UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE

MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

CUAUTITLÁN C1

LICENCIATURA EN BIOQUÍMICA DIAGNÓSTICA  

Sección de Bioquímica y Farmacología Humana

    

Reporte Práctica 6:  “AMPLIFICACIÓN  DE DNA POR PCR”

   

EQUIPO 7:
 

 Alcántara Ortiz Priscila

  Godínez Álvarez Alan Rodrigo
 Serrano Bolaños Carla Fatima
 

PROFESORES:
 
 M. en C. Maritere Domínguez Rojas.
  Q.F.B. NYDIA B. GONZÁLEZ ÁNGELES

 Q.F.B. ALEJANDRO GUTIÉRREZ GARCÍA

 
 

FECHA DE ENVÍO: 07/ Diciembre / 2020

UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE

AMPLIFICACIÓN DE DNA
POR PCR.
DNA AMPLIFICATION BY PCR.
Alcántara Ortiz Priscila, Godínez Álvarez Alan Rodrigo, Serrano Bolaños Carla Fátima

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN C1

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 RESUMEN
La determinación de perfiles genéticos ha tenido un gran éxito a lo largo de los años, por
su eficiencia y aplicación en áreas como la genética forense (en busca de un posible
criminal o en la identificación de personas), así como en la determinación de la relación
parentesco entre individuos (prueba de paternidad). La determinación de perfiles
genéticos se basa en tres técnicas moleculares muy importantes; la extracción de ADN, la
PCR y la electroforesis. El objetivo del presente estudio consiste en analizar marcadores
polimórficos partiendo de muestras de DNA de cuatro posibles padres, de la madre y del
hijo, por medio de una amplificación por PCR de marcadores STR y la separación de los
fragmentos mediante electroforesis con el fin de determinar cuál de los posibles
candidatos es el padre.  La comparación de las bandas funciona para dicha
determinación, siendo que el Hijo y el Posible padre 4 tuvieron una alta relación en sus
bandas, en base a esto se concluye que el candidato 4 es el padre biológico de dicho
Hijo.
Palabras clave: Perfiles genéticos, Prueba de paternidad, PCR, electroforesis, DNA,
STR

ABSTRAC
The determination of genetic profiles has been very successful over the years, for its
efficiency and application in areas such as forensic genetics (in search of a possible
criminal or in the identification of people), as well as in determining the kinship relationship
between individuals (paternity test). The determination of genetic profiles is based on three
very important molecular techniques, DNA extraction, PCR, and electrophoresis. The aim
of this study is to analyse polymorphic markers from DNA samples from four potential
parents, mother, and child, by means of PCR amplification of STR markers and separation
of fragments by electrophoresis in order to determine which of the possible candidates is
the parent.  The comparison of the bands works for this determination, being that the Son
and possible father 4 had a high relationship in their bands, on the basis of this it is
concluded that candidate 4 is the biological father of that Son.
Key words: Genetic Profiles, Paternity Test, PCR, Electrophoresis, DNA, STR

INTRODUCCIÓN

El presente estudio muestra la aplicación          La genética forense es el análisis

de la PCR en la genética forense para la
realización de perfiles genéticos,
fundamentales, entre otras cosas, en las
pruebas de paternidad a partir de
polimorfismos presentes en el DNA de
los progenitores, así como del hijo en
cuestión, donde se comparan dichas
variaciones genéticas para determinar si
existe parentesco entre ellos o no.
de los polimorfismos responsables de la
variabilidad genética en la población
humana aplicados a los problemas
judiciales, los cuales pueden ser estudios
de criminalística especializada en
asesinatos y delitos sexuales, además de
la identificación de restos cadavéricos y el
de mayor importancia en el presente
reporte, las investigaciones de paternidad.
Se sabe que el 99.9% de nuestro DNA es

