INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE
CIENCIAS BIOLÓGICAS

“INGENIERÍA BIOQUÍMICA”
“METODOS DE ANALISIS”
Practica No.3
“VERIFICACIÓN DEL FUNCIONAMIENTO DE UN
ESPECTROFOTÓMETRO”

PROFESORES:
 VAZQUEZ FLORES LUIS FRANCISCO
 BENÍTEZ IBARRA ROGELIO ALEJANDRO
 LARIOS SERRATO VIOLETA

ALUMNO:
 RIVERA HERNÁNDEZ JORGE OSCAR

GRUPO: 5IM2
 PREGUNTAS:
A) EXACTITUD DE LA ESCALA DE LONGITUD DE ONDA

a) Observar el espectro obtenido y señalar aquellas longitudes de onda donde se

presentaron picos y valles.
Se observaron picos en las longitudes de onda 420, 460, 490 y 630,550 nm y valles en las longitudes
de 410, 450, 470, 530 y 580 nm.
b) ¿Coincidieron los máximos y/o mínimos con las longitudes de onda informadas por el
fabricante? , ¿En qué longitudes de onda no fue así?
Coincidieron todos los picos y uno de los valles cabe mencionar que los primeros intervalos de longitud
de onda (400 a 480 nm) existe una ligera diferencia respecto a la longitud de onda en donde se obtiene
un decaimiento en el %T; pero el comportamiento de ahí en fuera fue el correcto y coincide con los
datos del fabricante o referenciales.
A2). MÉTODO DE SULFATO DE NÍQUEL
a) Observar el espectro obtenido y señalar aquellas longitudes de onda donde se
presentaron picos y valles.
Se observó en las longitudes de onda de acuerdo ala grafica No.2 solo un valor máximo de %T del
500nm y ningún valle.
b) ¿Coincidieron los máximos y/o mínimos con las longitudes de onda informadas por el
espectro de referencia?, ¿En qué longitudes de onda no fue así?
No coincidieron puesto que no se presentó más que un solo pico pero el comportamiento de ahí en
fuera fue el correcto y coincide con los datos del fabricante o referenciales.
B) PROPORCIONALIDAD FOTOMÉTRICA
a) Informar los valores de la ordenada al origen, la pendiente y el coeficiente de correlación.
𝒚 = 𝒎𝒙 + 𝒃 → 𝒚 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟔𝒙 − 𝟏. 𝟑𝟎𝟖𝟕
𝑹𝟐 = 𝟎. 𝟗𝟓𝟐𝟓 → 𝑹 = 𝟎. 𝟗𝟕𝟔
Ordenada de origen 1.3087
Pendiente 0.0026
Coeficiente de correlación 0.976
b) ¿Qué se puede concluir respecto a la proporcionalidad fotométrica en este intervalo de
longitudes de onda?
De acuerdo a los resultados obtenidos en la evaluación de la proporcionalidad fotométrica, el valor del
coeficiente de correlación no se encuentra dentro de los límites aceptables al tener un error relativo
menor al 5%.
c) ¿Qué relación existe entre la absorbancia y la longitud de onda en este intervalo de
longitudes de onda?
Existe una relación lineal.
 C) LUZ DISPERSA
a) Señalar dos causas que originen luz dispersa.

 Este fenómeno, conocido como dispersión, se produce cuando un rayo de luz

compuesta se refracta en algún medio quedando separados sus colores
constituyentes.
 En el momento de no cerrar bien la tapa del espectrofotómetro permitiendo la entrada
de un haz de luz.
D) ANCHO DE BANDA
a) Si el porcentaje de %T se incrementó, ¿Qué ocurrió con el ancho de banda?
El ancho de banda aumenta si él %T aumenta y viceversa, el ancho de banda disminuye si él %T
disminuye.
b) ¿Qué ocurre si el disminuye?
Si disminuye el %T disminuye de la misma manera por lo que podemos decir que son directamente
proporcionales.
c) Describir causas que modifiquen el cambio del ancho de banda.
 Si modificas el selector de onda modificaras el ancho de banda.
 Por la acumulación de polvo dentro de las ranuras del monocromador esto producirá una
reducción dentro del espectrofotómetro.
d) LINEALIDAD DE FOTOMETRICA
a) El intervalo dinámico lineal de concentración es el intervalo de concentraciones en el que
se observa una respuesta lineal entre la absorbancia y la concentración ¿cómo es este
intervalo con respecto al señalado por el profesor?
El intervalo es el mismo al señalado.
b) ¿Qué puede indicar que el intervalo sea menor al esperado?
Indicaría que el equipo esta funcionado apropiadamente.

