtiendo y luego se
almacenaron en presencia de un desecante. Las muestras de alimentos se
recolectaron y prepararon como "destinadas a ser consumidas"; es decir,
se cocinaban pastas y patatas. Las muestras con alto contenido de grasa,
como cacahuetes de chocolate, galletas de chocolate y tartas de
mermelada, se homogeneizaron mediante un homogeneizador Nutri-
Bullet. Una muestra del material homogeneizado (aproximadamente 2 g,
pesada con precisión) se transfirió a un ANKOM® bolsa de filtro, y las
bolsas se sellaron. Las bolsas de filtro se secaron en un horno a 105 ° C
antes de colocarlas en un desecador para enfriarlas. Se midió y registró el
peso de la bolsa más la muestra. A continuación, las muestras se
desgrasaron usando el aparato de desgrasado ANKOM a 60 ° C durante
90 min con éter de petróleo. Las bolsas recuperadas se secaron al aire
durante 15 min en una campana de gases y luego se secaron en un horno
a 105 ° C durante 30 min.
2.2.2 | Medida de actividades enzimáticas
La actividad de la α-amilasa en el PAA se midió utilizando Ceralpha®
procedimiento de ensayo que emplea bencilideno bloqueadopag
‐Nitrofenil maltoheptaósido en presencia de niveles excesivos de α ‐
glucosidasa termoestable. Las incubaciones se realizaron en tampón
de maleato de sodio a pH 6,9 y 40 ° C como se describe en el
Ceralpha® folleto del kit (Megazyme K ‐ CERA; AOAC Official Method
2002.01). Una unidad (U) de actividad enzimática se define como la
cantidad de enzima que libera un µmol depag‐Nitrofenol por minuto
según el procedimiento de ensayo definido. La actividad de la α-
amilasa informada es la medida al pH óptimo de 6,9. Sin embargo,
las incubaciones para medir el almidón digerible, el almidón
resistente y los carbohidratos disponibles se realizaron a pH 6,0. La
actividad de la α-amilasa a pH 6,0 es ~ 77% de la de pH 6,9 (McCleary
y Monaghan, 2002). La AMG se ensayó incubando 0,2 ml de enzima
adecuadamente diluida en tampón de acetato de sodio 100 mM (pH
4,5) con 0,5 ml de almidón soluble (10 mg / ml) en tampón de acetato
de sodio 100 mM (pH 4,5) a 40ºC. En varios intervalos de tiempo, los
tubos de reacción se calentaron a ~ 100 ° C en un baño de agua
hirviendo para terminar la reacción y se midió la glucosa liberada
utilizando el reactivo GOPOD (kit de ensayo de glucosa; Megazyme K‐
GLUC). Una unidad de AMG se define como la cantidad de enzima
necesaria para liberar un µmol de glucosa por minuto a pH 4,5 y 40 °
C. Cuando se mezcla con PAA, AMG se
4 | METROClimpio Et AL.

analizados con el reactivo de ensayo AMG (Megazyme R ‐ AMGR3) y

las unidades de actividad en el almidón se calcularon mediante un
factor de conversión. La actividad de AMG informada es la medida al
pH óptimo de 4,5. Sin embargo, las incubaciones para medir el
almidón digerible, el almidón resistente y los carbohidratos
disponibles se realizaron a pH 6,0. Actividad AMG a pH
6.0 es ~ 20% de eso a pH 4.5 (McCleary & Monaghan, 2002).

2.3 | Medición de RS y DS utilizando el

método rápido RS
El almidón resistente se midió de acuerdo con el método AOAC
2002.02 / AACC Método 32-40.01 y también utilizando el método
RS rápido descrito aquí. En este último procedimiento, se
pesaron muestras de cereales o alimentos finamente molidos
(0,5 mm) (~ 100 mg pesados con precisión) en tubos de
polipropileno de 16,5 × 101 mm y 13 ml, y los tubos se golpearon
suavemente para asegurarse de que todas las muestras cayeran.
al fondo del tubo. Para muestras húmedas como frijoles
enlatados picados o productos alimenticios, se analizó un
tamaño de muestra de aproximadamente 0,5 g (pesado con
precisión). Se añadió una alícuota (3,5 ml) de tampón de maleato
de sodio (pH 6,0) que contenía cloruro de calcio 2 mM, y el
contenido se mezcló completamente en un mezclador vórtex
durante 5 sy el tubo se colocó en un baño de agua a 37 ° C FIGURA 1 Conexión de tubos de polipropileno de 13 ml a un
durante 5 min para deje que el contenido se equilibre a la soporte de tubo de polipropileno en un baño de agua Grant OLS 200

temperatura. Una alícuota (0,5 ml) de solución de PAA / AMG (0,4

KU de PAA más 0.4)2ASI QUE4 suspensión de esta preparación
enzimática [PAA, 2 KU / ml; AMG, 0,83 KU / ml en 50%w/v se
utilizó sulfato de amonio], la muestra se suspendió en 3,8 ml de
tampón de maleato de sodio y se añadieron 0,2 ml de
suspensión enzimática). Los tubos se incubaron a 37 ° C con
agitación continua (200 golpes / min) durante exactamente 4
horas. Los tubos se retiraron del baño de agua de uno en uno,
etanol o IMS (alcoholes metilados industriales; 4,0 ml, 95%v/v),
se taparon los tubos y se agitó vigorosamente el contenido en
un mezclador de vórtice. Después de retirar las tapas, los tubos
se centrifugaron a 3250gramo (aprox. 3.250 fuerza centrífuga
relativa; rcf) durante 10 min. Inmediatamente después de que se
detuviera la centrífuga, la solución sobrenadante se decantó
cuidadosamente (asegurándose de que los sedimentos no se
perturbaran) y se almacenó para la determinación de DS. Los
gránulos se resuspendieron en 2 ml de 50%v/v etanol acuoso o
IMS y se mezcla vigorosamente en un mezclador de vórtice.
Otros 6 ml de 50%v/v Luego se añadió etanol acuoso o IMS al
tubo, se tapó el tubo y el contenido se mezcló completamente
por inversión. Se golpearon los tubos para eliminar todo el
líquido de las tapas. Luego se quitaron las tapas y los tubos se
centrifugaron a 3250ºC.gramo durante 10 min. A continuación,
las soluciones sobrenadantes se decantaron cuidadosamente y
se añadieron al sobrenadante original. El residuo se resuspendió
en 8 ml de 50%v/v etanol acuoso o IMS y centrifugado, y
el sobrenadante se decantó y se añadió a las dos primeras soluciones
sobrenadantes. Los tubos que contenían el residuo se invirtieron sobre
papel absorbente para eliminar el exceso de líquido mientras se
aseguraba que los gránulos no se desprendieran.
2.3.1 | Determinación de RS
Se añadieron a cada tubo una barra agitadora magnética (6 × 12 mm) y 2
ml de NaOH 1,7 M enfriado con hielo, y los gránulos se resuspendieron (y
el RS se disolvió) agitando durante aprox. 20 min en un baño de hielo /
agua sobre un agitador magnético (Figura 2). Se añadió tampón de
acetato de sodio (8 ml, 1,0 M, pH 3,8) que contenía cloruro de calcio (5
mM) a cada tubo mientras se agitaba. Se añadió inmediatamente AMG
(0,1 ml, 3300 U / ml); los tubos se mezclaron bien y se colocaron en un
baño de agua a 50 ° C y se incubaron durante 30 min con mezcla
intermitente en un mezclador de vórtice. Para muestras que contengan
<10% de contenido de RS, centrifugue las alícuotas de las soluciones sin
diluir a 8.000gramo durante 5 min en una microcentrífuga. El volumen
final en el tubo (antes de retirar una alícuota para centrifugación) fue de
aproximadamente 10,3 ml. Sin embargo, este volumen varió,
particularmente cuando se analizaron muestras húmedas, y en los
cálculos se hicieron las concesiones apropiadas para los volúmenes
finales. Para las muestras que contenían> 10% de contenido de RS, el
contenido de los tubos se transfirió cuantitativamente a un matraz
aforado de 100 ml utilizando una botella de lavado con agua. El volumen
se ajustó a 100 ml con agua destilada y se mezcló
METROClimpio Et AL.
FIGURA 2 Disposición de los tubos en un baño de agua helada sobre un
agitador magnético para la disolución de almidón resistente con 1,7 M de NaOH
bien. Se centrifugaron alícuotas de todas las soluciones a 8.000gramo
durante 5 min. Se transfirieron alícuotas duplicadas (0,1 ml) de todas las
soluciones al fondo de tubos de ensayo de vidrio (16 × 100 mm) y
Se agregaron 3,0 ml de reactivo GOPOD con mezcla y los tubos
se incubaron a 50 ° C durante 20 min. Se preparó una solución
de blanco de reactivo mezclando 0,1 ml de ácido acético 100 mM
(pH 4,5) con 3,0 ml de reactivo GOPOD. Se prepararon patrones
de glucosa (por cuadruplicado) mezclando 0,1 ml de solución de
glucosa (1 mg / ml) con 3,0 ml de reactivo GOPOD e incubando a
50ºC durante 20 min. Se midió la absorbancia de cada solución a
510 nm frente al blanco de reactivo.
El contenido de RS se calculó de la siguiente manera:
S (g∕100 gramos)
= ΔA×F×EV∕0,1×1∕1000×100∕W ×162∕180= ΔA
×F×EV∕W ×0,9
donde ΔA = absorbancia de la solución de muestra comparada con el
blanco de reactivo, F = factor para convertir los valores de absorbancia a
µg de glucosa (100 µg de glucosa dividido por el valor de absorbancia
obtenido para 100 µg de glucosa), EV = volumen de extracción de muestra
(10,3 o 100 ml), 0,1 = volumen de muestra analizada, 1 / 1.000 =
conversión de µg a mg, 100 / W = conversión a muestra de 100 mg, W =
peso de la muestra en mg, 162/180 = factor para convertir de glucosa
libre, según lo determinado, a anhidro-glucosa, como ocurre en el
almidón.
Los cálculos se simplifican utilizando un Megazyme MegaCalc
™ Excel® calculadora basada en (RAPRS) en la información de
apoyo.
2.3.2 | Determinación de DS
Los sobrenadantes combinados se ajustaron a 100 ml con
tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) y se centrifugó una
alícuota (2,0 ml) a 8.000 gramo durante 5 min. Para determinar
el almidón digerible, se transfirieron alícuotas duplicadas (0,1 ml)
al fondo de dos tubos de 16 × 100 mm, 0,1 ml de AMG
|5
(100 U / ml) en tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) y los
tubos se incubaron a 50ºC durante 30 min. Se añadió reactivo
GOPOD (3,0 ml) y los tubos se incubaron a 50ºC durante 20 min.
Se preparó una solución de blanco de reactivo mezclando 0,2 ml
de ácido acético 100 mM (pH 4,5) con 3,0 ml de reactivo GOPOD.
Se prepararon estándares de glucosa (por cuadruplicado)
mezclando 0,1 ml de solución de glucosa (1 mg / ml) con 0,1 ml
de tampón acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) y 3,0 ml de reactivo
GOPOD e incubando a 50 ° C durante 20 min. Se midió la
absorbancia de cada solución a 510 nm frente al blanco de
reactivo. El contenido total de carbohidratos de las soluciones se
determinó en alícuotas de 50 µl utilizando el procedimiento de
fenol-ácido sulfúrico de DuBois, Gilles, Hamilton, Rebers y Smith
(1956).
Calcular DS (% w/w, "Tal cual") en muestras de prueba como
sigue:
S (g∕Muestra de 100 g)
= ΔA×F×EV∕0,1×1∕1000×100∕W ×162∕180= ΔA
×F∕W ×0,9
donde ΔA = absorbancia (reacción) leída frente al blanco de reactivo,
F = conversión de absorbancia a µg (se determina la absorbancia
obtenida para 100 µg de glucosa en la reacción de GOPOD), (F = 100
[µg de glucosa] dividido por la absorbancia GOPOD para estos 100
µg de glucosa), EV = volumen de extracción de muestra (ml) = 100.
0,1 = volumen de muestra analizada, 1 / 1.000 = conversión de µg a
mg, 100 /W = conversión a 100 mg de muestra, W = peso de la
muestra en mg; 162/180 = factor para convertir de glucosa libre,
según lo determinado, a anhidro-glucosa como ocurre en el almidón.
2.4 | Medición de almidón reticulado
con fosfato (RS4)
El almidón reticulado con fosfato se midió mediante varios
métodos, el método de Shukri, Zhu, Seib, Maningat y Shi
(2015) y Shi, Sun y Shi (2019) y otros métodos como se
describe aquí. En el Shukri et al. (2015) y Shi et al. (2019)
como se describe aquí, la incubación inicial con PAA y AMG
se realizó en las condiciones del Método AOAC 2017.16 (PAA
100 U / ml; AMG 42 U / ml; Tabla 1) durante 4 horas, en lugar
de lo informado por Shukri et al. (2015) y Shi et al. (2019)
(PAA 50 U / ml; AMG 3 U / ml) durante 2 h. A continuación, la
fracción de RS se recuperó y se digirió de acuerdo con los
procedimientos particulares descritos por Shukri et al. (2015)
o Shi et al. (2019). En el Shukri et al. (2015), la fracción RS (p.
Ej., De Fibersym® [RS4]) se recuperó mediante precipitación
con etanol, centrifugación, lavado del residuo con etanol y se
incubó con proteasa seguida de α-amilasa termoestable (
Bacilo sp .; 200 U) a 100 ° C durante 30 min en 8 ml de
tampón de acetato de sodio 100 mM, pH 5 que contiene CaCl
5 mM2. Una segunda cantidad de α-amilasa
6 | METROClimpio Et AL.

