Validación Dobesilato CA

UNIVERSIDAD DE CHILE
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas

Departamento de Química Farmacológica y Toxicología
VALIDACIÓN DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE LOS

MEDICAMENTOS DOXIUM® CÁPSULAS, LABOSALIC®
LOCIÓN Y B-LABOTEROL® CREMA MEDIANTE EL USO
ESPECTROFOTOMETRÍA UV Y CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
DE ALTA EFICIENCIA (HPLC)
Profesor Supervisor Monitor de Práctica

Dr. Q.F. Igor Lemus Dr. Q.F. Juan Pablo Isa P.
Departamento de Química Gerente Depto. Control
Farmacológica y toxicológica de Calidad Inst. Farmacéutico
Labomed S.A.
Unidad de Práctica Optativa para Optar al Título de Químico Farmacéutico
Melissa Andrea Madrid Galgani
Santiago de Chile
Chile 2006
Resumen
La validación de la metodología de análisis se define como: “el proceso por el cual se establece
mediante estudios de laboratorio, que las características de desempeño del método analítico
cumplen con los requerimientos para la aplicación analítica propuesta”, de ahí la importancia
que tiene para un laboratorio realizar estudios de validación. Las validaciones se pueden agrupar
según un enfoque experimental en validación prospectiva y concurrente, y según el análisis de
datos históricos en validación retrospectiva y revalidación periódica y después de cambios. La
validación realizada en este trabajo es según el enfoque experimental una validación
Concurrente, que es la que se realiza durante la producción normal de un lote.
En esta práctica en el Instituto Laboratorio Farmacéutico Labomed para optar al titulo de
Químico Farmacéutico se realizaron la validación Concurrente de la metodología analítica de
cuatro productos farmacéuticos: Doxium® cápsulas por Espectrofotometría, B- Laboterol®
crema y Labosalic® loción por Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC).
Para realizar validación se comienza con la recopilación de la información sobre cada producto,
se revisa el registro sanitario, validación, revisión de los POS de validación y corrección de
ellos, características y funcionamiento del equipo a utilizar.
Luego del desarrollo experimental de los parámetros analíticos se evalúan los resultados
obtenidos y se plantean discusiones acerca de este trabajo realizado.
La conclusión final es que las técnicas analíticas de los productos farmacéuticos aquí validados
son: lineales, exactas, precisas, sensibles, selectivas y robustas.
El trabajo de práctica prolongada en el laboratorio farmacéutico tuvo una duración de seis
meses, en los cuales además de realizar el trabajo de validación de la metodología analítica de
los productos mencionados anteriormente, se realizó el análisis diario del agua desmineralizada
que se extraía de un pozo de propiedad del laboratorio para luego tratarla y utilizarla tanto en los
ensayos analíticos como en la producción de sus productos. De este análisis se emitía el Boletín
de Análisis del Agua Desmineralizada en el cual se informaba el parámetro, el método, la
especificación y los resultados obtenidos. Los parámetros evaluados diariamente eran los
estipulados por la USP 24, dentro de los cuales están pH, cloruros, sulfatos, límites de amonio,
calcio, dióxido de carbono, sustancias oxidables y sólidos totales.
2
También se realizaron pruebas pilotos para comprimidos de nifedipino de 10 y 20 mg Las
pruebas pilotos consistieron en realizar el pesaje de las materias primas de la nueva formulación,
continuando con el mezclado de ellas y llevar la mezcla hasta la comprimidora rotatoria y así
obtener los comprimidos de nifedipino, los cuales posteriormente se pesaron para ver si estaban
dentro de su rango de peso y se almacenaron para su posterior análisis.
Además se realizó la prueba de limpieza a la comprimidora después de su limpieza habitual,
analizando el agua de limpieza por espectrofometría UV la cual debe ser menor en 10 ppm en
partículas.
3
Índice
Resumen 2
Antecedentes 9
1. Introducción 10
2. Objetivos 12
2.1 Generales 12
2.2 Específico 12
3. Metodología 14
3.1 Definición de la Metodología 14
3. 2 Definir el Equipo y Materiales a Utilizar 14
3. 3 Elaboración de Procedimientos operativo Estándar 14
3.4 Verificación del Funcionamiento de los Equipos 14
3.5 Trazabilidad de los Estándares 15
3.6 Análisis de los Parámetros Analíticos 15
3.7 Evaluación de resultados en Forma Estadística 17
3. 8 Discusión 17
3. 9 Conclusión 17
3.10 Equipo, Materiales y Reactivos a utilizar 18
4. Resultados 20
4.1 Definir la metodología a validar 20
4.2 Metodología de Análisis 21
4.2.1 Preparación del estándar 22
4.2.2 Definir el Equipo y los Materiales a Utilizar 22
4.2.3 Revisión de los procedimientos Operativos Estándar 22
4.2.4 Verificación del Funcionamiento del equipo de HPLC 23
4
4.2.5 Trazabilidad del Estándar secundario 24
4.2.6 Análisis de los Parámetros Analíticos 24
4.3 Linealidad 24
4.4 Exactitud 29
4.5 Precisión 32
4.6 Límites 38
4.6.1 Dobesilato de Calcio 38
4.6.2 Clotrimazol 42
4.6.3 Betametasona dipropionato 44
4.6.4 Ácido Salicílico 47
4.7 Selectividad 50
4.8 Robustez 51
4.9 Evaluación de los Resultados en forma estadística 58
5. Discusión 61
6. Conclusiones 63
5
Índice de figuras
4.1 Gráfico de Concentración v/s Absorbancia, Dobesilato de calcio 26

4.2 Gráfico de Concentración v/s Gasto volumétrico, Clotrimazol 27
4.3 Gráfico de Concentración v/s Área Promedio, Betametasona dipropionato 28
4.4 Gráfico de concentración v/s Área Promedio, Ácido Salicílico 29
6
Índice de Tablas
4.1 Potencias obtenidas de estándares y muestras en sus respectivas trazabilidades 24

4.2 Absorbancia promedio obtenida a concentraciones de 80, 90, 100, 110 y 120% de estándar
de Dobesilato de calcio. 25
4.3 Gasto volumétrico promedio obtenido a concentraciones de 80, 90, 100, 110 y 120% de
estándar de Clotrimazol y Áreas promedio Betametasona dipropionato a iguales
concentraciones 26
4.4 Absorbancias promedio obtenidas a concentraciones de 80, 90, 100, 110 y 120% de estándar
de Ácido Salicílico 28
4.5 Porcentaje de recobro de las concentraciones. Comparación entre estándar de Dobesilato de
calcio y muestra de Doxium® cápsulas 30
4.6 Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre estándar de Clotrimazol y
muestra de B-Laboterol® crema 30
4.7 Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre estándar de Betametasona
dipropionato y muestra de B-Laboterol® crema 31
4.8 Porcentaje correspondiente a la comparación entre estándar de Ácido Salicílico y muestra de
Labosalic® solución 31
4.9 Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre estándar de Betametasona
dipropionato y muestra de Labosalic® loción 31
4.10 Precisión Dobesilato de calcio Estándar 33
4.11 Precisión Doxium® 33
4.12 Gasto volumétrico Concentración Clotrimazol Estándar 34
4.13 Gasto volumétrico de B-Laboterol® para Clotrimazol 34
4.14 Precisión Betametasona dipropionato Estándar 35
4.15 Precisión Betametasona dipropionato para B-Laboterol® crema 35
4.16 Precisión Ácido salicílico Estándar 36
4.17 Precisión Labosalic® para Ácido Salicílico 36
4.18 Precisión Betametasona dipropionato Estándar 37
4.19 Precisión Labosalic® para Betametasona dipropionato 37
7
4.20 Absorbancia promedio de Dobesilato de calcio 38
4.21 Desviaciones Estándar a 221 [nm] y 301 [nm] 39
4.22 Gasto Volumétrico de LSS promedio, Clotrimazol 42
4.23 Desviaciones Estándar, Clotrimazol 43
4.24 Absorbancias promedio obtenidas de las muestras de estándar para el parámetro de límites,
Betametasona dipropionato 44
4.25 Desviaciones estándar, Betametasona dipropionato 45
4.26 Absorbancias promedio obtenidas de las muestras de estándar para el parámetro de Límites,
Ácido Salicílico 47
4.27 Desviaciones estándar, Ácido Salicílico 48
4.28 Absorción presentada por los placebos a concentraciones de 80, 100 y 120%. 50
4.29 Resumen de la recuperación y % RSD obtenidas, Doxium® 53
4.30 Resumen de la recuperación y % RSD obtenidas, B- Laboterol® 55
4.31 Resumen de la recuperación y % RSD obtenidas, Labosalic® 57
4.32 Resultados finales de los parámetros propuestos para realizar la validación, Dobesilato de
Calcio 58
4.33 Resultados finales de los parámetros propuestos para realizar la validación, Encontrado
de Clotrimazol y Betametasona dipropionato, B- Laboterol® 59
4.34 Resultados finales de los parámetros propuestos para realizar la validación, Encontrado de
Ácido Salicílico y Betametasona dipropionato, Labosalic® 60
8
Antecedentes
Historia del Laboratorio
Laboratorio LABOMED, Instituto destinado a la producción y comercialización de
medicamentos, nace en 1947 en la calle Irarrázaval creado por la familia Lang con productos
vitamínicos, antiespasmódicos e antihipertensivos. Posteriormente, en los años 1953 se crea una
moderna planta para esa época en Carlos Fernández N ° 248, esta planta funcionó con un
crecimiento expansivo hasta los años 1970, para posteriormente en los años 1973, por razones de
situación política se ve en la obligación de vender sus productos a laboratorio PETRIZZIO de
propiedad de la familia Olcese, quienes siguieron comercializando los productos de LABOMED
debido a su valioso posicionamiento en el mercado chileno. Estos productos fueron fabricados
en las instalaciones del laboratorio PETRIZZIO ubicado en Marín N ° 388 y a pesar de la
precaria y escasa tecnología e instalaciones, se lograban obtener medicamentos de alta calidad.
Desde entonces prevaleció en la institución el espíritu de mejoramiento continuo en cuanto a sus
instalaciones y tecnología, lo cual significó ir creciendo en el mercado, llegando a ser líder en
algunas especialidades.
Es así como en 1994 se realizaron estudios para construir una entidad independiente, lo que fue
posible en 1995 con la materialización del proyecto y con la construcción de una nueva planta,
que cumpliera y superara todas las exigencias físicas y tecnológicas que conciernen a productos
farmacéuticos, adquiriendo equipos de excelente calidad.
En 1996 se inauguró la planta en Av. Eduardo Frei Montalva Km 21.5, en la cual se llevó a
cabo este trabajo de título. Dicha planta fue creada pensando en el crecimiento expansivo del
área de fabricación y de la excelencia en cuanto a calidad de medicamentos se refiere.
La planta cuenta con diversos departamentos, dentro de los cuales son tres los de mayor
importancia, estos son: Producción, Control de Calidad y Desarrollo, cada uno a cargo de un
Químico Farmacéutico.
Se encuentra integrado además por las áreas de: control de procesos, de baños y vestuario, de
casino, de tratamientos de agua, de computación, sala de reuniones y bodega de archivos.
9
Capítulo 1
Introducción
El ambiente farmacéutico se ha vuelto cada vez más exigente y competitivo, por esto la FDA
(Food and Drug Administration), ha dotado de un criterio unificador a las compañías, mediante
las “Buenas Prácticas de Manufactura” y “Buenas Prácticas de Laboratorio” (GMP´s y GLP´s
respectivamente), las cuales describen los métodos, equipos, instalaciones y controles
(incluyendo las pruebas analíticas) requeridas para producir alimentos, medicamentos e
instrumentos de uso médico. Es así como los métodos y procedimientos de los procesos se
optimizan para garantizar un producto de calidad satisfactoria, realizando procedimientos de
forma clara y documentada, de esta manera anular el concepto de error, disminuir la incidencia
de repetición de procesos, pérdidas o rechazos y así lograr una reducción de costos, llegar a la
mejora continua y competir en el mercado.
La industria farmacéutica ha convertido a las validaciones en un mecanismo de control
retroactivo de los medios de aseguramiento de la calidad. La OMS define la validación como:
“El establecimiento de una evidencia documentada, que suministra un alto grado de seguridad,
de que un proceso específico elaborará en forma permanente, un producto que cumple unas
características y especificaciones de calidad predeterminada”.
Ya que el término empleado en este rubro es Validación, la FDA ha definido muy claramente los
tipos de validación, clasificándose en prospectivas y concurrentes, las cuales son aplicables
según la política de la empresa. Por el hecho de tratarse de un medicamento, nos sugiere que las
personas que realicen las validaciones sean Químicos Farmacéuticos u otros profesionales, que
cuenten con los conocimientos y criterios aptos para dirimir los pasos a seguir.
Hoy en día se están creando mecanismos por los cuales se obliga a las industrias farmacéuticas
a realizar sus procedimientos en forma clara y documentada, dejando en el olvido el concepto de
error y equivocación en esta área.
Para generar procedimientos operativo estándares o fijos (POS), se debe conciliar por parte del
laboratorio farmacéutico una política determinada sobre este tema, y dirimir los textos de
bibliografía que se utilizarán para determinar los parámetros o pautas de comparación,
10
adoptando los criterios que se refieran a GLP y GMP en donde se describen los métodos,
equipos, controles, instalaciones y el personal más adecuados para el funcionamiento de una
industria farmacéutica.
La seguridad de cumplir con todas estas regulaciones (GLP y GMP), se obtiene a través de un
programa de Aseguramiento de la calidad bien diseñado.
Actualmente la institución que se encarga de esta regulación en Chile es el ISP la cual llega a
concluir que los procesos dentro de una industria farmacéutica deben estar estandarizados bajo el
concepto de validación.
Para lograr que los métodos de manufactura y las metodologías analíticas sean validados, es
necesario corroborar que sus procedimientos son los correctos, o bien, si están errados, es
necesario generar nuevos procedimientos. Para esto cada institución debe definir las políticas de
trabajo y educar en forma continua al personal involucrado en cada uno de los sucesivos
procesos por los cuales se formula un producto farmacéutico. El Químico farmacéutico, que
cuenta con una formación con criterios en el tema, puede desarrollar una planificación para
optimizar un determinado proceso asegurando una calidad garantizada, así como la educación
del personal. Se deben validar todos los procesos y calificar los equipos dentro de una industria
farmacéutica.
11
Capítulo 2
Objetivos
2.1. Generales
Desarrollar y validar una metodología analítica para cuantificar, Dobesilato de calcio en el

