EMBRIOGENESIS SOMÁTICA

INTRODUCCIÓN A LA EMBRIOGENESIS SOMÁTICA:

La embriogénesis somática es una técnica biotecnológica de gran importancia, que esta

comenzando a tomar campo en los últimos tiempos. Para poder entender este tema, debemos
conocer términos o palabras claves y definir algunos conceptos importantes.

¿Qué es la embriogénesis como proceso biológico en las plantas?

Se puede definir la embriogénesis en las plantas como el conjunto de procesos fisiológicos que
conducen a la transformación de una sola célula, el cigoto, en un individuo multicelular más
complejo.

¿Qué es la embriogénesis somática?

La embriogénesis somática “es un método que permite la formación de embriones somáticos, ya
sea de manera directa o indirecta, es decir con formación previa del callo embriogénico.” Cultivo
de Tejidos Vegetales I. Fundamentos y aplicaciones; Guillermo E. Delgado y Consuelo Rojas Idrogo.
Universidad Nacional Pedro Ruíz Gallo. Lambayeque-Perú.

“La embriogénesis somática (asexual o adventicia), consiste en del desarrollo de embriones a

partir de células que no son el producto de una fusión gamética, o en otras palabras, es una
proceso por el cual se produce una estructura bipolar (embrión) a partir de una célula somática”.
Encuentros en la Biología; Carlos López Encina y Rosa Perán Quesada. Facultad de Ciencias de la
Universidad de Málaga.

Palabras clave: callo, embrión, células somáticas, polipolidización, aneuploidización.

EMBRIOGENESIS SOMÁTICA IN VITRO:

La embriogénesis somática como técnica de micropropagación en la biotecnología puede utilizar
los siguientes tejidos como explantes.

Tabla 1. Explantes a partir de los cuales se puede realizar Embriogénesis In Vitro.

Explante Imagen Explante Imagen Explante Imagen

Hipocotilos Ápices Pedúnculos

Peciolos Pedúnculos Hojas

Jóvenes
Tipos de Embriogénesis Somática In Vitro:

Como se explico en la definición de Guillermo E. Delgado y Consuelo Rojas Idrogo. El método de la

embriogénesis se puede dividir en dos: Embriogénesis Directa e Indirecta.

Embriogénesis Directa:
La forma directa implica la existencia de células somáticas predeterminadas a seguir la vía
embriogénica y las células del explante primario se desarrollan para formar embriones.

Imagen 1.Plántula de coco obtenida por embriogénesis.

Embriogénesis Indirecta:
Implica la necesidad de una inducción para que las células sigan la vía embriogénica, tras pasar por
una fase proliferativa (callo) y cambiar su competencia a la expresión de embriogénesis.

Imagen 2. Callos formados durante la embriogénesis indirecta.

Ventajas de la Embriogénesis:
La embriogénesis como técnica de biotecnológica, nos brinda las siguientes ventajas:
 Posibilidad de manipular grandes cantidades de embriones en medio líquido: al tratarse de
una técnica de micropropagación se puede manipular grandes cantidades de embriones
(pequeños conjuntos de células), en un medio líquido nutritivo.
 Mínima manipulación manual y espacio de laboratorio.
 Obtener un producto libre de patógenos y contaminantes: siempre y cuando el proceso sea
realizado con todas las medidas y el cuidado microbiológico.
 Permite encapsular los embriones produciendo semillas sintéticas
 Automatización de la producción: llegando a utilizar bioreactores.
Desventajas de la Embriogénesis:
La técnica también presenta puntos en contra tomando en cuenta la evolución del desarrollo del
embrión:
 Tasa de regeneración baja.
 Generación asincrónica
 Poca información sobre la calidad y establecimiento en suelo.

Diferencias entre embriones somaticos y cigoticos

 Una primera diferencia entre embriones cigóticos y somáticos son sus sistemas de iniciación. Los
embriones cigóticos se forman a partir de la unión de los gametos, la doble fecundación y las plantas
que se originan son híbridas por la recombinación meiótica de sus genes.

 Por el contrario, los embriones somáticos se originan de células vegetativas de un único individuo y las
plantas resultantes son duplicados genéticos o clones de la planta madre.

 Sin embargo, tanto los embriones cigóticos como somáticos comparten similar ontogenia. Ambos
embriones pasan por los estados globular, torpedo y cotiledonal en especies dicotiledóneas y coníferas
o por los estados globular, escutelar y coleoptilar en monocotiledóneas .

