Morfología y estructura bacteriana

Taller de laboratorio 1

JOSEFINA GUZMAN

GRUPO A1
MEDICINA

ORIANA KARINA DAZA

FLORA YULIANA ANGULO
HIDALGO ANDRES ANDRADE
TATIANA SOFIA FLORIAN
ANA CECILIA MORALES

FUNDACION UNIVERSITARIA SAN MARTIN

BARRANQUILLA – ATLANTICO
 1. -IDENTIFICAR LA MORFOLOGÍA BACTERIANA

Coloración Gram

Bacilos Gram (Positivo).

Figura 1

Cocobacilos Gram
(negativos).

Figura 2
 1

Diplococos Gram (negativos) intra y

extra celular FLECHA (1).
Leucocitos de tipo neutrófilos FLECHA
(2).

Figura 3

1
2

Cocos en racimos Gram (Positivos)

FLECHA (1).
Cocos en cadena Gram (Negativos)
FLECHA (2).

Figura 4
2
 Bacilos Gram (Negativos).

Figura 5
Diplocos

Diplococo Gram (Positivos), con

morfologías diferentes (cadenas,
tétradas, racimos). Son positivos porque
la tinción de Gran proporcionó un color
morado y esto gracias a la gran cantidad
de peptidoglicano.

Figura 6
 2. Describa la estructura.

Endospora
s

Bacilos esporulados Gran (Positivos).

Figura 7
Esporas coloreadas
de verde gracias al
verde Malaquita.

Bacilos esporulados.

Endosporas Figura 8
 Cocos en racimos Gram (Positivos).

Figura 9

Cocos en cadenas Gram (Positivos), FLECHA

1.

Figura 10
 1

Bacilos en curva Gram (Negativos).

Figura 11

Tétradas Gram (Positivas).

Agrupación en forma de tétradas o
parejas

Figura 12
 3. Diga el Fundamento de las siguientes coloraciones y
describa la lámina.

Figura 13
Figura 14
1
Figura 13: Diplococos encapsulados Gram (negativos).
Flecha 1: señala a unos cocos en cadena Gram (Negativos), también
su capsula.
Figura 14: Diplococos encapsulados Gram (Negativos).
Flecha 2: podemos observar a los diplococos, se ve su capsula bien
marcada.
Fundamentos tinta china
La nigrosina y la tinta china actúan de manera similar; por ello se puede usar
cualquiera de las dos sustancias indistintamente.

Esta técnica recibe el nombre de tinción negativa porque actúa de forma contraria
al resto de las técnicas de coloración. En esta lo que queda sin teñir es la estructura
que se está buscando o que se desea ver; es decir, los microorganismos.

Por lo tanto, la coloración se basa en teñir el fondo del frotis en un color oscuro. En
este escenario las estructuras capsuladas resaltaran en color claro o incoloro.
 Por lo general las levaduras se observan refringentes, rodeadas por un halo claro
que corresponde a la cápsula. Esto ocurre porque la tinta china y la nigrosina son
sustancias incapaces de penetrar el polisacárido que conforma la cápsula de los
microorganismos vivos.

Vale destacar que tampoco penetran otras estructuras que pueden estar presentes
en la muestra directa, como leucocitos o hematíes.

Ahora bien, si los microorganismos están muertos, la tintura puede penetrar dentro
de los mismos, de tal manera que esta tinción también es útil para evaluar la
viabilidad de los microorganismos.

Figura 15

1 Flecha 1: Cocos Gram (Positivos), también se logra observar la

capsula, que vendrá siendo ese espacio en blanco.
Flecha 2: Cocos Gram (Positivos), se evidencia la capsula.

Fundamentos tinción de Hiss

La cápsula es una estructura fuerte de naturaleza polisacárido. Esta protege a los
microorganismos de la fagocitosis, y por tanto es una estructura difícil de penetrar.
Es por ello que las tinciones de cápsulas se fundamentan en el contraste. Los
colorantes tiñen el fondo de la preparación mientras que la cápsula queda incolora.

