08062010105126.practicas de Analisis Instrumental

PRÁCTICAS DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL
Isabel Sierra, Damián Pérez, Sonia Morante

Yolanda Pérez, Ruth Ballesteros, Alfredo Sánchez
PRÁCTICAS DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL
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de
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ISBN: 978-84-9849-189-0
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ÍNDICE
Índice
ÍNDICE 9
PRÓLOGO 13
SEGURIDAD Y NORMAS DE TRABAJO 17
PRÁCTICAS
I. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN UV-Vis 25

1. Determinación de hierro en cemento 29
2. Análisis de una mezcla de dos compuestos 37
3. Aplicaciones cualitativas de la espectroscopia de absorción UV-Vis 43
II. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN EN EL IR 49

4. Aplicaciones cualitativas de la espectroscopia de IR 53
5. Identificación de carbohidratos en cereales para desayuno 61
III. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA 67

6. Determinación de cobre en aleaciones metálicas 71
7. Determinación de manganeso en acelga 79
8. Efecto de la llama y disolvente en la determinación de magnesio 85
IV. REFRACTOMETRÍA 91
9. Identificación y control de pureza de aceites vegetales comestibles 95
10. Determinación de parámetros de calidad en alimentos 101
V. POLARIMETRÍA 107
11. Determinación de sacarosa en leche condensada 109
12. Determinación de almidón en arroz 117
13. Estudio de la reacción de inversión de la sacarosa 123
Prácticas de Análisis Instrumental 9

Índice
VI. POTENCIOMETRÍA 131

14. Determinación de la acidez en vinos 135
15. Determinación de ácido ascórbico en un preparado farmacéutico 141
16. Determinación de estaño en aleación de estaño y plata 147
VII. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA 153

17. Identificación de aspartamo y sus productos de hidrólisis en bebidas 155
18. Identificación de ácidos orgánicos en zumos y vinos 159
VIII. CROMATOGRAFÍA LIQUIDOS DE ALTA EFICACIA 165

19. Determinación de paracetamol y ácido acetil salicílico en preparado
farmacéutico 171
20. Determinación de cafeína, aspartamo y ácido benzoico en bebidas 177
21. Determinación de aniones en aguas residuales 183
22. Determinación de fluoruros en pasta de dientes 189
23. Determinación de sodio en sílices 195
IX. CROMATOGRAFÍA DE GASES 201

24. Determinación de impurezas en bebidas alcohólicas destiladas 205
25. Aplicaciones cualitativas y cuantitativas de la cromatografía de gases 211
ANEXO 219
BIBLIOGRAFÍA 225
10 Prácticas de Análisis Instrumental

PRÓLOGO
Prólogo
PRÓLOGO
La Química Analítica es un área de la ciencia con gran impacto en la vida
cotidiana. Es una disciplina genérica y su desarrollo posibilita grandes avances en
muchas áreas como la Medicina, Biotecnología, Ciencia de los Materiales, Ciencia
Forense, Ingeniería, Medio Ambiente, Tecnología de los Alimentos, etc. De ahí, que
actualmente, se considera que el objeto de la Química Analítica es toda la materia.
En este contexto, el objetivo principal de esta obra es que el alumno entienda

la importancia actual de la Química Analítica y la forma en que se trabaja, a través de
la realización de experimentos prácticos relacionados con el análisis de muestras
orgánicas e inorgánicas mediante el uso de instrumentos analíticos modernos. Se
pretende pues, motivar el interés del alumno por el análisis químico moderno.
Además, puesto que las prácticas de laboratorio han sido siempre una herramienta
básica para el aprendizaje de la Química, otros objetivos básicos de esta obra son que
el alumno se familiarice con el material de un laboratorio de Análisis Instrumental, que
aprenda el fundamento de las técnicas analíticas instrumentales más importantes y que
sepa aplicar estos conocimientos para la resolución de problemas analíticos sencillos.
La presente obra pretende también ser una aportación útil para profesores
que tienen que poner en marcha un curso práctico de Análisis Instrumental, ya que
incluye una serie de experimentos prácticos que abarcan las principales técnicas
analíticas instrumentales que se estudian de manera habitual en los programas de
asignaturas del área de Química Analítica de diversas titulaciones de Ciencias
(Química, Farmacia, Biología, Ciencias de la Salud, etc) e Ingeniería.
La obra constituye una recopilación de una serie de prácticas, todas ellas

comprobadas experimentalmente, que son perfectamente realizables por parte del
alumno. Las prácticas se agrupan en nueve bloques, en función del tipo de técnica
utilizada. Inicialmente, en cada bloque de prácticas se hace un breve repaso a los
fundamentos básicos de la técnica (espectroscopía UV-Vis, espectroscopía de IR,
espectroscopía de AA, refractometría, polarimetría, potenciometría, cromatografía en
capa fina, cromatografía de líquidos de alta eficacia y cromatografía de gases). A
continuación, para cada técnica se proponen dos, tres o más prácticas. La mayoría de
éstas son aplicaciones cuantitativas de las técnicas, en las que se analizan muestras
reales (alimentos, productos farmacéuticos, muestras ambientales, materiales
inorgánicos, etc), siendo por tanto, el tratamiento de la muestra una etapa importante
en el desarrollo de la práctica. Otras prácticas son aplicaciones cualitativas de las
técnicas y en algunos casos se estudian determinados aspectos teóricos de la técnica,
con objeto de que el alumno profundice en los mismos.
Antes de realizar cualquier tipo de trabajo en el laboratorio, el alumno debe leer

con detenimiento y atención el apartado dedicado a la Seguridad y Normas de trabajo
en el laboratorio, que incluye consideraciones generales que los alumnos deben

Prólogo
conocer de antemano a la hora de trabajar en un laboratorio (normas básicas de
seguridad, manipulación de reactivos y material, desecho de residuos, etc).
Cada práctica comienza con una introducción teórica con la que se pretende hacer
ver al alumno la importancia de la Química Analítica en el mundo real y en otras áreas
de la Ciencia. Posteriormente, se enumeran los objetivos básicos que se pretende que
los alumnos alcancen con la realización de la práctica. Seguidamente, se indican los
materiales, instrumentos y reactivos necesarios para la realización de la misma. El
apartado dedicado al procediendo experimental comienza con una serie de
precauciones que el alumno debe tener en cuenta, con objeto de evitar accidentes
innecesarios o errores en los resultados obtenidos. Después, se indican las
disoluciones necesarias y el modo de prepararlas, los pasos necesarios para el
tratamiento de la muestra y finalmente los pasos a seguir para llevar a cabo la medida
con la técnica empleada. Cada práctica se acompaña de numerosas fotografías que
facilitan las explicaciones sobre el tratamiento de la muestra, manejo del equipo, etc.
Finalmente, en cada práctica se describen los resultados que los alumnos deben
obtener en la misma y los posibles comentarios o tratamientos estadísticos que deben
realizar. Además, se formulan una serie de cuestiones para comprobar la asimilación
de los conocimientos teórico-prácticos por parte de los alumnos.
Sacar un libro a la luz es siempre un trabajo en equipo, por este motivo quisiera
expresar mi más sincero agradecimiento a los coautores del mismo: Damián Pérez,
Sonia Morante, Yolanda Pérez, Ruth Ballesteros y Alfredo Sánchez. Una parte muy
importante de este libro se debe a su gran esfuerzo en la puesta a punto de las
prácticas. También agradecer Carmen Garrido y Santiago Gómez por su ayuda
inestimable en el desarrollo de algunas de prácticas y a Gabriel Pastor por la
realización de alguna figura. También agradecer al resto de compañeros del
Departamento de Química Inorgánica y Analítica de la ESCET el que nos hayan
soportado durante el proceso de desarrollo del mismo y a nuestros familiares y amigos
por todas las horas que les hemos robado para escribirlo.
Isabel Sierra Alonso

Profesora Titular de Química Analítica de la URJC

SEGURIDAD Y NORMAS DE TRABAJO
Seguridad y normas de trabajo
SEGURIDAD Y NORMAS DE TRABAJO

El trabajo en cualquier laboratorio de Química lleva asociado un riesgo, que
será más o menos importante dependiendo del tipo de práctica a realizar. Por ello, es
necesario trabajar siempre bajo las máximas condiciones de seguridad, conociendo en
todo momento los potenciales accidentes que pueden producirse en el desarrollo de la
práctica y el modo de actuación en caso de emergencia. Así mismo, es imprescindible
conocer y cumplir de manera estricta las normas generales de trabajo en un
laboratorio, ya que de esta manera se evitará o minimizará el riesgo de accidentes.
1. Normas generales
Nunca se debe trabajar solo en el laboratorio ni realizar experimentos
distintos a los previstos en la práctica que se esté realizando.
Será obligatorio el uso de bata larga y con mangas que deberá estar en todo
momento abrochada para proteger de salpicaduras. También será obligatorio
el uso de gafas de seguridad (las graduadas no protegen de manera adecuada
los ojos) y evitando el uso de lentillas (que agravarían las lesiones oculares en
caso de accidente). En algunas ocasiones será necesario el uso de guantes.
Llevar el pelo recogido y evitar pulseras o colgantes que puedan engancharse
en los montajes.
Está prohibido ingerir alimentos y bebidas en el laboratorio.
Nunca se debe fumar en el laboratorio.
Antes de empezar a trabajar en el laboratorio hay que conocer la situación de
la puerta de emergencia, los extintores, la ducha, el lavaojos y el equipo de
primeros auxilios.
Cuando se realicen operaciones con riesgo potencial, las personas que no
intervengan en ellas y que estén situadas en las proximidades deben estar
perfectamente informadas del mismo.
Una vez finalizada la práctica se guardaran los materiales limpios y los
reactivos. Se limpiará el lugar de trabajo y deberá asegurarse de la desconexión
de aparatos y de que todas las llaves (agua, gas, vacio, ...) están cerradas.
Lavarse bien las manos al finalizar el trabajo en el laboratorio.
2. Manipulación de reactivos y material de laboratorio

2.1. Identificación de sustancias peligrosas
Las sustancias químicas, en función de su peligrosidad, se clasifican en:

explosivas, comburentes, extremadamente inflamables, fácilmente inflamables,
inflamables, muy tóxicas, tóxicas, nocivas, irritantes, nocivas, corrosivas, peligrosas
para el medio ambiente, cancerígenas, mutagénicas, teratogénicas y alegénicas. En el
envase original de cualquier reactivo es posible encontrar uno o varios pictogramas

que indican el tipo de peligrosidad del producto. Por ello, antes de manejar cualquier
reactivo, es imprescindible interpretar esta información, para conocer el riesgo
inherente a su uso, tomar las precauciones adecuadas y saber actuar en caso de
accidente. También encontramos en los envases una serie de frases que nos indican
riesgos específicos del producto (frases R) y consejos de seguridad (frases S).
Cualquier producto químico presente en un lugar de trabajo debe contener
información sobre el riesgo inherente a su uso, esta información aparecerá en forma
de ficha de seguridad, en la que aparece, entre otra, la siguiente información:
- Identificación de la sustancia y composición
- Identificación de los peligros y primeros auxilios
- Manipulación y almacenamiento
- Propiedades físicas, químicas, estabilidad y reactividad
- Informaciones toxicológicas
2.2. Recomendaciones generales en el manejo de reactivos
En la manipulación de sustancias químicas se evitará el contacto con la piel, la

inhalación de los posible vapores y la ingestión.
La apertura de los frascos que contienen sustancias químicas debe realizarse
lenta y cuidadosamente, evitando salpicaduras. La fricción que se produce al
abrir la tapa puede producir chispas y explosiones.
No introducir pipetas en los envases originales de reactivos. Calcular la
cantidad que se va a necesitar y trasvasarla a un vaso de precipitados,
sosteniendo el recipiente por el lado de la etiqueta. Nunca se debe devolver el
reactivo sobrante al recipiente original.
En el caso de reactivos sólidos, es imprescindible utilizar espátulas
perfectamente limpias.
Todas las disoluciones preparadas deben estar etiquetadas de forma correcta.
Cuando se prepare una disolución de un ácido concentrado, siempre se
deberá añadir, lentamente y con precaución, el ácido sobre el agua.
Se debe conocer la reactividad de los productos químicos utilizados. Añadir
los reactivos con todas las precauciones posibles. Cuando se realizan mezclas,
estudiar de antemano las posibles incompatibilidades de los productos,
evitando accidentes por reacciones violentas o desprendimiento de gases
tóxicos.
Utilizar la vitrina con campana extractora siempre que sea posible, y
obligatoriamente si se trabaja con reactivos que emiten vapores tóxicos,
nocivos o irritantes, o en la reacción hay desprendimiento de gases tóxicos.
Los reactivos químicos deben mantenerse alejados de mecheros y otras
fuentes de calor. Para el calentamiento de líquidos inflamables nunca se debe
utilizar un mechero.

Los envases de los productos químicos deben mantenerse siempre cerrados,

para evitar su paso al ambiente del laboratorio por evaporación, o bien
accidentes por vertido accidental. Solo se abrirán cuando sea necesario.
Evitar que ocurran derrames utilizando embudos para el transvase de
líquidos.
Avisad inmediatamente al profesor ante cualquier derrame de un producto
químico, para su limpieza inmediata. Si el producto es tóxico, inflamable o
corrosivo interrumpir el trabajo en el puesto de trabajo.
2.3. Recomendaciones generales en el manejo de material de laboratorio
Antes de utilizar cualquier material de vidrio debe verificarse su buen estado.

No llevar material de vidrio en los bolsillos de la bata.
Cuando se realizan montajes de vidrio se deben seguir las siguientes
recomendaciones: a) evitar que el material quede tensionado, b) utilizar
soportes y abrazaderas adecuadas, c) usar grasa de silicona en todas las
uniones esmeriladas y tapones de vidrio para evitar que las piezas queden
unidas y d) los matraces de fondo redondo han de ser introducidos en los
baños de forma lenta y progresiva.
Nunca se debe calentar en recipientes no destinados para tal fin. El vidrio que
se emplee debe ser específico para aguantar altas temperaturas. Tampoco se
calentará nunca recipientes cerrados herméticamente.
Evitar quemaduras con material de vidrio caliente utilizando pinzas y guantes
adecuados.
En cuanto a la manipulación de pipetas, está terminantemente prohibido
pipetear con la boca. Para aspirar fluidos con la pipeta hacer uso de “peras”
de caucho u otros sistemas de succión (propipetas).
• El material de laboratorio se debe limpiar con agua y detergentes, y debe ser
aclarado con abundante agua corriente y, finalmente, con pequeñas cantidades
de agua destilada (para eliminar los iones que quedan en el material después
de lavar con agua corriente).
Aparatos especiales:
Aparatos con llama: Los equipos con llama deben disponer de un sistema de seguridad
que permita el corte de suministro de gas en caso de emergencia. Se debe trabajar
siempre bajo una campana de extracción.
Baños: Los baños no se deben llenar hasta el borde. Utilizar soportes para asegurar la
estabilidad del baño. Se deberá utilizar un sistema de control de temperaturas.

Estufas: Siempre que se trabaje con vapores inflamables, utilizar estufas de seguridad.
Cuando se caliente sustancias volátiles se deberá emplear un sistema de extracción
localizada, filtros y un sistema de condensación para la retención de los mismos.
Utilizar un sistema de control de temperaturas.
Centrífugas: La carga de la centrífuga debe estar repartida de forma simétrica. Los

equipos no deben permitir su funcionamiento cuando la tapa este abierta. Los equipos
no deben permitir la apertura de la tapa cuando aún se encuentren en movimiento.
Autoclaves: Los equipos deben disponer de un manómetro. Los aumentos y descensos

de presión se deben realizar de forma lenta y progresiva.
2.4. Recomendaciones generales para el manejo de residuos
Los papeles impregnados con reactivos químicos y los guantes no se pueden

tirar a la papelera. Depositarlos en un recipiente destinado a tal fin (sólidos).
No mezclar en los mismos recipientes trapos, papeles o similares
impregnados con productos químicos incompatibles.
No se debe verter ningún tipo de residuo al desagüe. Los residuos líquidos
deben almacenarse en recipientes adecuados para tal fin (disolventes
halogenados, disolventes no halogenados, ácidos, bases, disoluciones acuosas,
aceites y especiales). Estos recipientes estarán debidamente etiquetados y se
situarán en una zona específica de almacenamiento con un sistema de
extracción de vapores.
Nunca se dejarán abiertos los recipientes para el almacenamiento de residuos,
ni se llenarán hasta rebosar.
3. Actuación en caso de accidente

En caso de sufrir un accidente es importante conservar la calma, avisar de
forma inmediata al profesor y seguir estas instrucciones básicas:
3.1 Incendios
Dar la alarma inmediatamente.

En caso de pequeños incendios, utilizar mantas o arena (nunca agua) y si es la
ropa la que se prende emplear además la ducha de seguridad. Retirar
inmediatamente, si es posible, los reactivos que se encuentren cerca del fuego.
Escoger adecuadamente el tipo de extintor. Todo el personal del laboratorio
debe conocer el funcionamiento de estos equipos.
Cuando se tenga que evacuar el laboratorio, hacerlo de forma ordenada y
tranquila, cerrando todas las puertas al salir.

3.2. Quemaduras térmicas
Lavar la zona afectada con abundante agua para enfriarla, no quitar la ropa
que se encuentre pegada a la piel.
No romper las ampollas.
Si la quemadura es grave no suministrar al accidentado ni bebida ni alimento.
Acudir al médico.
3.3. Salpicaduras
Lavarse con abundante agua durante 10 ó 15 min, empleando si es necesario

la ducha de seguridad.
Si la salpicadura se ha producido en los ojos lavarse con un lavaojos durante
15 ó 20 minutos.
Quitarse la ropa afectada por el producto.
Acudir al médico con la etiqueta o ficha de seguridad del producto.
3.4 Ingestión e inhalaciones
En caso de ingestión de un producto químico no provocar el vómito, salvo

indicación expresa, especialmente si el producto es corrosivo.
No se recomienda ingerir sustancia alguna tras la ingestión de un producto
químico.
En caso de inhalación de vapores de un producto tóxico o corrosivo, llevar
rápidamente a la persona afectada a un lugar con aire fresco.
Recopilar información (etiqueta o ficha de seguridad) sobre el producto
ingerido y acudir con ella rápidamente al médico.
En caso de duda consultar al servicio de información toxicológica.
3.5 Vertidos
Abrir las ventanas del laboratorio.

Poner en marcha las vitrinas con campana extractora con las guillotinas
subidas.
Apagar los aparatos con llama.
Si el vertido es importante, evacuar el laboratorio y no permitir la entrada al
recinto evacuado hasta asegurarse que la concentración ambiental del
contaminante no presenta riesgo alguno.
El vertido se deberá eliminar en función de la naturaleza del mismo:
¾ Mercurio: Absorber con polisulfuro de calcio, azufre o amalgamantes.
¾ Líquidos inflamables: Absorber con carbón activo. No emplear serrín.
¾ Ácidos: Neutralizar con productos comercializados para la absorción
y neutralización. En su defecto emplear bicarbonato de sodio.

¾ Bases: Neutralizar con productos comercializados para la absorción y

neutralización. En su defecto emplear agua de pH ligeramente ácido.
3.6 Fuga de gases
Cuando la fuga de gas se ha producido en una instalación fija, cerrar las llaves
de las botellas conectadas a la misma. Comunicar al responsable del
laboratorio para que ponga en marcha las actuaciones de emergencia
adecuadas.
Si la fuga de gas se produce en una botella cerrar la llave siempre que sea
posible. Utilizar un equipo de protección adecuado para trasladar la botella a
un espacio abierto y una vez en el exterior, controlar la botella hasta su total
vaciado.
3.7. Electrocución
Cortar inmediatamente la alimentación eléctrica del aparato causante de la

electrocución. No acercase antes a la víctima.
Retirar al accidentado una vez asegurado el corte del suministro eléctrico.
No suministrarle alimentos ni bebidas.

PRÁCTICAS
Espectroscopía de absorción UV-Vis – Fundamento teórico
I. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN UV-Vis
Fundamento teórico
La espectroscopía de absorción UV-Vis es una técnica instrumental que se basa en la
absorción de radiación electromagnética por parte de los analitos en la zona
ultravioleta y visible del espectro. Cuando la radiación de esta zona del espectro incide
sobre un compuesto, si esta tiene la energía adecuada, será absorbida por el analito y
se producirá la promoción de un electrón a un nivel electrónico superior, se dice que
la molécula ha pasado a un estado excitado de mayor energía (Figura 1). Los
parámetros que se utilizan para describir este proceso son la transmitancia (T) y la
absorbancia (A):
T = I/I0
A = - log 10 T = log (I0/I)
donde I0 e I son la intensidad inicial y final del haz de radiación, antes y después del
proceso de absorción.
Niveles vibracionales Niveles vibracionales
∆E
Nivel Electrónico 2 Nivel Electrónico 2
Absorción
Nivel Electrónico 1 Nivel Electrónico 1
Estado Fundamental Estado Excitado
Figura 1. Proceso de absorción de radiación UV-Vis.
Por tanto, la absorción selectiva 0.4 198 nm

de radiación de determinadas
0.3 240 nm
longitudes de onda, λ, por parte del
Absorbancia
analito permite obtener el espectro de 0.2

N
absorción característico del mismo 0.1

OH
(representación gráfica de la
variación de A frente a λ) que 0.0
proporciona información sobre su -0.1
composición y estructura (Figura 2).

200 250 300 350 400 450 500
λ (nm)
Figura 2. Espectro de absorción UV-Vis

de la 8-hidroxiquinoleína en agua.
Para la medida de la absorbancia de la radiación por parte de los analitos y la
obtención de espectros característicos se utiliza un aparato llamado espectrofotómetro. En los
aparatos más sencillos de haz simple, llamados así porque utilizan un único haz de luz, la
radiación procedente de una fuente continua pasa a través de un monocromador, que
selecciona una banda estrecha de longitudes de onda. A continuación, la radiación
atraviesa la disolución de la muestra problema situada en el interior de una cubeta (de
plástico, vidrio o cuarzo) y la intensidad de la radiación emergente no absorbida se mide
en el detector (Figura 3).
I0 I
Selector de Disolución
Fuente Detector
λ problema
Figura 3. Esquema de un espectrofotómetro de UV-Vis de haz simple.
La espectroscopía de absorción UV-Vis se emplea muy frecuentemente para el

análisis cuantitativo. La determinación de la concentración de analito presente en una
muestra se basa en el cumplimiento de la ley de Lambert-Beer, que establece una relación de
proporcionalidad directa entre absorbancia (A) y concentración de especies absorbentes
(C):
A = a·b·C
La constante a (absortividad) es la capacidad intrínseca del analito para absorber a

una determinada longitud de onda y sus unidades dependerán de las unidades empleadas
para b (camino o paso óptico, distancia recorrida por la radiación a través del medio
absorbente) y C. Si el camino óptico se expresa en cm (normalmente b = 1 cm) y la
concentración en g/L, la absortividad tiene unidades de L.g-1.cm-1. Sin embargo, si el
camino óptico se expresa en cm y la concentración en mol/L, la absortividad tiene
unidades de L.mol-1.cm-1 y se denomina absortividad molar (ε).
El primer paso que se sigue en cualquier análisis cuantitativo mediante

espectroscopía de absorción UV-Vis es la selección de la longitud de onda de medida, que
normalmente será la de máxima absorbancia ya que: a) en las proximidades del
máximo de absorción la ley de Lambert-Beer se cumple mejor, ya que en esta zona la
absorbancia es prácticamente constante y, b) la sensibilidad del análisis es máxima, es
decir, se obtiene la máxima absorbancia para una concentración dada de analito. Una vez
seleccionada la longitud de onda óptima se prepararán disoluciones patrón del analito de
concentración creciente y conocida (Figura 4) y se mide su absorbancia a la longitud de
onda óptima.