TABLA 1 Una comparación de las condiciones de incubación utilizadas en el almidón resistente, el almidón digerible, los carbohidratos disponibles y la fibra dietética.

procedimientos de ensayoa

Muestra Buffer Pancreático

peso volumen α-amilasa Amiloglucosidasa

U / ml de Unidades K Unidades K

Método, tiempo de incubación y ensayo por Unidades / ml de por

Componente medido número de catálogo mg ml solución ensayo solución de ensayo ensayo

Almidón resistenteB Método AOAC 2002.02 ~ 100 4 50 0,2 3 0,014

16 horas (K ‐ RSTAR)

Fibra dietética totalB Método AOAC 2009.01 / Método ~ 1000 40 50 2.0 3 0,14
AACC 32-45.01
16 horas (K-INTDF)C

Fibra dietética totalB Método AOAC 2011.25 ~ 1000 40 50 2.0 3 0,14

Método AACC 32‐50.01
16 horas (K-INTDF)

Almidón resistente Almidón de rápida resistencia ~ 100 4 100 0.4 42 0,17

4 horas (K ‐ RAPRS)

Digestible / resistente Método de almidón digestible / ~ 500 20 100 2.0 42 0,85

almidón resistente 4 h (K ‐ DSTRS)

Disponible Carbohidratos disponibles ~ 500 20 100 2.0 42 0,85

carbohidratos 4 h (K ‐ AVCHO)

Fibra dietética total Método AOAC 2017.16 ~ 1000 40 100 4.0 42 1,7
4 horas (K ‐ RINTDF)

aEn todos los casos, las incubaciones se realizaron en tampón de maleato de sodio 50 mM (pH 6,0) que contenía cloruro de calcio 2 mM.B
Azida de sodio (0.02% w/v) se incluyó en el búfer en estos procedimientos.CNúmeros de catálogo de Megazyme.

Se añadió (200 U) y la muestra se incubó durante 30 min
más. La solución se enfrió a 50ºC, se añadieron 132 U de
AMG y las soluciones se incubaron durante 1 hora. La
glucosa liberada se analizó con reactivo GOPOD y la RS se
calculó de acuerdo con Shukri et al. (2015). En el ensayo in
vitro "mejorado" de Shi et al. (2019), el residuo de RS se
suspendió en KOH 2 M y se agitó a temperatura ambiente
durante 4 h. La solución se neutralizó con HCl, se añadió
etanol y el residuo se recuperó por centrifugación (el
sobrenadante se recuperó para la determinación de DS). El
residuo se suspendió en 8 ml de tampón de acetato de sodio
100 mM (pH 5,0), se añadió α-amilasa termoestable (200 U) y
la solución se incubó a 100 ° C durante 30 min con agitación
vigorosa intermitente. Este tratamiento con α ‐ amilasa se
repitió luego por segunda vez. La solución se enfrió a 50 ° C,
se añadieron 132 U de AMG y la solución se incubó a 50 ° C
durante 1 hora. La glucosa liberada se analizó con reactivo
GOPOD y la RS se calculó de acuerdo con Shi et al. (2019).
En el procedimiento actual, las muestras (~ 100 mg pesadas con
precisión) se pesaron en 16,5 × 101 mm, tubos de polipropileno de
13 ml y una alícuota (3,5 ml) de tampón de maleato de sodio (pH 6,0)
más CaCl 2 mM.2 Se añadió, y el contenido se mezcló completamente
en un mezclador vórtex durante 5 sy el tubo se colocó en un baño de
agua a 37 ° C durante 5 min para permitir que el contenido
para equilibrar la temperatura. Se añadió una alícuota (0,5 ml) de
solución de PAA / AMG (0,4 KU de PAA más 0,17 KU de AMG) a cada
tubo, y los tubos se taparon herméticamente y se unieron
horizontalmente, alineados en la dirección del movimiento (Figura 1)
en agua agitada. baño fijado a 37 ° C. Los tubos se incubaron a 37 ° C
con agitación continua (200 golpes / min) durante exactamente 4
horas. Etanol o IMS (4,0 ml, 95%v/v) a cada tubo, y el contenido se
agitó vigorosamente en un mezclador de vórtice. Los tubos se
centrifugaron y el sobrenadante inicial se almacenó en un tubo
sellado para la determinación del almidón digerible. El residuo que
contenía el RS se recuperó y se lavó como en el método estándar de
RS rápido, y los sobrenadantes de los dos lavados con etanol acuoso
se añadieron al sobrenadante inicial y se usaron para medir el
almidón digerible. Se evaluaron varios procedimientos para la
disolución e hidrólisis del almidón en la fracción de residuo, a saber.
una. el residuo se suspendió en 8 ml de tampón de acetato
de sodio 100 mM (pH 5,0), se añadió 0,1 ml de α-amilasa
termoestable (200 U, E-BSTAA) y los tubos se incubaron a
100 ° C durante 30 min. Después, los tubos se enfriaron a
50ºC, se añadieron 0,1 ml de AMG (330 U) y los tubos se
incubaron a 50ºC durante 30 min. Los volúmenes se
ajustaron a 100 ml con agua destilada y el contenido se
METROClimpio Et AL.
mezclado. Se centrifugaron alícuotas (2,0 ml) a 8.000 g durante 5
min en una microcentrífuga y se retiraron alícuotas de 0,1 ml para
la determinación de glucosa utilizando reactivo GOPOD y
determinación de RS según el procedimiento utilizado en el
método RS (rápido). El almidón digestible se determinó usando el
mismo procedimiento para la determinación del almidón
digestible en el método RS (rápido).
B. El residuo se suspendió en 2 ml de hidróxido de sodio (1,7 M) y
se mezcló vigorosamente en un mezclador vórtex, y los tubos
se incubaron a 50 ° C durante 15 min (también se evaluaron
tiempos de incubación de 30, 60 y 120 min). Las soluciones se
neutralizaron mediante la adición de 8 ml de tampón de
acetato de sodio (600 mM, pH 3,8), se añadió 0,1 ml de α-
amilasa termoestable (200 U, E-BSTAA) y los tubos se
incubaron a 100 ° C durante 30 horas. min. Después, los tubos
se enfriaron a 50ºC y se añadieron 0,1 ml de AMG (330 U) y las
soluciones se incubaron a 50ºC durante 30 min. Los
volúmenes se ajustaron a 100 ml con agua destilada y el
contenido se mezcló completamente. Se extrajeron alícuotas
para la medición de glucosa y determinación de RS según el
ejemplo "a". El almidón digestible se determinó usando el
mismo procedimiento para la determinación del almidón
digestible en el método RS (rápido).
C. El residuo se suspendió en 2 ml de hidróxido de sodio enfriado con
hielo (1,7 M) y se mezcló vigorosamente en un mezclador vórtex, y los
tubos se incubaron a ~ 4 ° C con agitación durante 30 min. Las
soluciones se neutralizaron mediante la adición de 8 ml de tampón de
acetato de sodio (600 mM, pH 3,8) y todos los demás pasos fueron
como se describe en el ejemplo "b".
D. El residuo se suspendió en 2 ml de hidróxido de sodio (1,7 M)
y se mezcló vigorosamente en un mezclador de vórtice, y los
tubos se incubaron a 4ºC durante 20 min. Las soluciones se
neutralizaron mediante la adición de 8 ml de tampón de
acetato de sodio (1,2 M, pH 3,8), se añadieron 0,1 ml de AMG
(330 U) y los tubos se incubaron a 50ºC durante 30 min. Los
volúmenes se ajustaron a 100 ml con agua destilada y el
contenido se mezcló completamente. Se extrajeron alícuotas
para la medición de glucosa y determinación de RS según el
ejemplo "a". El almidón digestible se determinó usando el
mismo procedimiento para la determinación del almidón
digestible en el método RS (rápido). Este es el procedimiento
empleado para disolver RS en el procedimiento de ensayo
rápido de RS.
En otros experimentos, el contenido total de almidón de los almidones
reticulados con fosfato y otros almidones se determinó utilizando
directamente las condiciones de disolución e hidrólisis para el residuo RS
descritas en los ejemplos "a" - "d" anteriores.
El contenido total de carbohidratos del almidón digerible y las
fracciones de almidón resistente hidrolizado se determinó
analizando una alícuota (50 µl) con el procedimiento de fenol-ácido
sulfúrico de DuBois et al. (1956).
|7
|
2.5 Separación cromatográfica del
carbohidratos presentes en el hidrolizado de
Fibersym®
Veinte muestras distintas de Fibersym® (1,00 g cada uno) se
incubaron con PAA / AMG de acuerdo con el Método AOAC 2017.16.
Después de 4 h, el pH se ajustó a ~ 8,2 según el procedimiento, y las
soluciones se calentaron a ~ 95 ° C para inactivar PAA y AMG. Se
añadieron cuatro volúmenes de etanol (160 ml) a cada uno de los
veinte recipientes y se mezclaron minuciosamente. Después de
reposar a temperatura ambiente durante la noche, el contenido de
todos los recipientes se reunió y se centrifugó a
24.000 gramo durante 20 min. Los sobrenadantes (sobrenadantes originales) se
decantaron cuidadosamente, se combinaron y se concentraron por evaporación
rotatoria. Los residuos se agruparon en dos recipientes de centrífuga de 400 ml y se
suspendieron en ~ 200 ml de 80%v/v etanol en agua (en cada recipiente) y recuperado
por centrifugación. Este procedimiento se repitió una vez más. Cada uno de los
sobrenadantes se combinó con el sobrenadante original y se concentró. Los
carbohidratos en la fracción sobrenadante (DS) se concentraron a ~ 30 mg / ml y se
fraccionaron alícuotas (16 ml) en una columna (5 × 95 cm) de Bio ‐ Gel P ‐ 2, Extra Fine
(Bio ‐ Rad Laboratories) en agua destilada a 60 ° C. Se recolectaron fracciones de 20 ml
y se analizaron alícuotas para determinar los carbohidratos totales mediante el
procedimiento de fenol-ácido sulfúrico (DuBois et al., 1956). Las fracciones que se
muestran en la Figura 5 se recogieron y concentraron (cuando fue necesario)
mediante evaporación rotatoria hasta una concentración de carbohidratos de ~ 0,5
mg / ml. Estas soluciones se analizaron para determinar la glucosa libre incubando
alícuotas (0,1 ml) más 0,1 ml de tampón de acetato de sodio con 3. 0 ml de reactivo
GOPOD a 50 ° C durante 20 min. La absorbancia se midió frente a una solución en
blanco que contenía 0,2 ml de tampón de acetato de sodio 100 mM (4,5) más 3,0 ml de
reactivo GOPOD. Se prepararon soluciones estándar de glucosa incubando glucosa
(0,1 ml, 1,0 mg / ml) más 0,1 ml de tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) con
3,0 ml de reactivo GOPOD a 50ºC durante 20 min al mismo tiempo que las soluciones
de muestra. La hidrólisis por AMG se determinó incubando alícuotas de muestra (0,1
ml, ~ 0,5 mg / ml) en tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 0 ml de reactivo GOPOD
a 50 ° C durante 20 min al mismo tiempo que las soluciones de muestra. La hidrólisis
por AMG se determinó incubando alícuotas de muestra (0,1 ml, ~ 0,5 mg / ml) en
tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 0 ml de reactivo GOPOD a 50 ° C durante 20
min al mismo tiempo que las soluciones de muestra. La hidrólisis por AMG se
determinó incubando alícuotas de muestra (0,1 ml, ~ 0,5 mg / ml) en tampón de
acetato de sodio 100 mM (pH
4.5) con 0,1 ml de AMG (10 U) durante 30 min a 50 ° C con
3,0 ml de reactivo GOPOD. La concentración total de carbohidratos
de las muestras se determinó en alícuotas de 0,1 ml utilizando el
procedimiento de ácido fenol-sulfúrico (DuBois et al., 1956).
Los residuos combinados de la precipitación con alcohol de
las mezclas de incubación de PAA / AMG (las fracciones de RS) se
suspendieron en 40 ml de NaOH 1,7 M, se calentaron a 50 ° C
durante 30 min y luego se neutralizaron mediante la adición de
160 ml de acetato de sodio 600 mM. tampón (pH 3.8) más CaCl 5
mM2; el pH fue ~ 5,3. Se añadió α-amilasa termoestable (2 ml,
2000 U / ml) y la solución se incubó a ~ 100 ° C durante 30 min.
La temperatura se redujo a 50 ° C y 2 ml de
8 |
Se añadió AMG (3300 U / ml) y las soluciones se incubaron
durante 30 min a 50 ° C y luego a ~ 100 ° C durante 10 min para
inactivar el AMG. La solución se concentró a ~ 20 mg de
carbohidratos / ml, se centrifugó a 29.000gramo durante 15 min
para eliminar un precipitado muy ligero (que en la recuperación
representó el 0,16% del total de carbohidratos en el Fibersym®
muestra) y alícuotas (16 ml) fraccionadas en una columna (5 × 95
cm) de Bio ‐ Gel P ‐ 2, Extra Fine (Bio ‐ Rad Laboratories) en agua
destilada a 60 ° C. Se recogieron fracciones de 20 ml y se
analizaron alícuotas para determinar los carbohidratos totales
mediante el procedimiento de ácido fenol-sulfúrico (DuBois et
al., 1956). Las fracciones individuales se concentraron (cuando
fue necesario) a ~ 0,5 mg / ml, y se analizaron alícuotas
duplicadas (0,1 ml) para determinar los carbohidratos totales
mediante el método de fenol-ácido sulfúrico. Se analizaron
alícuotas separadas (0,1 ml) para determinar la glucosa libre
mediante incubación con reactivo GOPOD (3,0 ml) a 50 ° C
durante 20 min o se incubaron con AMG (0,1 ml, 10 U) en
tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) para 30 min a 50 °
C y luego con reactivo GOPOD (3,0 ml) a 50 ° C durante 20 min, y
se midió la absorbancia a 510 nm frente a un blanco de reactivo.
2.6 | Medición de almidón digestible (RDS,
SDS, TDS) y resistente
Se pesaron muestras de cereales o alimentos finamente molidos
(<0,5 mm) (~ 0,5 g pesados con precisión) en tubos de polipropileno
de 30 x 84 mm (40 ml) y se registró el peso. Se añadió una barra
agitadora de 20 x 6 mm a cada tubo, la muestra se humedeció con
0,5 ml de etanol (95%v/v) y se añadieron 17,5 ml de tampón de
maleato a cada tubo. Los tubos se taparon y se colocaron en un
soporte especial de polipropileno (Figura
3) en un Mixdrive 15 de 2mag® agitador magnético sumergible
en un baño de agua y se dejó equilibrar a 37 ° C durante 5 min
con agitación a 170 rpm. Se añadió una alícuota (2,5 ml) de
solución PAA / AMG (PAA, 2 KU; AMG, 0,85 KU) y los tubos se
taparon y se incubaron a 37 ° C con agitación a 170 rpm en el
2mag Mixdrive 15® agitador magnético sumergible. Si un (NH4)2
ASI QUE4 Se utilizó una suspensión de esta preparación
enzimática (PAA, 2 KU / ml; AMG, 0,83 KU / ml), la muestra se
suspendió en 19 ml de tampón de maleato de sodio y se añadió
1,0 ml de suspensión enzimática.
2.6.1 | Determinación de DS
Se retiraron alícuotas (1,0 ml) de la solución de reacción agitada
usando un dispensador de desplazamiento positivo a los 20 min
(para la determinación de RDS), a los 120 min (para la determinación
de SDS; SDS = DS a los 120 min - DS a los 20 min), y a 240 min (para la
determinación de TDS). Estas alícuotas se añadieron inmediatamente
a 20 ml de solución de ácido acético 50 mM, y los tubos se taparon y
se mezclaron a fondo. Estos fueron almacenados en
METROClimpio Et AL.
4 ° C en espera de análisis. Se transfirieron alícuotas (2 ml) de cada
solución a tubos de microcentrífuga de polipropileno de 2,0 ml y se
centrifugaron a 8.000gramo durante 5 min. A continuación, se
transfirieron alícuotas duplicadas (0,1 ml) al fondo de tubos de
ensayo de vidrio de 16 x 100 mm, se añadieron 0,1 ml de AMG (10 U)
en tampón de acetato de sodio 200 mM (pH 4,5) y los tubos se
incubaron a 50 °. C durante 30 min. Se añadió reactivo GOPOD (3,0
ml) y los tubos se incubaron a 50ºC durante 20 min. Se preparó una
solución de blanco de reactivo mezclando 0,2 ml de ácido acético 200
mM (pH 4,5) con 3,0 ml de reactivo GOPOD e incubando a 50ºC
durante 20 min. Se prepararon estándares de glucosa (por
cuadriplicado) mezclando 0,1 ml de solución de glucosa (1 mg / ml)
con 0,1 ml de tampón de acetato de sodio 200 mM (pH 4,5) y 3,0 ml
de reactivo GOPOD e incubando a 50 ° C durante 20 min. La
absorbancia de cada solución se midió a 510 nm frente al blanco de
reactivo.
Calcular DS (RDS, SDS y TDS;% w/w, "Tal cual") en
probar las muestras de la siguiente manera:
S (RDS, SDS o TDS) (g∕Muestra de 100 g) = ΔA×F×EV∕W
×D∕0,1×100×1∕1.000.000×100∕W ×162∕180= ΔA
×F∕W ×0.38745.
donde ΔA = lectura de la absorbancia (reacción) frente al blanco
de reactivo después de 20 min (RDS); después de 120 min - 20
min (SDS); después de 240 min (TDS),F = conversión de
absorbancia a µg (se determina la absorbancia obtenida para
100 µg de glucosa en la reacción de GOPOD; F = 100 [µg de
glucosa] dividido por la absorbancia de GOPOD para estos 100
µg de glucosa), y EV = volumen de extracción (ml) = 20,5.
W = "tal cual ”peso de la muestra analizada en g, es decir, ~ 0.50 g
(pesada con precisión).
FIGURA 3 Muestras (~ 0,5 g) en 40 ml, 30 × 84 mm
tubos de polipropileno en un soporte de tubo de polipropileno diseñado
(Megazyme cat. no. D ‐ PPTH) [C (w)] en un 2mag Mixdrive 15®
agitador magnético sumergible en un baño de agua hecho a medida
(Megazyme cat. no. D ‐ TDFBTH). Esta disposición permite agitar 15 muestras a
velocidad controlada (170 rpm) y 37 ° C
METROClimpio Et AL.
D = dilución de la muestra (21; 1,0 ml de muestra añadida a 20 ml
de ácido acético diluido).
0,1 = volumen de muestra analizada. 100 = conversión a g /
100 g. 1 / 1.000.000 = conversión de µg a g. 162/180 = factor para
convertir de glucosa libre, según lo determinado, a anhidro-
glucosa como ocurre en el almidón.
Los cálculos se simplifican utilizando un Megazyme
MegaCalc ™ Excel®Calculadora basada en datos (DSTRS-DS)
en Información de apoyo.
2.6.2 | Determinación de RS
Se retiraron alícuotas (4 ml) de las soluciones de reacción en
agitación usando un dispensador de desplazamiento positivo
después de 240 min (4 h) de incubación y se transfirieron a tubos de
polipropileno de 13 ml y 16,5 x 101 mm que contenían 4,0 ml de
etanol (95%).v/v) o IMS. Los tubos se taparon y el contenido se
mezcló completamente mediante inversión repetida. Los tubos se
centrifugaron a 3250gramo durante 10 min en una centrífuga de
banco, y el sobrenadante se decantó cuidadosamente
inmediatamente después de que se detuviera la centrífuga. Cada
gránulo se resuspendió en 2 ml de 50%v/vIMS acuoso en agua
agitando en un mezclador de vórtice. Otros 6 ml de 50%v/v Luego se
añadió IMS acuoso al tubo, que luego se tapó, y el contenido se
mezcló en un mezclador de vórtice. Los tubos se centrifugaron y los
sedimentos se recuperaron mediante centrifugación. Este proceso de
suspensión y centrifugación se repitió y el sobrenadante volvió a
decantarse cuidadosamente. El líquido libre en el tubo se eliminó
invirtiendo los tubos sobre papel absorbente mientras se aseguraba
que el gránulo no se desprendiera. Se añadieron a cada tubo una
barra agitadora magnética (6 x 12 mm) y 2 ml de NaOH 1,7 M frío, y
los gránulos se resuspendieron (y el RS se disolvió) agitando el
contenido del tubo durante aprox. 20 min en un baño de hielo / agua
sobre un agitador magnético (Figura 2). Las soluciones se
neutralizaron con 8 ml de tampón de acetato de sodio 1,0 M (pH 3,8)
que contenía CaCl 5 mM.2, almidón hidrolizado y glucosa medida
como se describe para el método RS rápido.
Calcular RS (% w/w, sobre una base "tal cual") en muestras de prueba
como sigue:
S (g∕Muestra de 100 g)
= ΔA×F×EV∕4×FV∕0,1×1∕1.000.000×100∕W ×162∕180= ΔA×
F∕W ×FV×0,004613
donde ΔA = absorbancia (reacción) leída frente al blanco de reactivo,
F = conversión de absorbancia a µg (se determina la absorbancia
obtenida para 100 µg de glucosa en la reacción de GOPOD; F = 100
[µg de glucosa] dividido por la absorbancia GOPOD para estos 100
µg de glucosa), EV = volumen de extracción (ml) = 20,5, 4 = volumen
de solución extraído de la mezcla de reacción para el análisis RS, FV /
0,1 = alícuotas de 0,1 ml tomado del volumen final (FV, ya sea 100 o
10,3 ml) para la determinación de glucosa utilizando el reactivo
GOPOD, 1 / 1.000.000 = conversión
|9
de µg ag, 100 /W = conversión a g / 100 g, W = "tal cual ”peso de la
muestra analizada en g (~ 0.50 g pesados con precisión), y 162/180
= factor para convertir de glucosa libre, según se determina, a
anhidro-glucosa como ocurre en el almidón.
Los cálculos se simplifican utilizando un Megazyme MegaCalc
TM Sobresalir®Calculadora basada en datos (RAPRS-RS) en
Información de apoyo.
2,7 | Medición de carbohidratos
disponibles
2.7.1 | Método
Se pesaron muestras de cereales o alimentos finamente molidos
(~ 0,5 g pesados con precisión) en tubos de polipropileno de 30
x 84 mm (40 ml) y se registró el peso. A continuación, se realizó
la incubación con PAA / AMG durante 4 horas exactamente como
se describió anteriormente para "almidón digestible y
resistente". Se retiraron alícuotas (1,0 ml) y se añadieron a 25 ml
de ácido acético 50 mM como se describe y se mezclaron a
fondo, y las muestras (2 ml) se centrifugaron a 8.000gramo
durante 5 min. Se analizaron alícuotas (0,1 ml) de esta solución
para determinar los carbohidratos disponibles (almidón digerible
total, maltodextrinas, sacarosa, lactosa, glucosa y fructosa).
Todas las incubaciones se realizaron como se describe en la
Figura 4. Los reactivos necesarios para esta determinación están
disponibles en el kit de análisis de carbohidratos disponibles de
Megazyme (nº de cat. K ‐ AVCHO). Se incubaron alícuotas (0,1 ml)
de solución centrifugada en una cubeta de espectrofotómetro
con 0,1 ml de una solución que contenía β-galactosidasa (800 U /
ml), sacarasa (20 U / ml) y maltasa (100 U / ml) en 50 mM tampón
de maleato de sodio (pH 6,5) que contiene BSA (0,5 mg / ml) a 25
° C durante 20 min para hidrolizar lactosa, sacarosa y maltosa a
monosacáridos. Agua destilada (2,0 ml), tampón de imidazol (0,1
ml, 2 M, pH 7,6) que contiene MgCl2 (100 mM) y una solución (0,1
ml) de NADP+ (20 mg / ml) más ATP (40 mg / ml) y se mezclaron, y
la absorbancia (A1) medido a 340 nm después de 3 min. A
continuación, se añadió una alícuota (20 µl) de hexocinasa (420
U / ml) y glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (110 U / ml), se
mezcló la solución e incubó durante 5 min a 25 ° C, y la
absorbancia (A2) Medido. Luego se agregó una alícuota (20 µl) de
fosfoglucosa isomerasa (1,000 U / ml), la solución se mezcló e
incubó durante 10 min a 25 ° C, y la absorbancia (A3) Medido.
Finalmente, se añadió una alícuota (20 µl) de una mezcla de
galactosa deshidrogenasa (200 U / ml) y galactosa mutarotasa
(4,1 mg / ml) y la solución se mezcló e incubó durante 10 min a
25 ° C y la absorbancia (A4) Medido. La diferencia (A2 - A1) tanto
para el blanco (ver Figura 4) como para la muestra se determinó
y la diferencia de absorbancia del blanco se restó de la diferencia
de absorbancia de la muestra, obteniendo así ΔAglucosa. La
diferencia de absorbancia (A3 - A2) tanto para el blanco como
para la muestra se determinó y la diferencia de absorbancia del
blanco se restó de la diferencia de absorbancia de
10 | METROClimpio Et AL.