producto farmacéutico Doxium® cápsulas, Clotrimazol y Betametasona dipropionato en el
producto farmacéutico B- Laboterol® crema, Ácido Salicílico y Betametasona dipropionato en
el producto farmacéutico Labosalic® loción, como parte del programa de validación del Instituto
Farmacéutico Labomed.
Conocer la labor del Químico Farmacéutico tanto en el Departamento de Control de Calidad,
como en las distintas áreas de las que se constituye el laboratorio.
2.2 Específicos
Recopilar antecedentes bibliográficos que permitan obtener información, sobre los

productos farmacéuticos, la técnica de valoración y las características y funcionamientos
de los equipos a utilizar.
Verificar y/o desarrollar POS (Procedimientos operativos estándar) necesarios para el
proceso de Validación de la Metodología analítica.
Dominar el manejo y uso del espectrofotómetro UV-visible y HPLC y de otros equipos
empleados en el proceso de validación de la metodología analítica.
Verificar el cumplimiento de los parámetros analíticos en la metodología utilizada
actualmente.
Conocer y aplicar los parámetros analíticos para la Validación de la metodología
analítica establecidos en la USP, además aplicar otros parámetros analíticos que no son
considerados imprescindibles, pero se han incluido para otorgar una validación mas
completa.
12
Aplicar un análisis estadístico sobre los datos obtenidos.
Validar la metodología analítica en los productos Farmacéuticos de acuerdo al estudio
realizado.
13
Capítulo 3
Metodología
3.1. - Definición de la Metodología a Validar.
Se deben definir e identificar las necesidades y prioridades del laboratorio farmacéutico en su
programa de aseguramiento de la calidad. Para ello debe evaluarse el producto a validar, su
metodología analítica y la disponibilidad para poder realizar esta validación en cuanto a
materiales, equipos y bibliografía referente al producto.
3.2- Definir el Equipo y Materiales a Utilizar.

Se realizará la recopilación de antecedentes referentes a los equipos y materiales a utilizar,
asímismo, se estimaran los materiales (vidrio y reactivos) a usar en el proceso de Validación.
3.3-Elaborar Procedimientos Operativos Estándares.

Para dar solidez a un proceso de Validación, es necesario contar con todos los POS
correspondientes, de esta manera es posible llevar a cabo todas las acciones disminuyendo los
errores. Para el desarrollo de ésta, se tomará como referencia el “Manual de Aseguramiento de
la Calidad” del departamento de Control de Calidad, documento guía que define la política de
validación del laboratorio, el cual define como se debe realizar una validación analítica y los
parámetros analíticos que estipula la USP24.
El propósito de generar POS es facilitar el proceso de validación, debido a que, realizando estos
pasos, se definirán los parámetros analíticos a desarrollar, la forma de analizarlos, evaluarlos y
por ende sus rangos de aceptación.
3.4. - Verificación del Funcionamiento de los Equipos.

Para obtener resultados confiables se realizará por parte de la empresa que provee los equipos e
insumos del UV-visible y HPLC, una manutención de estos, determinado la precisión
instrumental y comprobando que se cumple con las especificaciones técnicas de funcionamiento
y calificación de los equipos.
14
3.5. - Trazabilidad de los Estándares Secundarios y Preparación de los
Reactivos.
Es muy importante conocer la potencia de las drogas con las cuales se trabajará, para esto se
debe definir el tipo de estándar que se utilizará y el método de estandarización.
Por otro lado es muy importante dentro de la Metodología Analítica, la preparación de las
soluciones o reactivos, ya que de ellas dependen las propiedades analíticas que se desean
evaluar.
3.6. - Análisis de Parámetros Analíticos.

Se evaluará la parte analítica de la validación. Se determinarán los parámetros analíticos
estipulados por la farmacopea Norteamericana USP 24 para la validación de una metodología
analítica de un producto farmacéutico, la que recomienda realizar los siguientes parámetros
analíticos (categoría I): Exactitud, Precisión, Especificidad y Linealidad. Cabe señalar que para
hacer más sólida esta validación se realizará Límite de Detección y Límite de Cuantificación y
Robustez. Todas las especificaciones de todos los medicamentos son desarrolladas según el POS
de validación del laboratorio el cual estipula los rangos de aceptación de los métodos a seguir:
3.6.1. - Linealidad:
Corresponde a la capacidad del método de entregar resultados linealmente proporcionales a la
concentración del analito en la muestra. Se evidencia una proporcionalidad directa entre la
concentración y la respuesta. Es aceptable si esta se encuentra dentro del rango de aceptación, el
cual establece que el valor del coeficiente de correlación debe ser mayor de 0,990 y RSD
(Desviación Estándar Relativa) menor a 2,0% entre lecturas de cada una de las muestras.
3.6.2. -Exactitud:
Es la diferencia entre el valor de la concentración considerado como verdadero y el valor
experimental, cuando se aplica el método varias veces a diferentes muestras. Matemáticamente
se expresa como porcentaje de recuperación.
La determinación de la exactitud se realizará a las concentraciones que se estipulan en el POS de
validación y según éste los datos obtenidos se analizan de acuerdo al criterio de aceptación
15
donde RSD debe ser menor al 2,0% y el porcentaje de recuperación no debe ser menor al 98% ni
mayor a 102%, para considerar el método como exacto.
3.6.3. -Precisión:
Es el grado de concordancia entre resultados individuales, cuando el método de análisis se aplica
repetidamente a diferentes muestras. La precisión se puede catalogar de la siguiente manera:
Reproducibilidad: medida de la precisión de los resultados de un método efectuado sobre la
misma muestra, pero en condiciones diferentes. Precisión intermedia: Se refiere al uso de los
procedimientos analíticos a diferentes días, es decir variables de laboratorio, tales como cambio
de equipos, analistas, etc. Repetibilidad: medida de la precisión de un método efectuado en
iguales condiciones; igual muestra, igual analista, iguales equipos y reactivos.
3.6.4. -Especificidad o Selectividad:

Es un atributo o propiedad del método por el cual la respuesta obtenida corresponde
exclusivamente al compuesto que se desea detectar y cuantificar, sin ninguna interferencia por
parte de los demás componentes de la matriz.
3.6.5. -Límites: Es una propiedad del método para presentar un gran cambio en la respuesta
cuando se produce un pequeño cambio en la concentración. Para evaluar los límites se utiliza:
3.6.5.1. -Límite de Detección o Cantidad mínima Detectable: Hace referencia a la mínima

concentración del compuesto en estudio que es posible detectar con certeza.
3.6.5.2. -Límite de Cuantificación o Cantidad mínima cuantificable: Es la concentración
mas baja de un compuesto presente en una muestra, que puede ser cuantificada con un grado de
confianza previamente establecido (exactitud y precisión).
3.6.6. -Robustez:
Es el grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos para las mismas muestras, cuando se
introducen algunas variaciones al método y es desarrollado por diferentes experimentadores.
16
3.7. -Evaluación de los Resultados.
Al concluir la parte analítica de la validación, se procederá a evaluar los resultados obtenidos y
determinar a través del análisis de éstos, si cada parámetro analítico es aprobado o rechazado de
acuerdo a los parámetros preestablecidos, para posteriormente determinar si la metodología
analítica es validada.
3.8. -Discusión.
Se realizarán las discusiones con respecto a la realización de este trabajo de práctica.
3.9- Conclusión.
En este punto se generarán las discusiones con respecto a la realización de este trabajo de
práctica.
17
3.10 Equipo, Materiales y Reactivos a Utilizar
Equipos:
Los equipos utilizados durante la validación son los siguientes:

Balanza analítica modelo Mettler AB204, serie: 1115040819
Baño Ultrasonido Branson modelo 8210
Vortex Heidolph Promax 2020, serial 49500614
Espectrofotómetro UV-visible, modelo Shimadzu UV-1601 seria A 1075
Baño Termorregulado, modelo W 350 Shutzart 40050-IP 20, marca Memmert, representante
PROMEX.
HPLC-1 Merck- Hitachi LaChrom; Horno L-7350; Bomba L-7100; detector UV/VIS L-
7420; Interfase D-7000; Autosampler L-7200.
HPLC- 2 Merck- Hitachi LaChrom; Horno L-7350; Bomba L- 7100; Detector UV/VIS L -
7420.
Materiales:
Matraces Volumétricos de 10- 25- 50- 100- 200- 250- 1000 mL.
Pipetas volumétricas de 1- 2- 4- 5- 10- 25 mL.
Vasos precipitados de 25- 50- 100- 200- 500- 1000 mL.
Probetas de 100- 250- 500-1000 mL.
Microbureta
Jeringas y viales
Filter paper circles Milipore de 0,22 micras.
Plastic filter holder, modelo fp 0.25/l.
Columna LiChroCART® 100RP- 18 (5µ)
Frascos ámbar chicos
Embudos1.
1
Todo el material de vidrio corresponde a clase A, excepto el frasco ámbar utilizado y los embudos.
18
Reactivos:
1. Agua desmineralizada (utilizado como solvente en la preparación de las muestras)

