BQD_FITTA

Pruebas bioquímicas primarias

Prueba Fundamento Condiciones Indicador Reactivos Interpretación
Permite diferenciar y separar a Azul: Gram (+)
las bacterias en dos grandes
grupos basándose en la
Cultivo puro y
composición de la pared
joven (aplica para
celular.
todas las pruebas)
Las Gram + tienen una pared
Cristal violeta
celular gruesa compuesto por
1 min Cristal Mordiente (Lugol) Rosa: Gram (-)
Gram peptidoglicanos permitiendo ----
violeta Alcohol/acetona
que el complejo cristal violeta-
1 min Mordiente Safranina
lugol no sea eliminado por la
5s
solución alcohol- acetona.
alcohol/acetona
Las Gram – no tienen esta capa
1 min safranina
de peptidoglicano, por lo
tanto, son teñidas por el Reportar morfología microscópica y
colorante de contraste agrupación
Catalasa (+): efervescencia (O2)
Determina la presencia de Reacción
catalasa, enzima para degradar instantánea, No
Catalasa ---- 𝐻 𝑂 al 30%
el peróxido de hidrogeno utilizar asa de Catalasa (-): No se observa cambio
𝐻 𝑂 →𝐻 𝑂+𝑂 metal.

Basada en la identificación de Oxidasa (+) Oxidación del Reactivo

citocromo C como ultima
molécula aceptadora de e- en
la cadena respiratoria. Tiempo de N,N-dimetil-1,4- Oxidasa (-)
Oxidasa ----
En presencia de O2 la enzima reacción: 30s fenilendiamonio
citocromo C oxida al reactivo
Fenilendiamina y forma un
compuesto purpura (indofenol)
Motilidad Motilidad (+) Motilidad (-)
Agar semisólido: Crecimiento fuera Crecimiento solo en
Sembrado por de la línea de la línea de siembra
Identificación de mo que tienen punción. Incubar a
siembra
movilidad gracias a la 24 hrs-35ºC
presencia de un flagelo Método gota --- ---
Por agar semisólido o técnica suspendida:
de la gota suspendida

BQD_FITTA
 Identifica el tipo de Azul de
metabolismo energético del bromotimol
mo mediante un indicador 37ª por 24 hrs Vire a pH 6 a 7
O/F (amarillo-verde)
acido base en condiciones Agar semilíquido Glucosa al 10%
Oxidación y
anaerobias y aerobias Sembrado por
fermentación
Las bacterias producirán picadura
ácidos al metabolizar la
glucosa

Pruebas bioquímicas secundarias

Prueba Fundamento Condiciones Indicador Reactivos Interpretación
Determina la presencia de H2S
que el mo puede liberar partir
de aminoácidos azufrados,
utilizando la enzima tiosulfato Medio SIM
reductasa o cisteína Sulfato de amonio
Medio de cultivo
desulfhidrasa férrico
SIM semisólido
𝐶𝑖𝑠𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 → 𝑎𝑐. 𝑝𝑖𝑟𝑢𝑣𝑖𝑐𝑜 + 𝐻2𝑆 + 𝑁𝐻3 ---- Tiosulfato de sodio
Sulfuro-indol - Sembrar por
𝑇𝑖𝑜𝑠𝑢𝑙𝑓𝑎𝑡𝑜 → 𝑠𝑢𝑙𝑓𝑖𝑡𝑜 + 𝐻2𝑆 Reactivo de Ehrlich
movilidad Determina la capacidad del mo punción
o de Kovács
para oxidar al triptófano 35ºC 24-48 hrs
(p-dimetilamino
formando indol con ayuda de aminobenzaldehído)
las enzimas triptofanasas.
Detecta si el mo es móvil o
inmóvil
Método diferencial basada en
la capacidad en detectar si el
mo fermenta dextrosa, lactosa
y sacarosa para producir
sulfuro y ácidos que cambiaran Cultivo semisólido
pH del medio. Rojo de fenol Glucosa 1g
TSI siembra por pico y
Sacarosa 10 g
Agar triple estría
Lactosa 10 g
azúcar hierro Incubar a 37ºC
Sal de hierro
18-24 hrs No fermenta CHO: Medio Rosa
Fermentación de glucosa: Medio rosa y
amarillo, al tener menos cantidad de glucosa