FIGURA 4 Procedimiento para el

medición secuencial de glucosa, fructosa y

galactosa en una cubeta de espectrofotómetro

la muestra, obteniendo así ΔAfructosa. La diferencia de Para fructosa (g / L):

absorbancia (A4 - A3) tanto para el blanco como para la muestra,
2,44×180,16
y la diferencia de absorbancia del blanco se restó de la diferencia = × ΔA fructosa ×26
6300×1×0,1
de absorbancia de la muestra, obteniendo así:
= 18,124× ΔAfructosa
ing ΔAgalactosa.
La concentración de glucosa, fructosa y galactosa (g / L) se Para galactosa (g / L):
calculó de la siguiente manera: 2,46×180,16
= × ΔA galactosa ×26
V ×MW 6300×1×0,1
= × ΔA×D. = 18,290× ΔAgalactosa
×D×v
dónde V = volumen final (ml); PM = peso molecular de Al analizar muestras sólidas y semisólidas que se pesan para la
glucosa, fructosa o galactosa (g / mol);ε = coeficiente de preparación de la muestra, el contenido (g / 100 g) se calcula a partir
extinción de NADPH a 340 nm = 6,300 (L × mol−1 × cm−1);D = de la cantidad pesada de la siguiente manera:
camino de luz (cm); v = volumen de muestra (ml); D = factor
de dilución (26 veces). contenido de D-glucosa (g∕100 gramos) :

Sigue para la glucosa (g / L): =CD − glucosa (gramo∕L)×EV∕1000×1∕W ×100

2,42×180,16
=
6300×1×0,1 × ΔAglucosa ×26
contenido de D-fructosa (g∕100 gramos) :