Figura 4. Disoluciones patrón del analito de concentración creciente y conocida.
Con las absorbancias obtenidas se

construye una recta de calibrado 1
representando estos valores frente a las 0,9

0,8 A disolución problema
concentraciones de las distintas 0,7
0,6
disoluciones patrón del analito medidas C analito
Abs
0,5
en disolución problema
(Figura 5). El ajuste por el método de 0,4
0,3
mínimos cuadrados permite obtener la 0,2
0,1
ecuación de la mejor línea recta que 0
pase por los puntos (cuya pendiente será 0 2 4 6 8 10

C (ppm)
a o ε). Finalmente, se medirá la absorbancia
de la disolución problema de la muestra y se Figura 5. Ejemplo de una recta de
determinará su concentración utilizando calibrado para espectroscopía de
la recta de calibrado. absorción UV-Vis.

Espectroscopia de absorción UV-Vis - Determinación de hierro en cemento
Práctica 1. DETERMINACIÓN DE HIERRO EN
CEMENTO MEDIANTE ESPECTROSCOPÍA UV-Vis
1.1. Introducción
El hierro es un elemento químico de número atómico 26 y símbolo Fe. Este
metal de transición es el cuarto elemento más abundante en la corteza terrestre,
representando un 5%. Se encuentra en la naturaleza formando parte de numerosos
minerales, entre ellos muchos óxidos, y raramente se encuentra libre. El hierro es un
componente importante en algunos tipos de cemento.
Se denomina cemento a un aglutinante o aglomerante hidráulico que,

mezclado con agregados pétreos (grava o arena) y agua, crea una mezcla uniforme,
manejable y plástica capaz de fraguar y endurecer al reaccionar con el agua. Aunque
existen distintos tipos de cemento, el Portland es el más utilizado como ligante para la
preparación del hormigón. Fue preparado por primera vez en el año 1824 por el
albañil inglés Joseph Aspdin que le dio este nombre por su semejanza en su aspecto
con las rocas encontradas en Portland, una isla del condado de Dorset. Las materias
primas para la producción de este cemento son minerales que contienen óxidos de
calcio, silicio, aluminio, hierro y magnesio, principalmente. A partir del cemento
Portland se obtienen otros especiales con características diferentes a causa de
variaciones en el porcentaje de los componentes que lo forman, entre estos cabe
destacar el cemento Portland férrico (cemento rico en hierro que se obtiene
introduciendo cenizas de pirita o minerales de hierro en polvo), el cemento blanco (de
color blanco-grisáceo debido a la falta del hierro), el cemento puzolánico (mezcla de
cemento Portland con puzolana y yeso), el cemento siderúrgico (mezclas con ceniza
de carbón proveniente de las centrales termoeléctricas, escoria de fundiciones o
residuos obtenidos calentando el cuarzo), el cemento de fraguado rápido (que se
caracteriza por iniciar el fraguado a los pocos minutos de su preparación con agua) y el
cemento aluminoso (que se produce a partir, principalmente, de la bauxita con
impurezas de óxidos de hierro, titanio y silicio).
El hierro en la naturaleza puede presentarse en dos estados de oxidación

Fe(II) o Fe(III). En el cemento, se encuentra normalmente en estado oxidación
Fe(III). La concentración de Fe(III) en el cemento varía según el tipo de cemento
observándose que una mayor concentración de hierro en el cemento provoca una
coloración más oscura del mismo.
Los métodos para la determinación de hierro son muy diversos pudiéndose

determinar por método gravimétricos, volumétricos o mediante el empleo de diversas
técnicas instrumentales espectrométricas o cromatográficas. En la presente práctica se
llevará a cabo la determinación de hierro en distintos tipos de cemento mediante
espectroscopía de absorción UV-Vis. Para asegurarnos que todo el hierro esté en el
estado de oxidación +3 calcinaremos la muestra como etapa previa a su extracción.

1.2. Objetivos
1. Realizar el tratamiento de una muestra real como etapa previa al análisis.
2. Aprender el manejo de un espectrofotómetro UV-Vis.
3. Determinar del contenido de hierro en una muestra de cemento.
1.3. Aparatos y material

Cubeta espectrofotométrica de vidrio Probeta de 50 mL
Matraces aforados de 50, 250 y 1000 mL Pipetas de 5 y 10 mL
Placa calefactora Kitasatos de 500 mL
Placa filtrante porosa nº 4 Embudo de vidrio
Pipeta Pasteur con tetina de goma Vidrio de reloj o pesasustancias
Varilla de vidrio Crisol de porcelana
Vasos de precipitados de 100 y 250 mL Espectrofotómetro de UV-Vis
Balanza analítica
Mufla
1.4. Reactivos
Ácido clorhídrico
Cloruro de hierro(III) hexahidratado
Agua destilada
Muestras de cemento
1.5. Procedimiento experimental

1.5.1. Precauciones a tener en cuenta:
a) Antes de calcinar la muestra de cemento está debe estar perfectamente

molida.
b) Tenga cuidado de no quemarse al extraer la muestra de cemento de la mufla
emplee pinzas y guantes adecuados.
c) Realice la extracción del hierro de la muestra en la campana extractora, debido
a la toxicidad de los gases que se desprenden.
d) Tome la cubeta espectrofotométrica por los lados traslúcidos, evitando dejar
restos de grasa o suciedad en la celda que podrían afectar a la lectura de la
absorbancia.
e) Asegúrese que antes de introducir la cubeta espectrofotométrica en el equipo
se encuentra perfectamente limpia y seca, ya que de lo contrario al tratarse de
disoluciones que contienen ácido pudieran dañar el equipo.

1.5.2. Preparación de disoluciones:
Disolución de ácido clorhídrico (1:1). Se toman 25 mL de ácido clorhídrico

comercial y se transfieren a un matraz aforado de 50 mL y se completan con agua
destilada hasta el enrase.
Disolución de ácido clorhídrico al 1 % (v/v) A partir del ácido clorhídrico
comercial se tomará el volumen correspondiente que se transferirá a un matraz
aforado de 1000 mL y se enrasará con agua destilada.
Disolución madre de hierro(III) 6.25 10-3 M. Se pesan 1,6888 g de FeCl3 6 H2O, se
añaden 25 mL de HCl (1:1) y unos 100 mL de disolución de ácido clorhídrco al 1 %.
Una vez disueltos, se transfiere la disolución a un matraz aforado de 1000 mL y se
enrasa con ácido clorhídrico al 1%.
1.5.3. Determinación de hierro:
1.5.3.1. Extracción del hierro en la muestra
Se colocan 1,5 g de cemento

en un crisol de porcelana. Este crisol
se introduce en una mufla (Figura 1.1)
y se procede a la calcinación a 950 ºC
durante 24 horas. Transcurrido este
tiempo, se saca el crisol de la mufla y
se transfiere a un vaso de precipitados
al que se le añaden 20 mL de HCl (1:1)
y se calienta la muestra durante 10
minutos agitando con una varilla de
vez en cuando (tenga cuidado de no
llevar a sequedad la muestra,
realice esta operación en campana
extractora debido a la toxicidad de
los gases que se desprenden).
Figura 1.1. Mufla para la
calcinación del cemento.
Transcurrido este tiempo se procede al filtrado de la disolución en caliente

con un sistema de succión a vacío empleando un kitasato y una placa filtrante con
poro del número cuatro. El sólido se lava con una disolución caliente de ácido
clorhídrico al 1 %. Después de filtrar y lavar el sólido, se transfiere el filtrado y las
aguas de lavado a un matraz aforado de 250 mL. Lavar bien el kitasato con la
disolución de ácido clorhídrico al 1 % para arrastrar los restos de disolución que
puedan quedar adheridos en las paredes del mismo. Finalmente, enrasar el matraz con
la disolución de ácido clorhídrico al 1 %. Una alícuota de 10 mL de esta disolución se
transfiere a un matraz aforado de 50 mL y se enrasa con la disolución de ácido
clorhídrico al 1 %.

1.5.3.2. Preparación de la recta de calibrado
Se prepararan seis disoluciones de 50 mL que contengan alícuotas de 0, 2, 4,

6, 8 y 10 mL de la disolución de hierro de 6.25 10-3 M y se enrasaran con la disolución
de ácido clorhídrico al 1 %. Se agitarán manualmente los matraces con la finalidad de
homogeneizar las disoluciones.
1.5.3.3. Análisis espectrofotométrico
En la Figura 1.2 se muestra el espectrofotómetro de UV-Vis que se va a

emplear en esta práctica.
(a) (b)
Figura 1.2. (a) Espectrofotómetro de UV-Vis. (b) Detalle del compartimento de

medida.
Inicialmente se debe seleccionar la longitud de onda a la que se van a realizar

las medidas. Para ello, utilizando una disolución patrón de hierro de concentración
intermedia registrar el espectro de absorción en el intervalo de longitudes de onda
comprendido entre 250 y 800 nm. Para realizar esto:
(a) Abrir el menú “Scan” haciendo doble click en el icono.
(b) En el menú “Scan” para obtener el espectro, en primer lugar en el icono “Set
up” se eligen las siguientes condiciones de medida (Figura 1.3):
9 Start: 800 nm 9 Y mode: Absorbance

9 Stop: 250 nm 9 Y min: 0
9 Scan controls: “medium” 9 Ymax: 1

Figura 1.3. Detalle de la pantalla de selección de las condiciones de medida.
Presionar OK para salir del menú “Set up”.
(c) Llenar con ácido clorhidrico al

1% la cubeta de medida hasta la
marca que lleva impresa,
empleando una pipeta Pasteur
(Figura 1.4). Es muy
importante coger siempre la
cubeta por los lados
traslúcidos. Secar suavemente
con papel si hay gotas por la
parte exterior de la cubeta e
introducirla en el compartimento Límite de llenado
de medida (Figura 1.2b), de
manera que los dos lados
transparentes de la cubeta
queden hacia los lados abiertos
del soporte metálico. Cerrar la
puerta del compartimento de Figura 1.4 Detalle de la cubeta
medida. espectrofotométrica de medida.

(d) Hacer click sobre “Zero” para ajustar a cero la absorbancia del blanco (si el valor
de absorbancia no se ajustara a cero, hacer click una o dos veces más sobre
“Zero”).
(e) Sacar la cubeta del compartimento de medida y vaciarla.
(f) Llenar la cubeta de medida con la disolución patrón de hierro (aclarara
previamente dos veces con dicha disolución) siguiendo las indicaciones dadas en el
apartado (c), introducirla en el compartimento de medida y hacer click sobre
“Start” para registrar el espectro.
(g) Con ayuda del ratón se puede deslizar el cursor a lo largo de la curva de absorción
obtenida. En la parte inferior derecha de la pantalla, aparecerá el correspondiente
valor de λ y de absorbancia para cada punto. De acuerdo con el espectro obtenido
elegir una longitud de onda óptima de trabajo.
(h) Pintar el espectro obtenido (“Print”) y sobre él apuntar los valores (λ, A) de los
máximos de absorción.
Una vez seleccionada la longitud de onda a la que se realizarán las medidas, se

procederá a medir la absorbancia de cada una de las disoluciones patrón de hierro y de la
disolución problema. Para ello:
(i) Cerrar el menú “Scan” y abrir con doble click sobre el icono correspondiente el
menú “Simple Reads”.
(j) Seleccionar la longitud de onda que se ha elegido para preparar la curva de
calibrado haciendo click en “Set up”.
(k) Corregir para esa longitud de onda el valor de absorbancia del blanco (ácido
clorhídrico 1%) con “Zero”. A continuación realizar tres lecturas de la
absorbancia para cada una de las disoluciones patrón preparadas, en orden
creciente de concentraciones, y para la disolución problema, apuntando la
absorbancia en cada una de ellas.
1.6. Resultados
1. Construir una recta de calibrado con los datos de absorbancia obtenidos a
partir de las disoluciones patrón preparadas. Obtener los valores de la
ordenada en origen, pendiente y coeficiente de correlación de dicha recta.
2. A partir de la ecuación de la recta de calibrado y de la medida de absorbancia
en la disolución problema, obtener la concentración de hierro y Fe2O3 en la
muestra de cemento analizada, expresada en % en peso.
3. Con los datos obtenidos por los distintos grupos de trabajo del laboratorio,
realizar un tratamiento estadístico de los resultados (media, desviación
estándar y desviación con relación a la media), después de haber eliminado
previamente los datos discordantes.
4. Comentar los resultados obtenidos en cuanto al contenido de Fe2O3 y
compararlos con datos buscados en bibliografía sobre distintos tipos de
cemento.
1.7. Cuestiones
1. ¿Por qué se debe calcinar la muestra antes de proceder a extraer el hierro con
la disolución de ácido clorhídrico (1:1)?
2. ¿Qué problemas podrían presentarse si la longitud de onda seleccionada para
realizar las medidas no es la correcta?

Espectroscopia de absorción UV-Vis – Análisis de una mezcla
Práctica 2. ANÁLISIS DE UNA MEZCLA DE DOS
COMPUESTOS MEDIANTE ESPECTROSCOPÍA UV-Vis
2.1. Introducción
La espectroscopía de absorción UV-Vis permite el análisis de mezclas de
sustancias absorbentes, teniendo en cuenta que la absorbancia total de una disolución a
una longitud de onda dada es igual a la suma de las absorbancias de los componentes
individuales presentes en la disolución:
Amezcla = εX·b·[X] + = εY·b·[Y] + = εZ·b·[Z] …….
En el caso de una mezcla de dos componentes X e Y cuyos espectros solo se

solapan un poco en algunas regiones, se seleccionará la longitud de onda λ1, donde la
especie X es la que más contribuye al valor de la absorbancia de la mezcla, y la longitud
de onda λ2, donde la especie Y es la que más contribuye al valor de la absorbancia de la
mezcla. Para llevar a cabo la determinación, se mide la absorbancia de la mezcla problema
a cada una de las longitudes de onda seleccionadas (A mezcla (λ1) y A mezcla (λ2)) y se calculan
ambas concentraciones utilizando las siguientes expresiones:
Amezcla (λ1) = AX (λ1) + AY(λ1)
Amezcla (λ2) = AX (λ2) + AY (λ2)
Estas expresiones solo serán válidas si los dos componentes de la mezcla no

interaccionan entre si, y la exactitud en la determinación será mayor cuando exista
gran diferencia entre las ε de las λ seleccionadas.
Los indicadores ácido-base son sistemas ácido-base cuyas especies tienen

diferentes colores dependiendo de su estado de protonación. Entre los indicadores
ácido-base más utilizados cabe destacar la fenoftaleína, que normalmente se utiliza
como indicador químico en su transición de incolora a rosa en el intervalo de pH 8,0-
9,6, y el azul de bromofenol, que vira en el intervalo de pH 3.0-4.6 de amarillo a azul.
Br
R OH
Br
Azul de bromofenol Fenoftaleína
En la presente práctica se determinará el contenido de fenoftaleína y azul de

bromofenol en una mezcla de ambos compuestos en medio alcalino mediante
espectroscopía de absorción UV-Vis

2.2. Objetivos
1. Aprender el manejo de un espectrofotómetro de UV-Vis.
2. Determinar la composición de una mezcla de dos compuestos mediante
espectroscopía de absorción UV-Vis.

Cubeta espectrofotométrica de vidrio Pipetas de 5 y 10 mL
Matraces aforados de 100, 250, 500 y 1000 mL Varilla de vidrio
Pipeta Pasteur con tetina de goma Vidrio de reloj o pesasustancias
Vasos de precipitados de 100 y 250 mL Espectrofotómetro de UV-Vis
Balanza analítica Granatario
2.4. Reactivos
Hidróxido de sodio Fenolftaleína
Agua destilada Azul de bromofenol
Mezcla problema

a) Tome la cubeta espectrofotométrica por los lados traslúcidos, evitando dejar

absorbancia.
b) Asegúrese que antes de introducir la cubeta espectrofotométrica en el equipo
disoluciones que contienen base pudieran dañar el equipo.
Disolución de hidróxido de sodio al 1 % (p/v). Se pesan 10 g de hidróxido de

sodio comercial en un vaso de precipitados y se disuelven con unos 100 mL de agua
destilada. Una vez disueltos se transfieren a un matraz aforado de 1000 mL y se
completan con agua destilada hasta el enrase.
Disolución madre de azul de bromofenol 10-3 M. Se pesan 0,1670 g de azul de
bromofenol en balanza analítica. Se disuelven en unos 100 mL de disolución de
hidróxido de sodio al 1 %. Una vez disueltos se transfieren a un matraz aforado de
250 mL y se completan con disolución de hidróxido de sodio al 1 % hasta enrase.

Disolución madre de fenolftaleína 10-3 M. Se pesan 0,1590 g de fenolftaleína en
balanza analítica. Se disuelven en unos 100 mL de disolución de hidróxido de sodio al
1 %. Una vez disueltos se transfieren a un matraz aforado de 500 mL y se completan
con disolución de hidróxido de sodio al 1 % hasta enrase.
2.5.3. Análisis de una mezcla de dos compuestos:
2.5.3.1. Preparación de las rectas de calibrado
Se prepararan seis disoluciones patrón de 100 mL del azul de bromofenol que

contengan alícuotas de 0, 1, 2, 4, 6, 8 y 10 mL de la disolución madre de azul de
bromofenol 10-3 M y se enrasaran con la disolución de hidróxido de sodio al 1 %. Se
agitarán manualmente los matraces con la finalidad de homogeneizar las disoluciones.
Se prepararan seis disoluciones patrón de 100 mL de fenolftaleína, que

contengan alícuotas de 0, 1, 2, 4, 6, 8 y 10 mL de la disolución madre de fenolftaleína
10-3 M y se enrasaran con la disolución de hidróxido de sodio al 1 %. Se agitarán
manualmente los matraces con la finalidad de homogeneizar las disoluciones.

(a) (b)

medida.
Inicialmente se debe seleccionar la longitud de onda a la que se van a realizar

las medidas. Para ello, utilizando una disolución patrón de azul de bromofenol y de
fenolftaleína de concentración intermedia registrar el espectro de absorción de ambos
compuestos en el intervalo de longitudes de onda comprendido entre 300 y 700 nm. Para
realizar esto:

9 Start: 700 nm 9 Y mode: Absorbance

9 Stop: 300 nm 9 Y min: 0
9 Scan controls: “medium” 9 Y max: 1
(c) Llenar con hidróxido de sodio al puerta del compartimento de

1% la cubeta de medida hasta la medida.
marca que lleva impresa,
empleando una pipeta Pasteur
(Figura 2.4). Es muy
introducirla en el compartimento Límite de llenado
de medida (Figura 2.2b), de
del soporte metálico. Cerrar la Figura 2.4 Detalle de la cubeta
espectrofotométrica de medida.

“Zero”).
(e) Sacar la cubeta del compartimento de medida y vaciarla.
(f) Llenar la cubeta de medida con la disolución patrón azul de bromofenol (aclarara
previamente dos veces con dicha disolución) siguiendo las indicaciones dadas en el
apartado (c), introducirla en el compartimento de medida y hacer click sobre
“Start” para registrar el espectro.
(g) Con ayuda del ratón se puede deslizar el cursor a lo largo de la curva de absorción
valor de λ y de absorbancia para cada punto.
(h) Pintar el espectro obtenido (“Print”) y sobre él apuntar los valores (λ, A) de los
(i) A continuación, llenar la cubeta de medida con la disolución patrón fenoftaleína
siguiendo las indicaciones dadas en el apartado (c), introducirla en el
compartimento de medida y hacer click sobre “Start” para registrar el espectro.
(j) Pintar el espectro obtenido (“Print”) y sobre él apuntar los valores (λ, A) de los
(k) A la vista de los espectros obtenidos, elegir las dos longitudes de onda óptimas de
trabajo (λ1 y λ2).
Una vez seleccionadas las longitudes de onda a la que se realizarán las medidas, se
procederá a medir la absorbancia de cada una de las disoluciones patrón y de la mezcla
problema. Para ello:
(l) Cerrar el menú “Scan” y abrir con doble click sobre el icono correspondiente el
(m) Seleccionar una de las longitudes de onda elegidas para realizar las medidas (λ1)
haciendo click en “Set up”.
(n) Corregir para esa longitud de onda el valor de absorbancia del blanco (disolución
de hidróxido de sodio al 1 %) con “Zero”. A continuación realizar tres lecturas de
la absorbancia para cada una de las disoluciones patrón de azul de bromofenol y
de fenolftaleína, en orden creciente de concentraciones, y para la mezcla
problema proporcionada por el profesor, apuntando la absorbancia de cada una de
ellas.
(o) Finalmente, seleccionar la otra longitud de onda elegida para realizar las medidas
(λ2) en “Set up”, corregir para esa longitud de onda el valor de absorbancia del
blanco (disolución de hidróxido de sodio al 1 %) con “Zero” y realizar tres
lecturas de la absorbancia para cada una de las disoluciones patrón de azul de
bromofenol y de fenolftaleína, en orden creciente de concentraciones, y para la
mezcla problema proporcionada por el profesor, apuntando la absorbancia de
cada una de ellas.

2.6. Resultados
1. Calcular la absortividad molar para azul el bromofenol y para la fenolftaleína a
cada λ a partir de la ley de Lambert-Beer.
2. Calcular, en moles/L, la concentración de azul de bromofenol y de
fenolftaleína en la mezcla problema.
2.7. Cuestiones
1. ¿Qué diferencias podríamos encontrarnos si las disoluciones de azul de
bromofenol y de fenolftaleína se hubiesen enrasado con disolución de ácido
clorhídrico al 1%?
2. ¿Qué problemas podrían presentarse si la longitud de onda seleccionada para
realizar las medidas no es la correcta?
3. ¿Por qué no coincide exactamente el valor calculado para la concentración de
fenolftaleína y de azul de bromofenol con respecto al esperado teóricamente?