2. Dobesilato de Calcio Nº Análisis MP-1159.
3. Estearato de Magnesio MP-1095( utilizada en la preparación del parámetro selectividad)
4. Almidón de Maíz MP-857 ( utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
5. Etanol (utilizado como solvente en la preparación de las muestras y en fase móvil)
6. Acetonitrilo (utilizado como solvente en la preparación de las muestras y en fase móvil)
7. Ácido Salicílico Nº Análisis MP-188.
8. Betametasona dipropionato Nº Análisis MP-970.
9. Glicerina (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
10. Sodio edetato (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
11. Sodio hidróxido lenteja (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
12. Fosfato monosódico anhidro (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
13. Clotrimazol Nº Análisis MP-1202
14. Tween 80 (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
15. Crodolan LA (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
16. Vaselina Líquida (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
17. Vaselina Sólida (utilizado en la preparación del parámetro selectividad)
18. Span 80 (utilizado en la preparación del parámetro selectividad).
19. Acetona; Merck (utilizada en la preparación de las muestras y para el parámetro de
Selectividad)
19
Capítulo 4
Resultados
4.1 Definir la metodología a validar
Para definir la metodología a validar es necesario conocer los tipos de validaciones que se
pueden realizar, y así identificar cual es la más conveniente para las condiciones del laboratorio
y del proceso. Existen 4 tipos de validaciones1, las cuales son:
Prospectiva
Concurrente
Retrospectiva
Revalidaciones
En este caso, luego de identificar las necesidades del laboratorio, el trabajo a realizar será una
validación prospectiva de una metodología analítica. Cuando hablamos de validación
prospectiva nos referimos a un tipo de validación que es aplicable a procesos nuevos, o a
aquellos a los que se le destinan recursos adicionales para obtener la información, son
programados en el tiempo y tienen una planificación previa. Generalmente se realizan en etapas
de desarrollo de productos o en metodologías analíticas.
1
Es importante tener en cuenta que solo dos de ellas son aceptadas por la FDA (Prospectiva y
Concurrente)
20
Se definió validar el método analítico de cuantificación de Dobesilato de calcio en el producto
Farmacéutico Doxium cápsulas mediante espectrofotometría UV- visible, de Ácido Salicílico
y Betametasona dipropionato en el producto Farmacéutico Labosalic loción mediante HPLC,
Clotrimazol mediante titulación con Lauril Sulfato de sodio (LSS) y Betametasona dipropionato
en el producto Farmacéutico B-Laboterol crema, mediante HPLC, las cuales deben ser capaz
de determinar los principios activos antes mencionados.
4.2. Metodología de Análisis
La metodología analítica corresponde a la descripción de cómo se realiza la cuantificación del

principio activo en el producto intermedio/terminado.
Las condiciones espectrofotométricas para la cuantificación de Dobesilato de calcio, son las
siguientes:
Longitud de onda: 211,5 nm. y 301,5 nm.
Las condiciones cromatográficas para la cuantificación de Betametasona dipropionato, Ácido
Salicílico y Cloruro de Benzoxonio, son las siguientes:
Columna: Lichrosfer RP-18, para todas las validaciones.
Fase Móvil: Acetonitrilo: Metanol: Agua Desmineralizada. ( En la cuantificación de Ácido
Salicílico y Betametasona dipropionato)
Longitud de onda: 254 nm. Para Ácido Salicílico y Betametasona dipropionato.
21
4.2.1 Preparación del estándar.
Según las especificaciones que aparecen en la hoja de especificación del producto

intermedio/terminado se describe la cantidad a pesar y las diluciones del estándar y de la
muestra, para llegar a las siguientes concentraciones aproximadamente:
Dobesilato de calcio: 0,0200 mg/mL
Betametasona dipropionato: 0,035 mg/mL
Ácido Salicílico: 0,02 mg/mL
Clotrimazol: 0,2 mg/mL
(Hoja de especificaciones de producto intermedio/terminado es un documento confidencial del

Laboratorio)
4.2.2 Definir el Equipo y los Materiales a Utilizar.
Los equipos utilizados para la cuantificación de estándares y productos fueron el

Espectrofotómetro y el HPLC. Ambos instrumentos corresponden al método descrito en el
registro sanitario de los productos y el que es actualmente utilizado en el Laboratorio.
4.2.3 Revisar los Procedimientos Operativos Estándar para el proceso de Validación.
En los desarrollos de estas validaciones se utilizaron los POS dispuestos por el “Manual de
Procedimientos” del departamento de control de calidad y se buscó con esto cumplir con los
parámetros analíticos estipulados por la USP 24.
Antes de comenzar con la validación se realizó una revisión de cada uno de los POS a utilizar, se
actualizaron y se modificaron complementándolos con varios ítems.
22
Los POS a utilizar en este proceso de validación son los siguientes:
Validación de la metodología analítica por Espectrofotometría (CC- VAL- 08)

Calificación del equipo de Espectrofotometría (CC- VAL- 09)
Validación de la metodología analítica por HPLC (CC- VAL- 11)
Calificación de equipo de HPLC automático (CC- VAL-12)
Registro de datos en el libro de validación (CC- VAL- 03)
Trazabilidad del estándar secundario (CC -VAL-21)
Exactitud (CC -VAL- 14)
Linealidad (CC -VAL- 15)
Precisión (CC -VAL-16)
Robustez (CC -VAL -17)
Selectividad (CC -VAL- 18)
Sensibilidad, límite de detección (CC -VAL - 19)
Sensibilidad, límite de cuantificación (CC -VAL -20)
Instructivo de uso de HPLC (CC -INS -27)
Uso de balanzas (CC -INS -28)
4.2.4 Verificación del Funcionamiento del Equipo HPLC.
Se comprobó que el equipo cumplía con la mantención al día, la cual es realizada por la empresa
que provee de equipos e insumos al laboratorio Labomed (MERCK), la cual entrega un informe
de validez anual asegurando que el equipo se encuentra operando en óptimas condiciones. Es así
como se entrega un certificado de la calificación por parte de los técnicos autorizados por dicha
empresa.
23
4.2.5 Trazabilidad del Estándar Secundario.
La potencia del estándar de cada uno de las drogas a validar fue trazada contra un estándar
primario USP, según las técnicas internas del laboratorio farmacéutico Labomed.
Las mediciones fueron realizadas en quintuplicado para cada una de las materias primas a trazar
y con una lectura doble de cada muestra de modo de establecer la desviación estándar entra las
lecturas.
Cuadro 4.1: Potencias obtenidas de estándares y muestras en sus respectivas trazabilidades.

Potencia del Estándar Potencia de la Muestra
Droga
% %
Dobesilato de Calcio 100,17 99,3
Betametasona dipropionato 97,29 102,4
Clotrimazol 99,08 98,95
Ácido Salicílico 99,82 101
4.2.6 Análisis de los Parámetros Analíticos.
La totalidad de los parámetros analíticos se realizaron basándose en los POS elaborados en la

fase experimental del proceso de validación.
4.3 Linealidad
El parámetro de linealidad se realizó basándose en el POS de validación denominado CC-VAL-

05 del departamento de control de calidad del laboratorio. Este análisis consistió en la
elaboración de una muestra de estándar de acuerdo a lo descrito en la hoja de especificación de
producto intermedio/terminado, cada muestra fue realizada en triplicado y con inyecciones doble
de cada una de las muestras. Las concentraciones preparadas fueron de un 80, 90, 100, 110 y
120% de lo declarado en la metodología analítica. Límites de aceptación: r >0.99 y RSD ≤ 2,0 %
entre inyecciones, donde r corresponde al coeficiente de correlación lineal y el RSD a la
desviación estándar relativa.
24
Las siguientes tablas son el resumen de los resultados, la totalidad de las mediciones del
parámetro de Linealidad se encuentran en tablas de resultados para cada uno de los principios
activos.
Cuadro 4.2: Absorbancia promedio obtenida a concentraciones de 80, 90, 100, 110 y 120 % de
estándar de Dobesilato de calcio.
Concentración % RSD % RSD
Promedio Absorbancias Absorbancias entre entre
Dobesilato (221 nm) (301 nm) lecturas lecturas
[mg/mL] (221 nm) (301 nm)
2,0042E-2 (80 %) 0.5192 0.3577 0,17 0
2,2530E-2 (90 %) 0.5838 0,4014 0,12 0,19
2,5058E-2 (100 %) 0.6481 0,4456 0,09 0,04
2,7546E-2 (110 %) 0.7149 0,4936 0,11 0,4
3,0067E-2 (120 %) 0.7802 0.5379 0,3 0,23
Luego con la ecuación de la recta, se calcula la regresión lineal y se obtienen los siguientes
resultados:
у=bχ+a (4.1)
Donde: у: Área
χ: Concentración
a: Intercepto
b: Pendiente
Luego, se tiene. A 221 nm: A 301 nm:

a = -0,00369 a = -0,00547
b = 0,26065 b = 0,18074
r = 0,99997 r = 0,9998
2
r = 0,9999 r2 = 0,9997
Desviación Estándar (D.S.) = 0,39616 D.S.= 0,39617
Coeficiente variación (CV) = 0,259% CV = 0,1785%
25
En la figura 4.1 se muestra el gráfico de Concentración versus Absorbancia promedio obtenidas
a cada una de las concentraciones antes descritas de Dobesilato de calcio en el parámetro
linealidad.
0,9
0,8
0,7
Absorbancias
221 nm
0,6
0,5
301 nm
0,4
0,3
0,2
0,018 0,02 0,022 0,024 0,026 0,028 0,03 0,032
Concentraciones Dobesilato de calcio[mg/mL]
Figura 4.1: Gráfico de Concentración v/s Absorbancia, Dobesilato de calcio.
Cuadro 4.3: Gasto volumétrico promedio obtenido a concentraciones de 80, 90, 100, 110 y 120
% de estándar de Clotrimazol y Áreas promedio Betametasona dipropionato a iguales
concentraciones.
Concentración Gasto % RSD Concentración %RSD

Absorbancia
Clotrimazol Volumétrico entre Betametasona entre
Betametasona
[mg/mL] LSS[mL] Lecturas [mg/mL] Lecturas
16,856 (80%) 12,5 0 0,02724 (80%) 13774116 0,23

18,9491 (90%) 13,75 0,5142 0,03067 (90%) 15100642 0,48
21,0545(100%) 15,4 0 0,03427 (100%) 16420257 0,75
23,1847(110%) 16,7 0 0,03772 (110%) 18264894 0,04
25,2654(120%) 18,15 0,3895 0,04091 (120%) 19950586 0,22
26
Utilizando la ecuación 4.1, se calcula la regresión lineal y se obtienen los siguientes resultados:
Clotrimazol Betametasona dipropionato

a = 1,04513 a = 1233392
b = 0,6768 b = 4525934
r = 0,9992 r = 0,9962
2
r = 0,9985 r2 = 0,9944
Desviación Estándar (D.S.) = 3,329 D.S.= 0,54155
Coeficiente variación (CV) = 0,7264% CV = 1,6702%
En la figura 4.2 se muestra el gráfico de Concentración versus Gasto Volumétrico de LSS

promedio obtenida a cada una de las concentraciones antes descritas de Clotrimazol, en el
parámetro Linealidad.
20
Gasto Volumétrico de LSS[mL]
18
16
14
12
10
8
15 17 19 21 23 25 27
Concentraciones Clotrimazol [mg/mL]
Figura 4.2: Gráfico de concentración v/s Gasto volumétrico, Clotrimazol.
En la figura 4.3 se muestra el gráfico de Concentración versus absorbancia promedio obtenida a

cada una de las concentraciones antes descritas de Betametasona dipropionato, en el parámetro
linealidad.
27
21
Millones
20
19
18
17
Absorbancias
16
15
14
13
12
2,5 3 3,5 4
Concentraciones Betametasona [mg/mL]
Figura 4.3: Gráfico de Concentración versus Absorbancia Promedio, Betametasona

dipropionato.
Cuadro 4.4: Absorbancias promedio obtenida a concentraciones de 80, 90, 100, 110 y 120 % de
estándar de Ácido Salicílico.
Ácido salicílico Absorbancia