=CD-fructosa (gramo∕L)×EV∕1000×1∕W ×100

= 17,993× ΔAglucosa
METROClimpio Et AL.
contenido de D-galactosa (g∕100 gramos) :
=CD-galactosa (gramo∕L)×EV∕1000×1∕W ×100
dónde CD‐ glucosa (g / L) = concentración de D‐ glucosa por litro de
solución de extracción sin diluir, CD ‐ fructosa (g / L) = concentración
de D ‐ fructosa por litro de solución de extracción sin diluir, CD-
galactosa (g / L) = concentración de D-galactosa por litro de solución
de extracción sin diluir, EV = volumen de solución usado en la
extracción inicial (20.5), EV / 1,000 = ajuste de g / L de solución de
extracción sin diluir a g / volumen de solución de extracción
realmente utilizada, W = peso de la muestra analizada en gy 100
= conversión de los resultados a g / 100 g.
carbohidratos disponibles (g∕100 g) = D − glucosa (g∕
100 g) + D-fructosa (g∕100 gramos)
+ D−galactosa (g∕100 gramos)
Los cálculos se simplifican utilizando un Megazyme
MegaCalcTM Sobresalir®Calculadora basada en datos
(AVCHO) en Información de apoyo.
2.8 | Hidrólisis de sacarosa, raftilosa® y
Raftaline® (FOS) por invertasa (β ‐
fructofuranosidasa) y sacarasa
Alícuotas de sacarosa, Raftaline® o Raftilose® (1,0 ml, 10 mg / ml),
en agua destilada se incubaron con invertasa (1,0 ml, 200 U en
sacarosa) en tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) o
sacarasa (1,0 ml, 40 U en sacarosa) en 100 Tampón de maleato
de sodio mM (pH 6,5) que contiene BSA (0,5 mg / ml) a 30ºC. Las
incubaciones se terminaron a los 10, 30 o 60 min colocando los
tubos en un baño de agua hirviendo durante 5 min. Se realizó
una incubación de tiempo cero incubando la enzima en el baño
de agua hirviendo durante 5 minutos antes de agregar la
sacarosa, Raftaline® o Raftilose®. Todas las muestras se
transfirieron a tubos de microcentrífuga y se centrifugaron a
8.000 gramo durante 3 min. Se analizaron alícuotas de las soluciones
sobrenadantes por HPLC usando dos TSKgel® G2500PWSGcolumnas,
30 cm × 7,8 mm, conectadas en serie. Las columnas se hicieron
funcionar a 80 ° C con una fase móvil de agua destilada a 0,5 ml /
min. Se empleó una columna de protección de cationes / aniones de
Bio-Rad Laboratories (nº de cat. 125-0118) para desionizar las
muestras.
3|
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3.1 | Medición de RS (método rápido)
y DS
A través del programa de investigación europeo EURESTA, se
desarrolló una gama de métodos para la medición de RS
(Akerberg et al., 1998; Champ, 1992; Champ et al., 1999;
Englyst et al., 1992; Faisant et al., 1995 ; Goni et al.,
|11
1996; Muir y O'Dea, 1992), la mayoría involucró una incubación
de aproximadamente 16 horas con α-amilasa pancreática (PAA)
con agitación a 37 ° C. El Método AOAC 2002.02, que combina
muchos de los atributos de estos métodos, fue sometido a una
evaluación interlaboratorios en la que participaron 39
laboratorios de todo el mundo. Las condiciones de incubación
empleadas en el método AOAC 2009.01 (el método TDF
integrado) se basan en las utilizadas en el método AOAC
2002.02; sin embargo, la escala del ensayo se incrementó 10
veces para asegurar que se recuperara suficiente residuo para
una medición gravimétrica precisa. Una de las principales críticas
del método AOAC 2009.01 fue que el tiempo de incubación con
PAA / AMG de 16 horas no es fisiológicamente relevante. En
respuesta, se desarrolló un método modificado que implicaba un
tiempo de incubación con PAA / AMG de 4 h. Se aumentaron las
concentraciones de PAA y AMG para garantizar que los valores
de RS obtenidos con este método (el método TDF integrado
rápido) coincidieran con los obtenidos con los métodos AOAC
2002.02 y 2009.01 y los estudios de ileostomía. Este método se
evaluó con éxito bajo los auspicios de AOAC International e ICC
para convertirse en el Método AOAC 2017.16 y el Método ICC
185. En el trabajo actual, estas modificaciones del ensayo se
aplicaron al método original del almidón resistente (Método
AOAC 2002.02) en el desarrollo de un método RS rápido. . Las
incubaciones se realizan en tubos de polipropileno desechables
a prueba de fugas, y la cantidad de muestra (~ 100 mg) y el
volumen de tampón (4 ml) son una décima parte de los
empleados en el Método AOAC 2017.16. Concentraciones de
enzimas (PAA 0,4 KU / 4 ml; AMG 0,17 KU / 4 ml; Tabla 1), tampón
pH (6,0), tiempo de incubación (4 h), y la temperatura de
incubación (37 ° C) son las mismas que las empleadas en el
Método AOAC 2017.16. Las incubaciones se realizaron en un
baño de agua con agitación (200 golpes lineales por minuto) con
los tubos alineados en la dirección de agitación para asegurar la
suspensión completa de la muestra durante el período de
incubación (Figura 1). Los valores de almidón resistente
obtenidos para una variedad de muestras utilizando el método
AOAC 2002.02 y el nuevo método rápido RS se muestran en la
Tabla 2. Se obtuvieron valores muy similares para una amplia
gama de muestras, pero se obtuvo un valor ligeramente más
alto para la amilosa nativa alta almidón de maíz, Hylon VII, en
línea con los resultados obtenidos con el Método AOAC 2017.16
para fibra dietética. La repetibilidad del método RS rápido se
determinó analizando siete muestras por duplicado durante 4
días, y los resultados se muestran en la Tabla 3. Los valores de
repetibilidad entre días oscilaron entre 2.
3,0%. La desviación estándar de repetibilidad interdiaria muy alta
para el almidón de trigo se relaciona con el nivel muy bajo de RS en
esta muestra. Estos resultados demuestran que el método RS rápido
es tan repetible como el método AOAC 2002.02 y que se obtienen
valores muy similares para la mayoría de las muestras. La ventaja
significativa es que el tiempo de incubación se reduce a
12 | METROClimpio Et AL.

TABLA 2 Una comparación de los valores

AOAC Rapid RS (muestras de Almidón digestible
obtenido para el contenido de almidón resistente de
2002.02 100 mg) procedimientoa
una variedad de muestras utilizando el método AOAC
Almidón de maíz regular (lote 60401) 1.0 1.2 1,6 2002.02, el método del almidón resistente rápido (RS), y

Almidón de maíz con alto contenido de amilosa (lote 43,0 47,3 40,6 el RS medido como parte del procedimiento de almidón

60107) digestible / almidón resistente descrito en este estudio

Hola Maize 1043® (Lote 02161) 45,7 45,0 44,5

Hylon VII® (Ref 98GH8401) 48,6 52,3 48,7
Almidón de trigo (Sigma Lot 0.4 0,3 0,2
S512L) Novelose 330® 42,0 37,5 37,0
Novela 240® 42,9 42,6 43,1
Cristalino® 40,9 36,7 37,6
Fécula de patata nativa (Avebe) 63,4 63,9 30,8
Amilosa de patata 35,6 35,3 32,9
Actistar® 49,2 49,3 47,0
Heinz® frijoles horneados (liofilizados) 3.6 3.8 4.3
Brennans® Pan integral Frijoles de 0,9 0,8 0,7
mantequilla de soltero enlatados 3.1 3.3 3.1
Kellogg's® copos de maíz 2.2 2.1 1,9
UB arroz hervido express Ryvita® 2.4 2.4 2.3
galletas de centeno oscuro 1,7 1,9 1,9
aEn este procedimiento, se retiró una alícuota (4 ml) de la suspensión de reacción agitada y se añadió a 4 ml de etanol
y se recuperó el RS y se lavó como en el método RS rápido, se hidrolizó y analizó.

el tiempo fisiológicamente relevante de 4 horas, y con este Fibersym® utilizando el Shukri et al. (2015), Shi et al. (2019), o el
tiempo reducido, no hay necesidad de conservante de azida procedimiento actual de 50 ° C-NaOH. En todos los casos,
sódica en el tampón de incubación. Fibersym® se incubó primero con PAA / AMG según el método RS
rápido, y luego, los residuos se disolvieron e hidrolizaron según

3.2 | Medición de almidón reticulado

con fosfato (RS4)
Es bien sabido que el componente de almidón resistente de
Fibersym® (RS4) no se mide cuantitativamente en las
condiciones descritas para la disolución e hidrólisis de otras
fracciones de almidón resistentes. RS4 no se disuelve en
DMSO a ~ 100 ° C y solo es parcialmente soluble en KOH 2 M
o NaOH 1,7 M a 0–4 ° C. Shukri y col. (2015) y Shi et al. (2019)
han descrito dos métodos bastante prolongados para la
disolución y medición de RS4.
En los estudios actuales, se evaluaron diversos disolventes y
condiciones de incubación. Las muestras se suspendieron en
tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 4,5) más CaCl2 a 100 °
C, NaOH 1,7 M (a 4 o 50 ° C), o KOH 2 M (a 4 ° C, como en el
método RS rápido). Después del ajuste del pH de las soluciones
alcalinas a ~ pH 5,3, las soluciones se incubaron con α-amilasa
termoestable a 100 ° C seguido de AMG a 50 ° C. En otras
opciones, se eliminó la incubación con α-amilasa termoestable a
100 ° C (según el método RS rápido). En todos los casos, los
volúmenes se ajustaron a 100 ml y se extrajeron muestras para
la determinación de glucosa. En la Tabla 4, los valores de
almidón obtenidos para la fracción RS de
Shukri et al. (2015), Shi et al. (2019), o el procedimiento 50 ° C-
NaOH. Para Fibersym®, la fracción de DS fue ~ 33% w/w (tal cual)
(promedio de todas las muestras) y la fracción RS para los tres
métodos fue muy similar en ~ 39.5% -42.0% (tal cual). Sobre el
análisis directo del contenido total de almidón de Fibersym® con
Shukri et al. (2015) método, un valor de 81,3%w/w (dwb), y el
método Shi dio ~ 82,3% w/w (dwb), mientras que para el
procedimiento de 50 ° C-NaOH un valor de ~ 84,0% w/w (dwb).
En ningún caso se obtuvieron valores superiores al 84,0% (dwb).
Los valores totales de almidón obtenidos para el almidón de
trigo utilizando el procedimiento 50 ° C-NaOH fueron ~ 94,9%w/
w (dwb) y que para Hylon VII fueron ~ 95.2% w/w (dwb)
consistente con los valores obtenidos con otros procedimientos.
En un intento por comprender mejor los pasos clave
involucrados en la hidrólisis de Fibersym®, se estudiaron el
efecto de la temperatura de incubación en presencia o ausencia
de NaOH 1,7 M, el papel de la α-amilasa termoestable y el
tiempo de incubación con AMG y los resultados se resumen en la
Tabla 5. En cada caso, el DS se hidrolizó y eliminado según el
método RS rápido y un valor medio del 32,8% w/w(como es la
base) se obtuvo. Los valores obtenidos para la fracción RS
variaron significativamente. En las condiciones de incubación.
METROClimpio Et AL.
|13
TABLA 3 Estudio de repetibilidad del método de almidón resistente rápido (RS) para la medición de RS en una variedad de materiales alimenticios

Almidón resistente, % (w/w)a, significarB ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr)

Interday significa,
Muestra Día 1 Dia 2 Día 3 Día 4 ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr)

Heinz® frijoles [InterLab 13.08.13] 3,4 ± 0 3,7 ± 0 3,6 ± 0,2 3,7 ± 0 3,6 ± 0,3
0,04 0,44 3.10 0,63 3,91
Almidón de trigo, sin modificar, Sigma 0,3 ± 0 0,4 ± 0,1 0,3 ± 0 0,3 ± 0 0,3 ± 0,1
S5127, lote 0490048 2.21 12.47 2,24 2.15 18.01
Kellogg's® hojuelas de maíz 20.12.10 2 ± 0,1 2,2 ± 0,1 2,1 ± 0 2,1 ± 0 2,1 ± 0,2
1,61 1,82 0,54 0,23 3,78
Garbanzos en conserva 20/7/11 4,3 ± 0,1 4,7 ± 0 4,6 ± 0,1 4,6 ± 0,1 4,5 ± 0,3
1,28 0,39 1,56 1,26 3,40
Plátano semigreen 18,6 ± 0,3 18,7 ± 0,6 20 ± 1,1 20,6 ± 0,4 19,5 ± 1,9
0,81 1,72 2,65 0,95 4.84
Fécula de patata nativa Sigma S ‐ 4851 70 ± 0,5 69 ± 1,3 71,6 ± 0,5 72,7 ± 0,2 70,8 ± 3,1
Lote 49H04211 0,36 0,91 0,32 0,11 2.21
Hylon VII® MUY 60901 47,3 ± 1,6 48,4 ± 0,5 49,5 ± 0,3 49,2 ± 2,1 48,6 ± 2,1
1,69 0,50 0,30 2.17 2.17
ActiStar® (antes de la purificación) 46,7 ± 0,6 48,6 ± 0,1 49,7 ± 0,9 51,9 ± 0 49,2 ± 4
0,69 0,10 0,89 0,03 4.07
Abreviaturas:% RSDr, desviación estándar de repetibilidad; Dakota del Sur, Desviación
Estándar.aTodos los resultados se presentan como almidón "tal cual".BCada día, las muestras
de cada material se analizaron por duplicado.

TAB LE 4 Una comparación de los métodos empleados para medir el almidón total en Fibersym® y otros almidones, ya sea directamente o combinados

valores de almidón digestible y almidón resistente

Almidón digestible Almidón resistente Almidón total

Muestra Método (como es) (como es) Almidón total (como está) (dwb)

Fibersym® Shukri y col. (2015)a - - 72,4 ± 0,4 81,3 ± 0,7

Shukri y col. (2015)B 32,8 ± 0,2 39,5 ± 0,1 72,3 ± 0,1 81,1 ± 0,1
Shi y col. (2019)a - - 73,3 ± 0,2 82,3 ± 0,2
Shi y col. (2019)B 33,0 ± 0,1 39,9 ± 0,1 72,9 ± 0,1 81,8 ± 0,1
NaOH 15 min a 50 ° Ca - - 73,8 ± 0,7 82,8 ± 0,8
NaOH 15 min a 50 ° CB 32,9 ± 0,2 42,0 ± 0,2 74,9 ± 0,2 84,0 ± 0,3
NaOH 30 min a 4 ° Ca - - 69,7 ± 0,4 78,2 ± 0,4
NaOH 30 min a 4 ° CB 33,0 ± 0,1 37,1 ± 0,9 70,1 ± 0,8 78,7 ± 0,8
Hylon VII® Shukri y col. (2015)a - - 76,1 ± 0,3 87,2 ± 0,3
Shukri y col. (2015)B 38,7 ± 0,9 38,2 ± 2,0 76,9 ± 1,5 88,1 ± 1,6
Shi y col. (2019)a - - 75,0 ± 0,2 86,0 ± 0,2
Shi y col. (2019)B 38,6 ± 0,5 40,3 ± 0,7 78,9 ± 0,6 90,5 ± 0,7
NaOH 15 min a 50 ° Ca - - 83,0 ± 0,3 95,2 ± 0,4
NaOH 15 min a 50 ° CB 38,6 ± 0,5 43,1 ± 0,6 81,7 ± 0,5 93,7 ± 0,6
NaOH 30 min a 4 ° Ca - - 83,8 ± 0,6 96,2 ± 0,7
NaOH, 30 min a 4 ° CB 38,6 ± 0,1 43,3 ± 0,6 81,9 ± 0,5 93,9 ± 0,6
Almidón de trigo Shukri y col. (2015)a - - 82,3 ± 0,1 93,0 ± 0,1
Shi y col. (2019)a - - 78,1 ± 1,2 88,2 ± 1,3
NaOH 15 min a 50 ° Ca - - 84,0 ± 1,2 94,9 ± 1,3
NaOH 15 min a 50 ° CB 84,7 ± 0,7 0,2 ± 0,1 85,2 ± 0,7 96,3 ± 0,8
NaOH 15 min a 4 ° Ca - - 85,3 / 83,7 95,5 / 93,7

Nota: El Shukri et al. (2015) y Shi et al. (2019) se realizaron según lo descrito por los autores, excepto que la incubación inicial con PAA / AMG fue de 4 horas de acuerdo con el
Método AOAC 2017.16. El procedimiento de NaOH / 50 ° C se realizó como se describe en este estudio.
aAlmidón total determinado directamente.BAlmidón total determinado como los valores combinados de

almidón digerible y resistente.

