FACULTAD

DE INGENIERÍA
E.P. INGENIERÍA AMBIENTAL

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Y MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

PRÁCTICA Nº 3: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

I. OBJETIVOS

• Conocer los medios de cultivo y el requerimiento nutricional de los microbios.

• Clasificar los medios de cultivo según su composición.
• Preparar medios de cultivo: comunes y selectivos.

II. PRINCIPIOS TEÓRICOS

2.1. REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE LOS MICROORGANISMOS

Los microorganismos de acuerdo a sus requerimientos nutricionales se clasifican en
. general en AUTOTRÓFICOS y HETEROTRÓFICOS.
− MICROORGANISMOS AUTOTRÓFICOS: Son aquellos que obtienen su energía de la
oxidación de sustancias inorgánicas simples
− MICROORGANISMOS HETEROTRÓFICOS: Son aquellos que requieren de
compuestos orgánicos más complejos como fuente de carbono y nitrógeno,
requieren del suministro de proteínas, carbohidratos, lípidos, vitaminas, sales
inorgánicas y otros factores de crecimiento para la síntesis de compuestos
estructurales y citoplasmáticos para su desarrollo.

2.2. MEDIOS DE CULTIVO

v DEFINICIÓN.- Son sustancias nutritivas líquidas, sólidas o semi sólidas, que se

utilizan en el laboratorio para el crecimiento de los microorganismos, pudiendo
ser similares a sustratos naturales, en los cuales estos crecen normalmente.

v COMPOSICIÓN.- Sus componentes básicos deben satisfacer las mínimas

exigencias nutricionales para el desarrollo microbiano y varían según el tipo de
microorganismo. Incluyen agua, nutrientes como fuentes de nitrógeno, carbono
y energía; y en ciertos casos, factores de crecimiento.

Se consideran además para su crecimiento necesidades de oxígeno (aerobios),

CO2 parcial o total (microaerófilos o anaerobios) y condiciones óptimas de pH y
temperatura de incubación.

v UTILIDAD.- Los medios de cultivo de acuerdo a su naturaleza pueden ser

orgánicos e inorgánicos. La mayoría de los medios de cultivo empleados para el
desarrollo inicial y aislamiento de microorganismos heterotróficos, son ricos en
componentes proteicos: péptidos, peptonas, proteasas, aminoácidos, sales
inorgánicas como fosfatos y trazas de K y Mg.

El agar es el agente solidificante de un nutriente líquido, al igual que la gelatina

y su principal componente es un polisacárido de cadena larga, mayormente
constituido por D-galactopiranosa.

v CLASIFICACIÓN.- Según su composición y objetivos se clasifican de la

siguiente manera:

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v TIPOS DE CULTIVOS

1. MEDIOS COMUNES.- Aquellos que contienen los mínimos componentes nutricionales

para organismos heterotróficos no exigentes. Pueden ser:
− -Medios líquidos: caldo nutritivo
− -Medios sólidos: nutrientes compuestos de un medio líquido base, al que se le
agregan sustancias orgánicas de poco o nulo valor nutritivo como el agar o
gelatina, para dar al medio la consistencia de gel. Ejemplo: agar nutritivo. Un
medio así nos permite el aislamiento de bacterias no exigentes al estado de
pureza, a partir de una fuente problema
− -Medios semisólidos: compuesto por cualquiera de los medios líquidos antes
mencionados, a los que se le adiciona una cantidad suficiente de agar para
obtener un estado de gel blando. Principalmente se usa para estudios de
motilidad macroscópica.

2. MEDIOS ENRIQUECIDOS O SUPLEMENTADOS.- Preparados para satisfacer los

requerimientos nutricionales de bacterias más exigentes. Se componen de un medio
basal ordinarios suplementado con factores de crecimiento como sangre, vitaminas,
extracto de levadura, caldo TSA etc. Pueden ser:
− Medios líquidos: caldo BHI, caldo TSA
− Medios sólidos: Agar BHI, agar sangre, agar chocolate.

3. MEDIOS SINTÉTICOS DEFINIDOS O QUÍMICAMENTE DEFINIDOS.- Que son

preparados exclusivamente de sustancias químicas.
− Medios sintéticos simples: contienen carbono como fuente de energía, una
fuente inorgánica de nitrógeno; fosfato o sulfato y varias otras sales minerales.
Ejemplo: medio mínimo de Davis
− Medios sintéticos complejos: incorporan aminoácidos, purinas, pirimidinas y
otros factores de crecimiento para cepas exigentes.