Concentración [mg/mL] Ácido Salicílico
0,1652 (80 %) 1881279
0,2141 (90 %) 2497119
0,2620 (100%) 3064559
0,3149 (110%) 3751734
0,3638 (120%) 4417227
De manera análoga con lo que se obtuvieron los resultados anteriores, utilizando la ecuación 5.1,
se obtienen los siguientes resultados para el Ácido Salicílico.
Ácido Salicílico
a = -232084,96
b = 12706320,33
r = 0,9997
r2 = 0,9988
Desviación Estándar (D.S.) = 0,07875
Coeficiente variación (CV) = 1,1827 %
28
En la figura 4.4 se muestra el gráfico de Concentración versus Absorbancia promedio obtenida a
cada una de las concentraciones antes descritas de Ácido Salicílico, en el parámetro linealidad.
5
Millones
4,5
3,5
Absorbancias
2,5
1,5
0 1 2 3 4 5 6
Concentraciones Ácido Salicílico [mg/mL]
Figura 4.4: Gráfico de concentraciones v/s Absorbancia promedio, Ácido Salicílico
4.4 Exactitud
El parámetro analítico de exactitud se realizó basándose en el POS de validación CC-VAL del

departamento de control de calidad del laboratorio. Este consiste en la elaboración de una
muestra de estándar y de producto de acuerdo a lo descrito en la hoja de especificación de
producto intermedio/terminado, cada una fue realizada en duplicado y con doble lectura de cada
una de las muestras. Las concentraciones preparadas fueron de un 80, 100 y 120%. Límites de
aceptación: recobro 98,0 – 102,0% y el RSD entre cada inyección no deben ser superiores a
2,0%.
En el cuadro 4.5 se muestra el porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones

mencionadas en el parámetro Exactitud, correspondiente a la comparación entre estándar de
Dobesilato de calcio y muestra de Doxium® cápsulas.
29
Cuadro 4.5: Porcentaje de recobro de las concentraciones. Comparación entre estándar de
Dobesilato de calcio y muestra de Doxium® cápsulas.
% RSD % RSD % RSD % RSD
Conc. Conc.
entre entre entre entre
Dobesilato de Dobesilato Recobro Recobro
lecturas lecturas lecturas lecturas
calcio de calcio a 221nm a 301nm
a 221 a 221 a 301 a 301
Estándar Muestra (%) (%)
nm nm nm nm
[mg/mL] [mg/mL]
estándar muestra estándar muestra
0,02004 (80%) 0,01987 100,67 0,78 0,4 99,72 0,52 0,47
0,02505 (100%) 0,02483 98,94 0,23 0,12 98,35 0,26 0,17
0,03006 (120%) 0,02979 99,85 0,12 0,09 99,85 0,13 0,04
El cuadro 4.6, corresponde al porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones mencionadas

en el parámetro Exactitud, correspondiente a la comparación entre estándar de Clotrimazol y
muestra de B- Laboterol® crema.
Cuadro 4.6: Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre el estándar de

Clotrimazol y muestra de B-Laboterol® crema.
Concentración Concentración % RSD entre % RSD entre

Clotrimazol Clotrimazol Recobro (%) lecturas lecturas a
Estándar [mg/mL] Muestra [mg/mL] estándar muestra
16,86 (80%) 15,87 100,4 0,285 1,21

21,05 (100%) 19,84 100,1 0 0,493
25,29 (120%) 23,76 100,1 0,391 0,405

en el parámetro Exactitud, correspondiente a la comparación entre estándar de Betametasona
dipropionato y muestra de B-Laboterol® crema.
30
Cuadro 4.7: Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre estándar de
Betametasona dipropionato y muestra de B-Laboterol® crema.
Concentración Concentración % RSD entre
% RSD entre
Betametasona Betametasona Recobro lecturas a
lecturas
dipropinato Estándar Dipropionato Muestra (%) 221 nm
estándar
[mg/mL] [mg/mL] muestra
0,0273 (80%) 0,0287 100,1 0,7 0,29
0,0341 (100%) 0,0358 100,1 1,02 0,77
0,0408 (120%) 0,043 100,0 0,19 0,14

en el parámetro Exactitud, correspondiente a la comparación entre estándar de Ácido Salicílico
y muestra de Labosalic® loción.
Cuadro 4.8: Porcentaje correspondiente a la comparación entre estándar de Ácido Salicílico y

muestra de Labosalic® loción.
% RSD entre
Concentración Ácido Concentración Ácido % RSD entre
Recobro lecturas a
Salicílico Estándar Salicílico Muestra lecturas
(%) 221 nm
[mg/mL] [mg/mL] estándar
muestra
0,1642 (80%) 0,1621 101,8 0,231 1,09
0,2016 (100%) 0,2035 100,4 0,391 0,16
0,2415 (120%) 0,2427 101,4 1,297 0,326

en el parámetro de Exactitud, correspondiente a la comparación entre estándar de Betametasona
dipropionato y muestra de Labosalic® loción.
Cuadro 4.9: Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre estándar de

Betametasona dipropionato y muestra de Labosalic® loción.
Concentración Concentración % RSD entre

% RSD entre
Betametasona Betametasona Recobro lecturas a
lecturas
dipropinato Estándar Dipropionato (%) 221 nm
estándar
[mg/mL] Muestra [mg/mL] muestra
0,1622 (80%) 0,1666 100,8 0,23 1,09
0,2016 (100%) 0,2127 100,4 0,39 0,16
0,2420 (120%) 0,2614 101,4 1,79 0,32
31
4.5 Precisión
El parámetro analítico de precisión se realizó basándose en el POS de validación denominado

CC- VAL- 06 del departamento de control de calidad del laboratorio. Este análisis consistió en la
elaboración de una muestra de estándar y de producto de acuerdo a lo descrito en la hoja de
especificaciones de producto intermedio/terminado, cada una fue realizada en quintuplicado y
con doble lectura de cada una de las muestras. La concentración preparada fue de un 100% de lo
declarado en la metodología analítica. Límite de aceptación: RSD < 2,0%.
Los cuadros 4.10 y 4.11, muestran tablas correspondientes a la absorbancia para

estándar de Dobesilato de calcio y para muestra de Doxium® comprimidos cargadas al
100%, en el parámetro Precisión.
Los cuadros 4.12 y 4.13, muestran tablas de gasto volumétrico para estándar de
Clotrimazol y muestra de B-Laboterol® crema para Clotrimazol respectivamente,
cargadas al 100%, en el parámetro Precisión.
Los cuadros 4.14 y 4.15, muestran tablas de absorbancia para estándar de Betametasona
dipropionato y muestra de B-Laboterol® crema para Betametasona dipropionato
respectivamente, cargadas al 100%, en el parámetro Precisión.
Los cuadros 4.16 y 4.17, muestran tablas de absorbancia tanto para el estándar de Ácido
Salicílico, como para muestra de Labosalic® loción, cargadas al 100%, en el parámetro
Precisión.
Los cuadros 4.18 y 4.19, muestran tablas de absorbancia tanto para el estándar de
Betametasona dipropionato, como para muestra de Labosalic® loción para
Betametasona dipropionato, cargadas al 100%, en el parámetro Precisión.
32
Concentración RSD % Promedio
RSD % RSD %
de Dobesilato Absorb. Absorb. promedio Absorb.
Absorb. Absorb. entre entre
de Calcio promedio promedio entre a 221 y
a 221 a 301 Lecturas Lecturas
Estándar a 221 a 301 Lecturas 301 [nm]
[ nm] [ nm] a 221 a 301
(100%) [nm] [nm] a 221 y Respecti-
[nm] [nm]
[mg/mL] 301 nm vamente
0,656 0,4508
0,02507 0,6577 0,4518 0,37 0,31
0,6595 0,4528
0,6555 0,4502 0,18 0,6575
0,02505 0,6557 0,4501 0,04 0,01
0,6559 0,4501
0,6575 0,4523
0,02506 0,6568 0,4515 0,15 0,23
0,6561 0,4508
0,6604 0,4521
0,02506 0,6598 0,4523 0,12 0,06
0,6592 0,4525 0,13 0,4514
0,6589 0,4517
0,02507 0,6577 0,4515 0,25 0,04
0,6565 0,4514
Cuadro 4.10: Precisión Dobesilato de calcio estándar.
Concentración RSD % Promedio

RSD % RSD %
de Doxium® Absorb. Absorb. promedio Absorb.
Absorb. Absorb. entre entre
para promedio promedio entre a 221 y
a 221 a 301 Lecturas Lecturas
Dobesilato de a 221 a 301 Lecturas 301 [nm]
[ nm] [ nm] a 221 a 301
Calcio (100%) [nm] [nm] a 221 y Respecti-
[nm] [nm]
[mg/mL] 301 nm vamente
0,6578 0,4525
0,02483 0,6583 0,4528 0,1 0,1
0,6588 0,4532
0,661 0,4532 0,06 0,662
0,02484 0,6615 0,4533 0,1 0,04
0,662 0,4535
0,6616 0,4531
0,02483 0,6616 0,4529 0,01 0,04
0,6617 0,4528
0,6605 0,4525
0,02484 0,6609 0,4525 0,09 0
0,6614 0,4525 0,04 0,4536
0,6676 0,4568
0,02484 0,6676 0,4566 0 0,04
0,6676 0,4565
Cuadro 4.11: Precisión Doxium® cápsulas.
33
Concentración Gastos % RSD
Gasto Gasto
Clotrimazol Promedios entre Gastos % RSD
Volumétrico de Promedio
Estándar (100%) entre de las Promedio
LSS [mL] [mL]
[mg/mL] Muestras Muestras
15
21,079 15,1 0,004
15,1
15,5
21,079 15,65 0,013
15,8
15,5
21,054 15,55 0,004 15,47 1,41
15,6
15,4
21,079 15,45 0,004
15,5
15,6
21,079 15,6 0
15,6
Cuadro 4.12: Precisión Clotrimazol estándar.
Concentración de Gastos % RSD