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idéntico al del resto de los seres humanos,
donde el 0.1% restante es el que nos
diferencia como individuos, lo cual se
debe a los polimorfismos y por tanto es
de suma importancia para los genetistas
forenses. De este modo, se define como
polimorfismo a una región en la secuencia
de DNA donde existe una variación que
puede ser cambios en una sola base,
aunque también puede deberse a una
secuencia completa de DNA. Los
polimorfismos estudiados son los SNP
(Polimorfismo de un solo nucleótido) y
los STR (Polimorfismo en tándem de
repeticiones cortas) donde estos últimos
son los de mayor importancia en la
actualidad. La principal técnica para
estudiar los polimorfismos,
específicamente los STR, es la PCR,
posteriormente se realiza un análisis por
electroforesis, como se verá a la amplificación de un segmento
continuación.
La Reacción en Cadena de la
Polimerasa o PCR por sus siglas en
inglés, fue descrita por primera vez en
1983 por Kary B. Mullis, invención que
lo hizo acreedor del premio Nobel debido
al gran impacto de la técnica en el área de
bioquímica y biología molecular en la
obtención mediante amplificación in vitro
de cantidades masivas de DNA a partir de
muestras muy pequeñas. Dicha técnica se
basa en la replicación celular, en la que
actúan diversas proteínas para sintetizar
nuevas hebras de DNA a partir de otra
que funciona como molde, es decir, es el
proceso mediante el cual a partir de una
molécula de DNA de doble hélice se
sintetizan dos idénticas, y para ello se
requiere de componentes específicos,
tales como como un templado o molde de
DNA, primers, Taq DNA Polimerasa,
dNTPs, cationes divalentes como el
magnesio y un buffer que mantenga las
condiciones idóneas para cada uno de los
componentes.  mediante la comparación de las bandas.
La PCR consiste en ciclos de
calentamiento y enfriamiento repetidos,
en los cuales se genera la
desnaturalización, templado y extensión
del DNA, es decir, primero se incrementa
la temperatura para separar las dos
cadenas de la molécula de DNA que se
quiere amplificar (~95-96°C) donde cada
una de ellas actuará como molde para
fabricar su complementaria. A
continuación, se disminuye la temperatura
hasta la temperatura de alineamiento
(Ta~50°C), consiguiendo que cada primer
se una de forma específica a su región
complementaria dentro de la cadena de
DNA. Finalmente, último paso consiste
en la generación de la cadena de DNA
complementaria por acción de la DNA
Polimerasa, a partir del extremo 3´ de
cada primer, obteniendo como resultado
específico de DNA por medio de un
termociclador. 
Posterior a la PCR, se procede a
realizar la electroforesis, que es el método
estándar para separar, identificar y
purificar fragmentos de DNA donde se
emplea una corriente eléctrica para que
los fragmentos de la misma se desplacen
a través de un gel (comúnmente agarosa o
poliacrilamida) dependiendo del tamaño
de cada fragmento por los pares de bases
de los que se conforma, donde los poros
del gel actúan como un colador,
permitiendo que las moléculas más
pequeñas se muevan más rápido que las
grandes. Las condiciones utilizadas
durante la electroforesis se pueden ajustar
para separar moléculas en el rango de
tamaño que se desee. Los componentes
principales en una electroforesis son el
gel, un buffer de carga un marcador de
peso molecular y un colorante
fluorescente para leer el resultado de la
electroforesis y emitir conclusiones
 