Espectroscopía de absorción UV-Vis – Aplicaciones cualitativas
Práctica 3. APLICACIONES CUALITATIVAS DE LA
ESPECTROSCOPÍA UV-Vis
3.1. Introducción
Las aplicaciones cualitativas de la espectroscopía UV-Vis son limitadas por lo
que la identificación inequívoca de una sustancia mediante el uso exclusivo de esta
técnica suele ser imposible. Sin embargo, para disoluciones simples que tienen un solo
analito es posible detectar la presencia de determinados grupos funcionales.
Para poder interpretar el espectro de absorción en el UV-Vis de un

compuesto orgánico hay que tener en cuenta el tipo de transiciones electrónicas
posibles cuando dicho compuesto absorbe esta radiación. En esta zona del espectro
electromagnético pueden darse cuatro tipos principales de bandas de absorción que se
deben a las transiciones electrónicas: π → π *, n → π *, σ → σ * y n → σ *. Los
distintos tipos de transiciones pueden identificarse por la zona del espectro en la que
aparecen (λ), por sus intensidades relativas (ε) y, en algunos casos, por los
desplazamientos observados al variar el disolvente.
Para los compuestos orgánicos,

son las transiciones de electrones n o π al
estado excitado π * las que resultan de π* C O
mayor interés con fines cualitativos π
(Figura 3.1), ya que estas transiciones
C O
requieren longitudes de onda entre los
200 y 700 nm. Ambas transiciones n
requieren de la existencia de un grupo π* C O

funcional que aporte los orbitales π
(grupo cromóforo). En la Tabla 1 del Electrón excitado
Anexo se da una lista de grupos
cromóforos comunes y la localización Figura 3.1. Representación
aproximada de sus máximos de esquemática de las transiciones π →
absorción. π * y n → π * del grupo carbonilo.
Es preciso destacar que, a diferencia de las transiciones n → π *, para las

transiciones π → π * la posición de la λmax es prácticamente independiente de la
naturaleza de los átomos que intervienen y que estas bandas suelen aparecer en la zona
del UV lejano, zona del espectro poco accesible. Por otro lado, la ε de las bandas de
absorción asociadas a las transiciones n → π * suele ser baja, mientras que los valores
de ε para las transiciones π → π * son altos. Otra diferencia importante, se encuentra
en el efecto de la polaridad del disolvente. Así, un aumento en la polaridad del
disolvente produce un desplazamiento hacia λ más grandes (hipsocrómico o hacia el
azul) de las bandas n → π * y un desplazamiento hacia λ más pequeñas (batocrómico
o hacia el rojo) de las bandas π → π *.
3.2. Objetivos
1. Identificar los distintos tipos de bandas en el espectro de absorción UV-Vis
de un compuesto orgánico como la acetona.
2. Determinar el valor de la absortividad molar (ε) en el/los máximos de
absorción para un compuesto orgánico como la acetona.
3. Entender la importancia de la selección del tipo de disolvente y su efecto en el
desplazamiento de los máximos de absorción.

Cubeta espectrofotométrica de vidrio Matraces aforados de 50 y 100 mL
Pipetas de 5 y 10 mL Pipeta Pasteur con tetina de goma
Vasos de precipitados de 100 y 250 mL
Espectrofotómetro de UV-Vis
3.4. Reactivos
Acetona
Dimetilformamida
Etanol
Hexano
Agua destilada

a) Tome la cubeta espectrofotométrica por los lados traslúcidos, evitando dejar

absorbancia.
b) Asegúrese que antes de introducir la cubeta espectrofotométrica en el equipo
disolventes orgánicos pudiera dañarse el equipo.
Disolución de acetona 0,5 M en hexano. Se toman con una pipeta 3,7 mL de

acetona y se transfieren a un matraz aforado de 100 mL. Completar con hexano hasta
el enrase.

Disolución de acetona 0,5 M en etanol. Se toman con una pipeta 3,7 mL de
acetona y se transfieren a un matraz aforado de 100 mL. Completar con etanol hasta el
enrase.
Disolución de acetona 0,5 M en agua. Se toman con una pipeta 3,7 mL de acetona
y se transfieren a un matraz aforado de 100 mL. Completar con agua hasta el enrase.
Disolución de acetona 0,5 M en dimetilformamida. Se toman con una pipeta 3,7
mL de acetona y se transfieren a un matraz aforado de 100 mL. Completar con
dimetilformamida hasta el enrase.
3.5.3. Identificación de las bandas de absorción y efecto del disolvente:

(a) (b)

medida.
Inicialmente se registrará el espectro de absorción para la acetona en el intervalo

de longitudes de onda comprendido entre 190 y 800 nm que es el intervalo de longitudes
de onda en el que aparecen las bandas asociadas a los principales grupos funcionales. Para
realizar esto:

9 Start: 800 nm 9 Y min: 0

9 Stop: 190 nm 9 Y max: 1
9 Scan controls: “medium”
9 Y mode: Absorbance

(c) Llenar con hexano la cubeta de

medida hasta la marca que lleva
impresa, empleando una pipeta
Pasteur (Figura 3.4). Es muy
introducirla en el compartimento
de medida (Figura 3.2b), de Límite de llenado
del soporte metálico. Cerrar la
puerta del compartimento de
medida. Figura 3.4 Detalle de la cubeta
espectrofotométrica de medida.

“Zero”).
(e) A continuación hacer click sobre “Baseline” para realizar la corrección de la
absorbancia debida al disolvente.
(f) Sacar la cubeta del compartimento de medida y vaciarla.
(g) Llenar la cubeta de medida con la disolución de acetona 0,5 M en hexano
(aclararla previamente dos veces con dicha disolución) siguiendo las indicaciones
dadas en el apartado (c), introducirla en el compartimento de medida y hacer click
sobre “Start” para registrar el espectro.
(h) Con ayuda del ratón se puede deslizar el cursor a lo largo de la curva de absorción
valor de λ y de absorbancia para cada punto.
(i) Pintar el espectro obtenido (“Print”) y sobre él apuntar los valores (λ, A) de los
(j) Proceder de la misma manera con las disoluciones de acetona 0,5 M en etanol y
acetona 0,5 M en agua, utilizando etanol y agua, respectivamente, para hasta ajustar
a cero la absorbancia del blanco y realizar la corrección del disolvente.
(k) Por último, registrar el espectro para la disolución de acetona 0,5 M en
dimetilformamida, antes y después de realizar la corrección de la absorbancia
debida al disolvente (dimetilformamida).
3.5.4. Determinación de la absortividad molar:
3.5.4.1. Preparación de las rectas de calibrado
Preparar seis disoluciones patrón, de 50 mL, que contengan alícuotas de 0, 1,

2, 4, 6, 8 y 10 mL de la disolución de acetona 0,5 M en hexano y se enrasaran con
hexano. Se agitarán manualmente los matraces con la finalidad de homogeneizar las
disoluciones.
Una vez identificadas las bandas de absorción en el espectro de la acetona en

hexano y seleccionadas las longitudes de onda de los máximos de absorción,
procedemos a la determinación del valor de la absortividad molar (ε) a dichas
longitudes de onda. Para ello:
(l) Cerrar el menú “Scan” y abrir con doble click sobre el icono correspondiente el
(m) Seleccionar la longitud de onda que se ha elegido para realizar las medidas
haciendo click en “Set up”.

(n) Corregir para esa longitud de onda el valor de absorbancia del blanco (hexano)
con “Zero”. A continuación realizar tres lecturas de la absorbancia para cada una
de las disoluciones patrón preparadas, en orden creciente de concentraciones.
3.6. Resultados
1. A la vista del espectro de absorción obtenido para la acetona en hexano,
identifica el tipo de transición electrónica correspondiente a cada una de las
bandas observadas en el mismo.
2. ¿Qué ocurre con los máximos de absorción de las bandas observadas en el
espectro cuando pasamos de hexano a etanol y de etanol a agua?
3. ¿Qué ocurre cuando se registra el espectro de absorción de la acetona disuelta
en dimetilformamida, antes y después de ajustar la absorbancia a cero con el
blanco?
4. Calcular el valor de ε para la acetona en hexano, a las longitudes de onda
seleccionadas.
5. Comentar los resultados obtenidos en cuanto al valor de ε para la acetona en
hexano, a las longitudes de onda seleccionadas, y compararlos con datos
encontrados en bibliografía.
3.7. Cuestiones
1. ¿Qué es un desplazamiento hipsocrómico? ¿Y un desplazamiento
batocrómico? ¿Qué tipos de transiciones podemos diferenciar en base a estos
tipos de desplazamiento como consecuencia a un aumento en la polaridad del
disolvente?
2. ¿Qué es la longitud de corte de un disolvente?. ¿Cuál es esta longitud de onda
para la dimetilformamida?

Espectroscopía de absorción en el IR – Fundamento teórico
II. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN EN EL
INFRARROJO
Fundamento teórico
Las técnicas espectroscópicas de análisis se basan en el hecho de que los
compuestos, por aplicación de radiación electromagnética, absorben energía en
cantidades discretas llamadas cuantos o fotones. La absorción de energía provoca en
dicho compuesto una transición de niveles energéticos desde el estado fundamental de
mínima energía (M) a un estado excitado (M*). La diferencia de energía entre ambos
estados es igual a hν, siendo ν la frecuencia de la radiación absorbida:
M + hν → M*
La representación de la
absorbancia (A) o transmitancia (T) 100
de la radiación incidente en función

de su longitud de onda, frecuencia o 80
Transmitancia (%)
número de onda recibe el nombre
de espectro. El tipo de espectroscopía 60
esta determinada por la región del

espectro electromagnético a la que 40
corresponda la radiación aplicada.

Así, la región infrarroja (IR) del 20
3600 3200 2800 2400 2000 1600 1200 800
espectro está comprendida entre la -1

Número de Onda (cm )
zona del visible y de las microondas.

En un espectro de IR (Figura 1) Figura 1. Espectro de absorción IR.
habitualmente se representa %T
frente a número de onda (cm-1).
Cuando la radiación electromagnética incide sobre una molécula, el efecto

producido en la misma depende del tipo de radiación incidente. Así, la radiación IR
estimula el movimiento vibracional de las moléculas cuando la absorben. Para entender
esto, podemos imaginar un enlace como un resorte que conecta los dos átomos en
una molécula. Cuando esos resortes vibran, sólo pueden hacerlo con ciertas
frecuencias y, por tanto, las moléculas sólo pueden tener ciertos niveles de energía
vibracional. Estas vibraciones pueden ser descritas por la ley de Hooke, es decir, la
frecuencia de vibración es directamente proporcional a la fuerza del enlace ( f ) e
inversamente proporcional a las masas de los átomos enlazados (m1 y m2):
~υ = frecuencia de vibración en números de onda

k =constante
f = constante de fuerza
~υ = k f (m1 + m2 ) m1, m2 = masa de los átomos
m1m2

Una molécula poliatómica posee muchos enlaces, por lo tanto es de esperar
que presente un gran número de vibraciones y, como consecuencia, de absorciones en
el IR. En concreto, una molécula no lineal que contenga n átomos puede sufrir 3n-6
modos normales de vibración y si es lineal 3n-5. Las vibraciones en las que varían las
distancias entre los átomos pero no los ángulos de enlace se llaman vibraciones de tensión
y pueden ser simétricas o asimétricas (Figura 2). Aquellas en las que por el contrario
son los ángulos de enlace los que cambian se denominan vibraciones de flexión (tijereteo,
balanceo, aleteo y torsión).
Tensión simétrica Flexión simétrica en el plano Flexión simétrica fuera del

(movimiento de tijera) plano (movimiento de
torsión)
Tensión asimétrica Flexión asimétrica en el plano Flexión asimétrica fuera

(movimiento de balanceo) del plano (movimiento de
aleteo)
Figura 2. Modos normales de vibración en una molécula.
Existen distintos tipos de instrumentos para la medida de la absorción de

radiación en el IR, aunque los más utilizados actualmente son los espectrómetros de IR de
transformada de Fourier (FTIR). En estos instrumentos se detectan todas las longitudes de
onda y se miden de forma simultánea, lo cual explica que se les denomine instrumentos
multiplex. Además, permiten realizar medidas de longitud de onda de manera rápida con
elevada sensibilidad y precisión (Figura 3). Requieren una fuente de radiación continua en
el infrarrojo (fuente láser de dióxido de carbono, por ejemplo), un detector sensible a este
tipo de radiación y un interferómetro, para descomponer el espectro en términos de
potencia radiante en función de la longitud de onda.

1 2
2 4
Figura 3. Espectrómetro de IR, (1) fuente láser, (2) espejos, (3) detector, (4) lugar
donde se coloca la muestra.
Para llevar a cabo un análisis

mediante espectroscopía de IR es muy
importante una manipulación
adecuada de la muestra, ya que esta
etapa suele ser la más difícil y la que
requiere más tiempo. Pueden realizarse
espectros de infrarrojo de gases,
sólidos y líquidos. El espectro de un
líquido puede obtenerse directamente
del líquido puro o empleando una
disolución del mismo en un disolvente
apropiado. En muestras de líquidos
puros se utilizan dos discos o
“pastillas” de NaCl o KBr entre las
que se deposita una gota de la muestra.
A continuación, las pastillas se montan Figura 4. Soporte desmontable para
con cuidado en el soporte (Figura 4), el la colocación de pastillas para
cual se coloca en el espectrómetro para análisis de IR.
realizar la medida.

Para muestras sólidas o líquidas en disolución se utilizan celdas especiales en
las que se introduce el compuesto disuelto.
Las muestras de sólidos
pueden prepararse como disoluciones
(al igual que en el caso de los líquidos),
emulsiones o dispersiones sólidas en
KBr. Las emulsiones se preparan
mezclando una pequeña cantidad de la
muestra sólida con un par de gotas de
aceite mineral (nujol). Una gota de esa
pasta se utiliza para preparar una
muestra, tal como se ha descrito para
las muestras de líquidos puros. Este
método presenta el inconveniente de
que el aceite tiene absorciones en
algunas regiones del espectro IR, lo
que debe de ser tenido en cuenta a la
hora de analizar el espectro obtenido.
En el caso de las dispersiones sólidas,
se prepara una mezcla del producto
con KBr compuesto por partículas de
grano muy fino. La mezcla se tritura
con ayuda de un mortero. Una
pequeña cantidad se introduce en una
prensa (Figura 5), donde se fabrica un
pequeño disco o pastilla transparente,
la cual se monta en un soporte Figura 5. Prensa para la obtención
adecuado y se introduce en el de pastillas para análisis mediante
espectrómetro. espectroscopía de IR.
La espectroscopía de IR es una técnica versátil que permite llevar a cabo tanto

determinaciones cualitativas como cuantitativas. La región del espectro más utilizada para
realizar estas medidas es el IR medio (4.000 a 400 cm-1). Para llevar a cabo la
identificación de un compuesto orgánico a partir de su espectro de absorción en el IR
se debe, en primer lugar, estudiar la zona que abarca la radiación comprendida entre
4.000 y 1.200 cm-1 (región de frecuencias de grupo), que permitirá determinar que grupos
funcionales se encuentran presentes en la molécula. A continuación, se comparará el
espectro del compuesto a identificar con espectros de compuestos puros que
contienen esos mismos grupos funcionales. Para esto es muy útil comparar la región de
la huella dactilar, entre 1.200 y 400 cm-1, puesto que pequeños cambios en la estructura
de una molécula producen cambios importantes en el aspecto de esta zona del
espectro.

Espectroscopía de IR – Aplicaciones cualitativas
Práctica 4. APLICACIONES CUALITATIVAS DE LA
ESPECTROSCOPÍA DE INFRARROJO
4.1. Introducción
Cuando una muestra se somete a radiación electromagnética de la zona
infrarroja (IR) del espectro, si la frecuencia de la radiación electromagnética incidente
es igual a una de las frecuencias de vibración de las moléculas de dicha muestra, se
producirá una absorción de energía, pasando las moléculas a un nivel vibracional
superior. Por tanto, si se analiza la radiación que emerge al realizar un barrido con
radiación IR de distintas frecuencias y se representa el porcentaje de radiación
transmitida (% T) o absorbida (% A) frente al número de onda (cm-1) se obtiene el
espectro de absorción en el IR para dicho compuesto. Debido al elevado número de
absorciones que presenta una molécula orgánica, se puede afirmar que no hay dos
moléculas que presenten un espectro de absorción en el IR absolutamente idéntico. Es
por ello, que esta técnica se utiliza para identificar compuestos por comparación de su
espectro, por ejemplo, con los espectros de moléculas conocidas recogidos en una
base de datos informatizada.
Aunque, en principio, el espectro de absorción en el IR de una molécula de

tamaño medio es complicado, los grupos funcionales presentes en la misma tienen
frecuencias de vibración características y sus bandas de absorción aparecen en
posiciones determinadas del espectro (región de frecuencias de grupo). El estudio de
estas bandas permite hacer estimaciones sobre qué grupos funcionales es probable que
estén presentes o ausentes en la molécula analizada. Las bandas características de los
grupos funcionales más importantes aparecen en la Tabla 2 del Anexo. Estas tablas de
correlación servirán como punto de partida para el proceso de identificación de un
compuesto, pero por si solas no permitirán el establecimiento inequívoco de la
identidad o estructura del mismo.
En un espectro de absorción en el IR, se conoce como zona de la huella

dactilar a la zona que está comprendida entre 1.200 a 600 cm-1, pues es la zona de
mayor complejidad del espectro en la que aparecen un gran número de bandas.
Pequeñas diferencias en la estructura y composición de una molécula dará lugar a
grandes cambios en la distribución de los picos de absorción en esta zona del
espectro. Por lo tanto, un gran parecido en la región de la huella dactilar de los
espectros de dos compuestos constituye una evidencia casi segura de su identidad. En
cualquier caso, será la combinación de la espectroscopía de IR con otras técnicas,
como el análisis elemental, la espectrometría de masas y la espectroscopía de
resonancia magnética nuclear, lo que permitirá una identificación inequívoca del
compuesto.
En la presente práctica se tratará de identificar las bandas de absorción

presentes en los espectros de IR de distintos compuestos orgánicos.

4.2. Objetivos
1. Realizar la preparación muestras líquidas para su análisis por espectroscopía
de absorción en el IR.
2. Aprender el manejo de un espectrómetro de FTIR.
3. Identificar los diferentes tipos de bandas que aparecen en los espectros de IR
de algunos orgánicos.

Pastillas de KBr Soporte para pastillas de IR
Pipeta Pasteur con tetina de goma
Espectrómetro de FTIR
4.4. Reactivos
Acetofenona N, N-dimetilanilina
Hexano Tolueno

a) Las pastillas nunca deben de tocarse con los dedos, únicamente por los
bordes, y deben de manejarse con cuidado debido a su fragilidad.
b) La limpieza de las pastillas se efectúa con acetona, frotándolas suavemente
con un trozo de papel impregnado en dicho disolvente. Nunca emplear
agua, pues disolverá inmediatamente las pastillas ya que son de KBr.
c) No realizar ninguna operación en el ordenador del espectrómetro, aparte de
las indicadas en la práctica. Para cualquier problema avisar inmediatamente al
profesor de prácticas. El espectrómetro es un instrumento que debe de ser
manejado con el máximo cuidado.
4.5.2. Identificación de las bandas de absorción:
4.5.2.1. Preparación de las muestras
Para preparar la muestra, se deposita una gota de la misma sobre un disco o

pastilla de KBr y, a continuación, se coloca una segunda pastilla sobre la primera. La
gota de muestra depositada forma una película entre ambas y las mantiene adheridas.

Seguidamente, las pastillas se colocan con cuidado en el soporte, el cual se coloca en el
espectrómetro para realizar la medida (Figuras 4.1 y 4.2).
(a)
Muestra pipeteada a extender sobre el disco de KBr
Pastilla de KBr
(b) Segunda pastilla de KBr
Muestra
Pastillas de KBr unidas por la tensión superficial
(c)
Radiación Radiación infrarroja transmitida
infrarroja
incidente
Figura 4.1. Preparación de una muestra líquida para espectroscopía de IR. (a)
Aplicación de la muestra sobre la pastilla de KBr. (b) Se juntan las dos pastillas
de KBr. (c) Colocación de las pastillas en el espectrómetro de IR.
Figura 4.2. Soporte desmontable para la colocación de pastillas para análisis

mediante espectroscopía de IR.

4.5.2.2. Análisis espectrométrico
En la Figura 4.3 se muestra el espectrómetro de FTIR que se utilizará en la

presente práctica.
Figura 4.3. Espectrómetro de FTIR.
Registrar el espectro de IR para la acetofenona, hexano, tolueno y N, N-

dimetilanilina. Antes de empezar, comprobar que el ordenador del espectrómetro está
encendido y el programa EZ OMNIC iniciado (si no es así consultar con el profesor
de prácticas).
Para la adquisición de un espectro proceder como se indica a continuación:
(a) Hacer clic sobre “Collect” en el menú principal y, seguidamente, en el menú

desplegable hacer clic sobre “Experiment Setup”. En ese momento aparece
una pantalla como la que se muestra en la Figura 4.4 y se eligen las condiciones
de medida:
9 No. of scans: 32
9 Resolution: 4
9 Final Format: % Transmitance
9 Collect background before every sample

Figura 4.4. Detalle de la pantalla de selección de condiciones de medida.
(b) Hacer doble clic sobre “Col.Smp” y, seguidamente, pulsar OK. En ese
momento en la pantalla aparecerá un mensaje como el que se observa en la
Figura 4.5, pulsar OK. En este momento el equipo realizará un background (o
blanco) que luego restará al espectro de la muestra.
Figura 4.5. Detalle de la pantalla antes de realizar el background.
(c) Cuando el equipo ha terminado de realizar el background en la pantalla aparece

un mensaje como el que se muestra en la Figura 4.6. Colocar la muestra en el

espectrómetro, cerrar el compartimiento de medida y pulsar OK. En ese
momento el espectrómetro empezará a adquirir los datos.
Figura 4.6. Detalle de la pantalla después de realizar el background.
(d) Al terminar el proceso, el programa nos preguntará si queremos que nos envíe
el espectro hacia la ventana 1, hacer clic en “Yes”.
(e) Hacer clic sobre “Analyze” en el menú principal y, seguidamente, en el menú

desplegable hacer clic sobre “Find peaks”. Cuando todos los picos estén
señalados pulsar “Replace” y el nuevo espectro remplazará al anterior.
(f) Finalmente, hacer clic sobre “Print” para imprimir el espectro.
(g) Para analizar la siguiente muestra, retiramos del instrumento el soporte con la
pastilla y se continúa a partir del apartado (b).
(h) Una vez realizadas todas las medidas se cierra el programa y se apaga el
ordenador, pero nunca se apaga el equipo de infrarrojo.
4.6. Resultados
1. Identificar en los espectros obtenidos para la acetofenona, hexano, tolueno y

N, N-dimetilanilina, las bandas debidas a los distintos grupos funcionales
presentes cada compuesto.

4.7. Cuestiones
1. ¿Por qué es necesario realizar un background o blanco antes de proceder a

analizar cada una de las muestras?
2. ¿Es posible diferenciar por espectroscopía de IR el 2-butanol del 1-butanol?.
¿Por qué?
3. A partir de los espectros mostrados en la Figura 4.7, identifica cual
corresponde al ciclohexano y cual al benzaldehído. Señala las bandas de IR
correspondientes a los grupos funcionales más característicos.
80
(a)
60
Transmitancia (%)
40
20
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

(b) número de onda (cm )
-1
80
60
Transmitancia (%)
40
20
0
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
-1
número de onda (cm )
Figura 4.7. Espectros de IR para el ciclohexano y benzaldehído.