Gasto Gasto
B-Laboterol® para Promedios entre Gastos % RSD
Volumétrico de Promedio
Clotrimazol (100%) entre de las Promedio
LSS [mL] [mL]
[mg/mL] Muestras Muestras
19,869 14,5 14,5 0
19,881 14,5 14,5 0
19,873 14,6 14,6 0 14,58 0,894
19,831 14,8 14,8 0
19,832 14,5 14,5 0
Cuadro 4.13: Gasto volumétrico de concentraciones de B-Laboterol® crema para Clotrimazol.
34
Concentración % RSD
Absorbancias
Betametasona entre
promedios Absorbancias % RSD
dipropionato Absorbancias Lecturas
entre Muestras Promedio Promedio
Estándar (100%) iguales
iguales
[mg/mL] Muestras
820849
0,3410 823818,5 0,51
826788
816876
0,3405 818601 0,3
820326
821235
0,3410 831102 1,68 826067,2 0,674
840969
823215
0,3405 824735 0,26
826255
822763
0,3410 832079,5 1,58
841396
Cuadro 4.14: Precisión Betametasona dipropionato estándar.
Concentración B-
% RSD
Laboterol® para Absorbancias
entre
Betametasona promedios Absorbancias % RSD
Absorbancias Lecturas
dipropionato entre Muestras Promedio Promedio
iguales
(100%) iguales
Muestras
[mg/mL]
855182
0,3584 859737,5 0,749
864293
851219
0,3584 861994 1,767
872769
866103
0,3584 865448 0,107 857139,1 0,9507
864793
848182
0,3584 844671,5 0,587
841161
855635
0,3584 853844,5 0,296
852054
Cuadro 4.15: Precisión B-Laboterol® crema para Betametasona dipropionato.
35
Concentración de Absorbancias % RSD entre
Ácido Salicílico Promedios Lecturas Absorbancias % RSD
Absorbancias
Estándar (100%) entre Muestras Iguales Promedio Promedio
[mg/mL] Iguales Muestras
2494187
0,2066 2499816 0,318
2505445
2426818
0,2056 2427435 0,035
2428052
2434079
0,2066 2422151,5 0,696 2469626,3 1,68
2410224
2477522
0,2066 2489213,5 0,664
2500905
2535140
0,2066 2509515,5 1,44
2483891
Cuadro 4.16: Precisión de Ácido Salicílico estándar.
Concentración de
Absorbancias % RSD entre
Labosalic® para
promedios entre Lecturas Absorbancias % RSD
Ácido Salicílico Absorbancias
Muestras iguales Promedio Promedio
(100%)
iguales Muestras
[mg/mL]
2491127
0,2000 2486151,5 0,283
2481176
2451900
0,2000 2452589,5 0,039
2453279
2436977
0,2000 2444895 0,458 2462960,6 0,65
2452813
2471369
0,2000 2470863 0,028
2470357
2459605
0,2000 2460304 0,04
2461003
Cuadro 4.17: Precisión Labosalic® loción para Ácido Salicílico.
36
Concentración Absorbancias % RSD
Betametasona promedios entre
Absorbancias % RSD
dipropionato Absorbancias entre Lecturas
Promedio Promedio
Estándar (100%) Muestras iguales
[mg/mL] iguales Muestras
820849
0,03410 823818,5 0,51
826788
816876
0,03405 818601 0,3
820326
821235
0,03410 831102 1,68 826067,2 0,674
840969
823215
0,03405 824735 0,26
826255
822763
0,03410 832079,5 1,58
841396
Cuadro 4.18: Precisión de Betametasona dipropionato estándar.
Concentración
Labosalic® para Absorbancias % RSD entre
Betametasona promedios Lecturas Absorbancias % RSD
dipropionato Absorbancias
entre Muestras iguales Promedio Promedio
(100%) iguales Muestras
[mg/mL]
797329
0,3584 797038 0,051
796747
798348
0,3584 801619,5 0,577
804891
796561
0,3584 796502 0,01 798385,8 0,43
796443
802020
0,3584 794394 1,35
786768
798373
0,3584 802375,5 0,705
806378
Cuadro 4.19: Precisión Labosalic® loción para Betametasona dipropionato.
37
4.6 Límites
Los parámetros analíticos de límite de detección y límite de cuantificación se realizaron

basándose en los POS de validación denominada CC-VAL-09 y CC –VAL-10 respectivamente.
Este análisis consistió en la elaboración de una muestra de estándar de acuerdo a lo descrito en la
hoja de especificaciones de producto intermedio/terminado, cada una de las muestras fue
realizada en triplicado y con doble lectura. Las concentraciones preparadas fueron desde un 10 a
un 50% de lo declarado en la metodología analítica. Límite de aceptación: sin rango.
4.6.1 Dobesilato de calcio
El cuadro 4.20, corresponde a las absorbancia promedio de las concentraciones antes descritas
para el parámetro de Límites.
Cuadro 4.20: Absorbancia promedio Dobesilato de calcio
Absorbancia Absorbancia
Concentración
promedio a promedio a
[mg/mL]
221 [nm] 301 [nm]
0,2505E-2(10%) 0,0 0,0
0,5021E-2(20%) 0,1204 0,0
0,7507E-2 (30%) 0,1853 0,1226
1,0046E-2 (40%) 0,2513 0,1678
1,2519E-2 (50%) 0,3147 0,2116
Resultados.
A 221 nm: A 301 nm:
a = -0,010855 a = -0,00949
b = 0,006532 b = 0,0044231
r = 0,9999 r = 0,9999
2
r = 0,9999 r2 = 0,9999
Desviación Estándar (D.S.) = 0,396 D.S = 0,3231
38
De la regresión lineal anterior, se obtiene la siguiente ecuación:
Уbl = a + b ּ Χ (4.2)
El cuadro 4.21, muestra las desviaciones estándar de las concentraciones antes descritas.
Cuadro 4.21: Desviaciones estándar a 221 [nm] y 301[nm]

Concentración Desviación Estándar Desviación Estándar
(X) (Y) a 221 [nm] (Y) a 301 [nm]
0,2505 (10%) 1,0981 x 10-3 9,4118 x 10-4
-4
0,5021(20%) 2,7838 x 10 4,0104 x 10-4
0,7507 (30%) 6,6017 x 10-4 2,7537 x 10-4
1,0046 (40%) 2,3629 x 10-4 2,9297 x 10-4
-4
1,2519 (50%) 3,3291 x 10 2,3629 x 10-4
Luego, al reemplazar en la ecuación 4.2, se obtiene:
Уbl = - 0,010855 + 0,0065323 ּ Χ a 221 [nm]
Уbl = - 0,0094905 + 0,004423ּ Χ a 301 [nm]
Al igualar Χ a cero, entonces

Уbl = - 0,010855 a 221 [nm]
Уbl = - 0,0094905 a 301 [nm]
Resultados.
A 221 nm: A 301 nm:
-4
a = 9,092916x 10 a = 8,84731 x 10-4
b = -6,29117x 10-4 b = -1,57185 x10-5
r = 0.68451 r = 0,8203
2
r = 0.46856 r2 = 0,6728
Desviación Estándar (D.S.) = 0,396 D.S = 0,396
39
De esta regresión lineal se obtiene la siguiente ecuación:
Sbl = a +bּΧ (4.3)
Luego, remplazando en la ecuación 4.3 se obtiene:
Sbl = 9,92916 x 10-4 – 1,57247 x 10-4 ּ Χ a 221 [nm]
Sbl = 8,84731 x 10-4– 1,5178 x10-5 ּ Χ a 301 [nm]
Al igualar Χ a cero, entonces

Sbl = 9,92916 x 10-4 a 221 [nm]
Sbl = 8,84731 x 10-4 a 301 [nm]

El modelo matemático que se presenta a continuación, permite con estos datos, calcular los
límites antes descritos, ya sea tanto el límite de detección, como el límite de cuantificación.
LD = | Уbl | + 3 ּ | Sbl | (4.4)

blinealidad
Luego, a 221 [nm], reemplazando en la ecuación 4.4
LD = | - 0,010855| +3 ּ | 9,9291x 10-4| = 2,11 %

0,006531
Entonces como el 100% corresponde a una concentración de 0,025042 mg/mL, el 2,11 %
corresponde a 5,3041E-4 mg/mL. Esto quiere decir que la cantidad mínima a detectar de
Dobesilato de calcio en el equipo ultra violeta es de 5,3041E-4 mg/mL.
Análogamente, a 301 [nm], se tiene
LD = | -0,0094905| + 3 ּ | 8,847317x 10-4 | = 2,68 %

0,004526
40
Entonces como el 100% corresponde a una concentración de 0,025042 mg/mL, el 2,68 %
Dobesilato de calcio en el equipo ultra violeta es de 6,71E-4 mg/mL.
Luego
LC = | Уbl | + 10 ּ | Sbl | (4.5)
blinealidad
A 221 [nm], reemplazando en la ecuación 4.5, se tiene
LC = | - 0,010855| + 10 ּ | 9,9291x 10-4 | = 3,18 %

0,006531
Entonces como el 100% corresponde a una concentración de 0,002504 mg/mL, el 3,18%

corresponde a 7,969E-4 mg/mL. Por lo tanto esto quiere decir que la cantidad mínima que se
puede cuantificar de Dobesilato de calcio en el equipo ultra violeta es 7,969E-4 mg/mL.
Luego, a 301 [nm]
LC =| -0,0094905| + 10 ּ | 8,850646x 10-4 | = 4,05 %

0,004526
Entonces como el 100% corresponde a una concentración de 0,002504 mg/ mL, el 4,05%
corresponde a 1,0146E-3 mg/ mL. Por lo tanto, esto quiere decir que la cantidad mínima que se
puede cuantificar de Dobesilato de calcio en el equipo ultra violeta es de 1,0146E-3 mg/mL.
41
4.6.2 Clotrimazol
El cuadro 4.22 se muestra el gasto volumétrico de Lauril Sulfato de Sodio (LSS) promedio
obtenido a las concentraciones para el parámetro Límites.
Cuadro 4.22: Gasto volumétrico de LSS promedio, Clotrimazol

Concentración Gasto Promedio
mg/mL [mL]
2,107 (10%) 1,6 mL
4,214 (20%) 3,2 mL
6,321 (30%) 4,75 mL
8,428 (40%) 6,3 mL
10,535 (50%) 7,8 mL
De esta regresión lineal se obtiene la ecuación 4.2, luego se obtienen los siguientes
coeficientes.
Clotrimazol:
a = 0,08
b = 0,155
r = 0,9999
r2 = 0,9998
Desviación Estándar (D.S.)= 3,331
Reemplazando en al ecuación 4.2, se obtiene el modelo.
Уbl = 0,08 + 0,0,155ּ Χ
Ahora, al igualar el parámetro Χ a cero, se obtiene
Уbl = 0,08
El cuadro 4.23 muestra las desviaciones estándar correspondientes a las concentraciones

utilizadas en el cuadro 4.14
42
Cuadro 4.23 Desviación estándar, Clotrimazol
Concentración Desviación Estándar
[mg/mL]
2,107 (10%) 0
4,214 (20%) 0
6,321 (30%) 1,4886
8,428 (40%) 0
10,535 (50%) 0
De esta regresión lineal se obtiene la ecuación 4.3, luego reemplazando los valores del cuadro
4.22, se obtienen los siguientes coeficientes.
Clotrimazol
a = 0,29772
b=0
r=0
r2 = 0
Reemplazando en al ecuación 4.3, se obtiene el modelo
Sbl = 0,29772 + 0 ּ Χ
Ahora, al igualar el parámetro Χ a cero, se obtiene
Sbl = 0,29772
Con estos datos, podemos calcular entonces los límites antes descritos, ya sea tanto el límite de
detección, como el límite de cuantificación. Utilizando la ecuación 4.4, se tiene.
LD = | 0,08| + 3 ּ | 0,29772| = 7,35 %

0,1425

corresponde a 1,36301mg/mL.
43
Esto quiere decir que la cantidad mínima a detectar de Clotrimazol mediante titulación con
Lauril Sulfato de sodio 0,0040 N es de 1,36301 mg/mL. Utilizando la ecuación 4.5
LC = | 0,08| + 10 ּ | 0,29772 | = 21,45 %

0,1425

corresponde a 3,9758 mg/mL. Esto quiere decir que la cantidad mínima que se puede
cuantificar de Clotrimazol mediante Titulación con Lauril Sulfato de sodio 0,0040 N es de
3,9758 mg/mL
4.6.3 Betametasona dipropionato
En el cuadro 4.24, se muestran las áreas promedio obtenidas de las muestras de estándar de
concentraciones antes descritas para el parámetro de Límites.
Cuadro 4.24: Áreas promedio obtenidas de las muestras de estándar para el parámetro de
Límites, Betametasona dipropionato.
Absorbancia
Concentración
Promedio
[mg/mL]
3,405E-3 (10%) 94562,5
6,902E-3 (20%) 210732,5
1,04E-2 (30%) 256851,5
1,369E-2 (40%) 334836
1,702E-2 (50%) 400716
44
De esta regresión lineal se obtiene la ecuación 4.2, luego se obtienen los siguientes coeficientes.
Betametasona dipropionato
a = 38616,5
b = 7364,1
r = 0,9911
r2 = 0,9822
Reemplazando en la ecuación 4.2, se obtiene el modelo.
Уbl = 38616,5 + 7364,1ּ Χ