BQD_FITTA utiliza las peptonas como fuente de N (básico)

Fermentación de glucosa, lactosa y/o sacarosa:
Medio amarillo
BQD_FITTA

Basada en la capacidad que Purpura de

35º C de18-24
tiene el mo de descarboxilar o bromocresol
hrs Lisina hierro agar:
LIA desaminar la L-lisina por la 1) Utiliza los CHO como fuente de C
Cultivo sólido, L-lisina, citrato de
Lisina hierro enzima lisina descarboxilasa (generación de ácidos)
sembrado por amonio férrico.
agar 𝐿𝑖𝑠𝑖𝑛𝑎 → 𝑐𝑎𝑑𝑎𝑣𝑒𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝐶𝑂2 2) Lisina (+) descarboxilación (tubo4).
pico y estría
Debido a que la pérdida del grupo
carboxilo, da productos alcalinos. En la
desaminación se produce ácido alfa-ceto-
carbónico, el cual, con la sal de hierro y
bajo la influencia del oxígeno forma un
color rojizo en la superficie del medio
3) Lisina (+) sulfuro (+)

Medio de cultivo Citrato de amonio

KIA Identifica la capacidad que sólido, sembrado Rojo de fenol férrico C) Control
Agar hierro de tiene el mo de fermentar la por pico y estriada Glucosa 0.1% 1) No fermentador
Kigler lactosa y producir H2S Incubación 37ºC Lactosa 1% 2) Alcalino-ácido; Lactosa (-); Glucosa (+):
24-48 hrs Peptonas al estar en poca cantidad utiliza las
peptonas como fuente de energía; H2S (-);
Gas (-)
3) Alcalino-ácido: Lactosa (+); Glucosa (+);
H2S (+); Gas (-)
4) Ácido-ácido: Lactosa y glucosa (+); H2S
(-); Gas (+)
4A) Alcalino-ácido: Lactosa y glucosa (+);
H2S (-); Gas (+) Se dejo más tiempo en
incubación, el mo consumio todos los CHO
 y empezó a utilizar las peptonas como
fuente de N (Punta básica)
BQD_FITTA 5) Ácido- ácido: Lactosa y glucosa (+);
H2S (+); Gas (+)

35-37ªC por 24-

48 hrs
Determinar la capacidad
Medio de cultivo Purpura de
enzimática de un organismo
semisólido en bromocresol L-ornitina 5 g
MIO para descarboxilar L-Ornitina
ambiente Glucosa 1g
Motilidad- para formar una amina y
anaerobio (no es Reactivo de Ehrlich
indol- ornitina alcalinizar el medio
recomendado para o el de Kovács 1) Motilidad (+) si hay crecimiento fuera de
𝐿 − 𝑜𝑟𝑡𝑖𝑑𝑖𝑛𝑎 → 𝑝𝑢𝑡𝑟𝑒𝑐𝑖𝑛𝑎
prueba de indol) la línea de siembra
Siembra por 2) Catalasa (-) Medio acido: Fermentación
picadura de glucosa
3) Catalasa (+)
4) Indol (+)
Determina la capacidad
enzimática de un mo de Purpura de
descarboxilar o desaminar la 35ªC 24 – 48 hrs
Medio de cultivo bromocresol
arginina para alcalinizar el
líquido, sembrado L-arginina 5g
Arginina medio con ayuda de la enzima
por inoculo Glucosa 1g
arginina dihidrolasa
pesado
𝐴𝑟𝑔𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 → 𝑐𝑖𝑡𝑟𝑢𝑙𝑖𝑛𝑎 + 𝑁𝐻3 Ambiente anaerobio