Espectrocopía de IR - Identificación de carbohidratos en cereales
Práctica 5. IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS EN
CEREALES PARA DESAYUNO MEDIANTE
ESPECTROSCOPÍA DE INFRARROJO
5.1. Introducción
Los carbohidratos son el nutriente mayoritario en los cereales para desayuno

(entre el 75-90 %). Estos nutrientes proceden principalmente de los cereales a partir
de los que están elaborados (maíz, trigo, avena, arroz, etc) y de los azúcares añadidos
(sacarosa, jarabe de glucosa, miel, caramelo, etc), siendo la cantidad de azúcares
añadidos muy variable entre las distintas marcas comerciales. Se trata principalmente
de carbohidratos complejos (almidón) que se absorben lentamente y proporcionan
energía durante un periodo de tiempo prolongado y, en menor medida, de azúcares
sencillos como la sacarosa (azúcar común), glucosa y fructosa (Figura 5.1).
CHO CH2OH
H OH O CH2OH
H CH2OH
O H O H
HO H HO H H OH H
H OH
H OH HO H HOH2C O OH
H OH H
H OH HO
H OH
CH2OH CH2OH
Glucosa Fructosa Sacarosa

CH2OH CH2OH
H O H H O H
H OH OH H
O O O
OH H H OH
CH2OH CH2OH CH2OH CH2
H O H H O H
H O H H O H
H OH OH H
H OH OH H
O O O
O OH
OH H H OH OH H H OH
Almidón
Figura 5.1 Estructura de los carbohidratos estudiados en esta práctica.
En los espectros de infrarrojo (IR) de los carbohidratos las bandas de

absorción más características, asignadas a la vibración de tensión de los enlaces C-O y
C-C, se localizan en la región entre 1.200 y 950 cm-1. Así, la banda más intensa aparece
a 1.062, 1.147 y 1.032 cm-1 para la fructosa, galactosa y glucosa, respectivamente.
También se observan las bandas debidas a las vibraciones de tensión y flexión de los
enlaces C-H en los rangos de 2.800-3.000 y 1.450-1.500 cm-1, respectivamente. La
banda correspondiente a la vibración de tensión del enlace O-H aparece en el rango de
3.500-3.200 cm-1 como una banda ancha e intensa.
En la presente práctica se identificarán los diferentes tipos carbohidratos

presentes en cereales para desayuno a partir de la posición de bandas que aparecen en
sus espectros de IR.
5.2. Objetivos
1. Realizar la preparación de una muestra sólida para su análisis por
espectroscopía de absorción en el IR.
2. Aprender el manejo de un espectrómetro de FTIR.
3. Identificar los diferentes tipos de bandas que aparecen en los espectros de IR
de algunos carbohidratos.
4. Identificar los principales carbohidratos constituyentes de diferentes tipos de
cereales para desayuno a partir de las bandas de absorción que aparecen sus
espectros de IR.

Mortero o molinillo eléctrico Soporte para pastillas de IR
Pesasustancias Balanza analítica
Prensa
Espectrómetro de FTIR
5.4. Reactivos
Bromuro de potasio
Nitrógeno líquido
Muestras de cereales para desayuno

a) Las pastillas nunca deben de tocarse con los dedos, únicamente por los
bordes, y deben de manejarse con cuidado debido a su fragilidad.
b) La limpieza de las pastillas se efectúa con acetona, frotándolas suavemente
con un trozo de papel impregnado en dicho disolvente. Nunca emplear
agua, pues disolverá inmediatamente las pastillas ya que son de KBr.
c) No realizar ninguna operación en el ordenador del espectrómetro, aparte de
las indicadas en la práctica. Para cualquier problema avisar inmediatamente al
profesor de prácticas. El espectrómetro es un instrumento que debe de ser
manejado con el máximo cuidado.
d) Se debe extremar el cuidado en el manejo del nitrógeno líquido ya que puede
ocasionar quemaduras graves.

5.5.2. Identificación de carbohidratos:
Triturar los cereales para desayuno en un mortero o molino hasta obtener

partículas de grano muy fino. En el caso de cereales con un elevado contenido en
azúcar, congelarlos antes mediante la adición de nitrógeno líquido. Preparar una
mezcla de los cereales molidos con la sal (KBr) en proporción 1:1. La mezcla se tritura
y homogeniza bien con ayuda de un mortero. Una pequeña cantidad se introduce en
una prensa para obtener un disco transparente o “pastilla”, la cual se coloca en un
soporte adecuado y se introduce en el espectrómetro de FTIR (Figura 5.2).
(a) (b)
Figura 5.2. (a) Prensa para la obtención de las pastillas para análisis mediante
espectroscopía de IR. (b) Soporte desmontable para la colocación de pastillas
para análisis mediante espectroscopía de IR.
5.5.2.2. Análisis espectrométrico
Registrar el espectro de IR para la glucosa, fructosa, sacarosa y almidón así

como para los distintos cereales para desayuno suministrados por el profesor.
En la Figura 5.3 se muestra el espectrómetro de FTIR que se utilizará en la

presente práctica. Antes de empezar, comprobar que el ordenador del instrumento
está encendido y el programa EZ OMNIC iniciado (si no es así consultar con el
profesor de prácticas).

Figura 5.3 Espectrómetro FTIR.
Para la adquisición de un espectro proceder como se indica a continuación:
(a) Hacer clic sobre “Collect” en el menú principal y, seguidamente, en el menú

desplegable hacer clic sobre “Experiment Setup”. En ese momento aparece
una pantalla como la que se muestra en la Figura 5.4 y se eligen las condiciones
de medida tal y como aparecen en la Figura 5.4:
9 No. of scans: 32
9 Resolution: 4
9 Final Format: % Transmitance
9 Collect background before every sample
Figura 5.4. Detalle de la pantalla de selección de condiciones de medida.

(b) Hacer doble clic sobre “Col.Smp” y, seguidamente, pulsar OK. En ese
momento en la pantalla aparecerá un mensaje como el que se observa en la
Figura 5.5 y pulsar OK. En este momento el equipo realizará un background (o
blanco) que luego restará al espectro de la muestra.
Figura 5.5. Detalle de la pantalla antes de realizar el background.
(c) Cuando el equipo ha terminado de realizar el background en la pantalla aparece

un mensaje como el que se muestra en la Figura 5.6. Colocar la muestra en el
espectrómetro, cerrar el compartimiento de medida y pulsar OK. En ese
momento el espectrómetro empezará a adquirir los datos.
Figura 5.6 Detalle de la pantalla después de realizar el background.

(d) Al terminar el proceso, el programa nos preguntará si queremos que nos envíe
el espectro hacia la ventana 1, hacer clic en “Yes”.
(e) Hacer clic sobre “Analyze” en el menú principal y, seguidamente, en el menú

desplegable hacer clic sobre “Find peaks”. Cuando todos los picos estén
señalados pulsar “Replace” y el nuevo espectro remplazará al anterior.
(f) Finalmente, hacer clic sobre “Print” para imprimir el espectro.
(g) Para analizar la siguiente muestra, retiramos del instrumento el soporte con la
pastilla y se continúa a partir del apartado (b).
(h) Una vez realizadas todas las medidas se cierra el programa y se apaga el
ordenador, pero nunca se apaga el equipo de infrarrojo.
5.6. Resultados
1. Identificar las bandas pertenecientes a los enlaces C-H y O-H en el espectro
de IR obtenido para la glucosa (Tabla 2 Anexo).
2. Comparar los espectros obtenidos para la glucosa y fructosa e identificar en

dichos espectros las bandas pertenecientes al enlace C=O.
3. Comparar los espectros obtenidos para los patrones (glucosa, fructosa,

sacarosa y almidón) con el obtenido para los cereales de desayuno analizados.
¿Cuál de estos carbohidratos está presente mayoritariamente en los cereales?
4. Comparar los espectros obtenidos para los distintos cereales para desayuno
analizados y a partir de la intensidad de la banda observada entre 3.000 y 3.600
cm-1 intentar deducir cual es el que presenta mayor contenido en carbohidratos.
5.7. Cuestiones
1. ¿A que puede atribuirse la elevada intensidad que presentan las bandas que se
observan en los espectros obtenidos para los cereales de desayuno en torno a
2.900 y 2.850 cm-1?

Espectroscopía de absorción atómica – Fundamento teórico
III. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
Fundamento teórico
La espectroscopía de absorción atómica (AAS) es una técnica instrumental que se
basa en la absorción de radiación, en las regiones UV, Vis e IR del espectro
electromagnético, por parte de átomos o iones elementales en estado gaseoso. Los
espectros atómicos se originan de las transiciones electrónicas entre orbitales atómicos
y producen líneas de absorción delgadas (típicamente del orden de < 0,01 nm), a
diferencia de lo que ocurre en los espectros de absorción molecular UV-Vis. En la
Figura 1 se muestra un esquema de un espectrofotómetro de absorción atómica de
llama (FAAS), que es uno de los más utilizados.
I0 Llama I
Lámpara de
Monocromador Detector Amplificador
Cátodo Hueco
Combustible
Oxidante
Dispositivo
de medida
Disolución
problema
Figura 1. Esquema de un espectrofotómetro de FAA de haz sencillo.
Para llevar a cabo un análisis con este instrumento, la disolución problema se

aspira y se nebuliza en forma de aerosol en una llama larga y delgada, que se encuentra
a una temperatura entre 1.700 y 2.800 ºC. El líquido se evapora, y se produce la
atomización (separación de átomos) del analito en la llama. El camino óptico de la llama
suele ser de 10 cm y el ancho de 2 a 3 mm. La forma de la llama permite pasar la
radiación incidente a través de un suministro continuo de la muestra atomizada. Al
pasar la radiación que proviene de la fuente por la llama se reduce su intensidad de I0 a
I. Entonces, un detector (por lo general un tubo fotomultiplicador) mide la intensidad de
la radiación incidente. La absorbancia viene dada por log (I0/I) que, de acuerdo con la
ley de Lambert-Beer, se relaciona con la concentración de analito en la muestra.
Puesto que los anchos de

banda en espectroscopía atómica son
muy pequeños, es de especial
importancia que la fuente sea capaz de
producir radiación de longitud de onda
adecuada y con el menor ancho de
banda posible. Esto se consigue
mediante el uso de fuentes de líneas
como, por ejemplo, una lámpara de Figura 2. Lámpara de cátodo
cátodo hueco (Figura 2). hueco.

Así, por ejemplo, una lámpara de cátodo hueco de sodio, en la que los átomos
de sodio se excitan con una descarga eléctrica, podría utilizarse para determinar este
elemento en una muestra. Mediante un monocromador es posible seleccionar una línea de
emisión de la lámpara y eliminar la mayor parte de emisión posible procedente de la
llama. Se requiere, por tanto, una lámpara diferente para determinar cada elemento,
aunque en la actualidad existen en el comercio lámparas multielementales con más de
un elemento en el cátodo.
La atomización suele ser, por lo general, la etapa crítica en los análisis

mediante AAS, ya que de ella depende la precisión de las medidas, la sensibilidad
analítica y el grado de interferencias. La mayor parte de los espectrofotómetros de
llama utilizan un mechero de flujo laminar (Figura 3) en el que el combustible, oxidante y
muestra se mezclan antes de su introducción en la llama. La disolución problema se
introduce mediante un nebulizador neumático haciendo pasar una fuerte corriente de
oxidante por el extremo de un capilar, por el que se aspira la disolución.
Figura 3. Mechero de flujo laminar.
La combinación más frecuente de combustible-oxidante es acetileno-aire,

aunque para atomizar elementos de alto punto de ebullición (elementos refractarios),
es preferible utilizar oxigeno u óxido nitroso como agente oxidante, ya que se alcanzan
temperaturas de hasta 3.100 ºC. Si la llama es relativamente “rica” en combustible se
aumenta la sensibilidad, mientras que si la llama es “pobre” en combustible es más
caliente.
La llama tiene un perfil como
el que se muestra en la Figura 4, con Cono más externo
una zona de combustión primaria, una
zona interconal y una zona de Región interconal
combustión secundaria. Es en la zona
interconal donde habitualmente se Zona de combustión primaria
realizan las medidas, aunque la altura
en la llama en la cual se observa la
máxima absorción atómica dependerá
del elemento que se mida y de los
caudales de muestra, de combustible y
de oxidante. Figura 4. Regiones de la llama.
En espectroscopía de absorción atómica son frecuentes las interferencias, las
cuales pueden ser de dos tipos: espectrales y químicas. Se presentan interferencias
espectrales cuando la señal del analito se solapa con señales debidas a otros elementos o
moléculas que hay en la muestra o con señales debidas a la llama. La espectroscopía
atómica debe incorporar, por tanto, una corrección de fondo para distinguir la señal del
analito de la absorción, emisión y dispersión óptica de la matriz de la muestra o de la
llama. Esta corrección puede hacerse mediante una fuente continua, una lámpara de
deuterio por ejemplo, y consiste en pasar la radiación emitida por dicha lámpara a través
de la llama, alternando con la lámpara de cátodo hueco. La radiación procedente de la
lámpara de cátodo hueco es absorbida por el analito y absorbida y dispersada por el
fondo, mientras que la procedente de la lámpara de deuterio solo es absorbida y
dispersada por el fondo. La diferencia entre ambas absorbancias es la debida al analito.
Sin embargo, las interferencias químicas son las más comunes y se producen cuando
durante la atomización ocurren diversos procesos químicos que alteran la absorción
del analito. Entre las interferencias químicas cabe destacar la formación de
compuestos poco volátiles que disminuyen el grado de atomización del analito. Estas
interferencias pueden evitarse adicionando a la muestra agentes liberadores, que
interaccionan con el interferente evitando así que éste lo haga con el analito, o agentes
protectores que forman con el analito especies estables volátiles.
La espectroscopía de absorción atómica es una técnica muy sensible que

permite la determinación cuantitativa de un gran número de elementos. Sin embargo,
la absorción que se observa en los espectrofotómetros de llama puede variar de forma
importante de un equipo a otro, utilizando incluso el mismo tipo de muestra. Esto es
debido a la influencia de numerosas variables como la temperatura de la llama, la
sensibilidad del detector, etc.
Debido a esto, para obtener

resultados fiables es necesario el
calibrado de los equipos mediante el 1
Abs
uso de patrones. Para ello suele 0,9

0,8
recurrirse al método de la adición estándar Concentración de 0,7
analito en la disolución 0,6
ya que permite contrarrestar, problema 0,5
parcialmente o por completo, las 0,4

0,3
interferencias químicas y espectrales 0,2

0,1
producidas por la matriz de la muestra. 0
-3 -2 -1-0,1 0 1 2 3 4 5 6 7 8
Este método (Figura 5) consiste en C analito añadido
adicionar cantidades conocidas de

analito a la disolución problema. A
partir del aumento de señal producido Figura 5. Ejemplo de una recta de
se deduce cuánto analito había en la calibrado por el método de la
disolución problema de la muestra. adición estándar.

Espectroscopía de AA - Determinación de cobre en aleaciones metálicas
Práctica 6. DETERMINACIÓN DE COBRE EN
ALEACIONES METÁLICAS MEDIANTE
ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
6.1. Introducción
El cobre es un elemento químico de número atómico 29 y símbolo Cu. Es
uno de los metales más importantes industrialmente. De coloración rojiza es dúctil,
maleable y buen conductor de la electricidad. Es posible que el cobre haya sido el
metal más antiguo empleado, pues se han encontrado objetos de cobre del 8700 a.C.
En la mayoría de sus compuestos presenta estados de oxidación bajos, siendo el más
común el +2. Expuesto al aire, el color rojo salmón inicial se torna rojo violeta por la
formación de óxido de cobre (I) (Cu2O) para ennegrecerse, posteriormente, por la
formación de óxido de cobre (II) (CuO).
Existen diversas aleaciones metálicas basadas en cobre, entre las que cabe
destacar el bronce y el latón. El bronce es el nombre con el que se denominan toda
una serie de aleaciones metálicas que tienen como base el cobre, entre un 3-20 % de
estaño y proporciones variables de otros elementos como zinc, aluminio, antimonio y
fósforo. Por su elevado calor específico, el mayor de todos los sólidos, se emplea en
aplicaciones de transferencia de calor. Presenta una buena ductilidad y buena
resistencia al desgaste y la corrosión. Actualmente, se emplea en aleaciones
conductoras del calor y en baterías eléctricas, principalmente.
El latón es una aleación de cobre y zinc. Es más duro que el cobre, es dúctil y
puede forjarse en planchas finas. Su maleabilidad varía según la composición y la
temperatura, y es distinta si se mezcla con otros metales, incluso en cantidades
mínimas. Algunos tipos de latón son maleables únicamente en frío, otros sólo en
caliente, y algunos no lo son a ninguna temperatura. Las aplicaciones de los latones
abarcan los campos más diversos, desde el armamento, pasando por la ornamentación,
hasta los tubos de condensador y terminales eléctricos.
Puesto que las propiedades de los latones y bronces pueden variar en función
de su contenido en cobre, la determinación de este metal en estas aleaciones adquiere
especial interés. Así, este metal puede determinarse por métodos gravimétricos,
volumétricos o mediante el empleo de diversas técnicas instrumentales tales como la
espectroscopía de absorción molecular UV-Vis o la espectroscopía de absorción
atómica (AAS). En esta práctica se pretende determinar el contenido de cobre en una
aleación metálica (muestra de bronce o de latón). Para ello, previamente se deberá
realizar una disolución ácida de la muestra. Posteriormente, el cobre se determinará en
la disolución problema obtenida mediante lectura de la absorbancia en un
espectrofotómetro de absorción atómica. utilizando una llama de acetileno-aire.

6.2. Objetivos
2. Aprender el manejo de un espectrofotómetro de absorción atómica.
3. Determinar el contenido de cobre en muestras de bronce y latón.

Kitasato de 500 mL Matraz aforado de 50, 100, 250 y 1000 mL
Placa filtrante de poro nº 4 Pipetas de 1, 2, 5 y 10 mL
Pipeta Pasteur con tetina de goma Probeta de 50 mL
Varilla de vidrio Vasos de precipitados de 100, 250 mL
Vidrio de reloj o pesasustancias Embudo de vidrio
Balanza analítica Estufa
Goma adaptadora Placa calefactora
Sistema de succión a vacío Espectrofotómetro de absorción atómica
Lámpara de cátodo hueco de cobre
6.4. Reactivos
Ácido nítrico
Nitrato de cobre(II) trihidratado
Agua Milli-Q
Acetona
Muestra de bronce
Muestra de latón

6.5.1. Precauciones a tener en cuenta en la práctica:
a) La disolución de la muestra debe realizarse en campana extractora debido a la

producción de vapores nitrosos de color marrón que son altamente tóxicos.
b) Una vez finalizada la práctica, el residuo sólido generado se desechará al
recipiente de residuos sólidos.
c) Al finalizar, la práctica. la placa filtrante se lavará con ácido nítrico comercial,
para eliminar restos de precipitado, y después con abundante agua destilada.
Estas operaciones deben realizarse con el sistema de succión a vacío.
d) El equipo de absorción atómica debe manejarse con mucha precaución, por
emplear gases explosivos como el acetileno, atendiendo en todo momento a
las indicaciones del profesor. Evitar el contacto visual con la llama y lámparas.

Disolución ácido nítrico al 1 % (v/v). Disolver 10 mL de ácido nítrico comercial en

agua Milli-Q. Enrasar con agua Milli-Q hasta 1000 mL.
Disolución de cobre 1.000 ppm (p/v). Disolver 0,9602 g de nitrato de cobre(II)
trihidratado en 50 mL de disolución de ácido nítrico al 1 %. Transferir la disolución a
un matraz aforado de 250 mL y enrasar con disolución de ácido nítrico al 1 %.
Disolución de cobre 100 ppm (p/v). Transferir 10 mL de la disolución de cobre(II)
de 1.000 ppm a un matraz aforado de 100 mL y enrasar con la disolución de ácido
nítrico al 1 %.
6.5.3. Determinación de cobre:
6.5.3.1. Disolución de la muestra
Pesar en una balanza analítica del orden de 1 g de bronce o de latón (anotar el

peso exacto). Si la muestra de bronce o de latón no es en polvo y se encuentra en
trozos sólidos, éstos se deberán lavar con acetona para eliminar restos de materia
orgánica que puedan contener. Posteriormente, se secará en la estufa durante unos
instantes para eliminar la acetona.
La disolución de la muestra (Figura 6.1a) se lleva a cabo en un vaso de

precipitados de 250 mL, adicionando sobre ella 10 mL de agua destilada y 15 mL de
HNO3 comercial. Se calienta la muestra a 100 ºC en una placa calefactora para
completar la disolución de la misma. Concluido el proceso se obtiene una disolución
de color azul (la disolución de la muestra debe realizarse en campana extractora
debido a la producción de vapores nitrosos de color marrón que son altamente
tóxicos, Figura 6.1b).
(a) (b)
Figura 6.1. (a) Proceso de disolución de la muestra. (b) Detalle de los vapores
nitrosos.

En las muestras de latón la
disolución azul se transfiere
directamente a un matraz aforado de
100 mL. Se arrastran los posibles
restos que queden en el vaso de
precipitados con disolución de ácido
nítrico al 1 % y se enrasa el matraz
aforado con disolución de ácido
nítrico al 1 %. En el caso de las
muestras de bronce se observará la
aparición de un precipitado de color
blanco en la disolución azul resultante.
El precipitado se eliminará por
filtración con placa filtrante del nº 4 y
con sistema de succión a vacío (Figura
6.2). El filtrado se lavará con
disolución de ácido nítrico al 1 % en
caliente. Una vez filtrada la disolución
se transfiere a un matraz aforado de
100 mL. El kitasato se lavará con
disolución de ácido nítrico al 1 % y se
transferirán las aguas de lavado al Figura 6.2. Filtración de la
matraz aforado de 100 mL, enrasando disolución de la muestra de bronce.
con disolución de ácido nítrico al 1 %.
A partir de las disoluciones problema de bronce y latón obtenidas se

prepararán las disoluciones de trabajo I y II, para ello deberemos realizar las siguientes
diluciones:
Disolución de trabajo I: Tomar 1 mL de la disolución problema y trasferirlo a un
matraz aforado de 100 mL, completándose con disolución de ácido nítrico al 1%.
Disolución de trabajo II: Se toman 5 mL de la disolución de trabajo I y se
trasfieren a un matraz aforado de 100 mL, enrasándose con disolución de ácido nítrico
al 1 %. Esta disolución de trabajo II será la que empleemos para realizar la medida en
el espectrofotómetro.
6.5.3.2. Preparación de las disoluciones patrón
Curva analítica
A partir de la disolución de cobre(II) 100 ppm se toman 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL

que se transfieren a matraces aforados de 50 mL, completándose los matraces con
disolución de ácido nítrico al 1 %.

Método de adición estándar
A partir de la disolución de cobre(II) 100 ppm se toman 0, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2
mL que se transfieren a matraces aforados de 100 mL. Se añaden en cada matraz 2 mL
de la disolución de trabajo I y se completan los matraces con disolución de ácido
nítrico al 1 %.
6.5.3.3. Análisis espectrofotometrico
En la Figura 6.3a se muestra el espectrofotómetro de absorción atómica que

se utilizará en la práctica.
(a) (b)
Figura 6.3. (a) Espectrofotómetro de absorción atómica. (b) Detalle de las
válvulas de ajuste del caudal del combustible y oxidante.
A continuación se indican los pasos a seguir para poder llevar a cabo las medidas
en el instrumento:
(a) Encender el equipo de

absorción atómica.
(b) Cargar el método de trabajo
adecuado.
(c) Encender la lámpara de
cátodo hueco de cobre.
(d) Alinear el mechero de flujo
laminar con respecto al haz de
radiación (Figura 6.4).
Figura 6.4. Alineación del

mechero con respecto al haz de
radiación.