Ahora al igualar el parámetro Χ a cero, se obtiene
Уbl = 38616,5

utilizadas en el cuadro 4.24.
Cuadro 4.25: Desviaciones estándar, Betametasona dipropionato
Concentración Desviación Estándar

[mg/mL]
3,405E-3 (10%) 193,04015
6,902E-3 (20%) 2979,04087
1,04E-2 (30%) 1153,2913
1,369E-2 (40%) 1583,919
1,702E-2 (50%) 12897,6278
45
Betametasona dipropionato
a = -3442,83
b = 240,14
r = 0,7295
r2 = 0,5321
Sbl = -3442,96+ 240,14ּΧ
Con estos datos, podemos calcular entonces los límites antes descritos, ya sea tanto el límite de
detección, como el límite de cuantificación
LD = | 38616,5| + 3 ּ |-3431,83| = 0,31 %

155171,9
Entonces como el 100% corresponde a una concentración de 0,03405 mg/mL, 0,01%

Betametasona dipropionato en el equipo HPLC es de 1,0732E-4 mg/mL. Utilizando la ecuación
4.5.
LC = | 36802,6| + 10 ּ |-3442,83| = 0,45%

155171,9

puede cuantificar de Betametasona dipropionato en el equipo HPLC es de 1,563E-4 mg/mL.
46
4.6.4 Ácido Salicílico
El cuadro 4.26 muestra las áreas promedio obtenidas de las muestras de estándar de
concentraciones antes descritas para el parámetro de Límites.
Cuadro 4.26: Áreas obtenidas de las muestras de estándar para el parámetro de Límites, ácidos
Salicílico
Absorbancia
Concentraciones
Promedio
[mg/mL]
0,0199 (10%) 294602,25
0,0399 (20%) 585527,25
0,0598 (30%) 891032,75
0,0798 (40%) 1098889
0,0998 (50%) 1370247,5
De esta regresión lineal se obtiene la ecuación 4.2, luego se obtienen los siguientes coeficientes.
Ácido Salicílico
a = 48664,07
b = 26646,5
r = 0,9981
r2 = 0,9962
Уbl = 48664,07 + 26646,5 ּ X
Ahora, al igualar el parámetro Χ a cero, se obtiene.
Уbl = 48664,07
47
utilizadas en el cuadro 4.26.
Cuadro 4.27: Desviación estándar, Ácido Salicílico

Concentración
Desviación Estándar
[mg/mL]
0,0199 (10%) 5,0413X103
0,0399 (20%) 2,8274X104
0,0598 (30%) 7,1344X104
0,0798 (40%) 2,24916X104
0,0998 (50%) 1,07586X104
Ácido Salicílico
a = 25884,8
b = 56,55
r = 0,0342
r2 = 0,0016
Sbl = 25884,8 + 56,55 ּΧ
Ahora, al igualar el parámetro Χ a cero, se obtiene.
Sbl = 25884,8
Con estos datos, podemos calcular los límites antes descritos, ya sea tanto el límite de detección,
como el límite de cuantificación. Utilizando la ecuación 4.4, se tiene
LD = | 48664,07| + 3 ּ | 25884,8| = 1,99%

63269,11
48
corresponde a 4,025E-3 mg/mL. Esto quiere decir que la cantidad mínima a detectar de Ácido
Salicílico en el equipo HPLC es de 4,025E-3 mg/mL. Utilizando la ecuación 4.5
LC = | 48664,07| + 10 ּ | 25884,8| = 4,86%

63269,11

puede cuantificar de Ácido Salicílico en el equipo HPLC es de 9,799E-3 mg/mL.
49
4.7 Selectividad
El parámetro analítico de selectividad se realizó basándose en el POS de validación denominado

CC-VAL-08 del departamento de control de calidad del laboratorio. Este análisis consistió en la
elaboración de una muestra de producto blanco de acuerdo a lo descrito en la planilla de
fabricación, cada una fue realizada en triplicado y con doble lectura de cada una de las muestras.
Las concentraciones preparadas fueron de un 80 a un 120% de lo declarado en la metodología
analítica.
Cuadro 4.28: Corresponde a la absorción presentada por los placebos a concentraciones de

80,100 y 120%, en el parámetro Selectividad.
Concentración
de cada producto Preparación 1 Preparación 2 Preparación 3
Farmacéutico (%)
80 Sin absorción Sin absorción Sin absorción
No se obtiene ninguna absorción cuantificable de Dobesilato de calcio en el ultra violeta, por lo

que la metodología analítica utilizada se comporta de manera selectiva para este principio activo.
Los excipientes del producto farmacéutico B-Laboterol® no presentan gasto volumétrico en la
titulación con Lauril Sulfato de sodio, por lo tanto no interfieren con la identificación y
cuantificación de Clotrimazol, entonces la metodología analítica se comporta de manera
selectiva.
No se obtiene ninguna absorción cuantificable de Ácido Salicílico en el equipo de HPLC, por lo
que la metodología analítica utilizada se comporta de manera selectiva para este principio activo.
No se obtiene ninguna absorción cuantificable de Betametasona dipropionato en el equipo de
HPLC, por lo que la metodología analítica utilizada se comporta de manera selectiva para este
principio activo.
50
4.8 Robustez
El parámetro analítico de robustez se realizó basándose en el POS de validación denominado

CC-VAL-17 del departamento de control de calidad del laboratorio. Este análisis consistió en la
elaboración de una muestra de estándar y de producto de acuerdo a lo descrito en la hoja de
producto intermedio/terminado, cada una fue realizada en quintuplicado y con doble lectura de
cada una de las muestras. La concentración preparada fue de un 100% de lo declarado en la
metodología analítica y se sometieron a 4 tipos de condiciones modificadas.
Límites de aceptación: recobro entre 97,0% - 103,0% y RSD < 2,0%
Doxium® Cápsulas
Las condiciones modificadas de trabajo son las siguientes:
a) Cambio de material volumétrico
Condición Inicial:
Muestra: Pesar 693.8 mg un pool obtenido de 20 cápsulas de Doxium®, agregar en un matraz
de 250 mL, aforar con agua, filtrar, tomar una alícuota de 10 mL y llevar a un matraz
volumétrico de 1000 mL, aforar con agua.
Estándar: Pesar 625.0 mg de Dobesilato de calcio estándar, agregar en un matraz volumétrico de

250mL, aforar con agua, tomar una alícuota de 10 mL y llevar a un matraz de 1000 mL, aforar
agua.
Condición Modificada:
Muestra: Pesar 693.8mg o el equivalente al 100% de concentración de droga, de un pool
obtenido con 20 cápsulas del producto Doxium®, agregar en un matraz de 500 mL, aforar con
agua, filtrar, tomar una alícuota de 10 mL y llevar a un matraz volumétrico de 500mL, aforar con
agua.
51
Estándar: Pesar 625.0 mg de Dobesilato de calcio estándar, agregar en un matraz de 500 mL,
aforar con agua, tomar una alícuota de 10 mL y llevar a un matraz de 500 mL, aforar con agua.
b) Cambio del operador
Condición Inicial: Melissa Madrid Galgani

Condición Modificada: Johanna Rojas
c) Calentamiento de la muestra
Condición Inicial: medición de la muestra y estándar sin sometimiento a temperatura

Condición Modificada: Calentar la muestra y el estándar al 100 % de concentración en baño
maría a 45 º C por 30 minutos.
d) Estabilidad de la Solución
Condición Inicial: < 1 día (luego de preparada la muestra)

Condición Modificada: 5 días a temperatura ambiente
El cuadro 4.29 muestra un resumen de la recuperación obtenida de acuerdo a las modificaciones

a las que fueron sometidas las muestras:
52
Cuadro 4.29: Resumen de la recuperación y % RSD obtenidas de acuerdo a las modificaciones,
Doxium® cápsulas.
%RSD Encontrado
Tipo de Análisis Analítico: Recobro de las muestras:
en el Recobro
Estándar: 99,08% ( 221 nm) 0,16 ( 221nm)
a) Cambio en el material Estándar: 98,53% ( 301 nm) 0,15 ( 301nm)
volumétrico: Muestra: 98,53 % ( 221 nm) 0,03 ( 221nm)
Muestra: 97,59 % (301 nm) 0,06 ( 301nm)
Estándar: 99,58% ( 221 nm) 0,530 ( 221nm)
Estándar: 99,13% ( 301 nm) 0,369 ( 301nm)
b) Cambio operador:
Muestra: 99,97 % ( 221 nm) 0,492 ( 221nm)
Muestra: 99,04 % (301 nm) 0,837 ( 301nm)
Estándar: 99,58% ( 221 nm) 0,16 ( 221nm)
c) Calentamiento de las Estándar: 99,44% ( 301 nm) 0,03 ( 301nm)
muestras: Muestra: 100,6 % ( 221 nm) 0,26 ( 221nm)
Muestra: 100,28 % (301 nm) 0,15 ( 301nm)
Estándar: 102,02 % ( 221nm) 0,19 ( 221nm)
Estándar: 99,95% ( 301 nm) 0,14 ( 301nm)
d) Estabilidad:
Muestra: 102,31 % ( 221nm) 0,18 ( 221nm)
Muestra: 100,56 % (301 nm) 0,10 ( 301nm)
B- Laboterol® Crema
a) Cambio de material volumétrico para Betametasona Dipropionato
Condición Inicial:
Muestra para Betametasona dipropionato: pesar 2,8 gr. De muestra y llevarlo a un matraz
volumétrico de 10mL, completar con metanol.
Estándar para Betametasona dipropionato: Pesar 70 mg de estándar y llevar a un matraz
volumétrico de 100 mL con metanol. Tomar una alícuota de 5 mL y llevar a un matraz
volumétrico de 100mL y completar con metanol.
Las soluciones de estándar y muestra son medidas en el equipo HPLC Merck LaChrom
53
Muestra para Betametasona dipropionato: pesar 5,6 gr de producto y llevarlo a un matraz
volumétrico con aforo de 100 mL, completar con metanol.
Estándar para Betametasona dipropionato: Pesar 70 mg de Betametasona dipropionato estándar,
llevarlo a un matraz volumétrico de 200 mL aforado. Completar el aforo con metanol, tomar
una alícuota de 5 mL y llevar a un matraz volumétrico de 50 mL, aforar con metanol.
b) Cambio de Equipo para Betametasona dipropionato
Condición Inicial: Medición de muestras en equipo HPLC Merck LaChrom

Condición Modificada: Medición de muestras en equipo de HPLC Merck Hitachi modelo 65517
c) Calentamiento de la muestra para Betametasona dipropionato
Condición Inicial: Sin calor

Condición Modificada: Calentar la muestra y el estándar a baño maría a 50° C por 120 minutos
d) Estabilidad de la solución Betametasona dipropionato
Condición Inicial: < 1 día (luego de preparada la muestra.

Condición Modificada: 5 días a temperatura ambiente.
e) Cambio de Bureta para Clotrimazol
Condición Inicial: Realizar la titulación a estándar y muestra con bureta original.