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 Por lo tanto, con base en lo
anterior, el objetivo del presente estudio
consiste en analizar marcadores
polimórficos partiendo de muestras de
DNA de cuatro posibles padres, de la
madre y del hijo, por medio de una
amplificación por PCR de marcadores
STR y la separación de los fragmentos
mediante electroforesis con el fin de
determinar cuál de los posibles candidatos
es el padre.
METODOLOGIA
Se llevó a cabo una PCR en el laboratorio
PCR Learn Genetics
 https://learn.genetics.utah.edu/con
tent/labs/pcr/
Se realizó una prueba de paternidad en un
laboratorio virtual:  Con respecto al laboratorio PCR Learn
Cibertorio de biología molecular UAH
 http://biomodel.uah.es/lab/cibertor
io/cibertorio.htm
Con las indicaciones descritas en el
presente archivo:
 https://classroom.google.com/u/0/
c/ODk1MzkzNjI2NDFa
OBSERVACIONES Y
RESULTADOS
El laboratorio virtual ‘’Simulador de PCR
Learn Genetics’’ nos permitió observar de
manera gráfica el proceso a seguir en el
laboratorio para llevar a cabo una PCR
Figura 1.- Resultados del laboratorio virtual
‘’Simulador de PCR Learn Genetics’’. En donde se
observa la replicación enzimática del DNA
contenido en la muestra.
Figura 2.- Resultados del laboratorio virtual
‘’Cibertorio de biología molecular’’.  En la
imagen se muestran las bandas que se
obtuvieron de la electroforesis, en el pozo 1
se encuentra la muestra de la mujer, en el
pozo 2 se encuentra la muestra del hombre,
mientras que en los siguientes 4 pozos se
encuentran las muestras a analizar.
DISCUSION
Genetics se nos muestra gráficamente el
proceso para realizar una PCR, en donde
se nos explica que la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR)  permite llevar a
cabo hasta 100 billones de copias
idénticas de una secuencia de DNA
específica, dicha reacción es llevada por
la DNA polimerasa, los principales
componentes de esta reacción son:
componentes de una reacción de PCR
son: el templado o molde de DNA, un par
de oligonucleótidos que serán utilizados
como primers o cebadores, la Taq DNA
Polimerasa, desoxinucleótidos (dNTPs),
cationes divalentes y el buffer en donde
se llevará a cabo la reacción.
Por otra parte, en el segundo laboratorio
‘’Cibertorio de Genética Molecular’’ se
nos pidió realizar una prueba de
paternidad para 4 muestras de posibles
4
hijos, pero al realizar el proceso de
electroforesis mostrado en la figura 2
podemos determinar que ninguna de las 4
muestras analizadas coincide con la
muestra del supuesto padre, ya que las
bandas del DNA obtenidas no son
parecidas.
La Reacción en Cadena de la
Polimerasa Múltiple (PCR multiplex)
fue la técnica que se utilizó para la prueba
de paternidad. Las pruebas de paternidad
se basan en el patrón mendeliano de
herencia junto con la diversidad genética
de los individuos. Lo primero nos indica
que de cada dos copias o alelos de una
zona de nuestro genoma, una es idéntica a
una de las dos de nuestra madre mientras
la otra coincide con nuestro padre. Lo
segundo, que unas personas nos
diferenciamos de otras en la secuencia de
nucleótidos presente en diversas regiones
del genoma, lo que se denomina
polimorfismo genético. Para las pruebas
de paternidad, al igual que otras pruebas
de identidad, se emplean regiones
polimórficas del genoma que no codifican
ningún producto (proteína o RNA) y, por
ello, no representan ninguna ventaja ni
desventaja funcionales y sus variantes
(alelos) se distribuyen en la población de
forma aleatoria (aunque respetando las
leyes de herencia) En concreto, este
ensayo se centra en varias regiones
polimórficas conocidas como STR (short
tandem repeats, repeticiones cortas en
tándem) que forman parte de uno de los
grupos de marcadores de referencia
internacional, los marcadores del CoDIS
conocidos por ser los utilizados por el
FBI. La diferencia entre los alelos
presentes en distintos individuos está en
el número de unidades repetidas y, en
consecuencia, en la longitud de los
fragmentos de DNA que se amplificarán
mediante PCR y se analizarán mediante
electroforesis.
CONCLUSIONES
La biologia molecular ha facilitado la tarea de
identificación geneticala PCR es una técnica
que permite determinar relaciones de
parentesco entre individuos que se realizan
identificando repeticiones, estas repeticiones
permiten establecer relaciones biológicas de
parentesco, que se le conoce como
marcadores genéticos o marcadores
moleculares, por esto es importante conocer
los fundamentos de esta técnica y las
aplicaciones que tiene.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Rangel. H.. (2010). La prueba de
paternidad con ADN. 10/05/2020,
de NOTICONAQUIC Sitio web:
dnaprofile.com.mx/LaPruebadePa
ternidadconADN.pdf
 Dorado. G.. (2013).
Amplificación de DNA mediante
PCR (Reacción en Cadena de la
Polimerasa) . 10/05/2020, de
Universidad de Rabanales Sitio
web:
https://www.uco.es/dptos/bioquim
ica-biol-mol/pdfs/44%20PCR.p
 Lodish, H. Berk, A. Kaiser, C.
(2016).  “Biología Celular y
Molecular”. Séptima Edición. Ed.
Panamericana, México
 Luque, J., Herráez, A.  (2002). 
“Biología Molecular e Ingeniería
Genética”. Ed. Elsevier, Madrid,
España.