(e) Abrir los gases combustible (acetileno) y oxidante (aire) y encender el
mechero presionando durante unos segundos el botón de encendido.
Encender la campana extractora.
(f) Ajustar la estequiometría de la llama, es decir, el caudal de acetileno y aire
hasta conseguir una llama oxidante (Figura 6.3b).
(g) Introducir el capilar del

nebulizador (Figura 6.5) en
una disolución patrón de
cobre. Ajustar la proporción
acetileno-aire y la altura del
haz de radiación con respecto
a la llama hasta conseguir la
máxima absorbancia.
(h) Introducir el capilar del
nebulizador en la disolución
patrón de concentración cero
(blanco) y ajustar a cero la
absorbancia presionando
simultáneamente las teclas Figura 6.5. Introducción de la
“alt” y “read” . disolución patrón.
(i) Proceder con la lectura de las disoluciones patrón de cobre, en orden

creciente de concentraciones, en el espectrofotómetro de absorción atómica.
Anotar las lecturas de absorbancia de cada una de las disoluciones medidas.
(j) Finalmente, se introducirán las disoluciones de trabajo II de bronce o latón y
se anotarán los valores de su absorbancia.
6.6. Resultados
1. Construir las rectas de calibrado con los datos de absorbancia obtenidos a
ordenada en origen, pendiente y coeficiente de correlación de dichas rectas.
2. Determinar el % en peso de cobre que contiene la muestra de latón o bronce,
utilizando los dos métodos de calibrado.
4. Comentar los resultados obtenidos en cuanto al diferente % de cobre
obtenido de las muestras de bronce y latón analizadas.

6.7. Cuestiones
1. Inicialmente, la disolución que se obtiene al disolver la muestra es verde. Sin
embargo, al finalizar el proceso de disolución ésta es de color azul, ¿a que se
debe este cambio de color?
2. ¿Por qué se debe lavar el precipitado de estaño con disolución de ácido nítrico
en caliente?. ¿Cuál es el precipitado de estaño que se forma?

Espectroscopía de AA - Determinación de manganeso en acelga
Práctica 7. DETERMINACIÓN DE MANGANESO EN
ACELGA MEDIANTE ESPECTROSCOPÍA DE
ABSORCIÓN ATÓMICA
7.1. Introducción
Los minerales son nutrientes indispensables para el buen funcionamiento del
organismo humano ya que su carencia puede provocar serios problemas de salud. En
cuanto a su función, muchos de ellos actúan como cofactores de enzimas para
controlar la presión osmótica de fluidos celulares y el pH, o como parte constitutiva
de algunas macromoléculas Los minerales abundan en todos los alimentos, sin
embargo, en alimentos de origen vegetal su contenido depende en gran medida de las
características de cada especie y de las condiciones de cultivo (composición del suelo y
agua utilizada).
La perdida de minerales en los procesos tecnológicos es muy pequeña en

comparación con otros nutrientes como las vitaminas. Debido a que son
hidrosolubles, la mayor parte de las pérdidas de minerales se producen por lixiviación
en cualquier etapa que exista un contacto del alimento con agua (principalmente
durante el escaldado y la cocción). Sin embargo, también se producen pérdidas
importantes por separaciones físicas que tienen lugar durante la preparación de los
alimentos ya que, en muchos casos, su distribución en los mismos no es homogénea.
Un ejemplo característico es la perdida de minerales que se produce durante la
molienda de los cereales, pelado de frutas, etc.
El manganeso es un microelemento, esencial para todas las formas de vida.

En el organismo humano está presente en distintas enzimas que participan en la
síntesis de las grasas y participa en el aprovechamiento de ciertas vitaminas. Aunque su
presencia en los alimentos es pequeña, abunda en alimentos como pescados y
crustáceos, cereales integrales y legumbres. En otros alimentos como la acelga su
distribución no es homogénea pudiendo llegar a ser seis o más veces superior el
contenido en la hoja que en el tallo o penca.
La determinación de manganeso en los alimentos puede llevarse a cabo por

métodos gravimétricos, volumétricos o mediante el empleo de diversas técnicas
instrumentales tales como la espectrofotometría de absorción molecular UV-Vis o la
espectrofotometría de absorción atómica. En esta práctica se pretende determinar el
contenido de manganeso en acelga, diferenciado entre el contenido de manganeso en
hoja y en tallo. Para ello, previamente se deberá realizar una mineralización por vía
seca de muestra. Posteriormente, el manganeso se determinará mediante lectura de la
absorbancia de la disolución problema resultante en un espectrofotómetro de
absorción atómica utilizando una llama de acetileno-aire.

7.2. Objetivos
3. Determinar el contenido de manganeso en acelga.

Matraz aforado de 50 y 100 mL Kitasato de 500 mL
Pipetas de 1, 2, 5 y 10 mL Placa filtrante de poro nº 4
Probeta de 50 mL Pipeta Pasteur con tetina de goma
Vasos de precipitados de 100, 250 mL Varilla de vidrio
Embudo de vidrio Vidrio de reloj o pesasustancias
Crisol de porcelana Balanza analítica
Goma adaptadora Estufa
Placa calefactora Mufla
Tijeras Sistema de succión a vacío
Lámpara de cátodo hueco de Mn Espectrofotómetro de absorción atómica
7.4. Reactivos
Ácido clorhídrico
Sulfato de manganeso(II) tetrahidratado
Agua destilada
Muestra de acelga

a) La disolución de la muestra calcinada debe realizarse en campana extractora

debido a la producción de vapores tóxicos.
b) Para evitar confusiones identifique claramente todas las disoluciones que vaya
preparando.
c) Al finalizar, la práctica la placa filtrante se lavará con ácido nítrico comercial y
después con abundante agua destilada. Estas operaciones de lavado deben
realizarse con el sistema de succión a vacío.
d) El equipo de absorción atómica debe manejarse con mucha precaución, por
las indicaciones del profesor. Evitar el contacto visual con la llama o las
lámparas.

Disolución de ácido clorhídrico 1:1 (v/v). Se toman 25 mL de ácido clorhídrico

comercial, se transfieren a un matraz aforado de 50 mL y se completa con agua
Disolución de ácido clorhídrico al 1 % (v/v). Se toman 10 mL de ácido clorhídrico
comercial, se transfieren a un matraz aforado de de 1000 mL y se completa con agua
Disolución de manganeso 5.000 ppm (p/v). Disolver 1,8011 g de sulfato de
manganeso (II) tetrahidratado en 50 mL de disolución de ácido clorhídrico al 1 %.
Transferir la disolución a un matraz aforado de 100 mL y enrasar con disolución de
ácido clorhídrico al 1 %.
Disolución de manganeso 50 ppm (p/v). Transferir 1 mL de la disolución de
manganeso de 5.000 ppm (p/v) a un matraz aforado de 100 mL y enrasar con la
disolución de ácido clorhídrico al 1 %.
7.5.3. Determinación de manganeso:
7.5.3.1. Preparación de la muestra
Trocear la muestra de acelga con unas tijeras y separar las hojas del tallo.
Introducir en un crisol de porcelana, aproximadamente, 10g de las hojas y en otro 10g
del tallo (anotar el peso exacto, Pi) y secar la muestra en estufa a 105 ºC hasta peso
constante (Pf).
Pesar en un crisol de
porcelana en torno a 1,5 g de hojas
secas o 2 g de tallo seco (anotar el peso
exacto). Calcinar la muestra a 440 ºC
durante 24 horas hasta su reducción a
cenizas. Transferir las cenizas
resultantes a un vaso de precipitados,
añadir 20 mL de HCl (1:1) y calentar
durante 10 minutos agitando con una
varilla de vidrio de vez en cuando
(tenga cuidado de no llevar a
sequedad la muestra, realice esta
operación en campana). Filtrar con
placa filtrante del nº 4 y sistema de
succión a vacío (Figura 7.1), lavando el
con la disolución de ácido clorhídrico
al 1 % en caliente.
Figura 7.1. Filtración de la
disolución de la muestra.

Una vez filtrada, la disolución se transfiere a un matraz aforado de 100 mL.
Lavar el kitasato con la disolución de ácido clorhídrico al 1 % y transferir los líquidos
de lavado al matraz aforado de 100 mL, enrasando con disolución de ácido clorhídrico
al 1 %. Esta disolución será la que empleemos para realizar la medida en el
espectrofotómetro.
Curva analítica
A partir de la disolución de manganeso(II) 50 ppm (p/v) se toman 0, 1, 2, 3, 4

y 5 mL que se transfieren a matraces aforados de 50 mL, completándose los matraces
con disolución de ácido clorhídrico al 1 %.
Método de adición estándar
A partir de la disolución de manganeso(II) 50 ppm se toman 0, 1, 2, 3, 4 y 5

mL que se transfieren a matraces aforados de 100 mL. Se añaden en cada matraz 4 mL
de la disolución problema de hojas de acelga o 10 mL de la disolución problema de
tallo de acelga. Finalmente, se completan los matraces con disolución de ácido
clorhídrico al 1 %.
7.5.3.3. Análisis espectrofotometrico
En la Figura 7.3a se muestra el espectrofotómetro de absorción atómica que

se utilizará en la práctica.
(a) (b)
Figura 7.3. (a) Espectrofotómetro de absorción atómica. (b) Detalle de las
válvulas de ajuste del caudal del combustible y oxidante.

en el instrumento:
(a) Encender el equipo de absorción atómica.
(b) Cargar el método de trabajo adecuado.
(c) Encender la lámpara de cátodo hueco de manganeso.
(d) Alinear el mechero de flujo laminar con respecto al haz de radiación (Figura
7.4.a).

(f) Ajustar la estequiometría de la llama, es decir, el caudal de acetileno y aire

hasta conseguir una llama oxidante (Figura 7.3.b).
(g) Introducir el capilar del nebulizador (Figura 7.4.b) en una disolución patrón
de manganeso. Ajustar la proporción acetileno-aire y la altura del haz de
radiación con respecto a la llama hasta conseguir la máxima absorbancia.
(h) Introducir el capilar del nebulizador en la disolución patrón de concentración

cero (blanco) y ajustar la absorbancia a cero presionando simultáneamente las
teclas “alt” y “read” .
.
(a) (b)
Figura 7.4. (a) Alineación del mechero con respecto al haz de radiación. (b)
Introducción de la disolución patrón.

(i) Proceder con la lectura de las disoluciones patrón de manganeso, en orden
creciente de concentraciones, en el espectrofotómetro de absorción atómica.
Anotar las lecturas de absorbancia de cada una de las disoluciones medidas.
(j) Finalmente, se introducirá la disolución problema de la muestra de acelga.
7.6. Resultados
1. Determinar el contenido de agua en % en peso (humedad) en las hojas y tallo
de acelga.
2. Construir las rectas de calibrado con los datos de absorbancia obtenidos a
ordenada en origen, pendiente y coeficiente de correlación de dichas rectas.
3. Utilizando las dos métodos de calibrado, determinar el % en peso de
manganeso en las hojas y tallo de acelga. Expresar los resultados sobre
sustancia húmeda y sobre sustancia seca.
5. Comentar los resultados obtenidos en cuanto al diferente contenido en
manganeso en la hoja y tallo de la muestra de acelga analizada.
7.7. Cuestiones
1. ¿Qué error cometeríamos si la acelga analizada tuviera gran cantidad de arena?
2. ¿Por qué se debe secar la acelga hasta peso constante antes de calcinarla?
3. ¿Cuál es el objetivo de calcinar la acelga a 440 ºC?

Espectroscopía de AA - Efecto de llama y disolvente en determinación de Mg
Práctica 8. EFECTO DE LA LLAMA Y DISOLVENTE EN
LA DETERMINACIÓN DE MAGNESIO MEDIANTE
ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
8.1. Introducción
La selección adecuada del combustible y oxidante, así como la proporción de
mezcla de ambos, adquiere especial importancia en espectroscopía de absorción
atómica de llama (FAAS), puesto que de ello depende que la atomización de la
muestra sea o no adecuada. Por lo general, el combustible y oxidante se mezclan en
proporciones estequiométricas, aunque para determinados analitos puede ser necesaria
una llama “rica” o “pobre” en combustible. Por otro lado, hay que tener en cuenta
que las llamas solo son estables en ciertos intervalos de caudal en los que la velocidad
de combustión se iguala al caudal de la mezcla combustible-oxidante. Este caudal, que
dependerá del tipo de combustible y oxidante, se controla en el instrumento, por lo
general, mediante válvulas de aguja y su medida se realiza mediante un rotámetro.
La combinación más frecuente de combustible-oxidante es acetileno-aire, sin

embargo, el uso de esta llama limita la temperatura máxima de trabajo a unos 2.400 ºC.
Debido a esto, para atomizar elementos refractarios es preferible utilizar óxido nitroso
en vez de aire, ya que en estas condiciones es posible alcanzar temperaturas de hasta
unos 3.100 ºC. El tipo de combustible y oxidante utilizado, además de la proporción
en la que se mezclan, influye de manera importante en el aspecto y tamaño relativo de
las distintas regiones de la llama. Así por ejemplo, en llamas de acetileno-óxido nitroso
la región interconal, ampliamente utilizada en espectroscopía, puede alcanzar varios
centímetros de altura. Puesto que cada analito presenta máxima absorbancia en una
zona concreta de la llama, para obtener la máxima sensibilidad analítica es muy
importante realizar las medidas en la zona adecuada de la llama.
Otra variable que permite incrementar de manera importante la absorbancia

de los analitos en FAAS es el tipo de disolvente empleado, puesto que esta aumenta
en presencia de disolventes orgánicos como alcoholes de bajo peso molecular, ésteres
y cetonas. Este efecto se atribuye, principalmente, al aumento de la eficacia del
nebulizador y a la evaporación más rápida de este tipo de disolventes. Hay que tener
en cuenta que cuando se utilizan disolventes orgánicos se han de emplear relaciones
combustible-oxidante menores, para compensar la presencia de la sustancia orgánica
añadida. El inconveniente de esto es que las mezclas “pobres” en combustible
producen llamas de menor temperatura y, como consecuencia, aumenta la posibilidad
de interferencias químicas.
En la presente práctica se estudiará el efecto de la relación combustible-

oxidante, de la altura de la llama y del tipo de disolvente en la determinación de
magnesio mediante FAAS.

8.2. Objetivos
2. Entender la importancia de la proporción combustible-oxidante en la
llama y de la altura en la llama a la que se realizan las medidas en las
determinaciones mediante FAAS.
3. Conocer el efecto que provoca el tipo de disolvente en la sensibilidad del
método.

Matraz aforado de 50, 100 y 250 mL Pipetas de 1 y 5 mL
Pipeta Pasteur con tetina de goma Varilla de vidrio
Vasos de precipitados de 100 y 250 mL Embudo de vidrio
Vidrio de reloj o pesasustancias Lámpara de cátodo hueco de magnesio
Balanza analítica Espectrofotómetro de absorción atómica
8.4. Reactivos
Nitrato de magnesio(II) hexahidratado
Agua Milli-Q
Etanol

a) El equipo de absorción atómica debe manejarse con mucha precaución, por

las indicaciones del profesor. Evitar el contacto visual con la llama y lámparas.
Disolución de magnesio 1.500 ppm (p/v) en agua. Disolver 1,5750 g de nitrato de

magnesio hexahidratado en agua Milli-Q. Una vez disuelto transferir la disolución a
un matraz aforado de 100 mL y enrasar con agua Milli-Q.
Disolución de magnesio 1.500 ppm (p/v) en etanol. Disolver 1,5750 g de nitrato
de magnesio hexahidratado en etanol. Una vez disuelto transferir la disolución a un
matraz aforado de 100 mL y enrasar con etanol.
Disolución de magnesio 6 ppm (p/v) en agua. Tomar 1 mL de la disolución de
magnesio 1.500 ppm en agua, transferir a un matraz aforado de 250 mL y enrasar con
agua Milli-Q.

Disolución de magnesio 6 ppm (p/v) en etanol. Tomar 1 mL de la disolución de
magnesio 1.500 ppm en etanol, transferir a un matraz aforado de 250 mL y enrasar
con etanol.
8.5.3. Determinación de magnesio:
A partir de cada una de las disoluciones de magnesio de 6 ppm (p/v) se

toman 0, 1, 2, 3, 4, y 5 mL que se transfieren a matraces aforados de 50 mL,
completándose los matraces con agua o etanol (para evitar confusiones etiquete
todas las disoluciones que vaya preparando).
En la Figura 8.1 se muestra el espectrofotómetro de absorción atómica que se

utilizará en la práctica.
(a) (b)
Figura 8.1. (a) Espectrofotómetro de absorción atómica. (b) Detalle de: (1)
válvula de ajuste del caudal, (2) mando de ajuste de la altura del mechero, (3)
rotámetro.
en el instrumento:
(a) Encender el equipo de absorción atómica.

(b) Cargar el método de trabajo adecuado.
(c) Encender la lámpara de cátodo hueco de magnesio.
(d) Alinear el mechero de flujo laminar con respecto al haz de radiación (Figura
8.2.a).

Efecto de la estequiometría de la llama
(a) Mediante la válvula (1), ajustar la proporción de acetileno en la llama hasta

conseguir en el rotámetro (3) una lectura de 1,5 (Figura 8.1).
(b) Introducir el capilar del nebulizador (Figura 8.2.b) en la disolución en blanco

(agua) y ajustar la absorbancia a cero presionando simultáneamente las teclas
“alt” y “read”.
(a) (b)
Figura 8.2. (a) Alineación del mechero con respecto al haz de radiación. (b)
Introducción de la disolución patrón.
(c) Proceder con la lectura de la absorbancia para la disolución patrón de

magnesio de 0,24 ppm en agua.
(d) Repetir los pasos indicados en los apartados (b) y (c) ajustando previamente
la proporción de acetileno en la llama hasta conseguir en el rotámetro lecturas
de 1, 0,5 y 0,25.
(e) Repetir los pasos indicados en los apartados (a) y (d), utilizando la disolución
patrón de magnesio de 0,24 ppm en etanol, después de ajustar la absorbancia
a cero con etanol.
Efecto de la altura de la llama
(a) Una vez ajustada la estequiometría de la llama a su valor óptimo, ajustar la

altura del mechero con el mando (2) hasta conseguir una lectura en la escala
de 20 mm (Figura 8.1).
(c) Proceder con la lectura de la absorbancia para la disolución patrón de
magnesio de 0,24 ppm en agua.
(d) Repetir los pasos indicados en los apartados (b) y (c) ajustando previamente
la altura del mechero hasta conseguir en la escala lecturas de 15, 10, 7,5, 5 y 0
mm.
(f) Repetir los pasos indicados en los apartados (a) y (d), utilizando la disolución
patrón de magnesio de 0,24 ppm en etanol, después de ajustar la absorbancia
a cero con etanol.
Efecto del disolvente
(a) Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en los apartados anteriores,

ajustar en el equipo la proporción acetileno-aire y la altura del haz de
radiación con respecto a la llama para conseguir la máxima absorbancia
cuando se utiliza agua como disolvente (Figura 8.1).
(c) Proceder con la lectura de las disoluciones patrón de magnesio en agua, en
orden creciente de concentraciones, en el espectrofotómetro de absorción
atómica. Anotar las lecturas de absorbancia de cada una de las disoluciones
medidas.
(d) Finalmente, teniendo en cuenta los resultados obtenidos en los apartados
anteriores, ajustar en el equipo la proporción acetileno-aire y la altura del haz
de radiación con respecto a la llama para conseguir la máxima absorbancia
cuando se utiliza etanol como disolvente (Figura 8.1).
(e) Repetir los pasos (a) – (c) utilizando las disoluciones patrón de magnesio en
etanol, después de ajustar la absorbancia a cero con etanol. Anotar las lecturas
de absorbancia de cada una de las disoluciones medidas.
8.6. Resultados
1. Representar gráficamente la variación de la absorbancia frente a la proporción
de acetileno en la llama (lectura en el rotámetro) para la disolución de
magnesio en agua y en etanol.
2. Representar gráficamente la variación de la absorbancia frente a la altura de
llama para la disolución de magnesio en agua y en etanol.
3. Construir una recta de calibrado con los datos de absorbancia obtenidos a
ordenada en origen, pendiente y coeficiente de correlación de dicha recta.

8.7. Cuestiones
1. ¿Cómo se afectarían las lecturas de absorbancia si la estequiometría de la
llama no se hubiese ajustado convenientemente?
2. ¿Qué disolvente permite obtener una mayor sensibilidad de calibración?
3. ¿La altura en la llama a la que se observa la máxima absorción variará si lo que
vamos a determinar es cromo en vez de magnesio?

Refractometría – Fundamento teórico
IV. REFRACTOMETRÍA
Fundamento teórico
La refractometría es una técnica instrumental óptica que se basa en la medida del
índice de refracción (η). Este parámetro puede utilizarse para caracterizar un analito,
ya que existen muy pocas sustancias que tengan η idénticos a una temperatura y
longitud de onda dada. Por tanto su conocimiento, junto con el de otros parámetros
(punto de fusión, ebullición, ...) es de gran utilidad para identificar una sustancia o
comprobar su pureza. Además, la medida del índice de refracción puede llevarse a
cabo de manera rápida y sencilla, requiere una pequeña cantidad de muestra y no es
una técnica destructiva.
Cuando un rayo de luz pasa de un medio a otro de distinta densidad

experimenta un cambio de dirección. Este fenómeno recibe el nombre de refracción y es
debido a la distinta velocidad de la luz en ambos medios, como consecuencia de su
distinta interacción con los átomos y moléculas de los mismos (Figura 1).
i
M edio A
M ed io B
Figura 1. Refracción de un haz de luz al pasar de un medio A a otro B.
La relación entre los senos de los ángulos de incidencia (i) y de refracción (r)
del haz de luz al pasar de un medio A (vacío) a otro medio B se denomina índice de
refracción absoluto (η) que, según la ley de Snell, es igual al cociente de las velocidades
del haz de luz en ambos medios (c y vB, velocidades en el vacío y en el medio B,
respectivamente):
seni c λ
η= = = 0
sen r v B λB
siendo λ0 la longitud de onda de la radiación incidente en el vacío y λB la longitud de
onda en el medio B cuyo índice de refracción es η. El η es un número sin
dimensiones mayor que la unidad 1 ya que c > ν, al ser siempre el segundo medio más
denso que el vacío. Cuando el segundo medio es el agua, el η ≈ 1,333 utilizando la
línea D del sodio y realizando la medida a temperatura ambiente. Para otros líquidos
orgánicos los valores de η oscilan entre 1,3 y 1,7.
Las variables más importantes a la hora de determinar el η son la temperatura y
la longitud de onda de la radiación incidente, parámetros que han de controlarse
estrictamente y especificarse siempre. El η de una sustancia varía con la longitud de
onda, aunque de manera no lineal. Se suele medir en la región visible del espectro y,
para obtener mediciones precisas, es necesario el uso de luz monocromática. Una
fuente muy utilizada es la lámpara de descarga de sodio que emite un doblete amarillo
intenso (línea D) a 589,0 y 589,6 nm. También pueden utilizarse en trabajos de rutina
fuentes de luz blanca (lámpara de tungsteno), pero en este caso se requieren prismas
para separar la radiación amarilla, eliminando las de las demás longitudes de onda. En
cuanto a la temperatura, esta es otra variable importante a controlar, ya que se sabe
que el η de la mayoría de los líquidos disminuye aproximadamente 0,00045 unidades
al aumentar un ºC la temperatura. Este efecto está relacionado con la disminución de
la densidad y de la constante dieléctrica del medio con el aumento de la temperatura.
Así, para hacer las medidas del η elevada precisión (cuatro cifras decimales) la muestra
debe mantenerse a temperatura constante, con una variación no superior a ± 0,2ºC.
Los instrumentos que se utilizan para la medida del η reciben el nombre de

refractómetros y pueden ser de distintos tipos, aunque la mayoría se basan en la
medida del ángulo límite. Entre estos cabe destacar el refractómetro de Abbe (Figura 2).
Figura 2. Refractómetro de Abbe.
Este instrumento, consta de dos prismas P1 y P2 que están articulados, de

manera que una pequeña cantidad de muestra puede colocarse entre ambos (Figura 3).
La luz reflejada por un espejo penetra en el prisma de difusión (P1), atraviesa la
muestra y entra en el prisma de refracción (P2). El ángulo (α) con el que emerge el rayo
límite del prisma de refracción depende del η de éste (valor conocido), de la longitud
de onda utilizada y del η de la muestra. El rayo límite es el rayo más tangencial que
puede entrar en P2 y se denomina así porque establece el límite entre las porciones de
luz y sombra del campo visual en el ocular. Cuando el refractómetro utiliza luz blanca,
para evitar que aparezca un límite borroso y colorido entre los campos iluminado y

oscuro, debido a las diferencias entre los índices de refracción para la luz de distintas
longitudes de onda, se emplean dos prismas, llamados primas compensadores o de
Amici, que se colocan uno encima del otro enfrente del ocular. Mediante una escala
graduada proyectada en la parte superior del prisma de refracción P2 que puede
observarse a través del ocular, es posible medir el ángulo α. Para facilitar la lectura, en
la mayoría de los instrumentos la escala está graduada en unidades de η hasta 0,001
unidades y con el amplificador se puede determinar la siguiente cifra decimal.
Figura 3. Detalle de los prismas P1 y P2 del refractómetro y fuente de radiación.
La refractometría es una técnica que puede utilizarse con fines cualitativos y

cuantitativos. El η es una constante física ampliamente utilizada en la identificación de
sustancias y como criterio de pureza. Para su determinación se necesitan una pocas
gotas de muestra, aunque para obtener medidas seguras a partir de la cuarta cifra
decimal es importante realizar un calibrado periódico del instrumento y controlar
estrictamente la temperatura. Para la calibración suele utilizarse el agua (ηD25 =
1,33250). Por otro lado, la medida del η permite llevar a cabo análisis cuantitativos en
disoluciones que contienen un único analito ya que en estos casos el η es directamente
proporcional a la concentración:
η - η0 = k . C
donde η es el índice de refracción de la disolución, η0 es el índice de refracción del

disolvente, C es la concentración expresada, por lo general, en g/100 mL y k es una
constante de proporcionalidad. Para conocer el valor de la constante de
proporcionalidad se construye una recta de calibrado con disoluciones patrón
representando η - η0 frente a la concentración de dichas disoluciones. También es
posible el análisis cuantitativo de mezclas binarias homogéneas de constituyentes
conocidos.