Condición Modificada: Realizar titulación a estándar y muestra con bureta distinta a la original.
54
f) Cambio de analista para Clotrimazol
Condición Inicial: Melissa Madrid

Condición Modificada: Johanna Rojas
En el cuadro 4.30 se muestra un resumen de la recuperación obtenida de acuerdo a las

modificaciones las que fueron sometidas las muestras.
Cuadro 4.30: Resumen de la recuperación y % RSD obtenidas de acuerdo a las modificaciones,

B-Laboterol® crema.
%RSD Encontrado en el
Tipo de Análisis Analítico: Recobro de las muestras:
Recobro
Condición Modificada
a) Cambio en el material Condición Original: 101,18% Estándar: 0,054%
volumétrico: Condición Modificada: 99,31% Condición Modificada
Muestra: 0,05%
Condición Original: 98,72% Estándar: 0,128%
b) Cambio Equipo:
Condición Modificada: 101,76% Condición Modificada
Muestra: 0,145%
c) Calentamiento de las Estándar: 98,62% Estándar: 1,77%
muestras: Muestra: 101,60% Muestra: 0,307%
Estándar: 101,57% Estándar: 1,49%
d) Estabilidad:
Muestra: 102,42% Muestra: 0,80%
e) Cambio de bureta:
Muestra: 0,0%
f) Cambio de Analista:
Muestra: 0,472%
55
Labosalic® loción
a) Cambio de material volumétrico
Condición Inicial:
Las soluciones de estándar y muestra son medidas en el equipo HPLC Merck LaChrom
Muestra para Ácido Salicílico: Tomar una alícuota de 2 mL de producto y llevarlo a un matraz
volumétrico de 200mL, luego aforar con fase móvil.
Muestra para Betametasona: Tomar un alícuota de 10 mL de producto y llevarlo a un matraz
volumétrico con aforo de 200 mL, completar con metanol.
Estándar para Ácido salicílico: Pesar 40 mg de Ácido salicílico estándar llevarlo a un matraz
volumétrico de 200 mL y aforar con fase móvil.
Estándar para Betametasona dipropionato: Pesar 70 mg de Betametasona dipropionato estándar,
llevarlo a un matraz volumétrico de 100 mL aforado. Completar el aforo con metanol, tomar
una alícuota de 10 mL y llevar a un matraz volumétrico de 200 mL, aforar con metanol.
b) Cambio de Equipo
Condición Inicial: Medición de muestras en equipo HPLC Merck LaChrom

Condición Modificada: Medición de muestras en equipo de HPLC Merck Hitachi modelo 65517
c) Calentamiento de las muestras
Condición Inicial: Sin calor

Condición Modificada: Calentar la muestra y el estándar a baño maría a 50° C por 120 minutos
56
d) Estabilidad de la solución. (de ambos principios activos)
Condición Inicial: ≤ 1 día (luego de preparada la muestra).

Condición Modificada: 4 días a temperatura ambiente.
El cuadro 4.31 se muestra un resumen de la recuperación obtenida de acuerdo a las

modificaciones a las que fueron sometidas las muestras.
Cuadro 4.31: Resumen de la recuperación obtenida de acuerdo a las modificaciones, Labosalic®

loción.
Tipo de Análisis %RSD Encontrado en el
Recobro de las muestras:
Analítico: Recobro
a) Cambio en el material Condición Original: Condición Modificada

volumétrico para 98,05% Estándar: 1,82%
Betametasona Condición Modificada: Condición Modificada
dipropionato: 101,07% Muestra: 1,34%
Condición Original: Condición Modificada

b) Cambio Equipo para
98,86% Estándar: 0,580%
Betametasona
Condición Modificada: Condición Modificada
dipropionato:
100,64% Muestra: 0,833%

d) Estabilidad:

a) Cambio material
100,98% Estándar: 1,742%
volumétrico para Ácido
Condición Modificada: Condición Modificada
Salicílico:
101,36% Muestra: 1,851%

b) Cambio de equipo para 98,86% Estándar: 1,742%
Ácido Salicílico: Condición Modificada: Condición Modificada
100,64% Muestra: 1,675%

d) Estabilidad:
57
4.9 Evaluación de los resultados.
Los resultados en la validación de la metodología analítica de todos los medicamentos aquí

analizados, son comparados con los resultados establecidos por la USP 24, y así poder decidir si
cada parámetro cumple o no con lo esperado.
Los cuadros 4.32, 4.33 y 4.34 corresponden a los resultados finales de los distintos parámetros
propuestos para realizar la validación.
Encontrado de Encontrado de
Parámetro Esperado Dobesilato de Calcio Dobesilato de calcio a Comentario
a 221 [nm] 301 [nm]
r > 0,990 r = 0,9997 r = 0,9997 ambas longitudes
Linealidad
RSD ≤ 2,0% RSD = 0,158% RSD = 0,168% cumplen
RSD ≤ 2,0% RSD < 2,0% RSD < 2,0%
80%: 100,67 80%: 99,72 ambas longitudes
Exactitud Recobro:
100%: 98,94 100%: 98,35 cumplen
98-102%
120%: 99,85 120%: 99,85
RSD Estándar: 0,657% RSD Estándar: 0,451% ambas longitudes
Precisión RSD < 2,0%
RSD Muestra:0,662 % RSD Muestra: 0,453 % cumplen
Límites de
Sin rango 5,3041E-4 mg/mL 6,71E-4 mg/mL
Detección
Límites de
Sin rango 7,969E-4 mg/mL 1,0146E-3 mg/mL
Cuantificación
a) Estándar: 0,16% a)Estándar: 0,15% ambas longitudes

Muestra: 0,03% Muestra: 0,06% cumplen
b) Estándar: 0,53% b)Estándar: 0,369% ambas longitudes

Robustez RSD < 2,0%
C)Estándar: 0,16 % C) Estándar: 0,03% ambas longitudes
d)Estándar: 0,19% d) Estándar: 0,14% ambas longitudes

Cuadro 4.32: Resultados finales de los parámetros propuestos para realizar la validación,
Doxium® cápsulas.
58
Esperado de
Rango Encontrado de
Parámetro Betametasona Comentario
Esperado Clotrimazol
dipropionato
r > 0,990 r = 0,9992 r = 0,9972 Cumple
Linealidad
RSD≤ 2,0% RSD = 0,22 RSD = 0,34 Cumple
RSD≤ 2,0% RSD < 2,0 RSD < 2,0 Cumple
80%: 100,14 80%: 101,88 Cumple
Exactitud Recobro:
100%: 100,05 100%: 102,0 Cumple
98%-102%
120 %: 100,09 120 %: 101,67 Cumple
Estándar: 1,41% Estándar: 0,674% Cumple
Muestra: 0,089% Muestra: 0,9507% Cumple
Límite de
Sin rango LD: 4,025E-3 mg/mL LD: 1,0732E-4 mg/mL -
Detección
Límite de
Sin rango LC: 9,799E-3 mg/mL LC: 1,563E-4 mg/mL -
Cuantificación
a) Condición Modificada
– Cumple
Estándar: 0,054%
– Cumple
Muestra: 0,05%
b) Condición Modificada
– Cumple
Estándar: 0,128%
– Cumple
Muestra: 0,145%
– c)Estándar: 1,77% Cumple
– Muestra: 0,307% Cumple
Robustez: RSD< 2.0%
– d)Estándar: 1,49% Cumple
– Muestra: 0,80% Cumple
e) Cond. Modificada
– Cumple
Estándar: 0,0%
Cond. Modificada
– Cumple
Muestra: 0,0%
f) Cond. Modificada
– Cumple
Estándar: 0,46%
Cond. Modificada
– Cumple
Muestra: 0,472%
B-Laboterol® crema.
59
Encontrado de
Encontrado de Ácido
Parámetro Esperado Betametasona Comentario
Salicílico
dipropionato
r > 0,990 r = 0,9994 r = 0,9972 Cumple
Linealidad
RSD≤ 2,0% RSD = 0,22 RSD = 0,34 Cumple
RSD≤ 2,0% RSD < 2,0 RSD < 2,0 Cumple
Recobro : Recobro:
Exactitud Recobro: 80%: 101,83 80%: 100,98 Cumple
98%-102% 100%: 100,39 100%: 101,25 Cumple
120 %: 101,42 120 %: 100,88 Cumple
RSD Estándar: 1,684% RSD Estándar: 0,674% Cumple

RSD Muestra: 0,655% RSD Muestra: 0,432% Cumple
Límite de
Sin rango 1,36301 mg/mL 1,0732E-4 mg/mL -
Detección
Límite de
Sin rango 3,9758 mg/mL 1,563E-4 mg/mL -
Cuantificación
a) Condición Modificada a) Condición Modificada
Cumple
Condición Modificada Condición Modificada
Cumple
b) Condición Modificada b) Condición Modificada
Cumple
Estándar: 1,742% Estándar: 0,58 %
Condición Modificada Condición Modificada
Cumple
Robustez: RSD< 2.0%
c) Estándar: 0,575 % c) Estándar: 0,185% Cumple
d) Estándar: 0,585% d)Estándar: 0,085% Cumple
Labosalic® loción.
60
Capítulo 5
Discusión
1. La linealidad de los estándares analizados en esta validación, fue desarrollada a

concentraciones entre 80 y 120%, teniendo como resultado un coeficiente de correlación
lineal mayor a 0,997, cumpliendo con el criterio de la USP 24 es de un r mayor a 0,9900.
Este resultado nos indica que a medida que aumenta la concentración, aumenta
proporcionalmente la absorbancia del principio activo, por lo que hay una relación lineal
entre la absorbancia y la concentración.
2. Es importante explicar que la manera de calcular el porcentaje de recobro, no es un
simple cálculo de proporcionalidad, ya que, se toma en cuenta para estos efectos la
potencia del estándar y de la muestra, las cuales son distintas.
3. Una vez conocidas las trazabilidades y las potencias de los estándares se realizan las
correcciones y se obtiene las concentraciones reales de principio activo, tanto el
estándar, como en la muestra y se puede calcular el porcentaje de recobro.
4. En los parámetros linealidad y exactitud los rangos de concentración se establecieron
entre un 80 y un 120%. Estos rangos se definen de esta manera, debido a que los
porcentajes más permisivos que se presentan en los análisis, son los de la uniformidad
de contenido que se encuentran entre 85-115%, por lo que es necesario conocer el
comportamiento de la muestra a estas concentraciones, y darles un rango mayor para así
evitar trabajar en el límite.
5. En el parámetro precisión se obtienen resultados, con un RSD menor al 2,0% en cada
uno de las muestras analizadas, por lo que se puede decir que las muestras preparadas al
100% presentan una mínima diferencia de área con respecto al promedio de las 5
muestras.
61
6. El parámetro Límites de Cuantificación y Detección resultan de gran importancia,
debido a que entrega un resultado fundamental en caso de que el laboratorio tenga la
necesidad de identificar o cuantificar trazas de algún principio activo o analito, en otro
tipo de validación.
7. El cambio de material volumétrico, es bastante común en el laboratorio, ya que no
siempre se cuenta con el material de vidrio necesario para que el analista pueda realizar
las diluciones descritas en la metodología analítica. Los analistas deben recurrir al
cambio de material volumétrico, para así seguir adelante con el análisis, tomando solo la
precaución de llegar a la misma concentración descrita en la metodología analítica. El
resultado obtenido, en este trabajo, se encuentra dentro de los márgenes permitidos, lo
que reflejaría que se puede realizar cambios en el material volumétrico sin que esto
tenga como consecuencia un cambio en el resultado final.
8. El cambio de equipo ocurre de manera cotidiana en el laboratorio, ya que se disponen de
varios de ellos para ejecutar los análisis y no siempre la medición de las muestras se
toman en el mismo equipo. Por esto es importante determinar el % recobro de estándar
contra la muestra de ambos equipos y comparar los resultados de las mediciones, para
así determinar que al cambiar de equipo la recuperación de los analitos no estará
alterada.
9. El calentar la muestra se usa como una medida extrema en el laboratorio, es por esto,
que es necesario reconocer si la muestra presenta algún cambio, bajo estas condiciones
de sometimiento. En este caso se calentó la muestra a 50 ° C por 120 minutos y se
obtuvo un porcentaje de recobro 100.07% de promedio en las muestras. Este porcentaje
promedio demuestra una mínima variabilidad entre las muestras originales y las
muestras modificadas, por lo que podemos deducir que calentar la muestra a esta
temperatura no representa ninguna alteración en el principio activo.
10. Por último, evaluamos la estabilidad de las soluciones durante 5 días a temperatura
ambiente, dando como resultado un porcentaje de recobro de 100,53% promedio para
los estándares y 100,39 % promedio para las muestras. Estos porcentajes nos indican
que las soluciones pueden permanecer sobre el mesón del laboratorio 5 días, ya que el
principio activo, o el solvente utilizado, no están sufriendo alguna alteración bajo estas
condiciones.
62
Capítulo 6
Conclusiones
1. Las metodologías analítica utilizadas para los productos farmacéuticos Doxium®

