Análisis cuantitativo

Hay dos métodos de cuantificación: los métodos estándar externo e interno, y

ambos se realizan mediante una curva de calibración. El método estándar
externo crea una curva de calibración para una muestra estándar y las
muestras desconocidas se cuantifican mediante la calibración. En el método de
patrón interno, se agrega una cantidad fija de una sustancia de patrón interno a
una muestra desconocida al crear una curva de calibración utilizando una
muestra estándar, y se crea una curva de calibración con la relación de
concentración frente a la relación de área de pico para la cuantificación.

Como se muestra en la Fig.12, se requiere que la sustancia estándar interna

sea un componente no incluido en la muestra real, para producir picos que
sean completamente separables de los de cualquier componente de
contaminación, para eluir en un tiempo de retención cercano al componente
objetivo cuantitativo. , ser química y físicamente estable y ser altamente
puro. La ventaja del método del patrón interno es que evita errores en el
volumen de inyección o los provocados por la evaporación del disolvente.

Fig.12 Cuantificación por método de patrón interno, curva de calibración

(izquierda) y cromatograma (derecha)

Procedimiento para establecer las condiciones de análisis

El procedimiento para establecer las condiciones de análisis se resume a
continuación.
Paso 1 Aclare el propósito del análisis e investigue los componentes a
analizar:
1. Peso molecular, estructura molecular y grupos funcionales de
componentes.
2. Propiedades (solubilidad, estabilidad, UV / Vis o espectro de
fluorescencia, etc.) de los componentes
3. Estado de la muestra (contenido, concentración, impurezas)
4. Examen preliminar de las condiciones de análisis y pretratamiento
basado en la hoja de datos y la literatura
Paso 2 Considere las condiciones de análisis para la columna, las
condiciones de la fase móvil, la temperatura, el método de separación y el
método de detección:
1. Confirmación de picos de componentes en muestras estándar
utilizando concentraciones relativamente altas y examen de las
condiciones de separación.
 2. Medición a la concentración requerida, determinación del método de
detección
Examen del pretratamiento de muestras desconocidas
3. Confirmación de la separación de los componentes objetivo y los
contaminantes en muestras desconocidas.
Paso 3 Determinación de las condiciones de análisis que se pueden
utilizar para las mediciones de rutina.
1. Determinación de la linealidad de la curva de calibración y el tipo de
curva de calibración
2. Reproducibilidad cuantitativa incluido el pretratamiento
3. Confirmación de componentes que están fuertemente retenidos en la
columna y componentes que no son detectados por el detector.
4. Correlación con otros métodos cuantitativos
Paso 4 Análisis cuantitativo de rutina
1. Vida útil de la columna
2. El coste de funcionamiento
3. Aclaración del procedimiento de medición y la documentación.
4. Mantenimiento del sistema y de la columna