Refractometría - Identificación y control de pureza de aceites vegetales
Práctica 9. IDENTIFICACIÓN Y CONTROL DE PUREZA
DE ACEITES VEGETALES COMESTIBLES MEDIANTE
REFRACTOMETRÍA
9.1. Introducción
Los aceites y grasas vegetales comestibles son aquellos obtenidos a partir de
frutos de vegetales (aceituna, coco, palma, …) o de diversas semillas oleaginosas
(girasol, soja, maíz, colza, cacahuete, palmiste, etc). Las características y composición
del fruto o semilla oleaginosa son muy diferentes. La aceituna contiene un elevado
porcentaje de agua y un bajo porcentaje de proteína, mientras que en las semillas
ocurre lo contrario. Sin embargo, en ambos casos el contenido de lípidos (glicéridos,
ácidos grasos libres, fosfolípidos, esteroles, etc) es elevado.
El grado de instauración de los ácidos grasos es una característica

fundamental en los aceites y grasas vegetales. Así, por ejemplo, la grasa de semillas de
palma (palmiste) contiene un elevado porcentaje de ácidos grasos saturados, mientras
que los aceites de lino, girasol, oliva, maíz o soja presentan un elevado contenido en
ácidos grasos insaturados. En cuanto al tipo de ácidos grasos insaturados, el aceite de
oliva es rico en oleico y los aceites de maíz, soja y girasol los son en linoleico.
Existen una serie de parámetros e índices que sirven para caracterizar

tecnológicamente las grasas y aceites vegetales comestibles, entre los que cabe
destacar: la tª de formación de humo y tª de inflamación (índices relacionados con la
calidad para la fritura), el índice de peróxido (relacionado con el grado de oxidación),
el punto de fusión (relacionado con el contenido en ácidos grasos saturados), el índice
de Reichert-Meissl (mide ácidos volátiles esterificados), índice de acetilo (mide los
grupos –OH libres en los glicéridos), índice de saponificación (menor cuanto más
largos son los ácidos grasos componentes de los glicéridos) y, finalmente, el índice de
yodo e índice de refracción (relacionados, ambos, con el grado de instauración).
El índice de refracción (η) de un aceite depende de su composición en ácidos

grasos y aumenta con la instauración y la longitud de la cadena. De ahí, que este
parámetro pueda utilizarse para la identificación del mismo. Esto es debido a que cada
sustancia va a presentar un η característico que va a depender, únicamente, de la
temperatura de medida y de la longitud de onda de la radiación empleada. Por otro
lado, la medida del η es empleada para comprobar si el aceite ha sufrido o no
alteraciones o adulteraciones. Si un aceite no presenta su índice de refracción
característico, puede ser que sea una mezcla de varios aceites, o que se encuentre
mezclado con otras sustancias que hayan podido alterarlo o adulterarlo.
En la presente práctica se determinará el índice de refracción de distintas

muestras de aceite, con el objeto de identificarlas y detectar posibles alteraciones o
adulteraciones en las mismas. Para ello se utilizará un refractómetro de Abbe.

9.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la refractometría.
2. Aprender el manejo de un refractómetro de Abbe.
3. Identificar, a partir de la medida del índice de refracción, diferentes tipos de
aceite y detectar adulteraciones en los mismos.

Pipeta Pasteur con tetina de goma
Refractómetro de Abbe
9.4. Reactivos
Acetona
Agua destilada
Muestras de aceite

a) Es muy importante que se tenga especial cuidado con el prisma principal del
refractómetro. Se deben evitar posibles arañazos, ralladuras y la corrosión del
pulido del vidrio óptico. Se recomienda limpiar bien el prisma después de
cada trabajo.
b) Se debe comprobar siempre que la temperatura del prisma principal
permanece estable y que no oscila durante la medición.
c) Siempre se debe anotar el valor de temperatura junto con la medida del índice
de refracción, ya que éste se ve afectado por la temperatura.
9.5.2. Identificación y control de pureza:
9.5.2.1. Medida del índice de refracción
En la Figura 9.1 se muestra el refractómetro que se utilizará en la práctica.

Antes de medir el índice de refracción de las muestras se debe comprobar si el
refractómetro se encuentra correctamente calibrado. Para ello debemos proceder tal y
como se describe a continuación:

(a) Abrir y separar los prismas principal y secundario. Para ello se ha de girar el
mando (1) para la apertura y cierre de los prismas (Figura 9.1). Cuando se gira
este mando, el prisma secundario se puede separar aproximadamente 1 cm, lo
que permite abrir totalmente los prismas.
4
1 3
Figura 9.1. Refractómetro Abbe, (1) mando para la apertura y cierre de los
prismas, (2) mando de medida, (3) mando de compensación de color, (4)
tornillo de calibración.
(b) Limpiar bien la superficie del prisma principal empleando un papel

ligeramente mojado con el disolvente de lavado (Figura 9.2). En este caso
utilizaremos acetona.
Figura 9.2. Detalle de los primas principal y secundario una vez separados.
(c) Situar unas gotas de agua destilada en la superficie del prisma principal, volver
a unir los prismas y cerrar girando el mando (1).

(d) Mirando por el ocular, mover el mando de medida (2) despacio hasta situar la
lectura de la escala en la proximidad de la medida del índice de refracción del
agua a 20 ºC (1,3330).
(e) En el campo de visión

aparecerá una línea horizontal
de separación borrosa y
coloreada (Figura 9.3),
próxima a la intersección de
las rectas cruzadas. Mover el
mando de compensación del
color (3) hasta conseguir una
línea nítida de separación sin
color.
(f) Cuando la línea nítida de

separación coincida con la
intersección de las rectas
cruzadas, comprobar que la
lectura del índice de refracción
coincide con el que aparece en
la Tabla 3 del Anexo, en Figura 9.3. Campo de visión y
función de la temperatura a la escala.
que se está realizando la
medida.
(g) En el caso de que la lectura coincida con la de la tabla se puede proceder a la

medida del índice de refracción de las muestras de aceite.
(h) En el caso de que no coincida, ajustar la escala a la medida correcta del índice
de refracción que aparece en la Tabla 3 del Anexo. Mover el tornillo de
calibración (4) en uno u otro sentido hasta ajustar la línea de separación de
campos en el centro de la intersección de las líneas cruzadas (Figura 9.3).
Una vez calibrado el equipo, se comienza con la medida del índice de refracción
de cada una de las muestras de aceite proporcionadas. Para ello, proceder del siguiente
modo:
(i) Abrir y separar los prismas principal y secundario, limpiarlos perfectamente y

depositar dos o tres gotas de aceite en el centro de la superficie del prisma
principal. Volver a unir los prismas y cerrar girando el mando (1). Esperar
durante 1 minuto antes de proceder con la lectura.
(j) Mirando por el ocular, girar despacio el mando de medida (2) hasta que la
línea de separación horizontal aparezca en el campo de visión.

(k) Girar el mando de compensación de color (3) para conseguir que la línea
horizontal aparezca lo más nítida posible y sin color. Una vez conseguido,
ajustar con el mando de medida (3) la línea horizontal con la intersección de
las líneas cruzadas (Figura 9.3).
(l) Tomar la medida del índice de

refracción que aparece en la
escala. Junto con esta medida
es importante anotar la
temperatura a la que ha sido
tomada la misma (Figura 9.4).
(m) Realizar cada medida por

triplicado, repitiendo los pasos
del (i) al (l) anotando junto a
cada medida la temperatura
que aparezca en la pantalla Figura 9.4. Termómetro con
digital del termómetro. pantalla digital.
9.6. Resultados
1. Empleando la fórmula que se indica a continuación, calcular el índice de
refracción del aceite a la temperatura de referencia (normalmente 20 ºC ó
25ºC):
Lc = L + F × (T − Tref )
Lc: Índice de refracción corregido.
F: Factor de corrección (0,000365 para aceites)
T: Temperatura a la que ha sido realizada la lectura.
Tref: Temperatura de referencia.
2. Con los datos obtenidos identificar los aceites problema y detectar que
muestras se encuentran adulteradas (ver Tabla 4 del Anexo).
9.7. Cuestiones
1. ¿De qué otras formas podríamos diferenciar distintos tipos de aceites
vegetales?
2. ¿Qué problemas pueden presentarse si no se tuviera en cuenta la temperatura
a la que se está realizando la determinación del índice de refracción?
3. ¿El índice de refracción de un aceite sirve para comprobar si un aceite ha sido
alterado o adulterado?. ¿De qué formas suele adulterarse un aceite?

Refractometría – Determinación de parámetros de calidad en alimentos
Práctica 10. DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS DE
CALIDAD EN ALIMENTOS MEDIANTE
REFRACTOMETRÍA
10.1. Introducción
La miel es la sustancia natural dulce producida por la abeja, Apis mellifera, a
partir del néctar de plantas. Existen diferentes tipos de miel dependiendo de su origen
y forma de elaboración, la cual puede presentarse en forma líquida, pastosa o
cristalizada. La humedad en la miel es un parámetro de importancia por estar
relacionada con la calidad y conservación del producto en el tiempo, además de con la
zona geográfica de procedencia de la misma. El porcentaje de agua en la miel no debe
superar el 21 %, ya que de lo contrario puede haber peligro de fermentación del
producto durante el almacenamiento del mismo, por el desarrollo de determinadas
levaduras. El método oficial para determinar la humead de la miel se basa en la medida
del índice de refracción (η) a 20 ºC mediante el refractómetro de Abbe. Otros
métodos alternativos para la determinación de humedad en alimentos son el método
de Karl Fischer, el método gravimétrico de secado, el método por destilación
azeotrópica, etc
La mantequilla es una grasa alimenticia obtenida de la nata o grasa de leche o

de la mezcla de nata con leche completa, sometida al batido y amasado. Es una
emulsión de agua en grasa, lo que quiere decir que contiene finas gotitas de agua
dispersas homogéneamente en su estructura. La mantequilla contiene entre un 15-20
% de agua y un 80-85 % de grasa. Al igual que el resto de los alimentos, la mantequilla
debe pasar por un control de calidad antes de su comercialización que comprende una
serie de exámenes ente los que se encuentra la determinación del punto de fusión,
índice saponificación, índice de acidez, índice de yodo, índice de refracción, .... La
determinación del η da una idea, de una forma directamente proporcional, del grado
de insaturación y de la longitud de los ácidos grasos presentes en la mantequilla. Esto
es importante para el control de calidad de la misma, pues se prohíbe la adición a la
mantequilla de grasas o aceites vegetales o animales, distintos de las grasas de leche.
Para mantequillas de buena calidad, los valores de ηD40 se encuentran entre 1,4530 y
1,4553. Otro método alternativo para la detección de dichas adulteraciones, ya sea con
grasas de origen vegetal o animal, es el análisis del perfil de triglicéridos y esteroles por
cromatografía de gases.
En la presente práctica se utilizará un refractómetro de Abbe para la

determinación del índice de refracción en muestras de miel y mantequilla. Este
parámetro se utiliza de manera habitual para el control de calidad de estos alimentos,
lo que será necesario para certificar si estos productos son adecuados o no para su
comercialización y consumo.

10.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la refractometría.
2. Aprender el manejo de un refractómetro de Abbe.
3. Determinar el índice de refracción en diferentes alimentos como parámetro
de calidad de los mismos.

Cristalizador de 250 mL Granatario
Pipeta Pasteur con tetina de goma Placa calefactora
Probeta de 50 mL Varilla de vidrio
Vidrio de reloj o pesasustancias Vasos de precipitados de 50 mL
Refractómetro de Abbe
10.4. Reactivos
Acetona Muestra de miel
Agua destilada Muestra de mantequilla

a) Es muy importante que se tenga especial cuidado con el prisma principal del
refractómetro. Se deben evitar posibles arañazos, ralladuras y la corrosión del
pulido del vidrio óptico.
b) Limpiar bien el prisma después de cada medida utilizando acetona.
c) Se debe comprobar siempre que la temperatura del prisma principal
permanece estable y que no oscila durante la medición.
d) Siempre se debe anotar el valor de temperatura junto con la medida del índice
de refracción, ya que éste se ve afectado por la temperatura.
10.5.2. Determinación de parámetros de calidad:
Se pesan en torno a 4 g de mantequilla en un vidrio de reloj. Mediante una

espátula, se introduce la mantequilla en un vaso de precipitados de 50 mL. En un
cristalizador de 250 mL se añaden 50 mL de agua. Se introduce el vaso que contiene la

mantequilla en el interior del cristalizador y se coloca encima de una placa calefactora.
Se calienta a 60 ºC durante unos 20 min (Figura 10.1).
Figura 10.1. Montaje para fundir la mantequilla.
10.5.2.1. Medida del índice de refracción
En la Figura 10.2 se muestra el refractómetro que se utilizará en la práctica.

Antes de medir el índice de refracción de las muestras se debe comprobar si el
refractómetro se encuentra correctamente calibrado. Para ello debemos proceder tal y
como se describe a continuación:
(a) Abrir y separar los prismas principal y secundario. Para ello se ha de girar el
mando (1) para la apertura y cierre de los prismas (Figura 10.2). Cuando se
gira este mando, el prisma secundario se puede separar aproximadamente 1
cm, lo que permite abrir totalmente los prismas.
4
1 3
Figura 10.2. Refractómetro Abbe, (1) mando para la apertura y cierre de los
prismas, (2) mando de medida, (3) mando de compensación de color, (4)
tornillo de calibración.

(b) Limpiar bien la superficie del prisma principal empleando un papel
ligeramente mojado con el disolvente de lavado (Figura 10.3). En este caso
utilizaremos acetona.
Figura 10.3. Detalle de los primas principal y secundario una vez

separados.
(c) Situar unas gotas de agua destilada en la superficie del prisma principal, volver
a unir los prismas y cerrar girando el mando (1).
(d) Mirando por el ocular, mover el mando de medida (2) despacio hasta situar la
lectura de la escala en la proximidad de la medida del índice de refracción del
agua a 20 ºC (1,3330).
(e) En el campo de visión

aparecerá una línea horizontal
de separación borrosa y
coloreada (Figura 10.4),
próxima a la intersección de
las rectas cruzadas. Mover el
mando de compensación del
color (3) hasta conseguir una
línea nítida de separación sin
color.
(f) Cuando la línea nítida de

separación coincida con la
intersección de las rectas
cruzadas, comprobar que la
lectura del índice de refracción
coincide con el que aparece en
la Tabla 3 del Anexo II, en
función de la temperatura a la Figura 10.4. Campo de visión y
que se está realizando la escala.
medida.

(g) En el caso de que la lectura coincida con la de la tabla se puede proceder a la

medida del índice de refracción de las muestras de aceite.
(h) En el caso de que no coincida, ajustar la escala a la medida correcta del índice
de refracción que aparece en la Tabla 3. Mover el tornillo de calibración (4)
en uno u otro sentido hasta ajustar la línea de separación de campos en el
centro de la intersección de las líneas cruzadas.
Una vez calibrado el equipo, se comienza con la medida del índice de refracción
de cada una de las muestras de mantequilla y miel proporcionadas. Para ello proceder
del siguiente modo:
(i) Abrir y separar los prismas principal y secundario, limpiarlos perfectamente y

depositar dos o tres gotas de muestra en el centro de la superficie del prisma
principal. Volver a unir los prismas y cerrar girando el mando (1). Esperar
durante 1 minuto antes de proceder con la lectura.
(j) Mirando por el ocular, girar despacio el mando de medida (2) hasta que la
línea de separación horizontal aparezca en el campo de visión.
(k) Girar el mando de compensación de color (3) para conseguir que la línea
horizontal aparezca lo más nítida posible y sin color. Una vez conseguido,
ajustar con el mando de medida (3) la línea horizontal con la intersección de
las líneas cruzadas.
(l) Tomar la medida del índice de

refracción que aparece en la
escala. Junto con esta medida
es importante anotar la
temperatura a la que ha sido
tomada la misma (Figura
10.5).
(m) Realizar cada medida por

triplicado, repitiendo los pasos
del (i) al (l) anotando junto a
cada medida la temperatura
que aparezca en la pantalla Figura 10.5. Termómetro con
digital del termómetro. pantalla digital.
En el caso de la muestra de mantequilla la determinación del índice de

refracción se llevará a cabo a 40 ºC, para lo que se calentará previamente los prismas
del refractómetro a esta temperatura mediante un baño de circulación de agua.

Refractometría - Determinación de parámetros de calidad en alimentos
10.6. Resultados
1. Empleando la fórmula que se indica a continuación, calcular el índice de
refracción de la muestra de miel a la temperatura de referencia:
Lc = L + F × (T − Tref )
Lc: Índice de refracción corregido.
F: Factor de corrección (0,0023).
T: Temperatura a la que ha sido realizada la lectura.
Tref: Temperatura de referencia (20 ºC).
2. Con los datos obtenidos para el índice de refracción de la miel a 20 ºC y de

mantequilla a 40 ºC, determinar si las muestras analizadas cumplen con las
especificaciones impuestas por ley (ver Tabla 5 del Anexo).
10.7. Cuestiones
1. ¿Qué es el índice de refracción de una sustancia?
2. ¿Qué problemas pueden presentarse si no se tuviera en cuenta la temperatura
a la que se está realizando la determinación del índice de refracción?
3. ¿Por qué es importante termostatizar el refractómetro antes de realizar la
medida del índice de refracción en la mantequilla?

Polarimetría – Fundamento teórico
V. POLARIMETRÍA
Fundamento teórico
Existen numerosas sustancias capaces de provocar la rotación del plano de
una radiación polarizada. Se dice que esas sustancias son ópticamente activas y se
caracterizan por su asimetría molecular o cristalina. El ángulo de rotación del plano de
la radiación polarizada (α) varia mucho de un compuesto a otro y la rotación puede
ser hacia la derecha (compuestos dextrógiros, +) o hacia la izquierda (compuestos
levógiros, -). Para un compuesto dado, el ángulo de rotación depende del número de
átomos o moléculas en la trayectoria de la luz, por consiguiente de la concentración de
la disolución, y de la longitud del recipiente que contiene la disolución. También
depende de la longitud de onda de la radiación y de la temperatura.
La polarimetría se basa en la medida de ángulo de rotación de una sustancia a

una única longitud de onda, generalmente a 589 nm, la línea D de la lámpara de sodio.
La ley de Biot establece la relación existente entre la concentración de la disolución de
dicha sustancia y el ángulo de rotación observado:
α = [α]D20 . l . C
donde [α]D20 es la rotación óptica específica de dicha sustancia a 20 ºC utilizando la

línea D de emisión del sodio, C es la concentración en g/mL y l es el camino óptico
(dm).
La rotación óptica se suele medir con un instrumento denominado polarímetro

(Figura 1) que consta de una fuente de radiación monocromática, un filtro o prisma
que actúa de polarizador de la radiación utilizada, un tubo para la muestra, un prisma
analizador y un detector (que puede ser el ojo humano).
Figura 1. Esquema de un polarímetro sencillo.

Polarimetría – Fundamento teórico
Muchos de los polarímetros utilizados actualmente se basan en la
determinación manual del ángulo óptico de rotación y para ello utilizan dos haces
luminosos (Figura 2).
Figura 2. Polarímetro digital.
En estos instrumentos la radiación, generada comúnmente con una lámpara

de sodio, se hace pasar por un filtro o prisma polarizador situado frente a la muestra a
un ángulo de 90º con el plano de polarización. Este prisma divide el haz en dos rayos
separados que forman un ángulo de rotación de pocos grados, en el sentido de las
manecillas del reloj y en sentido inverso respecto a la luz incidente. Los dos rayos se
pasan por un tubo de vidrio de longitud conocida que contiene la disolución del
analito. A continuación, se pasan los dos rayos de luz por un filtro o prisma analizador
que se puede girar. A través del objetivo pueden observarse dos semicírculos que
corresponden a cada uno de los dos rayos formados. El prisma analizador se gira hasta
que la intensidad de los dos rayos sea igual (sólo en una determinada posición del
analizador los dos semicírculos presentan la misma intensidad luminosa). En este
punto, los rayos de luz tienen ángulos equidistantes de rotación, a ambos lados del
detector. El punto medio de esos ángulos es el ángulo de rotación óptica en el que la
disolución de la muestra giró el plano de polarización del haz incidente.
Puesto que a través de la medida del ángulo de rotación óptica se puede hallar
la concentración y pureza de una sustancia, la polarimetría es una técnica rápida,
sencilla y no destructiva muy empleada en control de calidad, control de procesos e
investigación farmacéutica, química y en la industria alimentaria. Una de sus
aplicaciones más importantes es la determinación de azúcares, para lo cual es necesario
que la disolución a medir esté concentrada, que no presente ningún otro azúcar
además del que se pretende medir, y que no esté turbia ni coloreada. La principal
aplicación de la polarimetría en el análisis de azúcares es la determinación cuantitativa
de sacarosa, de azúcar invertido y de glucosa. Antes de realizar la polarimetría debe
comprobarse e identificarse que azúcar está presente en la muestra. Además, la
polarimetría tiene una gran importancia en la determinación de almidón.