14 | METROClimpio Et AL.

TAB LE 5 El efecto de las condiciones de digestión y tratamientos enzimáticos sobre la medición del contenido de almidón de Fibersym®

α-amilasa Incubación Total

NaOH (15 min) (280 U, 100 ° C) tiempo con Almidón digestible Resistente Almidón total almidón

Temperatura de Incubación 300 U g / 100 g almidón (g / 100 g) (g / 100 g) "como (g / 100 g)

Muestras incubación tiempo, min AMG (min) "como es"a "como es" es" "Dwb"

A No incluido 15 30 32,8 ± 0,4 40,0 ± 0,6 72,8 ± 0,5 81,7 ± 0,5

B No incluido 30 30 32,8 ± 0,4 40,5 ± 0,6 73,3 ± 0,5 82,3 ± 0,5
C No incluido 60 30 32,8 ± 0,4 40,2 ± 0,5 73,0 ± 0,5 81,9 ± 0,5
D 4°C 0 30 32,8 ± 0,4 1,6 ± 0,2 34,4 ± 0,3 38,6 ± 0,4
mi 4°C 30 30 32,8 ± 0,4 39,9 ± 1,0 72,7 ± 0,8 81,6 ± 0,9
F 50 ° C 0 30 32,8 ± 0,4 5,4 ± 0,6 37,2 ± 0,5 41,7 ± 0,6
GRAMO 50 ° C 30 30 32,8 ± 0,4 41,2 ± 0,5 74,0 ± 0,5 83,1 ± 0,5
H 50 ° C 30 60 32,8 ± 0,4 41,5 ± 0,6 74,3 ± 0,5 83,4 ± 0,6

Nota: A. El residuo que contenía RS se suspendió en 8 ml de tampón de acetato de sodio 100 mM (pH 5,0) y se incubó con α-amilasa termoestable durante 15 min y con AMG como se muestra en
la tabla durante 15 min.
B. Las incubaciones se realizaron como en el ejemplo A, pero incubación con α-amilasa termoestable durante 30 min.

C. Las incubaciones se realizaron como en el ejemplo A, pero incubación con α-amilasa termoestable durante 60 min.

D. El residuo que contenía RS se suspendió en NaOH a 4ºC y se agitó durante 15 min. Después, la solución se neutralizó con tampón acetato y se añadió AMG (330 U) y se
incubó a 50ºC durante 30 min.
E. El residuo que contenía RS se suspendió en NaOH a 4ºC y se agitó durante 15 min. Después, la solución se neutralizó con tampón acetato; Se añadió α-amilasa (280 U) y se
incubó a 100 ° C durante 30 min. La temperatura se redujo a 50 ° C y se añadió AMG (330 U) y se incubó durante 30 min.
F. El residuo que contenía RS se suspendió en NaOH a 50 ° C de acuerdo con el método RS rápido. Después, la solución se neutralizó con tampón acetato y se añadió AMG
(330 U) y se incubó a 50ºC durante 30 min.
G. El residuo que contenía RS se suspendió en NaOH a 50 ° C de acuerdo con el método RS rápido. Luego, la solución se neutralizó con tampón acetato, se añadió α-
amilasa (280 U) y se incubó a 100 ° C durante 30 min. La temperatura se redujo a 50 ° C y se añadió AMG (330 U) y se incubó durante 30 min.
H. Las incubaciones fueron las mismas que para “G”, excepto que la incubación con AMG fue de 60 min.aEl
valor mostrado es un promedio de las determinaciones para todas las muestras.

empleado en el método RS rápido estándar (1,7 M NaOH a 4
° C) (Ejemplo D), poco de RS en Fibersym® fue hidrolizado (~
1.6% w/w). Curiosamente, se hidrolizó muy poca fracción
resistente (~ 5,4%w/w) incluso si la incubación con NaOH se
realizó a 50 ° C (Ejemplo F). En todos los casos en los que se
empleó α-amilasa termoestable, se obtuvieron los valores
más altos de almidón. Valores similares (~ 84%w/w) se
obtuvieron en incubación con α‐ amilasa termoestable, ya
sea (ejemplos G y H) o no (ejemplos A – C) el Fibersym® se
pretrató con 1,7 NaOH a 50 ° C durante 15 min. El aumento
del tiempo de incubación con AMG de 30 a 60 min (ejemplos
G y H) no dio ningún aumento en los valores determinados.
Aumentar el tiempo de incubación con NaOH 1,7 M a 50 ° C
de 15 min a 30, 60 o
120 min (valores no mostrados) no dieron ningún cambio en los
valores de almidón determinados para la fracción RS de
Fibersym®. En ningún caso el valor combinado del almidón
digestible más el almidón de la fracción de residuo (RS) para
Fibersym® (medido como glucosa con reactivo GOPOD) supere el
84% w/w(dwb). Los valores de almidón determinados usando
DMSO o NaOH para disolver Fibersym® se comparan en la Tabla
6. Con el formato DMSO (Método AOAC 996.11), el valor de
almidón obtenido (66,0%) es aproximadamente el 80% del
obtenido por Shukri et al. (2015) (Tabla 4), en consonancia con lo
informado por estos autores.
En un intento de intentar comprender por qué la recuperación
cuantitativa de Fibersym® como no se alcanza la glucosa en los ensayos de
almidón, las muestras digeridas (almidón total, almidón digerible

TAB LE 6 Efecto del disolvente de disolución y la temperatura de disolución en la medición del contenido de almidón de Fibersym® y Hylon VII

Tiempo de incubación con

Incubación con disolvente α-amilasa Almidón total,% w/w dwb

Solvente Tiempo Temperatura Tiempo a 100 ° C Fibersym® Hylon VII

DMSO (2 ml) 5 minutos 100 ° C 6 min en MOPS (pH 6,5) 66,0 ± 0,8 94,5 ± 0,9
KOH (2 ml, 2 M) 20 minutos 4°C 30 min en acetato (pH 5) 81,3 ± 0,4 95,1 ± 1,5
NaOH (2 ml, 1,7 M) 15 minutos 50 ° C 30 min en acetato (pH 5) 83,7 ± 0,2 95,6 ± 0,6
Tampón de acetato de sodio - 100 ° C 30 min en acetato (pH 5) 80,5 ± 0,1 87,6 ± 0,5
(10 ml, 100 mM)
METROClimpio Et AL.
[DS] y fracciones de almidón resistente digerido [DRS]) se analizaron
tanto para carbohidratos totales por el procedimiento de ácido fenol-
sulfúrico como para glucosa por el método GOPOD. Como referencia,
Hylon VII® se analizó al mismo tiempo y la glucosa determinada fue ~
98% del valor total de carbohidratos. Para Fibersym®, la glucosa fue ~
92% del valor total de carbohidratos, lo que demuestra claramente
que el hidrolizado todavía contenía ~ 8% de glucosa / gluco-
oligosacáridos químicamente modificados que son resistentes a la
hidrólisis de glucosa por AMG y, por lo tanto, no se miden con el
reactivo GOPOD específico de glucosa. . Para identificar aún más la
naturaleza de las fracciones resistentes, Fibersym® se hidrolizó con
PAA / AMG de acuerdo con el procedimiento de almidón resistente
rápido (durante 4 horas a 37 ° C). Las fracciones de DS de 20
incubaciones se combinaron, concentraron y cromatografiaron en
Bio ‐ Gel P ‐ 2. Las fracciones de residuos en las incubaciones de
PAA / AMG también se combinaron, se lavaron con etanol acuoso al
50%, se agitaron en NaOH 1,7 M a 50 ° C durante 30 min, se
neutralizaron e hidrolizaron con α‐ amilasa termoestable durante 30
min a 100 ° C seguido por AMG durante 30 min a 50 ° C. En estas
condiciones, el residuo se solubilizó esencialmente por completo. La
fracción de DRS también se concentró y se cromatografió en Bio ‐ Gel
P ‐ 2. Las fracciones se recolectaron y analizaron en busca de
carbohidratos (Figura 5) utilizando el procedimiento de fenol-ácido
sulfúrico (DuBois et al., 1956). La fracción de DS consistió en 89% de
monosacárido (que se demostró que es exclusivamente glucosa
usando el reactivo GOPOD), 4% de disacárido, 2% de trisacárido y 5%
de oligosacáridos de DP superior. Los di‐ y trisacáridos fueron
completamente hidrolizados a glucosa por AMG, mostrando que
eran maltosa y maltotriosa que escaparon a la hidrólisis por AMG en
la incubación inicial con PAA / AMG. La fracción de DP más alta se
hidrolizó hasta un grado <5% por AMG. Por lo tanto, la fracción de
almidón digerible
|15
contenía ~ 5% de oligosacáridos resistentes a la digestión por
AMG, y esto representa 5 × 32,8 / 100% (es decir, 1,6%) del total
de Fibersym® muestra. La fracción de DRS consistió en 87% de
monosacárido (demostrado ser exclusivamente glucosa usando
el reactivo GOPOD), ~ 7% de disacáridos, 1% de trisacárido y ~
5% de oligosacáridos de DP superior. Las fracciones de di y
trisacáridos (~ 8%) fueron resistentes a la hidrólisis por AMG, y la
fracción de DP más alta (~ 5%) se hidrolizó en un grado <5% por
AMG (es decir, 4,8% de oligosacáridos resistentes). Por tanto, las
fracciones resistentes combinadas en DRS eran ~ 13% del
hidrolizado total. De la Tabla 5, Ejemplo "B", la fracción de DS es
32,8% "tal cual" y la fracción de almidón resistente es 42,8% "tal
cual" determinada como glucosa. Teniendo en cuenta la relación
de glucosa determinada con respecto al contenido total de
carbohidratos (fenol-sulfúrico) de estas dos fracciones, la
recuperación total de la muestra es 32,8 × 100/95 (fracción DS) +
42,8 × 100/87 (fracción DRS) = 34,5 + 49,2 o 83,7% "tal cual" (es
decir, 93,7% "dwb"). La fracción de almidón resistente es ~ 55%
"dwb" (de la fracción DRS) más ~ 2% (de la fracción DS), es decir,
57% dwb, consistente con los valores obtenidos por gravimetría
en el Método AOAC 2017.16.
La hidrólisis del almidón mediante mezclas de PAA / AMG depende
fundamentalmente tanto de las concentraciones de las enzimas utilizadas
como del tiempo de incubación. En el método AOAC 2002.02, se emplean
0,2 KU de PAA y 0,014 KU de AMG por ensayo (en
4,0 ml de tampón) y se realizan incubaciones a 37 ° C durante 16 h.
Este tiempo de incubación se eligió sobre la base de trabajos
publicados previamente (Akerberg et al., 1998; Champ, 1992; Champ
et al., 1999; Faisant et al., 1995; Goni et al., 1996; Muir & O'Dea , 1992)
y particularmente porque el valor de RS obtenido para un conjunto
de muestras de referencia estaba en línea con los resultados de los
estudios de ileostomía (Champ et al., 1999). El tiempo

