UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA EXAMEN PRÁCTICO PRIMERA UNIDAD

INGENIERIA AMBIENTAL (Celendin) Nombre: ______________________________

Instrucciones: Responder las siguientes preguntas:

1. Describir en sus propias palabras ¿Cómo se realiza el Test de Allium?

Ara estandarizar Allium test se hizo necesario selec-cionar cuatro bulbos de Allium cepa de
dos cm de diá-metro aproximado (tres réplicas), los cuales fueron asignados al medio agua
destilada. Al cabo de las pri-meras 72 horas, se retiraron las cebollas de sus respec-tivos
tratamientos y se procedió a preparar entre dos y tres raíces de dos cm de longitud de cada
cebolla para análisis al microscopio. Se realizó la tinción y jación de células con base en
el procedimiento de Fiskesjö y Dutka (1996). Se tuvo en cuenta solamente la parte apical de
entre uno y dos cm y se añadieron dos go-tas de la solución de jación Carnoy hasta
cubrirlas. Se jaron durante diez minutos. El exceso de jador se eliminó con pipeta y
papel de ltro, e inmediatamente después se añadió el colorante (orceína acético-clorhí-
drica). Se ameó hasta la emisión de vapores, evitando la ebullición. Se dejó enfriar y se
repitió entre dos y tres veces durante 15 minutos. Posteriormente se rea-lizaron cortes
nos del ápice de la raíz de la cebolla, se hizo el “squash” del tejido y se sellaron los
bordes del cubreobjeto con barniz de uñas transparente para evi-tar la deshidratación celular

Observación microscópica:l os preparados fueron observados a través de un mi-croscopio

óptico binocular. Se calculó el índice mitóti-co () que estima el porcentaje de células
en división que existen en un tejido y que por tanto es una medida de su potencial
proliferativa

Resultados: estandarizar Allium test en condiciones de labo-ratorio se observaron

claramente algunas organelas celulares. Se identicaron los núcleos, los cromo-somas
teñidos de color violeta y las membranas ce-lulares claramente definidas

2. ¿Qué se entiende por ecotóxico?

Un ecotóxico es un producto químico peligroso con capacidad para ser absorbido por
cualquiera de los elementos de un ecosistema y para, por pequeña que sea la cantidad
presente, alterar los equilibrios biológicos del mismo. Muchos de ellos tienden a persistir en
el ambiente. El ser humano es un elemento más de los ecosistemas.

Con el fin de poder actuar eficazmente sobre los problemas de ecotoxicidad, resulta muy
importante establecer la relación existente entre los productos y la contaminación
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ambiental. Se dice que un ambiente está contaminado cuando en él aparecen sustancias o
productos que no debieran estar, o cuando su concentración es distinta a la que debería
haber de forma natural

3. ¿Qué es un biomarcador? Anote algunos ejemplos

Los biomarcadores se utilizan para detectar enfermedades o los procesos de las mismas.
Estos se pueden medir objetivamente y ser evaluados como un indicador de un proceso
biológico común, estado patogénico o una respuesta a un tratamiento médico. La medición
en los niveles moleculares, bioquímicos o celulares consiguen reflejar estos biomarcadores.
De esta forma se logra señalar la exposición del organismo a sustancias nocivas y la
gravedad de la respuesta del organismo al agente contaminante.

Ejemplo:

Algunos ejemplos de biomarcadores son:

Las sustancias biológicas («bioquímicas»), como las enzimas (sustancias biológicas que
provocan cambios en el organismo), las cuales se pueden encontrar en muestras de sangre o
tejidos (por ejemplo, en el caso del cáncer);

Las alteraciones genéticas (ADN);

Las imágenes médicas, como las resonancias magnéticas (RM) o las radiografías.

4. Si tengo 10 mL de una suspensión de microrganismos, cuya concentración es de 5000

individuos/mL y realizo una dilución al 1/10 En esta dilución ¿Cuál será la
concentración?
5. Describa como se realiza una coloración Gram:

Cómo se hace la tinción de Gram?

El proceso es muy sencillo, y los pasos a seguir serían:
 Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de
algodón).
 Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
 Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
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 Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
 Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El
lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de
penetrar en la pared de las células bacterianas.
 Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos
segundos.
 Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir
las gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con
un tono rosado o rojo. Lavar con agua.
 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de
color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.