DISCUSIÓN
Los análisis realizados al espectrofotómetro fueron llevados a cabo para identificar los diferentes
parámetros y partes del sistema y de esta manera conocer el funcionamiento para la verificación del
espectrofotómetro.
Mediante la escala de longitud evaluamos el monocromador que consiste en una rendija de entrada,
un elemento dispersor (rejilla de difracción o prisma), lentes y/o espejos y la rendija de salida, la cual
su función principal es separar el espectro de la fuente de iluminación, es por esta razón que se
muestran los espectros de trasnominación tanto del filtro de dídimo como el de 𝑁𝑖𝑆𝑂4 ∗ 6𝐻2 𝑂al 20%
tanto para los teóricos como los referenciales. Por el cual evaluamos la exactitud de la escala de
longitud de onda demostró que no existen desviaciones importantes entre los datos ya que siguen la
misma tendencia, por lo que los éstos son confiables y la utilización de dos métodos permite evaluar
con mayor precisión esta característica debido a que ambos análisis estuvieron en sus valores
esperados, podemos afirmar que el resultado es el correcto.
El análisis de la proporcionalidad fotométrica permite conocer la relación entre la radiación registrada
y la lectura pues evalúa la parte del detector mediante transmitancia vs absorbancia de 𝑁𝑖𝑆𝑂4 ∗ 6𝐻2 𝑂
al 20% en un intervalo de 530-570nm y de acuerdo a los resultados, esta relación presentara linealidad
por lo que podemos afirmar que la cantidad de radiación que detecta este aparato en su uso es el valor
real, pues dichas longitudes de onda contra absorbancia de acuerdo al Génesis 20, nos muestran un
coeficiente de correlación del 0.976 no entrando en los parámetros permitidos debido a errores por el
instrumentista sugiriendo al instrumentista que lleve a cabo más repeticiones, pero de igual manera
será clasificado como bueno pero no siendo el mejor.

La presencia de luz dispersa es evaluada ya que provocará que los valores obtenidos con el aparato
sean incorrectos al haber una mayor cantidad de luz que la que fue emitida ya que llega al detector sin
pasar por la muestra. El resultado obtenido indica que, aunque está presente espectrofotómetro, su
valor está dentro de los límites aceptable presentándose en buenas condiciones para su uso.
El análisis del ancho de banda es realizado para conocer el estado del aparato y asegurarse así que
las lecturas realizadas den resultados correctos ya que es el intervalo de longitud de onda de radiación
saliente de la rendija de salida de un monocromador medido medido en la mitad de un pico del flujo
radiante detectado. Para esta prueba leímos transmitancia a 500nm de 𝑁𝑖𝑆𝑂4 ∗ 6𝐻2 𝑂al 20%,
obteniendo un valor del 90.16%, por lo que el resultado obtenido demuestra que está ligeramente
elevado el ancho de banda; sin embargo, está dentro de los valores esperados. Esto puede deberse
a pequeñas alteraciones en el monocromador o los filtros dentro del equipo.
La exactitud fotométrica nos informa si la escala del espectrofotómetro proporciona valores exactos y
por lo tanto, confiables. El resultado obtenido demuestra que el aparato proporciona las medidas
exactas a 500 y 400 nm debido a que el valor medido está dentro del rango aceptable.
La exactitud fotométrica se determina comparando la absorbancia de una solución de referencia con
la lectura de esta obtenida en el espectrofotómetro, la solución estándar utilizada es 𝑁𝑖𝑆𝑂4 ∗ 6𝐻2 𝑂al
20%, presentando una absorbancia de 1.89 a 400nm y 0.047 a 500nm, se observa que a 400nm el
𝑁𝑖𝑆𝑂4 ∗ 6𝐻2 𝑂 al 20% absorbe mucho, pero transmite poco, sin embargo a 500nm absorbe poco y
transmite mucho y al comparar estos valores de tolerancia de absorbancia esperada podemos decir
que las diferencias son centésimas por lo tanto hay una buena exactitud fotométrica.
Finalmente, la evaluación del intervalo dinámico lineal de concentración se refiera a un intervalo en el
cual la relación entre concentración y absorbancia tiene una relación lineal, el cual es un parámetro
para determinar que si sigue la Ley de Bouguer-Lambert-Beer. Pues a mayor concentración aumenta
la absorbancia, es decir, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración.
Presentándose una recta, con un coeficiente de correlación de 0.997 y de acuerdo a los datos de la
regresión lineal, los datos obtenidos están dentro de los valores esperados y muy aceptables.
CONCLUSIONES

 El aparato se encuentra en una moderada situación porque las variables analizadas están
dentro del rango aceptable.
 Los datos en este espectrofotómetro no serán completamente exactos al estar fuera de los
valores de referencia.
 Los analitos medidos en el espectrofotómetro D-Lab siguen la Ley de Buoguer-Lambert-Beer.
 Se debe realizar un mantenimiento correctivo para arreglar la exactitud fotométrica.
BIBLIOGRAFÍA
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Assurance 10: 283-288.
 Blázquez, J. (2005) Calibración de espectrofotómetros para la medida directa de absorbancias, Gestión de
Calidad en Laboratorios. http://www.iberolab.org/opencms/opencms/congreso/IberolabIII2005/ind ex.html.
 Duymovich, C., Acheme, R; Sesini, S; Mazziotta, D. (2005) Espectrofotómetros y fotocolorímetros: Guía práctica
de actualización. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 39: 529-53.