cápsulas, Labosalic® loción y B- Laboterol® crema resultó ser, lineal, exacta, precisa
selectiva y robusta, cumpliendo así con todos los parámetros analíticos dispuestos por la
USP 24, necesarios para una validación. Con esto queda demostrado que las
metodologías analíticas propuestas por el Laboratorio Instituto Farmacéutico Labomed
para estos productos farmacéuticos están validadas.
2. En el desarrollo del parámetro exactitud se obtiene un porcentaje de recobro dentro de
los límites propuestos para todos los productos farmacéuticos validados y sus
respectivos estándares, lo que refleja una buena recuperación del analito y sugiere la
ausencia de interferentes en la longitud de onda donde se identifica cada uno de ellos.
3. El parámetro límites de cuantificación y detección, permite verificar cual es la mínima
cantidad de principio activo que se puede cuantificar y detectar en el equipo UV-visible
(espectrofotómetro) para el producto Doxium® cápsulas y su estándar, y en el equipo
HPLC UV-visible para los otros productos validados en este trabajo.
4. En el parámetro selectividad se obtuvieron excelentes resultados, ya que los placebos
preparados a concentraciones de 80, 100 y 120%, no presentaron absorción a la longitud
de onda descrita para cada uno de los estándares en la metodología analítica. Este
resultado indica que las absorbancias obtenidas en los otros parámetros, sólo están
cuantificando el principio activo y no presentan ningún interferente que pueda otorgar
una absorbancia adicional.
5. El parámetro final es la robustez, que refleja la capacidad de la inalterabilidad de los
resultados, cuando se realizan pequeños cambios, que pueden ocurrir en la cotidianidad
del análisis. En este parámetro se realizan cuatro cambios, que son los que ocurren con
más frecuencia en el laboratorio, como, cambio de material volumétrico, cambio de
analista, calentamiento de la muestra y estabilidad de la muestra.
63
6. El cambio de Bureta solo se hizo para el estándar de Clotrimazol y para el producto
Farmacéutico B-Laboterol® crema en el parámetro Robustez, ya que es el único que
requiere para su análisis una titulación.
7. El Laboratorio Labomed cuenta con certificación GMP lo que indica que estas normas
son implementadas y se encuentran funcionando para asegurarnos que todos los
productos que se obtengan sean de una calidad óptima.
8. Es importante destacar el hecho de que el laboratorio cuenta con la Documentación,
materiales y equipos necesarios para desarrollar en las mejores condiciones este trabajo
de validación
9. El realizar este trabajo de práctica prolongada es una oportunidad real a la labor que
desempeña el Químico Farmacéutico en la industria Farmacéutica y de aplicar la gran y
diversa cantidad de conocimientos adquiridos en la universidad. También de
relacionarse con un equipo de trabajo para obtener un bien común que es en este caso el
aseguramiento de la calidad.
10. El desarrollo de la práctica profesional en el instituto farmacéutico LABOMED resultó
de fácil realización, ya que se contaba con toda la experiencia de los profesionales
Químicos Farmacéuticos y con toda la disposición del personal que trabaja en el
laboratorio.
64
Bibliografía
1. Winkel, G. General Method Validation Guidelines for Pharmaceuticals samples.

Reglamento del Sistema Nacional de Productos Farmacéuticos, alimentos de uso
Médico y Cosmético D.S. 1876/1995; Ministerio de Salud.
2. Guía de Inspección de Buenas Prácticas de Manufactura (GMP) para la Industria de
Productos Farmacéuticos, Ministerio de Salud, Instituto de Salud Pública; Andros
Impresores; 1999; página 5, 6, 18.
3. Curso Teórico Práctico para implementar un Sistema de aseguramiento de la Calidad en
la Industria Farmacéutica; Relatores Dra.Q.F. Gabriela Prosser y Dr. Q.F. Carlos Seitz;
organizado por la Sociedad de Químicos Farmacéuticos de la Industria de Chile
(SOQUIFICH); Patrocinado por el Colegio de Químicos Farmacéuticos de Chile; 17
Junio al 17 de Julio del 2002
4. USP XXIV; The United States Pharmacopeia Convention, INC; National Pusblishing
Philadelphia, PA; 1999; páginas 221-223
5. Manual de Procedimientos de Control de Calidad del Instituto Farmacéutico Labomed;
POS de validación; Edición Diciembre 2001; Revisión Junio 2006.
6. Certificado Analítico de Materia Prima, de cada uno de las drogas involucradas en esta
validación, perteneciente al Instituto Farmacéutico Labomed.
7. Hoja de Especificación de Producto Intermedio/Terminado del Departamento de Control
de Calidad del Instituto Farmacéutico Labomed; POS de Validación; edición Diciembre
2001; Revisión Diciembre 2005.
8. Skoog/Leary; Análisis Instrumental; Editorial Mc Graw Hill; Cuarta Edición; 1994;
Capitulo 8, Capítulo 26, Apéndice 1.
9. Cáceres, CA; ““Validación de la Metodología Analítica por HPLC para el Producto
Farmacéutico Prefem® ”; Unidad de Práctica Optativa para Optar al título de Químico
farmacéutico; Universidad de Chile, 2002
10. Isa, J.P; “Validación de un Proceso de Manufactura en la Industria Farmacéutica”;
Unidad de Práctica Optativa para Optar al Título de Químico Farmacéutico; Universidad
de Chile; 2001.
65
11. Provoste, Carolina; “Validación de la Metodología Analítica del Producto Farmacéutico
Labosona® crema, mediante el uso de Cromatografía Liquida de Alta Eficiencia
(HPLC)”; Unidad de Práctica Optativa para Optar al Titulo de Químico Farmacéutico;
Universidad de Chile, 2004.
12. Mora Evelyn; “Protocolo de Validación de la Metodología Analítica para la
Estandarización de Diclofenaco Sódico Materia Prima por Cromatografía Liquida de
Alta Presión”; Unidad de Práctica Optativa para Optar al Titulo de Químico
Farmacéutico; Universidad de Chile; 2006.
13. The Merck Index. 12ª Edición. Merck & Co. INC. Whitehouse station, N.J. USA, 1996.
14. Iman, E., Frischmann, J., Journal of chromatographic science.25: 252-256; 1987.
15. Swartz, M., Krull, I. Validation of Chromatographic Methods. Pharm. Technol 22
(Mar.): 104-118, 1998.
66
67

Validación Dobesilato CA

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UNIVERSIDAD DE CHILE

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas

VALIDACIÓN DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE LOS

Profesor Supervisor Monitor de Práctica

Unidad de Práctica Optativa para Optar al Título de Químico Farmacéutico

Melissa Andrea Madrid Galgani

4.1 Gráfico de Concentración v/s Absorbancia, Dobesilato de calcio 26

4.1 Potencias obtenidas de estándares y muestras en sus respectivas trazabilidades 24

Desarrollar y validar una metodología analítica para cuantificar, Dobesilato de calcio en el

 Recopilar antecedentes bibliográficos que permitan obtener información, sobre los

3.2- Definir el Equipo y Materiales a Utilizar.

3.3-Elaborar Procedimientos Operativos Estándares.

3.4. - Verificación del Funcionamiento de los Equipos.

3.6. - Análisis de Parámetros Analíticos.

3.6.4. -Especificidad o Selectividad:

3.6.5.1. -Límite de Detección o Cantidad mínima Detectable: Hace referencia a la mínima

Los equipos utilizados durante la validación son los siguientes:

1. Agua desmineralizada (utilizado como solvente en la preparación de las muestras)

4.1 Definir la metodología a validar

4.2. Metodología de Análisis

La metodología analítica corresponde a la descripción de cómo se realiza la cuantificación del

Según las especificaciones que aparecen en la hoja de especificación del producto

(Hoja de especificaciones de producto intermedio/terminado es un documento confidencial del

4.2.2 Definir el Equipo y los Materiales a Utilizar.

Los equipos utilizados para la cuantificación de estándares y productos fueron el

4.2.3 Revisar los Procedimientos Operativos Estándar para el proceso de Validación.

Validación de la metodología analítica por Espectrofotometría (CC- VAL- 08)

4.2.4 Verificación del Funcionamiento del Equipo HPLC.

Cuadro 4.1: Potencias obtenidas de estándares y muestras en sus respectivas trazabilidades.

4.2.6 Análisis de los Parámetros Analíticos.

La totalidad de los parámetros analíticos se realizaron basándose en los POS elaborados en la

El parámetro de linealidad se realizó basándose en el POS de validación denominado CC-VAL-

Luego, se tiene. A 221 nm: A 301 nm:

Concentraciones Dobesilato de calcio[mg/mL]

Figura 4.1: Gráfico de Concentración v/s Absorbancia, Dobesilato de calcio.

Concentración Gasto % RSD Concentración %RSD

16,856 (80%) 12,5 0 0,02724 (80%) 13774116 0,23

Clotrimazol Betametasona dipropionato

En la figura 4.2 se muestra el gráfico de Concentración versus Gasto Volumétrico de LSS

Figura 4.2: Gráfico de concentración v/s Gasto volumétrico, Clotrimazol.

En la figura 4.3 se muestra el gráfico de Concentración versus absorbancia promedio obtenida a

Figura 4.3: Gráfico de Concentración versus Absorbancia Promedio, Betametasona

Ácido salicílico Absorbancia

Figura 4.4: Gráfico de concentraciones v/s Absorbancia promedio, Ácido Salicílico

El parámetro analítico de exactitud se realizó basándose en el POS de validación CC-VAL del

En el cuadro 4.5 se muestra el porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones

El cuadro 4.6, corresponde al porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones mencionadas

Cuadro 4.6: Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre el estándar de

Concentración Concentración % RSD entre % RSD entre

16,86 (80%) 15,87 100,4 0,285 1,21

El cuadro 4.7, corresponde al porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones mencionadas

El cuadro 4.8, corresponde al porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones mencionadas

Cuadro 4.8: Porcentaje correspondiente a la comparación entre estándar de Ácido Salicílico y

El cuadro 4.9, corresponde al porcentaje de recobro obtenido a las concentraciones mencionadas

Cuadro 4.9: Porcentaje de recobro correspondiente a la comparación entre estándar de

Concentración Concentración % RSD entre

El parámetro analítico de precisión se realizó basándose en el POS de validación denominado

 Los cuadros 4.10 y 4.11, muestran tablas correspondientes a la absorbancia para

Cuadro 4.10: Precisión Dobesilato de calcio estándar.

Concentración RSD % Promedio

Cuadro 4.11: Precisión Doxium® cápsulas.

Cuadro 4.12: Precisión Clotrimazol estándar.

Concentración de Gastos % RSD

19,869 14,5 14,5 0

Recopilar antecedentes bibliográficos que permitan obtener información, sobre los

Los cuadros 4.10 y 4.11, muestran tablas correspondientes a la absorbancia para