Detecta si el mo puede Medio de cultivo

desaminar la fenilalanina por líquido. Sembrado
enzimas desaminasas. por la técnica de Cloruro férrico
Fenilalanina El ac. Pirúvico producido se ----
slam o lengüeta
detectará con el reactivo FeCl3 Incubar a 37ºC de
𝐹𝑒𝑛𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑖𝑛𝑎 → 𝐴𝑐. 𝑝𝑖𝑟𝑢𝑣𝑖𝑐𝑜 + 𝑁𝐻3
24-48 hrs

(+) (-)
1) Detección de ac. Pirúvico por el cloruro
férrico para formar un color verde
BQD_FITTA
Medio de cultivo Azul de
Permite evidenciar los mo que bromotimol
líquido, sembrado
son capaces de utilizar el
por inoculo
Malonato malonato de sodio como única Caldo malonato
pesado. Incubar a
fuente de C y el sulfato de
35ºC 24 hrs
amonio como única fuente de N A) Control
B) Malonato (-) Utiliza CHO generando
ácido
C) Malonato (+)
Condiciones Reactivo de Barrit
Permite identificar mo que aerobias Alfa-naftol 5%/ EtOH
VP fermenten la glucosa por la vía Tiempo de lectura KOH 40%
Reactivo de Coblentz
Voges butilenglicolica, identificando y de reacción: 10- --- Alfa-naftol 5%/ EtOH
Proskauer el metabolito acetoìna como 15 min 95%
intermediario Tiempo límite de KOH 40%
detección: 48 hrs
Permite detectar si la bacteria Rojo de metilo
Medio líquido,
es fermentadora de glucosa
sembrado por
por vía acido mixta,
MR inoculo pesado. Medio de Clark y
produciendo ácidos fuertes
Rojo de metilo Incubar a 35ºC Lubs
(ácido láctico, ac. acético y ac.
de18-24 hrs
fórmico) provocando un
descenso en el pH del medio (+) (-)

Se basa en la capacidad que Azul de

tiene el mo de utilizar al citrato bromotimol Medio de cultivo:
como fuente de C (producción 35º 24-48 hrs pH de vire 6.4-7 Citrato de Simmons
Citrato de ácidos) o las sales de Medio solido Fuente de C: Citrato
amonio como única fuente de Inocular por estría Fuente de N: sales
nitrógeno (alcalinizando el de amonio
medio)
1) Citrato (-) 2) Citrato (+)
Medio de Agar urea de Christensen
Christensen:
Se basa en la capacidad de un
Medio de cultivo Rojo fenol Agar urea de
mo para hidrolizar la urea por
sólido. inoculación Christensen (más
Ureasa acción de la enzima ureasa
por estría sensible) o Caldo de
𝑈𝑟𝑒𝑎 → 2𝑁𝐻3 + 𝐶𝑂2
Caldo de Stuart: Stuart
Medio de cultivo (-) (+) (+) lenta
líquido, sembrado Caldo de Stuart
 por inoculo
BQD_FITTA pesado
A 37ª C-24 hrs
Se lee a las 24 hrs

(-) (+)
Incubar a 37ºC por
48 hrs
Muestra la capacidad de los mo
Refrigerar a 4ºC
para hidrolizar la gelatina a
por 10 min
Gelatinasa péptidos y aa, mediante la --- ---
Medio semisólido
acción de enzimas específicas
Sembrado por
denominadas gelatinasas
punción ¾ partes
del tubo

(+) (-)
Debido a que el reactivo de Griess solo
detecta la presencia de nitrito, las muestras
con un resultado (-) se evaluan con Zn
Reactivo de Griess:
(reductor) para detectar si hay precencia de
Medio de cultivo Sol. A: Acido
Determina la capacidad que nitritos.
líquido, sembrado sulfanilico 0.8%
tienen los mo de reducir el Reactivo de Griess + Zn
Nitratos por inoculo --- Sol. B: Alfa-
nitrato a nitritos o en N2 por la
pesado por 35ºC naftilamina 0.5%
enzima nitrato reductasa
por 24 hrs Zn

(-) (+)
Si se observa color, significa que el Zn
redujo los nitratos presentes y se torno a
rosa por el reactivo de Griess
Si no hay cambio de color significa que la
bacteria redujo el nitrato a otros productos
como N2