5
Fracción de almidón digestible (DS) de Fibersym
Glucosa
4
Carbohidrato, mg / ml

Glucosa = 89%
3 DP 2 = 4%
DP 3 = 2%
DP más alto = 5%
2

1 DP más alto 2
3
0
20 25 30 35 40 45 50 55 60 70
sesenta y cinco 75 80 85 90 95
Número de tubo (20 ml / tubo)

2.5
Fracción de almidón resistente digerido (DRS) de Fibersym Glucosa

2.0
Carbohidrato, mg / ml

FIGURA 5 Cromatografía activada Glucosa = 87%

1,5 DP 2 = 7%
Bio ‐ Gel P ‐ 2 de las fracciones de "almidón DP3 = 1%
DP más alto = 5%
digestible" e hidrolizado "almidón resistente" 1.0
de Fibersym®. Se aplicaron muestras (20 ml, 20
0,5 DP más alto
2
o 30 mg / ml) y se eluyeron con agua destilada
3
a 60ºC. Se recogieron fracciones (20 ml) y se 0.0
analizaron los carbohidratos mediante el 20 25 30 35 40 45 50 55 60 sesenta y cinco70 75 80 85 90 95
procedimiento de fenol-ácido sulfúrico. Número de tubo (20 ml / tubo)
dieciséis | METROClimpio Et AL.
100
Almidón digestible g / 100 g (dwb)
80
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10
Tiempo de incubación, h
FIGURA 6 Hidrólisis en el tiempo de una variedad de almidones y
Alimentos que contienen almidón mediante una mezcla de α-amilasa
pancreática y amiloglucosidasa en las condiciones de incubación del
procedimiento TDF integrado (Método AOAC 2009.01). Se retiraron
muestras (0,5 ml) a varios intervalos de tiempo, se inactivaron las enzimas
y se midió la glucosa de acuerdo con los materiales y métodos.
La hidrólisis del curso de una variedad de almidones en estas
condiciones se muestra en la Figura 6. En sus estudios sobre la
medición del contenido de RS de Fibersym®, tanto Shukri et al. (2015)
y Shi et al. (2019) utilizaron las condiciones de incubación del método
AOAC 2002.02, excepto que el tiempo de incubación con PAA / AMG
se redujo de 16 a 2 h. Como era de esperar, mucho menos de
Fibersym® se hidrolizó y, por lo tanto, se obtuvieron valores de RS
mucho más altos. En la Figura 6, se puede ver que bajo las
condiciones de incubación del Método AOAC 2002.02, Fibersym®
se hidroliza en una extensión de ~ 70% después de 16 h (es decir, ~ 30%
RS), pero solo 13% después de 2 h. Con un tiempo de incubación de 2
horas, incluso el almidón de trigo tiene un valor RS de ~ 60%w/w, que
muestra claramente que el uso del contenido de PAA / AMG empleado en
el método AOAC 2002.02 con este tiempo de incubación reducido genera
resultados sin sentido. El método AOAC 2009.01 emplea las condiciones
de incubación del método AOAC 2002.02 y un valor de DF de ~ 30%w/w
fue obtenido para Fibersym®. Este método se actualizó recientemente
(Método AOAC 2017.16) al reducir el tiempo de incubación a 4 horas y al
mismo tiempo aumentar las concentraciones de PAA y AMG para
garantizar que los valores de RS obtenidos con un conjunto de muestras
de referencia aún estén alineados con los datos de ileostomía. En estas
condiciones, un valor RS de ~ 60%w/w fue obtenido para Fibersym®,
todavía significativamente menor que el valor de ~ 86% w/w(dwb)
informado por Maningat, Seib y Bassi (2013).
3.3 | Medición de almidón digerible y
almidón resistente.
El método descrito aquí para la medición de almidón digestible y
almidón resistente está estrechamente alineado con el método de
Englyst et al. (1992), con la modificación de que las muestras se
extraen para su análisis a los 20, 120 min y también 240 min.
Almidón de trigo Además, el contenido de almidón resistente de la muestra se mide
FiberRite directamente en lugar de por diferencia como en Englyst et al. (1992)
Copos de maíz procedimiento. Otra diferencia es que se emplean enzimas
Fibersym
estandarizadas altamente purificadas y las incubaciones se realizan
Brennans WMB
en tubos que permiten la extracción de la muestra mientras continúa
Hylon VII
la incubación (Figura 3). Las condiciones de incubación son idénticas
a las del Método AOAC 2017.16, excepto que el tamaño de la
Frijoles horneados
muestra, los volúmenes de tampón y las cantidades de PAA y AMG se
reducen al doble. La concentración de la enzima, el pH y la
temperatura de incubación y las condiciones de agitación son las
mismas. De acuerdo con el método de Englyst et al. (1992), se
12 14 dieciséis extraen alícuotas de muestra a los 20 minutos para medir el almidón
de digestión rápida (RDS) y a los 120 minutos para medir el almidón
de digestión lenta (SDS). Sin embargo, se extrae una tercera muestra
a los 240 min (4 h) para medir el almidón digestible total (TDS); [ver
“Medición de almidón digerible (RDS, SDS, TDS) y resistente” -
Métodos]. Este tiempo está en línea con el tiempo de residencia de
los alimentos en el intestino delgado humano (Camalilleri et al., 2010;
Deiteren et al., 2010; Geboes et al., 2003; Geypens et al., 1999; Miller
et al., 2010). ., 1997; Sadik et al., 2003; Stotzer y Abrahamsson, 2010;
Zarate et al., 2010). Después de 240 min (4 h) de incubación, se
extrae una muestra (4 ml) para medir el almidón resistente. La
muestra se agrega a 4 ml de etanol, y todos los pasos posteriores de
lavado, disolución e hidrólisis son los mismos que los empleados en
el método RS rápido. La repetibilidad de este método para la
medición de RDS, SDS, TDS y RS se muestra en las Tablas 7 a 10. Se
analizaron siete muestras con un amplio rango de valores de
almidón digestible y resistente, y se obtuvo una excelente
repetibilidad para cada valor para todas las muestras. Los valores de
almidón resistente determinados para un rango de muestras con el
método de almidón digestible / resistente se comparan con los
valores obtenidos con el método AOAC 2002.02 y el método rápido
RS en la Tabla 2. Se obtuvieron valores similares con cada uno de los
procedimientos con la clara excepción de la papa nativa. almidón,
que se sabe que es un almidón frágil y que se daña fácilmente en
condiciones de incubación que requieren agitación (McCleary y
Monaghan, 2002).
3.4 | Medición de carbohidratos
disponibles
Los carbohidratos disponibles se han definido como la suma de
azúcares (glucosa, fructosa, galactosa, sacarosa, maltosa, lactosa
y oligosacáridos) y carbohidratos complejos ("malto" dextrinas,
almidón y glucógeno; Anon, 2003). Históricamente, estos se han
medido individualmente mediante una combinación de
procedimientos enzimáticos y de HPLC y los valores agrupados.
El método aquí descrito implica la hidrólisis completa y específica
de cada carbohidrato a los componentes monosacáridos,
glucosa, fructosa y galactosa y la medición enzimática específica
de estos en una sola cubeta de reacción. Con el mayor
conocimiento de la hidrólisis del almidón en el intestino delgado
humano y el reconocimiento de la importancia
METROClimpio Et AL.
|17
TAB LE 7 Estudio de repetibilidad en el
Almidón de rápida digestión,% (w/w)a, significarB ± 2 Dakota del Sur, (%
medición de "almidón de digestión rápida" en el
RSDr)
procedimiento de ensayo de almidón resistente al Interday significa,
almidón digerible Muestra Día 1 Dia 2 Día 3 Día 4 ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr)

Maíz regular 21 ± 1,4 19,9 ± 0,4 19,2 ± 1,3 19,7 ± 0,2 19,9 ± 1,6
almidón
3,29 0,91 3.32 0,46 3,95
Hylon VII® 7,4 ± 0,3 6,8 ± 0,5 6,5 ± 0,3 7 ± 0,4 6,9 ± 0,8
2,35 3,61 2,60 2,78 5.52
UB expreso 58,9 ± 2,7 59,3 ± 3,9 57,3 ± 0,7 57,2 ± 2,6 58,2 ± 2,9
arroz hervido
2,29 3,32 0,60 2,24 2,48
ActiStar® 21,2 ± 0,2 20,6 ± 0,9 20,3 ± 0,8 22,5 ± 0,7 21,2 ± 1,9
0,43 2,11 1,91 1,65 4,38 13 ± 0,1 12,7 ± 0,3 12,8 ± 0 12,7 ± 0,1
Guisantes de jardín 12,8 ± 0,4
0,38 1,23 0,11 0,56 1,37
All Bran 23,6 ± 0,3 24 ± 0,3 24,1 ± 0,2 23,9 ± 0 23,9 ± 0,4
0,56 0,62 0,44 0,03 0,83
Frijoles de mantequilla 17,9 ± 0,5 18,5 ± 0,2 19,3 ± 1,8 19,1 ± 1,4 18,7 ± 1,4
1,46 0,63 4,75 3,55 3,81

Abreviaturas:% RSDr, desviación estándar de repetibilidad; Dakota del Sur, Desviación

Estándar.aTodos los resultados se presentan como almidón "tal cual".BCada día, las muestras
de cada material se analizaron por duplicado.

TAB LE 8 Estudio de repetibilidad en el

Almidón de digestión lenta,% (w/w)a, significarB ± 2 Dakota del Sur, (%
medición de "almidón de digestión lenta" en el
RSDr)
procedimiento de ensayo de almidón resistente al Interday significa,
almidón digerible Muestra Día 1 Dia 2 Día 3 Día 4 ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr)

Maíz regular 51,1 ± 2,5 48,4 ± 1,7 49,8 ± 1,2 47,3 ± 1,3 49,2 ± 3,3
almidón
2,47 1,78 1,24 1,33 3.39
Hylon VII® 14,3 ± 0,1 16,5 ± 0,2 16,5 ± 0,5 17,3 ± 0,1 16,2 ± 2,4
0,31 0,75 1,62 0,42 7,42
UB expreso 13,6 ± 3,8 12,3 ± 1,4 11,7 ± 1,3 11,4 ± 0,4 12,2 ± 2,4
arroz hervido
13,85 5,61 5,43 1,69 9,77 6 ± 0,2 5,7 ± 0 7 ± 0,2 6 ± 1,4
ActiStar® 5,3 ± 1,1
10.44 1,78 0,22 1,62 11,63
Guisantes de jardín 2,6 ± 0,3 2,7 ± 0,6 2,6 ± 0,1 2,5 ± 0,1 2,6 ± 0,3
4,97 11.28 2,44 1,15 5,97
All Bran 1,4 ± 1,1 1,2 ± 0,7 0,7 ± 0,3 0,6 ± 0,3 1 ± 0,9
40,84 30,81 19.00 22.52 45,75

Frijoles de mantequilla 14,1 ± 2 13,3 ± 0,4 12,7 ± 0,3 12 ± 1,8 13 ± 2

7.21 1,62 1,35 7,44 7.55
Abreviaturas:% RSDr, desviación estándar de repetibilidad; Dakota del Sur, Desviación
Estándar.aTodos los resultados se presentan como almidón "tal cual".BCada día, las muestras
de cada material se analizaron por duplicado.

de almidón resistente como componente de la fibra dietética, se ha
vuelto importante medir específicamente el almidón digerible, en
lugar del almidón total, para el cálculo de los carbohidratos
disponibles. En consecuencia, el procedimiento descrito aquí para la
medición del almidón digerible total (TDS) forma la base del método
actual para los carbohidratos disponibles. Muestras
se incuban con PAA y AMG en las condiciones descritas para el
procedimiento de almidón digerible / almidón resistente. Se extrae
una muestra de la solución de incubación y se agrega para diluir el
ácido acético, que se utiliza en la determinación de los carbohidratos
disponibles. En la incubación con PAA y AMG, se obtienen maltosa,
maltodextrinas, glucógeno y almidón digerible.
18 | METROClimpio Et AL.

a B TAB LE 9 Estudio de repetibilidad en el

Almidón digerido total,% (w/w), media (% ± 2 Dakota del Sur,
medición del "almidón digerible total" en el
RSDr)
Interday significa, procedimiento de ensayo de almidón resistente al
Muestra Día 1 Dia 2 Día 3 Día 4 ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr) almidón digerible

Maíz regular 82,1 ± 0,4 79 ± 0,8 79,5 ± 0,4 79,8 ± 1,7 80,1 ± 2,7
almidón
0,25 0,54 0,23 1.07 1,67
Hylon VII® 33,2 ± 0,9 36,5 ± 1,7 35,7 ± 0,2 38,2 ± 0,6 35,9 ± 3,9
1,34 2,39 0,32 0,84 5,47
UB expreso 72,5 ± 1,3 70,2 ± 0,9 70,8 ± 0,4 71,8 ± 0,1 71,3 ± 2
arroz hervido
0,93 0,66 0,29 0,06 1,40
ActiStar® 34,6 ± 0,4 34,1 ± 4,1 33,1 ± 0,8 35,6 ± 2,3 34,4 ± 2,7
0,55 6,05 1,21 3,21 3,89
Guisantes de jardín 16,9 ± 0 16,6 ± 0,4 16,3 ± 0,5 16,4 ± 0,1 16,5 ± 0,6
0,04 1,11 1,61 0,17 1,77
All Bran 24,9 ± 1,5 25,2 ± 0,2 25,1 ± 0,1 25,1 ± 0,2 25,1 ± 0,6
2,93 0,32 0,22 0,45 1,27
Frijoles de mantequilla 34,4 ± 0,6 34,5 ± 0,2 34,7 ± 0 34,9 ± 1,8 34,6 ± 0,8
0,87 0,28 0,05 2,54 1,20

Abreviaturas:% RSDr, desviación estándar de repetibilidad; Dakota del Sur, Desviación

Estándar.aTodos los resultados se presentan como almidón "tal cual".BCada día, las muestras
de cada material se analizaron por duplicado.

hidrolizado a glucosa (con niveles traza de maltosa). En la
incubación posterior con sacarasa, maltasa y β-
galactosidasa, la lactosa se hidroliza a glucosa y galactosa, la
sacarosa se hidroliza específicamente a glucosa y fructosa y
la maltosa se hidroliza a glucosa (Figura 4). La medición de
glucosa, fructosa y galactosa se muestra en la Figura 7.
Tradicionalmente, la sacarosa se hidroliza con invertasa (β-
fructofuranosidasa), pero esta enzima también actúa sobre los
fructooligosacáridos, lo que provoca una sobreestimación de la
sacarosa. Hidrólisis de sacarosa y raftilosa® (una mezcla comercial de
fructooligosacáridos) por invertasa y sacarasa se muestra en la
Figura 8. Las condiciones de incubación con invertasa están en línea

a B TAB LE 1 0 Estudio de repetibilidad en

Almidón resistente, % (w/w) , significar ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr)
Interday significa, la medición de "almidón resistente" en el

Muestra Día 1 Dia 2 Día 3 Día 4 ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr) procedimiento de ensayo de almidón resistente al

almidón digerible
Maíz regular 1,9 ± 0,1 2 ± 0,1 1,9 ± 0 2 ± 0,1 2 ± 0,1
almidón
1,52 2,77 0,07 2,77 2,47
Hylon VII 48,2 ± 0,1 47,7 ± 1,9 47,1 ± 0,2 46,6 ± 0,6 47,4 ± 1,5
0,14 1,95 0,17 0,60 1,60
UB expreso 2,5 ± 0,4 2,6 ± 0,3 2,6 ± 0,2 2,4 ± 0,2 2,5 ± 0,3
arroz hervido
8.06 5.22 4.58 3.28 6.33 52 ± 0.1 52.3 ± 0.3 51 ± 0.1 51.8 ± 0.9
ActiStar 51.8 ± 1.1
0,07 0,25 0,13 0,88 1,05
Guisantes de jardín 7,9 ± 0,4 7,9 ± 0,3 7,6 ± 0,7 8 ± 0,6 7,9 ± 0,5
2,36 1,69 4,55 3,42 3,09 0,3 ± 0 0,3 ± 0 0,3 ± 0 0,3 ± 0 0,3 ± 0
All Bran
4,36 0,95 0,14 3,69 3,96
Frijoles de mantequilla 3,5 ± 0,1 3,4 ± 0,1 3,5 ± 0,2 3,3 ± 0 3,4 ± 0,2
1,43 1,16 2,24 0,38 3,22

Abreviaturas:% RSDr, desviación estándar de repetibilidad; Dakota del Sur, Desviación

Estándar.aTodos los resultados se presentan como almidón "tal cual".BCada día, las muestras
de cada material se analizaron por duplicado.
METROClimpio Et AL.
|19
FIGURA 7 Medición del curso del tiempo 1,5
GalDH / GalM
de glucosa, fructosa y galactosa en las
Glu (20 µg) + Fruta (20 µgramo)
condiciones de incubación descritas en la Figura 4
+ Gal (40µgramo)

Absorbancia, 340 nm
IGP
1.0
Galactosa 80 µgramo

HK / G6PDH

0,5

Blanco

0.0
0 5 10 15
Tiempo de incubación (min)

con los utilizados en kits comerciales de ensayo de sacarosa. En estas en el método de carbohidratos disponibles. Por el contrario, la invertasa
condiciones de incubación, la sacarasa proporciona una hidrólisis completa de hidroliza completamente la sacarosa en glucosa y fructosa en 10 minutos
la sacarosa después de 60 minutos (sacarosa + sacarasa / 60) pero no tiene y también proporciona una hidrólisis casi completa de la raftilosa.®
acción sobre la raftilosa (raftilosa + sacarasa / 60) según sea necesario. al mismo tiempo (Raftilose + Invertase / 10). Claramente,

FIGURA 8 Cromatografía HPLC en dos TSKgel® Columnas G2500PWXL de los productos de hidrólisis de sacarosa y raftilosa® por ambos
enzimas invertasa o sacarasa como se describe en Materiales y métodos
20 | METROClimpio Et AL.