 No obstante, existen diferencias significativas que limitan su uso como método de propagación. Por
ejemplo, especies que son monoembriónicas y producen embriones cigóticos vía un suspensor,
generalmente dan origen a embriones somáticos por un sistema evolutivo poco desarrollado donde se
forma una masa de tejido embrional ( denominado complejo proembrional ) con múltiples embriones
somáticos. Las razones para este retroceso hacia un tipo de desarrollo primitivo son desconocidas .
Dicha masa de embriones somáticos se desarrolla en forma asincrónica, de tal forma que múltiples
estados de desarrollo embrional están presenten en el cultivo en cualquier momento. Al desarrollarse
en diferentes momentos están sujetos a cambios en el régimen nutricional del medio de cultivo. En
este ambiente fluctuante desde el punto de vista nutricional, los embriones se vuelven desorganizados,
forman nuevas células embriogénicas y de esta manera contribuyen a la asincronía

 También ocurre una germinación precoz, donde dichos embriones forman solo raíces o tallos; no es
una germinación que de origen a una plántula normal.
 Otro problema es que los embriones somáticos generalmente muestran anormalidades estructurales
como cotiledones extras y meristemas apicales pobremente desarrollados.
Todos estos problemas se deben a las condiciones de cultivo y no a factores intrínsecos de los
embriones somáticos, ya que embriones cigóticos inmaduros al ser removidos de las semillas y
cultivados in Vitro presentan similares irregularidades.

 Otra diferencia significativa entre embriones cigóticos y somáticos, es que a los embriones somáticos
les falta la fase de quiescencia.

 Los embriones cigóticos maduros de las semillas ortodoxas, al llegar a la madurez se deshidratan y
entran en un periodo de reposo o quiescencia, que es el principal factor para que las semillas puedan
ser almacenadas.

 Por el contrario, los embriones somáticos continúan creciendo, algunos germinan, otros se vuelven
desorganizados y se transforman en tejido proembrional y otros mueren. La falta de una fase de
reposo en los embriones somáticos es el mayor obstáculo de su utilización como semilla artificial.
Aplicaciones de la Embriogénesis Somática en la Biotecnología Vegetal
La técnica de embriogénesis somática es aplicada en la biotecnología en los siguientes aspectos:
 Propagación masiva de plantas.
 Conservación de Germoplasmas
 Mejoramiento de germoplasmas y plantas.
 Producción de embriones sin variación somaclonal
 Producción de semillas sintéticas y plantas libres de patógenos.

FASES DE LA EMBRIOGENESIS SOMÁTICA:

 Inducción del callo embriogénico

Esta fase comprende la selección y desinfestación del explante, asi como su inoculación en
el medio de cultivo, llamado tambien primario o de inducción. Este medio de cultivo varía
en eficiencia entre una especie a otra e inlcusive entre genotipos de una misma especie a
otra e inclusive entre genotipos de una misma espcie, tal como fue observado en alfalfa. Un
hecho notable en este medio de cultivo primaro es la presencia de auxinas, en
 aproximadamente el 60% de las especies revisadas por Evans et al., (1981) y Ammirato
(1983), destacando el 2, 4-D y en menor proporción el AIA y ANA. En algunas familias como
las Apiaceae las auxinas son las únicas hormonas requeridas y en las Poaceae el 2,4-D es la
única hormona inductora. Las citocininas tienen un papel menor aunque en algunos
sistemas resultan esenciales pero en muy bajas concentraciones.

 Inducción y maduración de los embriones somáticos

En la mayoría de los casos, donde se indujo el callo embriogénico, fue necesario

transferirlo a un segundo medio de cultivo, denominado medio de cultivo secundario o de
inducción y maduración de los embriones somáticos. Este medio de cultivo por lo gneerla
carece de hormonas, o las auxinas son incoporadas en muy bajas concentraciónes. En
algunos sistemas ha isdo rqueridoa la suplementacion de bjaas oncentraciones de
citocininas y giberlinas. En esta fase el problema no es tanto la formación de los
embriones somáticos, los que pueden ser fácilmente induciods, sino la fomración en
grandes cantidads y con la plasticidad de que puedan ráiodamente convertirse en plantas,
fase esta que ha resultado muy difcultosa envarios sistemas. Los conceptos de
embriogénesis somática de lata frecuencia (HFSE) y embriogénesis somatica de baja
frecuencia (LFSE), en base al numero de embriones somaticos producidos, fueron
desarrollados posteriormente.

El desrrollo normal de un embrión somatico en esta fase del proceso, y como ya ha sido
ampliamente destacado, sigue la secuencia: globular, acoazonada y torpedo; sin embargo,
es posible observar aglunas otras formas complmenetarias como la de torpedo tardio,
ctiledonar y torpedo expandido como ocurren en la embriogénesis somatica del camote.