Polarimetría - Determinación de sacarosa en leche condensada
Práctica 11. DETERMINACIÓN DE SACAROSA EN
LECHE CONDENSADA MEDIANTE POLARIMETRÍA
11.1. Introducción
La sacarosa es un disacárido de fórmula molecular C12H22O11 constituido por
una molécula de D-glucosa y otra de D-fructosa. No contiene ningún átomo de
carbono anomérico libre, puesto que los carbonos anoméricos de sus dos
monosacáridos constituyentes se hallan unidos entre sí covalentemente mediante un
enlace O-glucosídico. Por esta razón, la sacarosa no es un azúcar reductor. Este
disacárido, más conocido como azúcar de mesa o azúcar común, se obtiene
principalmente de la caña de azúcar y de la remolacha azucarera. También se
encuentra, en menor proporción, en las frutas y en algunas raíces como la zanahoria.
La sacarosa es un azúcar muy utilizado como edulcorante en la elaboración de

diversos alimentos, aunque también actúa como agente conservante natural cuando se
adiciona en concentraciones elevadas. Esto es lo que ocurre, por ejemplo, en la
elaboración de la leche condensada donde la elevada proporción de sacarosa
adicionada (30 al 50 % en peso) impide el desarrollo de los microorganismos, evitando
de este modo un proceso de esterilización posterior del producto.
Una de las aplicaciones más importantes de la polarimetría es la

determinación cuantitativa de sacarosa en alimentos. Esta determinación, sin embargo,
se ve dificultada por la presencia en la muestra de otros azúcares naturales
ópticamente activos. Por tanto, el método utilizado comúnmente para su
determinación se basa en el principio de inversión de Clerget, por el que se deduce el
contenido en sacarosa del alimento por el cambio que se produce en el ángulo de
rotación de la disolución de la muestra cuando se hidroliza la sacarosa en medio ácido:
H+
Sacarosa + H2O D-glucosa + D-fructosa
[α]D20 = 66,5º [α]D20 = 52,7º [α]D20 = -92,4º

mezcla [α]D20 = -19,9º
El proceso de hidrólisis de la sacarosa se conoce como inversión y la mezcla
resultante azúcar invertido, ya que en una disolución que solo contenga sacarosa este
proceso se ve acompañado por un cambio en la rotación específica de la disolución
resultante que pasa de ser dextrógira a levógira.
En esta práctica se determinará el contenido de sacarosa de una muestra de

leche condensada mediante polarimetría. La lectura polarimétrica directa se hace sobre
la muestra neutralizada, clarificada y filtrada. La hidrólisis de la sacarosa se realiza
mediante un tratamiento ácido que no afecta a la lactosa ni a otros azúcares presentes
en la leche. El cambio observado en el ángulo de rotación tras el proceso de hidrólisis
dependerá, entonces, de la sacarosa presente en la muestra.

11.2. Objetivos
2. Aprender el manejo de un polarímetro.
3. Determinar el contenido de sacarosa en una muestra de leche condensada.

Embudo de vidrio Probeta de 50 mL
Matraces aforados de 20, 25 y 100 mL Varilla de vidrio
Matraces erlenmeyer de 50 y 100 mL Vidrio de reloj o pesasustancias
Papel indicador de pH Balanza analítica
Papel de filtro Placa calefactora y agitadora
Pipetas de 5 y 10 mL Polarímetro
Pipetas Pasteur con tetina de goma Tubo de observación de 2 dm
11.4. Reactivos
Ácido acético
Ácido clorhídrico
Amoniaco
Cloruro de zinc
D-Fructosa
D-Glucosa
Hexacianoferrato(II) de potasio
Sacarosa
Agua destilada
Muestra de leche condensada

a) Extreme las precauciones en el manejo del tubo de observación,

especialmente en el proceso de llenado del mismo.
b) Evite la presencia de burbujas de aire en el interior del tubo de observación ya
que éstas interfieren en el haz de luz polarizada y, por tanto, causarán error en
la medida.
c) Asegúrese que antes de introducir el tubo de observación en el polarímetro se
encuentra perfectamente limpio y seco ya que de lo contrario, al tratarse de
disoluciones ácidas, pudiera dañarse el equipo.
Disolución madre de fructosa 5,55·10-1 M. Se pesan 10 g de fructosa y se disuelven

en unos 80 mL de agua destilada. Posteriormente, se transfiere la disolución a un
matraz aforado de 100 mL y se enrasa con agua destilada.
Disolución madre de glucosa 5,55·10-1 M. Se pesan 10 g de glucosa y se disuelven
en unos 80 mL de agua destilada. Posteriormente, se transfiere la disolución a un
matraz aforado de 100 mL y se enrasa con agua destilada.
Disolución madre de sacarosa 5,55·10-1 M. Se pesan 18,98 g de sacarosa y se
disuelven con unos 80 mL de agua destilada. Posteriormente, se transfiere la
disolución a un matraz aforado de 100 mL y se enrasa con agua destilada.
11.5.3. Determinación de sacarosa:
Se pesan 20 g de leche condensada en un erlenmeyer de 100 mL, se añaden 20

mL de amoniaco comercial y se agita cuidadosamente hasta completa
homogenización. Una vez homogenizado, se lleva la disolución a pH neutro
añadiendo ácido acético glacial comercial con una pipeta Pasteur, midiendo el pH
durante la adición del ácido con papel indicador (tenga cuidado al añadir el ácido
de no quemarse ya que la reacción de neutralización es muy exotérmica).
Cuando la disolución se encuentra a pH neutro se pasa a un matraz aforado de 100
mL, se añade una punta de espátula de cloruro de zinc, otra de hexacianoferrato (II)
de potasio y se mezcla suavemente por rotación del matraz inclinado (evite la
agitación violeta para prevenir la formación de burbujas). Finalmente, se enrasa el
matraz con agua destilada, se tapa y se mezcla bien agitando enérgicamente. Tras dejar
reposar durante unos minutos, se filtra la disolución con un embudo de vidrio cónico
y papel de filtro, descartando los primeros 10-15 mL del filtrado De esta forma
obtendremos la disolución problema I.
Para llevar a cabo la hidrólisis de la sacarosa, una alícuota de 10 mL de la

disolución problema I se lleva a un matraz aforado de 20 mL y se añaden 6 mL de
HCl comercial. Se coloca el matraz en un baño de agua a 40 ºC durante 1 hora,
sumergiendo el matraz hasta donde empieza el cuello. Mezcle por rotación durante los
primeros minutos. Transcurrido el tiempo, se enfría el matraz rápidamente hasta 20 ºC
y se enrasa con agua destilada, obteniéndose de esta forma la disolución problema II.
11.5.3.2. Preparación de la recta de calibrado
Se prepararan cinco disoluciones de 25 mL que contengan alícuotas de 0, 5,

10, 15 y 20 mL de la disolución madre de sacarosa de 5,55 10-1 M y se enrasaran con
agua destilada. Este mismo procedimiento se sigue con las disoluciones madre de
fructosa y glucosa. Se agitarán manualmente los matraces con la finalidad de

11.5.3.3. Análisis polarimétrico
En la Figura 11.1 se muestra el polarímetro que se utilizará en la presente

práctica.
Figura 11.1. Polarímetro (detalle del depósito de muestras).
Para llevar a cabo las medidas en el polarímetro será necesario, en primer

lugar, el ajuste a cero del mismo con agua destilada. Para ello proceder de la siguiente
manera:
(a) Presionar el interruptor de encendido del instrumento situado en la parte

posterior del mismo. Debe esperarse de 5 a 10 minutos desde que se enciende
la lámpara antes de empezar a trabajar.
(b) Llenar el tubo de observación (1)(Figura 11.2)con agua destilada. Para ello,
desenroscar el anillo de seguridad (4) de uno de los extremos del tubo y quitar
el anillo de goma (3) y el disco de vidrio (2). Colocar el tubo de observación
en posición vertical e introducir la muestra mediante una pipeta Pasteur hasta
la boca del mismo. Deslizar el disco de vidrio sobre la boca del tubo, evitando
la formación de burbujas en el interior. A continuación, colocar el anillo de
goma sobre el disco de vidrio y enroscar el anillo de seguridad. Comprobar
que si se ha formado alguna burbuja, ésta se sitúe en la trampa para las
mismas, en caso contrario abrir el tubo y rellenarlo con un poco más de
muestra.
(c) Colocar el tubo en el depósito de muestras levantado la tapa de la cámara para

las mismas (Figura 11.1).

3 4
1 2
Figura 11.2. (1) Tubo de observación, (2) disco de vidrio, (3) anillo de goma, (4)
anillo de seguridad.
(d) En el cuadro de mandos del

polarímetro (Figura 11.3), 4
comprobar que el piloto de
la tecla de ajuste a cero (1)
5 2
está encendido. Si se
encuentra apagado indica 1
que el analizador está 3
desplazado del cero
aproximadamente ± 3º, por
lo que deberá presionar
simultáneamente la tecla de Figura 11.3. Cuadro de mandos del
rotación rápida (2) y la de polarímetro: (1) piloto de ajuste a cero,
rotación a la izquierda (3) o (2) tecla de rotación rápida, (3) tecla de
a la derecha (4), hasta que rotación a la izquierda, (4) tecla de
se ilumine dicho piloto. rotación a la derecha, (5) tecla para el
ajuste a cero.
(e) Cuando el piloto de ajuste a cero se encuentre iluminado mirar a través del
ocular e igualar el brillo de los campos ópticos derecho e izquierdo como se
indica en la Figura 11.4. Si, por ejemplo, el lado derecho aparece más brillante,
lo que indica desviación de la luz hacia la derecha del material de la muestra,
se ha de pulsar la tecla de rotación derecha (4) y el campo visual del lado
derecho, que originalmente era el más brillante, va cambiando poco a poco
hasta hacerse más oscuro. Existe un punto en este proceso en el que el brillo
de los campos derecho e izquierdo se iguala, entonces, pulsar la tecla de ajuste
a cero (5). Si fuera el lado izquierdo el más brillante se procedería del mismo
modo pero, en este caso, pulsando la tecla de rotación hacia la izquierda (3).

(a) Medida (b)
Figura 11.4. Posibles cambios del campo visual: (a) desviación óptica hacia la
derecha, (b) desviación óptica hacia la izquierda.
Una vez realizada la calibración del polarímetro se realizarán las medidas del
ángulo de rotación de las cinco disoluciones patrón de sacarosa, fructosa, glucosa y de
las disoluciones problema I y II (antes y después del proceso de hidrólisis de la
sacarosa). Para ello:
(f) Rellenar el tubo de observación con la disolución a medir (lavarlo

previamente dos veces con la disolución).
(g) Colocar el tubo en el depósito de muestras.
(h) Mirando a través del ocular, igualar el brillo de los campos ópticos derecho e
izquierdo, tal y como se ha indicado en el apartado (e). Es en el punto de
igualdad de brillo en el que debe leerse en la pantalla digital la desviación
óptica de la disolución que se está midiendo.
11.6. Resultados
1. Con los datos de ángulos de rotación obtenidos a partir de las disoluciones

patrón preparadas de sacarosa, glucosa y fructosa construir las rectas de
calibrado. Obtener los valores de la ordenada en origen, pendiente y
coeficiente de correlación de dichas rectas.
2. A partir del cambio en el ángulo de rotación que se produce tras la inversión
de la sacarosa presente en la muestra (∆[α]), obtener el % en peso de sacarosa
en la leche condensada (despreciar el contenido de proteínas y grasa en la
misma) utilizando la siguiente expresión:
∆[α] . f = [α]sacarosa +[α]glucosa +[α]fructosa
siendo f el factor de dilución en la etapa de hidrólisis (hay que tener en cuenta

que el factor de conversión de dos moles de monosacárido en 1 mol de
disacárido es 0,95 puesto que se pierde 1 mol de agua).

4. Comentar los resultados obtenidos en cuanto al contenido de sacarosa y
compararlos con datos buscados en bibliografía sobre distintos tipos de leche
condensada.
11.7. Cuestiones
1. ¿Por qué se añade amoniaco y ácido acético a la muestra?
2. ¿Se podría añadir primero el ácido acético y después neutralizar con
amoniaco?
3. ¿Para qué se añade cloruro de zinc y hexacianoferrato(II) de potasio?, ¿se
podría realizar el ensayo sin añadir dichas sales?

Polarimetría - Determinación almidón en arroz
Práctica 12. DETERMINACIÓN DE ALMIDÓN EN
ARROZ MEDIANTE POLARIMETRÍA
12.1. Introducción
El almidón es un polisacárido de reserva en las plantas que proporciona entre
el 70 y 80 % de las calorías consumidas por los humanos de todo el mundo. Tanto el
almidón como los productos de la hidrólisis de éste constituyen la mayor parte de los
carbohidratos digestibles de la dieta habitual. El almidón está formado por dos
componentes: la amilosa y la amilopectina, y se diferencia de los demás carbohidratos
en que, en la naturaleza, se presenta como complejas partículas discretas que reciben el
nombre de gránulos. Los gránulos de almidón son relativamente densos, insolubles y
se hidratan muy mal en agua fría. Una característica importante del almidón es su
capacidad para formar con el yodo compuestos de inclusión coloreados, propiedad
que permite detectar su presencia en los alimentos.
El almidón es el componente principal de muchos alimentos entre los que

destacan las patatas, las legumbres y los cereales como, por ejemplo, el arroz. El arroz
ha sido durante siglos y sigue siendo en la actualidad el alimento básico de más de la
mitad de la población mundial, fenómeno que tiene su explicación en las excelentes
propiedades nutritivas de este cereal. Su aporte energético es de unas 350 kilocalorías
por cada 100 gramos, siendo prácticamente la totalidad de esta energía debida al
almidón. Además, el arroz es rico en minerales como fósforo, hierro y potasio, y en
vitaminas, además de disponer de los ocho aminoácidos esenciales para el cuerpo
humano.
La determinación polisacáridos (almidón, celulosa, pectinas, ...) suele hacerse

tras someter a los mismos a una hidrólisis ácida o enzimática, mediante la cual los
polisacáridos se separan en sus componentes que se analizarán, a continuación, con
diversas técnicas como la espectrofotometría UV-Vis, la cromatografía de líquidos,
etc. Sin embargo, gracias a la elevada rotación específica que presenta el almidón (en
torno a + 190º), éste puede determinarse directamente con elevada precisión, aún en
cantidades relativamente pequeñas, mediante polarimetría, después de disolver el
almidón de la muestra en un medio ácido. Otra ventaja de esta determinación es que
otros polisacáridos, como las hemicelulosas, no interfieren al tener una actividad
óptica significativamente menor, por lo que pueden estar presentes en la disolución
junto con el almidón. Debe tenerse en cuenta, sin embargo, que la determinación
polarimétrica de almidón no puede llevarse a cabo en alimentos que contengan
almidones modificados, como por ejemplo almidón gelatinizado.
En la presente práctica se llevará a cabo la determinación de almidón en

harina de arroz mediante polarimetría. Para ello, se realizará una extracción previa de
los azúcares solubles en etanol presentes en la misma y, posteriormente, se
determinará el ángulo de rotación de la disolución, a partir del cual, se calculará el
porcentaje en peso de almidón en la muestra de arroz.
12.2. Objetivos
2. Aprender el manejo de un polarímetro.
3. Determinar del contenido de almidón en una muestra de arroz.

Kitasatos de 250 mL Goma adaptadora de Kitasato
Matraces aforados de 50 y 100 mL Tapón Suba-seal
Matraz erlenmeyer de 100 mL Trompa de vacío
Pipetas de 2, 5 y 10 mL Balanza analítica y granatario
Pipeta Pasteur con tetina de goma Molinillo eléctrico
Placa filtrante porosa nº 4 Placa calefactora
Probetas de 50 y 100 mL Polarímetro
Vasos de precipitados de 50, 100 y 1000 mL Tubo de observación de 2 dm
12.4. Reactivos
Ácido acético glacial Agua destilada
Ácido perclórico Etanol
Cloruro de zinc Muestra de arroz
Hexacianoferrato(II) de potasio


que éstas interfieren en el haz de luz polarizada y causarán error en la medida.
encuentra perfectamente limpio y seco.
12.5.2. Preparación de disoluciones
Disolución de ácido perclórico 0,30·M. Se toman 1,28 mL de ácido perclórico

comercial, se transfieren a un matraz aforado de 50 mL y se completan con agua
Disolución de cloruro de zinc 1 M en ácido acético 2 M. Se pesan 6,95 g de
cloruro de zinc en un vaso de precipitados de 50 mL y se disuelven con agua destilada.
La disolución resultante se pasa a un matraz aforado de 50 mL, se añaden 5,80 mL de
ácido acético glacial comercial y se enrasa con agua destilada.
Disolución de hexacianoferrato(II) de potasio 0,25 M. Se pesan 5,33 g de
K4Fe(CN)6·3H2O en un vaso de precipitados de 50 mL y se disuelven con agua
destilada. La disolución resultante se pasa a un matraz aforado de 50 mL y se enrasa
con agua destilada.
12.5.3. Determinación de almidón:
12.5.3.1. Extracción del almidón
Moler el arroz con un molinillo eléctrico, hasta obtener una harina fina. Pesar
2,5 g de la harina en un vaso de precipitados de 100 mL y añadir 80 mL de etanol.
Dejar durante 1 hora a temperatura ambiente, agitando de vez en cuando durante este
periodo. Posteriormente, filtrar la muestra con placa filtrante del nº 4 y lavar el residuo
filtrado con unos 20 mL de etanol. El residuo filtrado se deja secar al aire. Cuando el
residuo esté bien seco, se pasa a un matraz erlenmeyer de 100 mL, se añaden 50 mL
de HClO4 0,30 M y se homogeniza la disolución. Se tapa el matraz erlenmeyer con un
tapón suba-seal y se mete en un baño de agua hirviendo durante 15 min, agitando
sobre todo al inicio (tenga cuidado de no quemarse).
Transcurrido este tiempo, se añaden 30 mL de agua al matraz erlenmeyer y se

enfría rápidamente a temperatura ambiente. Una vez frío se transfiere a un matraz
aforado de 100 mL, se añaden 5 mL de la disolución de cloruro de zinc en ácido
acético y se agita. A continuación, se añaden 5 mL de la disolución de
hexacianoferrato(II) de potasio y se agita de nuevo. Finalmente, se enrasa el matraz
con agua destilada y se procede al filtrado de la disolución con un embudo cónico y
filtro de pliegues, descartando los primeros 10-15 mL del filtrado.
12.5.3.2. Análisis polarimétrico
En la Figura 12.1 se muestra el polarímetro que se utilizará en la práctica.

manera:

muestra.
3 4
1 2

(d) En el cuadro de mandos del polarímetro (Figura 12.3), comprobar que el

piloto de la tecla de ajuste a cero (1) está encendido. Si se encuentra apagado
indica que el analizador está desplazado del cero aproximadamente ± 3º, por
lo que deberá presionar simultáneamente la tecla de rotación rápida (2) y la de
rotación a la izquierda (3) o a la derecha (4), hasta que se ilumine dicho
piloto.

5 2
1
3
Figura 12.3. Cuadro de mandos del polarímetro: (1) piloto de ajuste a cero, (2)
tecla de rotación rápida, (3) tecla de rotación a la izquierda, (4) tecla de
rotación a la derecha, (5) tecla para el ajuste a cero.
(a) Medida (b)
ángulo de rotación de la disolución problema de arroz. Para ello:
(f) Rellenar el tubo de observación con la disolución a medir (lavarlo
previamente dos veces con la disolución).
(g) Colocar el tubo en el depósito de muestras.
(h) Mirando a través del ocular, igualar el brillo de los campos ópticos derecho e
izquierdo, tal y como se ha indicado en el apartado (e). Es en el punto de
igualdad de brillo en el que debe leerse en la pantalla digital la desviación
óptica de la disolución que se está midiendo.

Polarimetría - Determinación de almidón en arroz
12.6. Resultados
1. Con el dato del ángulo de rotación obtenido a partir de la disolución

problema de la muestra de arroz, calcular el % en peso de almidón en la
misma, teniendo en cuenta que [α]D20 para el almidón de arroz es igual a
185,9.
3. Comentar los resultados obtenidos en cuanto al contenido de almidón en el
arroz y compararlos con datos buscados en bibliografía.
12.7. Cuestiones
1. ¿Por qué se debe lavar la muestra con etanol antes de proceder a extraer el
almidón de la misma?
2. ¿Por qué se emplea ácido perclórico en caliente para extraer el almidón de la
muestra?. ¿Se podría extraer simplemente con agua caliente?
3. ¿Para que se añaden las disoluciones de cloruro de zinc en ácido acético y de
hexacianoferrato(II) de potasio?

Polarimetría – Estudio de la reacción de inversión de la sacarosa
Práctica 13. ESTUDIO DE LA REACCIÓN DE
INVERSIÓN DE LA SACAROSA MEDIANTE MEDIDAS
POLARIMÉTRICAS.
13.1. Introducción
La sacarosa es un disacárido de fórmula molecular C12H22O11 constituido por
una molécula de D-glucosa y otra de D-fructosa. El proceso de hidrólisis de la
sacarosa, conocido como inversión, se encuentra catalizado por ácidos según la
reacción:
H+
Sacarosa + H2O D-glucosa + D-fructosa
[α]D20 = 66,5º [α]D20 = 52,7º [α]D20 = -92,4º

mezcla [α]D20 = -19,9º
En la reacción de hidrólisis de la sacarosa, se puede definir la velocidad como

la disminución de la concentración de reactivo con respecto al tiempo. Además esta
velocidad es proporcional a la concentración de reactivos:
- d[sac]
= k [sac] [H2O] (1)
dt
Así, k es la constante de velocidad y [sac] y [H2O] son las concentraciones de

sacarosa y agua, respectivamente. Sin embargo, como el agua es el disolvente y está en
exceso con respecto a la concentración de sacarosa, la concentración de agua
permanece prácticamente constante con respecto al tiempo y, por tanto, puede ser
incluida en la constante de velocidad. Así la ecuación 1 quedaría como:
- d[sac]
k´ = k [H2O] (2) = k´ [sac] (3)
dt
La ecuación de velocidad es consistente con una cinética de primer orden ya

que la velocidad sólo depende de la concentración de sacarosa. Aunque en realidad es
cinética de pseudo-primer orden, puesto que la constante engloba la concentración de
uno de los reactivos. Si se integra la ecuación (3) se transforma en:
- d(Co-x) - d(Co-x)
= k´ ( Co-x) = k´dt (4)
dt ( Co-x)

La concentración inicial de sacarosa se denomina Co, mientras que x es la
concentración de glucosa y fructosa en un instante t. Si integramos la ecuación (4)
entre los valores t = 0 y t = t resulta la siguiente ecuación:
dx Co 1
= k´dt ln = k´ (5)
( Co-x) Co-x t
Las concentraciones “Co” y “x” se pueden relacionar con el ángulo de

rotación (α) mediante la ley de Biot:
α = [α]Dt . l . C (6)
donde α es el ángulo de rotación, [α]Dt es el ángulo de rotación específica producido

cuando la luz polarizada atraviesa 1 dm de longitud de una disolución de
concentración 1 g/mL a una temperatura dada (t) y para un tipo de radiación
determinada (línea D de emisión del sodio), l es el camino óptico (dm) y C es la
concentración (g/mL).
Teniendo en cuenta la ecuación (6) podemos escribir la ecuación (5) de la

siguiente manera:
α o- α 1
8
k´ = ln (7)
α t- α t
8
Los ángulos de rotación “αo”, “αt” y “α∞” son los medidos en el instante
inicial (t = 0), a tiempo t y a tiempo t = ∞, respectivamente. Colocando la ecuación
(7):
αo- α
8
ln = k´t (8)
αt- α
8
En esta práctica se determinará la constante de velocidad de la reacción de

inversión de la sacarosa utilizando ácido clorhídrico y ácido tricloroacético, mediante
medidas polarimétricas.
13.2. Objetivos
1. Aprender a utilizar un polarímetro.
2. Estudiar la reacción de inversión de la sacarosa utilizando dos ácidos
diferentes.
3. Determinar la constante de velocidad de una reacción.