La invertasa no es adecuada para la hidrólisis específica de sacarosa 13). La repetibilidad entre días es excelente, con RSDr valores
en presencia de fructooligosacáridos. La β-galactosidasa empleada que van de 1,6 a 3,58.
aquí es deAspergillus niger y se sabe que proporciona una hidrólisis

4|
completa de galactooligosacáridos (GOS) y de lactosa. Se puede
CONCLUSIONES
lograr una hidrólisis más específica de lactosa con β-galactosidasa de

Escherichia coli, pero se requerirían diferentes condiciones de
incubación (pH ~ 7,5). Dado que los GOS rara vez se utilizan en
productos alimenticios que no sean formulaciones específicas para
bebés,A. niger β‐Se eligió galactosidasa para esta metodología. El
formato de incubación empleado en la medición de los carbohidratos
disponibles se muestra en la Figura 4. Esto difiere de los formatos
publicados anteriormente en que también se mide la galactosa.
El contenido de glucosa, fructosa y carbohidratos disponibles
de varios productos alimenticios se muestra en la Tabla
11. Estos productos no contienen ni lactosa ni galactosa. En mesa
12, se muestra el contenido de carbohidratos disponibles de tres productos
alimenticios, dos de los cuales contienen lactosa. La repetibilidad del método de
carbohidratos disponibles se ha determinado analizando ocho productos
alimenticios por duplicado durante 4 días (Tabla
4.1 |
Almidón digerible y resistente
En este artículo, describimos métodos simples, confiables y precisos
para la medición de almidón resistente (RS), almidón digestible (RDS,
SDS y TDS) y carbohidratos disponibles y destacamos las
consideraciones clave en cada determinación. La hidrólisis precisa
del almidón digerible (no resistente) es un elemento crítico de todas
estas determinaciones. Las condiciones de incubación empleadas en
cada uno de estos ensayos imitan las utilizadas en el método rápido
integrado de fibra dietética total (método AOAC 2017.16, método ICC
185); la relación entre el peso de la muestra, el volumen del tampón y
la concentración de enzimas son iguales. En condiciones de
incubación diseñadas para medir la fibra dietética total (Método
AOAC 2017.16), los valores de carbohidratos disponibles se pueden
obtener simplemente eliminando alícuotas

TAB LE 1 1 Carbohidrato disponible

D ‐ glucosa D ‐ fructosa Carbohidrato disponible
contenidoa de una variedad de muestras ("tal
Muestras (g / 100 g) (g / 100 g) drados (g / 100 g)
cual" o liofilizadas como se indica)
Kellogg's® copos de maíz 76,1 2.8 78,9
Kellogg's® todo salvado 37,9 7.1 45,0
Weetabix® 68,1 1.1 69,2
Kellogg's® Especial K® 69,4 4.2 73,6
Kellogg's® Helados® 67,1 13,4 80,5
Roma® pasta de 69,1 0.0 69,1
macarrones Patata gallo 50,9 0,8 51,7
(liofilizada) Batata 46,6 17,6 64,2
(liofilizada) Cebolla roja 28,2 24,2 52,4
(liofilizada) Coliflor 11,8 11,4 23,2
(liofilizada) Apio (liofilizada) 12,1 9.5 21,6
Brócoli (liofilizado) 7.1 6.2 13,3
Zanahoria (liofilizado) 26,8 18,3 45,1
Sueco (liofilizado) 33,8 17,4 51,2
Pimiento rojo (liofilizado) 24,3 37,9 62,2
Champiñón (liofilizado) 3.1 0 3.1
Plátano maduro 39,8 29,4 69,2
(liofilizado) Frijoles rojos 12,1 2.6 14,7
(secos) Soja (seca) 3.9 3.2 7.1
Heinz® frijoles horneados (liofilizados) Ryvita® 43.2 3,5 48,7
galletas de centeno oscuro almidón de trigo 68,7 4.8 73,5
86,3 0.0 86,3
Hylon VII® 33,4 0.0 33,4
Amilosa de patata 59,4 0.0 59,4
Almidón de maíz regular 83,7 0.0 83,7
aTodos los valores son el promedio de determinaciones duplicadas.
METROClimpio Et AL.
|21
TAB LE 1 2 Glucosa, fructosa,
Glucosa Fructosa Galactosa Carbohidrato disponible
galactosa y contenido de carbohidratos disponiblesa
Muestra (g / 100 g) (g / 100 g) (g / 100 g) drados (g / 100 g)
de tres muestras de alimentos desgrasados y

liofilizados Galletas con chispas de chocolate 43,9 1,78 0,75 45,45

Galletas con chispas de chocolate 43,17 1,78 0,67 45,63

Cacahuetes de chocolate 11.22 2,34 6.34 19,90

Cacahuetes de chocolate 11.26 2,35 6.34 19,95

Tartas de mermelada 57,80 10,24 0,00 68.04

aTodos los valores son el promedio de determinaciones por duplicado y sobre una base de peso seco.

TAB LE 1 3 Estudio de repetibilidad en

Carbohidratos disponibles,% (w/w)a , significarB ± 2 Dakota del Sur,
la medición de los carbohidratos disponibles (glucosa
(% RSD C r )
más fructosa) en una variedad de productos Interday significa,
alimenticios Muestra Día 1 Dia 2 Día 3 Día 4 ± 2 Dakota del Sur, (% RSDr)

Almidón de trigo 87,3 ± 2,1 90,2 ± 2,2 88,2 ± 0,6 90 ± 1,1 88,9 ± 2,8
1,21 1,21 0,34 0,61 1,60
All Bran 43,2 ± 2,2 45,4 ± 0,4 43,2 ± 1 44,5 ± 0,2 44,1 ± 2,2
2,55 0,40 1,20 0,27 2,53
Batata 59,6 ± 0,2 60,7 ± 1,3 58,2 ± 2,1 60,4 ± 1 59,7 ± 2,3
0,14 1,10 1,80 0,81 1,92
Plátano maduro 65,4 ± 0,4 70 ± 0,3 67,1 ± 1 66,8 ± 0,6 67,3 ± 3,6
0,28 0,19 0,77 0,46 2,68
Zanahoria 53,7 ± 0,9 57,4 ± 0,6 55,1 ± 1,5 55,3 ± 0,3 55,4 ± 2,9
0,87 0,54 1,36 0,23 2,58 51 ± 0,5 55,4 ± 2,5 53,8 ± 3,1 52,9 ± 1,9
pimiento rojo 53,2 ± 3,8
0,49 2,25 2,92 1,83 3,58
Ryvita® 60,6 ± 1,3 61,5 ± 1,3 61 ± 2,4 62,6 ± 0,7 61,4 ± 2
1,07 1,04 1,96 0,60 1,61 55 ± 4,3 53,6 ± 0,4 54,2 ± 1,3 54,1 ± 2
sueco 54,2 ± 2,1
3,92 0,34 1,19 1,82 1,96

Nota: La repetibilidad (% RSDr) del método de ensayo de carbohidratos disponibles se evaluó utilizando ocho muestras molidas.
Para cada muestra, se procesaron extracciones duplicadas y se aplicaron al ensayo cada día durante cuatro días separados.

El contenido de carbohidratos disponible de las muestras analizadas cubría un rango de trabajo del 44,1% al 88,9% (w/w)
sobre una base de peso seco. La repetibilidad (% RSDr) en este conjunto de datos de muestra fue excelente, menor o igual a
3,58% para todas las muestras.aTodos los resultados se presentan en peso seco.
BCada día se analizaron muestras de cada material por duplicado.CSD =
desviación estándar. % RSDr = desviación estándar de repetibilidad.

(por ejemplo, 0,2 ml) de las soluciones de incubación para el análisis
de carbohidratos disponibles. La metodología de almidón digestible
descrita aquí permite una comparación de las tasas de digestión de
varios almidones y debería ser útil para monitorear las condiciones
de procesamiento de alimentos destinadas a producir almidón
resistente y de digestión lenta. Como se detalla aquí, los
"carbohidratos disponibles" se determinan en muestras extraídas en
un tiempo de incubación de 4 horas. Sin embargo, se puede obtener
glucosa rápidamente disponible (RAG) y respuesta a la insulina.
El RAG se deriva de la glucosa libre, las maltodextrinas y el
almidón que se digieren en 20 min. En el método actual, la
medición separada de glucosa, fructosa y galactosa derivada de
carbohidratos de digestión rápida, junto con el índice glucémico
conocido para cada azúcar, permite determinar el índice
glucémico del alimento.

4.2 | Almidón de fosfato reticulado (RS4)

una medida de los "carbohidratos glucémicos", es decir, los
carbohidratos que afectan el índice glucémico, extrayendo muestras
de la mezcla de incubación a los 20 min. Englyst, Englyst, Hudson, El almidón digestible es el principal contribuyente a los carbohidratos
Cole y Cummings (1999) han mostrado una buena correlación entre disponibles en muchos alimentos. El almidón ha sido modificado en
22 | METROClimpio Et AL.

Fibra dietética o almidón digerido,% p / p (dwb)

100
Almidón de trigo hidrolizado
(medido como glucosa)
80
Fibersym como DF

60

40

20
Fibersym hidrolizado
(medido como glucosa)

Almidón de trigo como DF

0
70 75 80 85 90 95 100
Temperatura de incubación con - amilasa, oC

92% 75% 17% 5%

- Actividad de amilasa dejada después de 30 min a la temperatura establecida

FIGURA 9 Hidrólisis de almidón de trigo y Fibersym® en condiciones exactamente como se describe para el método AOAC 985.29, pero con incubaciones
realizado a 70, 80, 90, 95 y 100 ° C. Las incubaciones con proteasa y AMG fueron como se describe en el Método AOAC 985.29. Se extrajo una muestra de la solución
de incubación (10 ml) y se filtró inmediatamente. Se añadió una muestra (1 ml) a 25 ml de agua destilada y se mezcló. Se incubó una alícuota (0,1 ml) de esto con 30 U
de AMG a 40ºC durante 15 min y se midió la glucosa usando un reactivo de glucosa oxidasa / peroxidasa. La DS se calculó a partir del valor de glucosa y el valor de
fibra dietética (RS) se determinó restando el valor de DS del peso total de la muestra. La actividad de la α‐ amilasa remanente en las mezclas de incubación se
determinó utilizando Ceralpha® método