4. MEDIOS ESPECIALES.- Son aquellos que además de contener los requerimientos

nutricionales básicos, llevan en su composición sustancias inhibidoras con carácter
selectivo y compuestos específicos e indicadores para poner de manifiesto los
principales caracteres bioquímicos esenciales para el diagnóstico específico.
Comprenden:
− MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO: Que favorecen el crecimiento de uno o un grupo de
microrganismos en particular e inhiben en lo posible a otros de la microflora
acompañante. Ejemplo: Agua peptonada alcalina (APA), Caldo tetrationato
− MEDIOS SELECTIVOS: Que favorecen el aislamiento de un determinado grupo de
microrganismos mediante la obtención de colonias. Todos son utilizados en
condiciones sólidas, Ejemplo: Agar Chapman, Agar Mitis Salivarius, Agar
McConkey, Agar EMB, Agar SS
− MEDIOS DIFERENCIALES: Empleados para detectar reacciones bioquímicas con
carácter diferencial de grupos, géneros y especies microbianas. Ejemplo: Agar
TSI, Agar LIA, Citrato de Simmons, Medio SIM.

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III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Proporcionado por el Laboratorio: Proporcionado por el estudiante (grupo):

Medios de cultivo deshidratados: • Papel kraft.

1. Agar Mc Conkey • Fósforo
2. Agar EMB • Hilo o pabilo
3. Agar SS
4. Agar XLD
5. Agar Sabouraud
6. Agar Plate Count
7. Caldo lactosado
8. Agar TSI
9. Agar Citrato de Simmons
10. Agar Mitis Salivarius
11. Agar TSA
12. Agar TCBS
13. Agar LIA
14. Agar Mueller- Hinton (MH)
Equipos y materiales:
• Balanza ordinaria
• Luna de reloj
• Vaso de precipitados
• Un matraz Erlenmeyer de un litro de
capacidad, con tapón de algodón
• Una probeta graduada de un litro de
capacidad
• Agua destilada
• Varillas o baguetas de vidrio
• Trípode y rejilla con asbesto
• Placas Petri
• Papel indicador de pH
• Rotulador
• El Autoclave

IV. PROCEDIMIENTO EPERIMENTAL

4.1. ACTIVIDAD N° 1 - PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

• Preparar medios de cultivo comunes. Agar nutritivo
• Preparar medios selectivos: Agar Saboraud
• Los estudiantes atenderán las indicaciones de parte del docente sobre las Reglas
generales de laboratorio, también se dará énfasis a los puntos más importantes del
reglamento de higiene y seguridad que se deben observar en el laboratorio.
Además se explicará el respectivo uso de los materiales, equipos y reactivos de
laboratorio para esta práctica.

4.2. ACTIVIDAD N° 2 - PROCEDIMIENTO

• Pesar la cantidad requerida de los medios a preparar
• Colocar la cantidad pesada en el matraz Erlenmeyer, adicionar agua destilada en la
proporción requerida. Homogenizar la mezcla mediante la varilla de vidrio

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• Colocar el matraz en baño maría o calentarla empleando la llama del mechero de

bunsen, hasta lograr la total disolución de los ingredientes
• Disueltos los componentes, enfriar a 50 – 55 °C. Verificar el pH
• Esterilizar a la autoclave a 15 lb de presión, 121 ° C por 15 minutos. Terminado el
tiempo de esterilización, esperar que la aguja del manómetro descienda y extraer los
medios
• Los medios sólidos sometidos al proceso de esterilización y enfriados a 50 – 55 °C,
deben de repartirse en promedio de 12 a 15 ml en placas Petri estériles en
condiciones asépticas; cuando los medios se solidifican, invertir las placas para
evitar que el agua de condensación se acumule sobre la superficie del agar.
• Incubar las placas a 37°C por 24 horas, para control de esterilidad
• Rotular datos: nombre del medio y fecha de preparación

V. BIBLIOGRAFÍA
1. AQUIAHUATI, M. Manual de Prácticas de Laboratorio de Microbiología General;
Universidad Autónoma Metropolitana; México; 2004.
2. GARZÓN, G.G. Fundamentos de Química general, 211 ed. México: Mc. Graw-Hill,
1986. 144p.
3. WILLEY Y OTROS., Microbiología de Prescott, Harley Klein. 7ª ed. Madrid:
Interamericana de España S. A.2009. 1086 p. ISBN: 978-84-481-6827-8
4. TORTORA.FUNKE.CASE. Introducción a la microbiología. 9ª ed. Madrid: Editorial
Médica Panamericana S.A. 2007. 931p. ISBN:978-950-06-0740-7
5. MADIGAN, M. Martinko, J. y J. PARKER. Biología de los microorganismos. 10a ed.
España: Editorial Pearson educación, S. A. 2006. 1008p.ISBN: 0-13-066271-2.
6. KARP, G. Biología celular y Molecular: Conceptos y experimentos. 4a ed. México: Mc.
Graw-Hill Interamericana Editores. 2011. 765p. ISBN: 978-607-15-0504-0
7. AQUIAHUATI, M. Manual de Prácticas de Laboratorio de Microbiología General;
Universidad Autónoma Metropolitana; México; 2004.
8. SAWWYER, C. McCARTY, P. PARKIN, G. Química para Ingeniería Ambiental. 4ª ed.
Editorial McGraw Hill. 2001, 716 p. ISBN: 9584101641
9. SHARPE, A. Química Inorgánica. 1ª ed. Editorial Reverte S.A. 2008. 584 p. ISBN:
8429175016.

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