Por tanto, con estas técnicas la cápsula es fácilmente reconocible. Si el

microorganismo no posee cápsula no será distinguible con este tipo de coloración,
porque todo se teñirá del mismo color.

Todas las técnicas que se utilizan para colorear la cápsula poseen el mismo
fundamento a pesar de que utilizan colorantes y procedimientos diferentes.

En principio, las bacterias coloreadas de color

rosado – lila, serían las micobacterias, las que
han soportado el alcohol – ácido sin decolorarse,
mientras que las bacterias coloreadas de azul,
serían todas las demás bacterias presentes en la
muestra, las cuales se decoloraron con el alcohol
– ácido.

Figura 16

Fundamento Ziehl Neelsen

Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (ácidos
micólicos) que les confieren la propiedad de resistir a la decoloración con alcohol-
ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-
alcohol resistentes . Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M.
marinum se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La
coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere de calentamiento para que el colorante
atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento
aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita
su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son de color
rojo, sobre un color azul (que lo provee el colorante de contraste Azul de metileno).
 Figura 17

Placa rosa: bacilos Gram (Negativo).

Placa morada: cocos en racimos Gram
(Positivos).

Fundamentos GRAM
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas

La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglicano, además de dos clases de ácidos teicoicos: anclado en la cara
interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido
lipoteichoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente
en el peptidoglicano (también conocido como mureína).
Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negativas es
delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de
composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa
delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La
membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.

Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas

diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el
material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las gram positivas lo
poseen en mucha mayor proporción que las gran negativas.

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración se debe a que la

membrana externa de las bacterias gram negativas es soluble en solventes
orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de
peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el
complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este
complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Por el contrario, las
bacterias gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor
proporción de peptidoglicano, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico,
sino que este actúa deshidratando los poros, cerrándolos, lo que impide que pueda
escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violeta.
 Schaeffer Fulton

Endosporas FLECHA (1).

Bacilos vegetativos FLECHA (2).

Se observan cadenas de bacilos: estreptobacilos

de color rojo, endosporas de color verde, Gram
negativas.

Figura 18
1 2

Se pueden notar bacilos con tinción Gram

negativa, endosporas, células vegetales,
esta esporulado, las esporas son centrales,
forma elipsoide.

Figura 19
Fundamento Schaeffer Fulton
Las endoesporas son formas de resistencia altamente deshidratadas y con una serie de cubiertas
muy poco permeables, esto hace que sean difíciles de teñir, excepto si se calienta la preparación
para permeabilizarlas.

Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología: un enfoque gráfico En la tinción de

Schaeffer Fulton el colorante primario (verde de malaquita) se introduce en la espora mediante el
calentamiento a emisión de vapores de la preparación. El verde de malaquita es soluble en agua y
tiene una baja afinidad por el material celular, por lo que las células vegetativas y las células madre
de esporas pueden decolorarse con agua y contrateñirse con safranina (colorante de contraste) por
la cual si tienen afinidad Las esporas no se tiñen con las coloraciones convencionales debido a que
poseen una pared muy gruesa. La compleja composición de las esporas impide la entrada de la
mayoría de los colorantes.

Si se estudia la espora de afuera hacia dentro se observan las siguientes capas: en primer lugar,
está el exosporium, que es la capa más fina y externa formada por glicoproteínas.

Luego viene la cutícula, que brinda resistencia a las altas temperaturas, seguida de la corteza
compuesta por peptidoglicano. Posteriormente está la pared de la base que protege al protoplasto.
La espora es una estructura deshidratada que contiene un 15 % de calcio y ácido dipicolínico. Por
ello, la mayoría de las técnicas de coloración de esporas se basan en la aplicación de calor para
que el colorante pueda penetrar la gruesa estructura.
 BIBLIOGRAFIA
https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologicas/libros/Tinciones.pdf
López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G,
Franco-Cendejas R. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Mediagraphic.org.
2014; 3 (1): 10-18. Disponible en: medigraphic.com
Tankeshwar A. Capsule Stain: Principle, Procedure and Results. 2019. Medical Microbiology
Guide. Available in: microbeonline.com