varias formas de reducir la digestibilidad y contribuir positivamente con PAA / AMG es de 4 horas, y las concentraciones de PAA y AMG se
al contenido de fibra dietética de los alimentos. Uno de los almidones ajustaron para garantizar que los valores RS medidos obtenidos para
modificados químicamente más ampliamente utilizado es el almidón varias muestras de referencia coincidieran con los datos de la
reticulado con fosfato (p. Ej., Fibersym®). La medición de esto, ya sea ileostomía. En las condiciones de incubación del método AOAC
directa o indirectamente, es un tema de debate continuo. Maningat y 2017.16, los valores de FD obtenidos para la mayoría de las muestras
col. (2013) han informado valores de fibra para almidón reticulado que contienen RS fueron similares a los obtenidos con el método
con fosfato (p. Ej., Fibersym®) superior al 85% w/w (dwb) utilizando AOAC 2009.01. Una gran excepción es Fibersym®, para el cual se
Prosky et al. (1985) método de fibra dietética (Método AOAC 985.29 / obtuvo un valor de DF de ~ 60% en comparación con un valor de ~
Método AACC 32‐05.01). Para obtener estos valores, el paso de 30% w/w obtenido bajo las condiciones de incubación extendida del
incubación con α-amilasa termoestable debe realizarse a 98–100 ° C. método AOAC 2009.01.
A una temperatura de incubación por debajo de 98 ° C, el valor de En un informe reciente sobre la digestibilidad in vivo del almidón
fibra dietética determinado cae en picado (Figura 9). Por ejemplo, a fosforilado reticulado (CLP) en sujetos con ileostomía (Iacovoua et al.,
una temperatura de incubación de 95 ° C, se obtiene un valor de DF 2017), valores de producción de DF del 40% w/w (promedio de más de 10
de solo 43% y este cae al 28% a 80 ° C. Claramente, los valores pacientes) se obtuvieron para Fibersym® utilizando Prosky et al. (1985)
obtenidos dependen del método y el método empleado no tiene método. Los autores afirman que “el 40% de RS in vivo para el almidón de
relación con las condiciones de digestión en el intestino delgado trigo CLP determinado por el ensayo Prosky para cuantificar la fibra
humano y, por lo tanto, el método de fibra dietética Prosky es saliente en sujetos con ileostomía es erróneamente bajo” y que la “causa
simplemente inadecuado para su uso con muestras que contienen principal de la baja recuperación se debe al daño de la α ‐ amilasa en los
RS.4. El Método AOAC 2009.01 se desarrolló como un método gránulos de almidón de trigo CLP en el intestino delgado de un sujeto ".
alternativo para la medición de la fibra dietética total con un intento Estos resultados y las conclusiones de los autores son, de hecho,
de obtener una medición fisiológicamente relevante de RS. Sin consistentes con los resultados obtenidos con el procedimiento TDF
embargo, dado que se empleó un tiempo de incubación con PAA / integrado rápido (Método AOAC 2017.16). Gránulos de almidón, incluido
AMG de 16 h, el método no se consideró fisiológicamente relevante. RS4, son digeridos en diferentes grados por PAA durante el paso a través
Los informes de la literatura indican que el tiempo de residencia de del intestino delgado humano, destacando la importancia de simular las
los alimentos en el intestino delgado es de ~ 4 h (± 1 h); en condiciones de digestión in vivo en ensayos in vitro de RS y DF. Sin
consecuencia, se desarrolló un método TDF integrado modificado embargo, los autores, no satisfechos con los resultados experimentales
(Método AOAC 2017.16). En este método, el tiempo de incubación obtenidos, introdujeron un "factor de corrección de recuperación"
METROClimpio Et AL.
para ajustar los valores de fibra determinados experimentalmente a
valores en línea con lo que obtuvieron para CLP nativo utilizando
Prosky et al. (1985) procedimiento; un ensayo in vitro
fisiológicamente no relevante. El "factor de corrección de
recuperación" se basó en la relación (~ 80%) que obtuvieron para el
almidón medido con el método AOAC 996.11 (formato DMSO) y
Shukri et al. (2015) para seis muestras de efluentes de ileostomía de
2 horas aparentemente elegidas al azar de su estudio. No está claro
por qué los autores simplemente no analizaron el contenido de
almidón de los efluentes totales con el "cuantitativo" Shukri et al.
(2015) método. En contraste con los valores de almidón de ~ 100%w/
wobtenido por Shukri et al. (2015) y Shi et al. (2019) v para Fibersym®,
pudimos obtener valores no superiores al 84% dwb,
independientemente del formato de ensayo utilizado. En el estudio
de ileostomía publicado por Iacovoua et al. (2017), la recuperación
media in vivo de almidón de trigo fue del 10,8%w/w, que es mucho
más alto que el <1% w/w valores obtenidos en otros estudios de
ileostomía y ensayos in vitro. Los autores sugieren que este alto valor
podría deberse a la glucosa que "se originó a partir del caramelo
duro" en la dieta. Esta glucosa libre debería haberse medido por
separado y restado de los valores de "almidón total" para obtener
una medición precisa del almidón. Esta glucosa derivada de los
dulces también puede haber influido en los valores informados para
el almidón en las muestras de almidón reticulado con fosfato. Como
observación final, los autores afirman que Prosky et al. (1985) debe
utilizarse el método para el análisis de algunos Fibersym®- que
contienen muestras, pero no para otros. Como se indicó
anteriormente, creemos que el método no es adecuado para el
análisis de cualquiera de los Fibersym® muestras.
4.3 | Carbohidratos disponibles
Para el etiquetado de alimentos en los Estados Unidos, el
único método permitido para el etiquetado de carbohidratos
en el panel de información nutricional implica restar la
cantidad de proteína cruda, grasa total, humedad y cenizas
del peso total de la muestra. La fibra dietética está incluida
en el valor total de carbohidratos, pero puede indicarse por
separado en la etiqueta. Los "carbohidratos netos" se
determinan restando el valor de fibra dietética del valor total
de carbohidratos. Un problema importante al utilizar este
método es el de los errores acumulados (FAO, 1998). En este
artículo, se describe un método simple para la medición
directa de los carbohidratos disponibles (glucosa, fructosa y
galactosa derivada de glucosa libre, maltodextrinas,
sacarosa, lactosa y almidón digerible) mediante la medición
directa de glucosa, fructosa y galactosa.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Los autores agradecen al Dr. Vincent McKie, Megazyme, por realizar
todos los análisis estadísticos de los datos informados en este
manuscrito.
|23
ORCID
Barry V. McCleary https: // orcid.
org / 0000-0002-7103-5759
REFERENCIAS
Akerberg, AKE, Liljeberg, HGM, Granfeldt, YE, Drews,
AW y Bjorck, IME (1998). Un método in vitro, basado en la masticación, para
predecir el contenido de almidón resistente en los alimentos permite la
determinación paralela del almidón y la fibra dietética potencialmente
disponibles.Revista de nutrición, 128, 651–660. https://doi.org/10.1093/ jn /
128.3.651
Anon (2003). McCance y Widdowson, La composición de los alimentos,
sexta edición resumida, Agencia de Normas Alimentarias, RSC.
AOAC Internacional (2012). Métodos oficiales de análisis de AOAC
Internacional (19a ed.). Métodos 925.10, 985.29, 991.42, 991.43,
993.19, 994.13, 996.01, 2001.03, 2002.01, 2002.02, 2009.01 y
2011.25. Rockville, MD: AOAC International.
Camilleri, M., Thorne, NK, Ringel, Y., Hasler, WL, Kuo,
B., Esfandyari, T.,… Rao, SSC (2010). Cápsula inalámbrica de pH‐
motilidad para el tránsito colónico: comparación prospectiva con
marcadores radiopacos en el estreñimiento crónico.
Neurogastroenterología y motilidad, 22(8), 874–882, e233.
https: //doi.org/10.1111/j.1365-2982.2010.01517.x
Champ, M. (1992). Determinación de almidón resistente en alimentos y
productos alimenticios: estudio interlaboratorio. Revista europea de nutrición
clínica. 46(Suplemento 2), S51 – S62.
Champ, M., Martin, L., Noah, L. y Gratas, M. (1999). Metodología analítica
ods para almidón resistente. En SS Cho, L. Prosky y M. Dreher (Eds.),
Carbohidratos complejos en los alimentos. (págs. 169-187). Nueva York, NY:
Marcel Dekker Inc.
Comisión del Codex Alimentarius (2010). Alimentación conjunta FAO / OMS
Programa de Normas, Secretaría de la Comisión del Codex Alimentarius.
Directrices sobre etiquetado nutricional CAC / GL 2‐1985 en su última
modificación de 2010. Roma, Italia: FAO.
Deiteren, A., Camilleri, M., Bharucha, AE, Burton, D., McKinzie,
S., Rao, AS y Zinsmeister, AR (2010). Características de desempeño de
la medición gammagráfica del tránsito del colon en la salud y el
síndrome del intestino irritable y su relación con las funciones
intestinales.Neurogastroenterología y motilidad, 22(4), 415–423.e95.
https: // doi.org/10.1111/j.1365-2982.2009.01441.x
DuBois, M., Gilles, KA, Hamilton, JK, Rebers, PA y Smith, F.
(1956). Método colorimétrico para la determinación de azúcares y
sustancias afines.Química analítica, 28, 350–356. https: // doi. org /
10.1021 / ac60111a017
Englyst, HN y Cummings, JH (1988). Un método mejorado para el
medición de fibra dietética como polisacáridos sin almidón en alimentos
vegetales. Revista de AOAC International, 71, 808–814.
Englyst, HN y Hudson, GJ (1987). Método colorimétrico para el
medición rutinaria de fibra dietética como polisacáridos sin almidón. Una
comparación con la cromatografía gas-líquido.Química de Alimentos, 24,
63–67.
Englyst, HN, Kingman, SM y Cummings, JH (1992).
Clasificación y medición de fracciones de almidón nutricionalmente
importantes. Revista europea de nutrición clínica, 46(Suplemento 2),
S33 – S50.
Englyst, HN, Wiggins, HS y Cummings, JH (1982).
Determinación de polisacáridos distintos del almidón en alimentos vegetales mediante
24 | METROClimpio Et AL.
Cromatografía gas-líquido de azúcares constituyentes como acetatos de
alditol.El analista, 107, 307–318. https://doi.org/10.1039/an9820700307
Englyst, KN, Englyst, HN, Hudson, GJ, Cole, TJ y Cummings,
JH (1999). Glucosa rápidamente disponible en los alimentos: una
medida in vitro que refleja la respuesta glucémica.La Revista
Estadounidense de Nutrición Clínica, 69, 448–454. https://doi.org/
10.1093/ ajcn / 69.3.448
Faisant, N., Planchot, V., Kozlowski, F., Pacouret, M.‐P., Colonna, P. y
Champ, M. (1995). Determinación de almidón resistente adaptada a
productos con alto contenido de almidón resistente.Sciences des Aliments,
15, 83–89.
FAO (1998). Los carbohidratos en la nutrición humana. Informe de una consulta conjunta de
expertos FAO / OMS (documento de la FAO sobre alimentación y nutrición
66). Roma, Italia: Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación.
Geboes, KP, Luypaerts, A., Rutgeerts, P. y Verbeke, K. (2003). Inulina
es un sustrato ideal para una prueba de hidrógeno en el aliento para medir
el tiempo de tránsito orocecal. Farmacología y terapéutica alimentaria, 18,
721–729. https://doi.org/10.1046/j.1365-2036.2003.01750.x Geypens, B.,
Bennink, R., Peeters, M., Evenepole, P., Mortelmans, L.,
Maes, B.,… Rutgeerts, P. (1999). Validación de la lactosa‐ [13Prueba de aliento con
ureido C] para la determinación del tiempo de tránsito orocecal mediante
gammagrafía. Revista de medicina nuclear, 40, 1451-1455.
Goni, I., García ‐ Diz, E., Manas, E. y Saura ‐ Calixto, F. (1996). Análisis
de almidón resistente: un método para alimentos y productos alimenticios.
Química de Alimentos, 56, 445–449. https://doi.org/10.1016/0308-8146(95)
00222-7
Iacovoua, M., Lima, J., Maningat, CC, Bogatyreva, A., Lya, E.,
Dhital, S.,… Seib, P. (2017). Digestibilidad in vivo del almidón de trigo
fosforilado reticulado (RS4) en sujetos con ileostomía.Carbohidratos
bioactivos y fibra dietética, 12, 25–36.
Maningat, CC, Seib, PA y Bassi, SD (2013). Contenido de fibra dietética
de almidón resistente fosforilado reticulado (RS4) determinado por los métodos
de Prosky y McCleary. Parte II. Comparación de datos de ensayo.Mundo de los
alimentos de cereales, 58, 252–263.
Mann, J., Cummings, JH, Englyst, HN, Key, T., Liu, S., Riccardi,
G.,… Wiseman, M. (2007). Actualización científica de la FAO / OMS sobre los
carbohidratos en la nutrición humana: Conclusiones.Revista europea de
nutrición clínica, 61(Supl. 1), S132 – S137. https://doi.org/10.1038/
sj.ejcn.1602943
McCleary, BV (2007). Un procedimiento integrado para la medida
cantidad de fibra dietética total (incluido el almidón resistente),
oligosacáridos no digeribles y carbohidratos disponibles. Química
analítica y bioanalítica, 389, 291.
McCleary, BV (2018). Fibra dietética total (definición del CODEX) en los alimentos
e ingredientes alimentarios mediante un método enzimático-gravimétrico
rápido y cromatografía líquida: estudio colaborativo, primera acción 2017.
Revista de AOAC International, 102, 196–207.
McCleary, BV, Cox, J., Ivory, R. y Delaney, E. (2018). Definición
y análisis de fibra dietética en productos de cereales. En T. Beta y ME
Camire (Eds.),Alimentos funcionales a base de cereales: carbohidratos y
componentes fitoquímicos (química, función y análisis de los alimentos)
(págs. 103-126). Real Sociedad de Química. Capítulo 6.
McCleary, BV, DeVries, JW, Rader, JI, Cohen, G., Prosky, L.,
Mugford, DC y Okuma, K. (2010). Determinación de fibra dietética total
(definición del CODEX) por método enzimático-gravimétrico y
cromatografía líquida: estudio colaborativo.Revista de AOAC
International, 93, 221–233.
Ver estadísticas de publicación
McCleary, BV, McNally, M. y Rossiter, P. (2002). Medida de
almidón resistente por digestión enzimática en muestras de almidón y materiales
vegetales seleccionados: Estudio colaborativo. Revista de AOAC International,
2002(85), 1103-1111.
McCleary, BV y Monaghan, DA (2002). Medida de resistente
almidón. Revista de AOAC International, 85, 665–675.
McCleary, BV, Sloane, N. y Draga, A. (2015). Determinación del total
Fibra dietética y carbohidratos disponibles: un procedimiento integrado
rápido que simula la digestión in vivo. Almidón - Stärke, 67, 860–883.
https://doi.org/10.1002/star.201500017
Miller, MA, Parkman, HP, Urbain, JL, Brown, KL, Donahue, D.
J., Knight, LC,… Fisher, RS (1997). Comparación de la gammagrafía y la prueba de
hidrógeno en el aliento con lactulosa para la evaluación del tránsito orocecal: La
lactulosa acelera el tránsito del intestino delgado.Enfermedades y Ciencias
Digestivas, 42, 10-18.
Muir, JG y O'Dea, K. (1992). Medida de almidón resistente:
factores que afectan la cantidad de almidón que escapa a la digestión in vitro.
Revista estadounidense de nutrición clínica, 56, 123–127.
Prosky, L., Asp, N.‐G., Furda, I., DeVries, JW, Schweizer, TF,
Y Harland, BF (1985). Determinación de fibra dietética total en
alimentos y productos alimenticios: Estudio colaborativo.Revista de
AOAC International, 68, 677–679.
Sadik, R., Abrahamsson, H., Bjornsson, E., Gunnarsdottir, A. y
Stotzer, P.‐O. (2003). La etiología de la hipertensión portal puede influir en
el tránsito gastrointestinal.Revista escandinava de gastroenterología,38,
1039–1044. https://doi.org/10.1080/00365520310004939
Shi, J., Sun, Z. y Shi, Y.‐C. (2019). Ensayo in vitro mejorado de resistencia
almidón tant en almidón fosforilado reticulado. Polímeros de
carbohidratos, 210, 210-214. https://doi.org/10.1016/
j.carbpol.2019.01. 059
Shukri, R., Zhu, L., Seib, PA, Maningat, C. y Shi, Y.‐C. (2015).
Ensayo directo in vitro de almidón resistente en almidón reticulado
fosforilado. Carbohidratos bioactivos y fibra dietética, 5, 1–9. https://
doi.org/10.1016/j.bcdf.2014.11.001
Stotzer, PO y Abrahamsson, H. (2010). Gástrico postprandial humano
El vaciado de sólidos no digeribles puede ocurrir sin relación con la fase antral.
III. Neurogastroenterología y motilidad, 12, 415–419. https: // doi.
org / 10.1046 / j.1365-2982.2000.00218.x
Zarate, N., Mohammed, SD, O'Shaughnessy, E., Newell, M., Yazaki,
E., Williams, NS,… Scott, SM (2010). Localización precisa de una
caída del pH en la región ileocecal: Validación mediante técnica
gammagráfica dual.Revista estadounidense de fisiología, 299,
G1276 – G1286. https://doi.org/10.1152/ajpgi.00127.2010
INFORMACIÓN DE SOPORTE
Puede encontrar información de respaldo adicional en línea
en la sección Información de respaldo al final del artículo.
Cómo citar este artículo: McCleary BV, McLoughlin
C, Charmier LMJ, McGeough P. Medición de carbohidratos
disponibles, almidón digerible y resistente en ingredientes y
productos alimentarios. Química de cereales. 2019; 00: 1–24.
https://doi.org/10.1002/cche.10208