 Desarrollo de embriones somáticos en plantas

En esta fase, el embrión somático, que ha alcanzado el estadio de torpedo, se convierte en

planta integra potencialmente capaz de ser trnasferida con éxito a condiciones de campo.
Esta fase usualmente la alcanza en el mismo medio de cultivo secundario; sin embargo, no
han sido muy numerosos los protocolos establecidos con enraizamiento del embrión
somático; la formación de una planta y su transferencia al suelo.
 EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA: UNA ALTERNATIVA PARA LA PROPAGACIÓN,
MEJORAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE GERMOPLASMA EN CACAO (PAPER)

INTRODUCCIÓN

El cacao (Theobroma cacao) es un árbol que se introdujo de México y América Central en

África en 1822 en Santo Tomé y en 1850 en Ghana. Después del café y del azúcar, el cacao
es la tercera mercancía agrícola exportada en el mundo, representando en 1988 más de
2000 millones de dólares de intercambio comercial.

En la técnica de embriogénesis somática, el caco se ha comportado como recalcitrante por

los bajos niveles de respuesta que se ha logrado y por la variabilidad de la misma en
cuanto a los diferentes genotipos.

DESARROLLO

Explantes, desinfección e inducción de callos

En el cacao se han probado diferentes explantes para la inducción del proceso de la

embriogénesis somática en cotiledones y en hojas.

La desinfección de los explantes de ha logrado con el uso del hipoclorito de sodio al 2%

durante 20 minutos cuando se ha trabajado con los cotiledoneos , e hipoclorioto de sodio
al 1% entre 15 y 20 minutos cuando se han utilizado como explantes pétalos y
estaminoides.

La inducción de callos se realizó en medio MS suplementado con agua de coco, caseína

hidrolizada, tiamina y ácido naftalenacético para el caso de los cotiledones, donde además
se pudo observar la formación de embriones somáticos con características asincrónicas.
La formación de callos también se ha obtenido a partir de pétalos y estaminoides en
medio MS con combinaciones de ácido 2,4-D y quinetina. Estos explantes son los que
mayor importancia tienen para la propagación del cultivo, ya que el cacao por se un planta
alógama los cotiledones llevan implícita una variabilidad natural productora de su
cruzamiento, aunque los mismos se pueden emplear cuando se parte de cruzamientos
conocidos. En el caso de pétalos y estaminoides representan a la planta y pueden
encontrarse durante casi todo el año en cantidades que oscilan entre 20 y 100 mil flores.

Diferenciación de embriones somáticos

Los callos obtenidos de estaminoides han resultado se los de mayor potencial para la
formación de embriones somáticos en medios con las sales MS diluidas a la mitad,
suplementada con sacarosa, ácido giberélico, quinetina, ácido nafatalenacético y
vitaminas en el clon UF-613. Estos resultados nos indican la posibilidad de obtener
embriones somáticos a partir de callos formados de estaminoides en una frecuencia más
elevada. Los embriones se encontraban en estado globular, acorazonado y torpedo, lo
cual indica un alto grado de asincronía, característica del proceso embriogénico en medio
sólido.

(b) embrión en estado globular, (d) embrión en estado acorazonado, (e) embrión en
estado torpedo
Maduración y conversión en plantas de los embriones somáticos

Los embriones en estado de torpedo fueron

transferidos a medios de maduración que
contenían las sales Driver Kunikyuki (DKW)
suplementados con ácido absícico, sacarosa 6%
y la combinación de ambos. Con el tratamiento
de sacarosa 6% se obtuv un mayor porcentaje
de respuesta en el aumento de tamaño de los
embriones, cambio de coloración de los
cotiledoneos, de blancos a violáceos, lo que
indica la acumulación o síntesis de reserva por
parte de los embriones.

Los embriones somáticos también manifestaron

la elongación del hipocotilo, lo cual indica el
inicio de la germinación y conversión de los
embriones. Luego de transferir los embriones en
germinación hasta medios para tal fin se obtuvo
la conversión de una parte de ellos hasta un
20%. Sin dudas es esta parte donde se presentan
mayores dificultades del método de
propagación.

BIBLIOGRAFIA:
 http://es.wikipedia.org/wiki/Embriog%C3%A9nesis_som%C3%A1tica
 http://www.fagro.edu.uy/~fisveg/docencia/cursos%20posgrado%20y%20optativos/curso%20
de%20micropropagacion/mateoricos/Embriognesis%20somtica%202008.pdf
 Cultivo de Tejidos Vegetales I. Fundamentos y aplicaciones; Guillermo E. Delgado y Consuelo
Rojas Idrogo. Universidad Nacional Pedro Ruíz Gallo. Lambayeque-Perú.
 Encuentros en la Biología; Carlos López Encina y Rosa Perán Quesada. Facultad de Ciencias de
la Universidad de Málaga.