Matraces aforados de 50 y 100 mL Balanza analítica
Pipeta Pasteur con tetina de goma Cronómetro
Pipeta de 10 mL Placa agitadora
Probeta de 50 mL Polarímetro
Varilla de vidrio Tubo de observación de 2 dm
Vasos de precipitados de 100 y 250 mL Granatario
14.4. Reactivos
Ácido clorhídrico
Ácido tricloroacético
Agua destilada
Sacarosa


que éstas interfieren en el haz de luz polarizada y, por tanto, causarán error en
la medida.
encuentra perfectamente limpio y seco ya que de lo contrario, al tratarse de
disoluciones ácidas, pudiera dañarse el equipo.
Disolución de sacarosa 20 % (p/v). Se pesa 10 g de sacarosa y se añaden unos 30

mL de agua destilada para disolverla. Una vez disuelta se transfiere a un matraz
aforado de 50 mL y se completa con agua destilada hasta el enrase.
Disolución de ácido clorhídrico 3 M. Se transfieren 25,53 mL ácido clorhídrico
comercial a un matraz aforado de 100 mL y se enrasará con agua destilada.
Disolución de ácido tricloroacético 3 M. Se disuelven 24,51 g de ácido
tricloroacético en unos 30 mL de agua destilada. Se transfiere la disolución a un
matraz aforado de 50 mL enrasando con agua destilada.

14.5.3. Determinación de la constante cinética y del orden de la reacción:
En la Figura 14.1 se muestra el polarímetro que se utilizará en la presente

práctica.

manera:

muestra.


3 4
1 2
(d) En el cuadro de mandos del

polarímetro (Figura 14.3), 4
comprobar que el piloto de
la tecla de ajuste a cero (1)
5 2
está encendido. Si se
encuentra apagado indica 1
que el analizador está 3
desplazado del cero
aproximadamente ± 3º, por
lo que deberá presionar
simultáneamente la tecla de Figura 14.3. Cuadro de mandos del
rotación rápida (2) y la de polarímetro: (1) piloto de ajuste a
rotación a la izquierda (3) o cero, (2) tecla de rotación rápida, (3)
a la derecha (4), hasta que tecla de rotación a la izquierda, (4)
se ilumine dicho piloto. tecla de rotación a la derecha, (5)
tecla para el ajuste a cero.

Polarimetría - Estudio de la reacción de inversión de la sacarosa
(a) Medida (b)
ángulo de rotación αo, αt. y α∞:
(a) Medida de α0. Tomar 25 mL de la disolución de sacarosa al 20 % (p/v) y

transferirlos a un vaso de precipitados de 100 mL. Añadir 35 mL de agua
destilada y homogeneizar la disolución. Introducir la disolución en el tubo de
observación y tomar la medida en el polarímetro cuando el brillo de ambos
campos sea el mismo.
(b) Medida de αt. Coger 25 mL de la disolución de sacarosa al 20 % (p/v) y

transferirlos a un vaso de precipitados de 100 mL. Añadir 35 mL de la
disolución de ácido tricloroacético 3 M, con agitación continua y conectar el
cronómetro en ese momento. La primera medida de α se realizará lo antes
posible y a partir de ésta se toman medidas cada 3 min hasta el minuto 30 y
cada 5 min hasta el minuto 60.
(c) Medida de α∞. Para obtener esta medida hay que asegurarse que la reacción
ha terminado, por tanto, la medida se tomará al día siguiente, comprobando
con una segunda medida, a las dos horas, que el valor permanece constante.
Realizar el mismo procedimiento que el descrito anteriormente utilizando ácido

clorhídrico para llevar a cabo la hidrólisis de la sacarosa.
13.6. Resultados
1. Construir una tabla con los datos obtenidos a partir de las medidas realizadas
que incluya: αo, α∞, αt, tiempo (segundos), αo-α∞, αt-α∞ y ln (αo-α∞/αt-α∞) tanto
para la reacción de hidrólisis con ácido tricloroacético, como para la reacción
de hidrólisis con ácido clorhídrico.

Polarimetría - Estudio de la reacción de inversión de la sacarosa
2. Representar los datos gráficamente ln (αo-α∞/αt-α∞) frente al tiempo. Obtener
los valores de la ordenada en origen, pendiente y coeficiente de correlación de
ambas rectas.
3. Obtener los valores de la constante cinética con sus correspondientes
unidades, para ambas reacciones de hidrólisis.
4. Comentar los resultados obtenidos con ambos ácidos.
13.7. Cuestiones
1. Según las representaciones gráficas, ¿la reacción de hidrólisis de la sacarosa
corresponde con una cinética de pseudo-primer orden?, ¿por qué?
2. Calcular el valor de rotación específica de la sacarosa y compararlo con el
valor dado en la introducción de la práctica, ¿coinciden ambos valores?. ¿de
qué factores depende dicho valor?

Potenciometría – Fundamento teórico
VI. POTENCIOMETRÍA
Fundamento teórico
Las técnicas potenciométricas son un grupo de técnicas electroanalíticas
basadas en la medida del potencial de una celda electroquímica en ausencia de
corrientes apreciables. En una celda para análisis potenciométrico típica vamos a
distinguir dos electrodos (electrodo indicador y electrodo de referencia) que se encuentran
sumergidos en una disolución del analito y que están conectados a un dispositivo para
medir el potencial.
Un electrodo indicador ideal es aquel que responde rápidamente y de manera

reproducible a la actividad del analito en la disolución problema. Los electrodos
indicadores pueden ser metálicos o de membrana. Los primeros generan un potencial
eléctrico en respuesta a una reacción redox que tiene lugar en la superficie metálica del
electrodo. Sin embargo, algunos de estos electrodos no participan como tal en la
reacción redox, sino que su única misión es la de transferir electrones. Esto es lo que
ocurre con los electrodos que se construyen con metales inertes como el platino, oro
y paladio.
Por otro lado, los electrodos

de membrana o electrodos selectivos de
iones (ISE) son diferentes a los
electrodos metálicos tanto en su
diseño como en su fundamento, ya
que la membrana no da ni recibe
electrones (es decir, no esta implicada
en un proceso redox) sino que es
capaz de unirse de manera selectiva al
ion que se pretende determinar. Los
orígenes de estos electrodos derivan
del electrodo de vidrio de pH, cuya
robustez, fiabilidad y selectividad
hacen que hoy en día sea uno de los
más utilizados dentro de este tipo de
electrodos. En la Figura 1 se muestra
un electrodo combinado de pH típico,
que incorpora tanto el electrodo
indicador de vidrio como el electrodo Figura 1. Electrodo de pH
de referencia. combinado.
Las determinaciones potenciométricas pueden ser de dos tipos: (1) medidas

potenciometrícas directas (cuando la actividad del ion que nos interesa se determina
realizando una única medida del potencial de la celda) y (2) valoraciones potenciométricas
(cuando la medida del potencial de la celda se utiliza para detectar el punto final de
una valoración). La determinación de un ion mediante potenciométría directa es
rápida y simple. Requiere la comparación del potencial desarrollado por el electrodo
indicador en la disolución problema con el potencial obtenido cuando se sumerge en
una o más disoluciones patrón del analito.
Una valoración potenciométrica implica la medida del potencial de la celda

electroquímica en función del volumen de reactivo valorante adicionado. Las
valoraciones potenciométricas proporcionan datos más fiables que los que se obtienen
en valoraciones en las que se utilizan indicadores químicos, y pueden ser utilizadas en
reacciones de neutralización, redox, precipitación y formación de complejos. Estas
valoraciones se pueden automatizar fácilmente. En la Figura 2 se muestra un valorador
automático (autovalorador) para efectuar una valoración potenciométrica. Este
dispositivo vierte el reactivo valorante desde un depósito (botella de vidrio), situado en
la parte posterior, en el vaso que contiene el analito, el cual se agita de manera
continua mediante un agitador magnético
Figura 2. Valorador potenciométrico.
La selección del electrodo

indicador depende de la naturaleza de
la valoración. En valoraciones redox el
electrodo debe ser de un metal inerte
como Pt o Pd. En valoraciones ácido-
base el electrodo es normalmente de
vidrio. Para complexometrías se usan
tanto electrodos de membrana como
metalicos. En argentometrías se usa un
electrodo de Ag. Figura 3. Electrodo de Pt
combinado.
El proceso de valoración consiste en la medición del potencial de la celda (en
unidades de milivoltios o pH) después de cada adición de reactivo valorante. Al
principio se añade el valorante en grandes incrementos de volumen que luego se van
haciendo menores a medida que se acerca el punto final. Para detectar el punto final
de una valoración potenciométrica se pueden utilizar varios métodos. El más directo
se basa en llevar directamente a una gráfica el potencial en función del volumen de
reactivo adicionado (Figura 4.a), el punto medio en la porción ascendente de la curva
se estima visualmente y se toma como el punto final (punto de inflexión). Otro
procedimiento para detectar el punto final es llevar a una gráfica el cambio de
potencial por unidad de volumen del reactivo valorante (es decir ∆E/∆V, curva de la
primera derivada) en función del volumen de reactivo adicionado. Como se muestra
en la Figura 4.b se obtiene una curva con un valor máximo que corresponde al punto
final. La curva de la segunda derivada (∆2E/∆V2) cambia de signo en el punto final
(Figura 4.c) y se toma como punto final la intersección de la misma con el eje de
abscisas.
14
10
12
(a) (b)
8
10
∆pH/∆V
8 6
pH
6 4
4
2
2
0
0
0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Volumen añadido (mL) Volumen añadido (mL)
30
20 (c)
10
2
∆ pH/∆V
0
2
-10
-20
-30
0 20 40 60 80 100
Volumen añadido (mL)
Figura 4. (a) Curva de valoración. (b) Curva de la primera derivada. (c) Curva
de la segunda derivada.

Potenciometría - Determinación de la acidez en vino
Práctica 14. DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ EN
VINOS MEDIANTE VALORACIÓN
POTENCIOMÉTRICA
14.1. Introducción
El vino es una bebida obtenida de la uva mediante fermentación alcohólica de
su zumo o mosto. La fermentación se realiza por medio de levaduras que transforman
los azúcares de la uva en alcohol y anhídrido carbónico. Los principales componentes
del vino son el agua (85 % a 90 %) y el etanol (9 % a 15 %).
La uva es una fruta ácida y, como consecuencia, el vino es una bebida ácida ya
que los ácidos de la uva pasan al mismo. Durante el proceso de vinificación se
generan, además, nuevos ácidos. Así, se pueden clasificar los ácidos del vino en:
orgánicos naturales (proceden de la uva, son el ácido tartárico, málico y cítrico),
orgánicos derivados (surgidos durante los procesos fermentativos, son el ácido láctico,
succínico y acético) e inorgánicos (de origen es mineral, destaca el ácido sulfúrico
presente en forma de sulfatos).
El proceso de elaboración del vino influye de manera importante en la acidez

del mismo. Así, por ejemplo, la presencia del hollejo (piel de la uva) en el proceso de
fermentación reduce la acidez del vino, puesto que ésta contiene potasa que difunde al
mismo. Según las prácticas de elaboración, pueden distinguirse tres tipos principales
de vino: el blanco, procedente de mostos de uva blanca o de uva tinta con pulpa no
coloreada, habiéndose evitado en este último caso la difusión al mostos de la materia
colorante contenida en el hollejo, el tinto, procedente de mostos obtenidos de uvas
tintas con el adecuado proceso de elaboración para conseguir la difusión al mosto de
la materia colorante del hollejo y, el rosado, procedente de uvas tintas, o de mezcla de
tintas y blancas, cuyos mostos han fermentado sin los hollejos.
La acidez del vino no se expresa como el contenido de cada ácido por

separado, sino como la suma de todos los ácidos, referida al más abundante que es el
tartárico (expresada en gramos de ácido tartárico por litro de vino). La acidez total
incluye, por tanto, una acidez que se considera negativa en el vino, que es la debida a
la presencia de ácido acético. Ésta es la que se conoce como acidez volátil, llamada así
porque este ácido se evapora espontáneamente. Es conveniente, por tanto, que la
acidez volátil de un vino sea lo más baja posible. La acidez volátil se expresa en
gramos de ácido acético por litro de vino. Si a la acidez total se le resta la acidez
volátil, la diferencia se llama acidez fija, expresada en gramos de ácido tartárico por
litro de vino.
En esta práctica se determinará la acidez total, fija y volátil en distintas

muestras de vino mediante valoración ácido-base con indicador químico y mediante
valoración potenciométrica.

14.2. Objetivos
1. Aprender el manejo de un valorador potenciométrico.
2. Entender el fundamento de las valoraciones potenciométricas.
3. Determinar la acidez total, volátil y fija de distintos tipos de vinos.
4. Diferenciar entre el uso de un indicador visual y un indicador instrumental
para la detección del punto final en una valoración.

Bureta Vasos de precipitados de 100 y 250 mL
Cristalizador Vidrio de reloj o pesasustancias
Embudo de vidrio Granatario
Matraz aforado de 500 mL Electrodo combinado de pH
Matraces erlenmeyer de 250 mL Pinza de bureta
Pipeta Pasteur con tetina de goma Placa calefactora
Pipeta aforada de 20 mL Soporte
Probeta de 50 mL Valorador potenciométrico
Varilla de vidrio Baño de ultrasonidos
14.4. Reactivos
Hidróxido de sodio Etanol
Hidrógenoftalato de potasio Agua destilada
Fenolftaleína Muestras de vino

a) Tenga cuidado al pesar (granatario) y manejar el hidróxido sódico puesto que

provoca quemaduras graves.
b) Asegúrese que el electrodo está sumergido en la disolución antes de comenzar
la valoración. Evitar que el imán toque el electrodo durante la agitación.
Disolución de hidróxido de sodio 0,1 M. Se pesa 2 g de hidróxido de sodio y se

añaden unos 400 mL de agua destilada para disolverlo. Una vez disuelto se transfiere a
un matraz aforado de 500 mL y se completa con agua destilada hasta el enrase.
Disolución de fenolftaleína. Se disuelven 0,05 g de fenolftaleína en 50 mL de etanol.
Posteriormente, agregar 50 mL de agua destilada.

14.5.3. Estandarización del hidróxido de sodio 0,1 M:
Estandarizar la disolución de NaOH 0,1 M con hidrogenoftalato de potasio,

utilizando fenolftaleína como indicador. Para ello, se pesa 1 g de hidrogenoftalato de
potasio en un matraz erlenmeyer y se añaden unos 50 mL de agua destilada para
disolverlo. Adicionar la disolución de NaOH desde la bureta hasta que la disolución
tome un color rosa. Repita la valoración, al menos dos veces, y obtenga la
concentración exacta de la disolución de NaOH a partir de un valor medio.
14.5.4. Determinación de la acidez total, volátil y fija:
Poner, aproximadamente, 150 mL de la muestra de vino en un vaso de

precipitados de 250 mL. Colocar el vaso en el baño de ultrasonidos, durante unos 15
minutos, para eliminar el dióxido de carbono.
14.5.4.1. Valoración con indicador químico
Acidez total: Tomar una alícuota de 20 mL del vino desgasificado y colocarla en un

erlenmeyer, añadiendo 5 gotas de fenolftaleína como indicador. Valorar con la
disolución de NaOH, previamente estandarizada. En el caso de que la muestra sea de
vino tinto, valorar hasta que se observe un enturbiamiento y en el caso de que sea de
vino blanco, hasta que se detecta el cambio de color persistente. Repita la valoración,
al menos dos veces.
Acidez fija: Tomar otra alícuota de 20 mL del vino desgasificado y colocarla en un vaso
de precipitados de 100 mL. Evaporar al baño María hasta observar una consistencia
aceitosa (realizar este proceso en la campana). Añadir 10 mL de agua destilada y llevar
de nuevo a sequedad. A continuación, disolver el residuo en, aproximadamente, 100
mL de agua destilada. Transferir a un matraz erlenmeyer y valorar del mismo modo
que en el caso de la acidez total. Repita la valoración, al menos dos veces.
14.5.4.2. Valoración potenciométrica
Acidez total: Tomar otra alícuota de 20 mL del vino desgasificado y colocarla en un

vaso de precipitados de 250 mL. Valorar con la disolución de NaOH, previamente
estandarizada, utilizando un valorador potenciométrico con electrodo combinado de pH
(Figura 14.1).
Acidez fija: Tomar otra alícuota de 20 mL del vino desgasificado y colocarla en un vaso
de precipitados de 100 mL. Evaporar al baño María hasta observar una consistencia
aceitosa (realizar este proceso en la campana). Añadir 10 mL de agua destilada y llevar
de nuevo a sequedad. A continuación, disolver el residuo en, aproximadamente, 100
mL de agua destilada y transferir a un vaso de precipitados de 250 mL. Valorar con la

disolución de NaOH, previamente estandarizada, utilizando un valorador
potenciométrico con electrodo combinado de pH (Figura 14.1).
Figura 14.1. Valorador potenciométrico.
A continuación se describe el proceso de valoración:
(a) Rellenar la botella del valorador potenciométrico con la disolución de NaOH 0,1
M previamente estandarizada.
(b) Encender el equipo y lavar dos o tres veces el pistón. Para ello, apretar
alternativamente “DOS” para vaciar y “FILL” para rellenar.
(c) Seguidamente es necesario cargar el método de valoración. Pulsar <mode>
repetidamente hasta que aparezca “DET” en la pantalla (Dynamic Equivalence
point Titration). Confirmar “DET” pulsando <enter> y seleccionar la
magnitud medida pulsando <select> hasta que aparezca “pH” en la pantalla.
Confirmar “pH” pulsando <enter>.
(d) Colocar el vaso de precipitados

con la disolución del vino en el
agitador e introducir la bureta y
el electrodo en la disolución,
con cuidado de que el imán no
golpee el electrodo durante la
agitación. Al pulsar <start>
comenzará la valoración.
Durante la valoración, la
primera línea de la pantalla Figura 14.2. Detalle de la pantalla del
muestra el pH actual y el valorador en el transcurso de la
volumen de reactivo valorante valoración.
dosificado (Figura 14.2).

Tan pronto como se haya
alcanzado un punto de
equivalencia, el valorador lo
muestra en la segunda línea de
la pantalla. Dejar que la
valoración continúe durante
cierto tiempo, hasta
aproximadamente pH = 11,50
e interrumpir entonces con
<stop>. En la primera línea de
la pantalla aparece ahora Figura 14.3. Detalle de la pantalla del
“DET pH” y en la segunda se valorador al finalizar la valoración.
muestra el punto de
equivalencia (Figura 14.3).
(e) Para imprimir la curva de valoración pulsar repetidamente <def> hasta que
aparezca en la pantalla >impresión y pulsar <enter> para pasar a la definición
de las impresiones. Elegir con <select> hasta que aparezca >impresión: curva;
compl y pulsar <enter> para confirmar. Pulsar <print>, <reports> y <enter> y
se imprimirá la curva de valoración.
14.6. Resultados
1. A partir del volumen de NaOH gastado en las distintas valoraciones, calcular
acidez total y fija del vino, expresada en gramos de ácido tartárico por litro.
2. Con los valores obtenidos de acidez total y fija calcular la acidez volátil,
expresada en gramos de ácido acético por litro de vino.
4. Comprueba si los valores obtenidos de acidez total y volátil del vino se
encuentran dentro del rango permitido.
14.7. Cuestiones
1. Comparando ambos métodos de valoración, ¿cuál es más preciso?, ¿cuál es
más rápido?
2. ¿Por qué es necesario calentar las muestras de vino al baño María antes de
calcular la acidez fija?
3. ¿Encuentras diferencias en la acidez en los distintos vinos?. ¿A qué pueden
ser debidas estas diferencias?
4. A la vista de los resultados obtenidos, ¿crees que alguna de las muestras de
vino proporcionadas se ha conservado en malas condiciones?, ¿por qué?
Potenciometría - Determinación de ácido ascórbico en preparado farmacéutico
Práctica 15. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO
EN UN PREPARADO FARMACÉUTICO MEDIANTE
POTENCIOMETRÍA
15.1. Introducción
Bajo el término vitamina C se engloban dos compuestos con la misma
actividad biológica en el organismo humano, el ácido ascórbico y el ácido
dehidroascórbico. Solo los isómeros L de estos dos ácidos tienen acción vitamínica y
el ácido dehidroascórbico presenta, aproximadamente, un 80 % de la actividad
vitamínica del ácido ascórbico.
El ácido ascórbico es una γ-lactona sintetizada por las plantas por lo que se
encuentra, principalmente, en alimentos de origen vegetal. Por esta razón el consumo
diario de frutas y verduras frescas aporta la vitamina C requerida diariamente por el
organismo humano.
La actividad biológica de la vitamina C en el organismo no está clara. Se sabe,

sin embargo, que su deficiencia produce una serie de trastornos que en estado avanzado
se conocen como escorbuto (inflamación articular, hemorragias subcutáneas, etc) y
vuelve al individuo muy susceptible de contraer infecciones. Es por esta razón, por lo que
suele adicionarse en numerosos preparados farmacéuticos (contra la gripe y el resfriado) y
utilizarse frecuentemente para enriquecer alimentos.
El ácido ascórbico es un agente reductor que reacciona rápidamente con el

ión triyoduro (I3−) y en su oxidación cede dos átomos de hidrógeno para
transformarse en el ácido dehidroascórbico según la siguiente reacción:
OH HO
HO O O
O
+ I3- + H2O O + 3 I- + 2H+
O OH
HO OH
OH OH
Ácido ascórbico Ácido dehidroascórbico
Esquema 1. Reacción de oxidación del ácido ascórbico.
Esta reacción se utilizará en la presente práctica para la cuantificación del

ácido ascórbico en un preparado farmacéutico mediante una valoración redox por
retroceso, en la que el exceso de I3− adicionado se valorará con una disolución de
tiosulfato. La detección del punto final se llevará a cabo con un indicador químico o
mediante valoración potenciométrica.

15.2. Objetivos
3. Determinar el contenido de ácido ascórbico en un preparado farmaceutico.
4. Diferenciar entre el uso de un indicador visual y un indicador instrumental
para la detección del punto final en una valoración.

Bureta Vasos de precipitados de 100 y 250 mL
Matraces aforados de 100 y 250 mL Balanza analítica
Matraces erlenmeyer de 250 mL Electrodo combinado de platino
Pipeta Pasteur con tetina de goma Imán
Pipetas de 5, 10 y 25 mL Pinza de bureta
Probeta de 50 mL Soporte
Varilla de vidrio Valorador potenciométrico
15.4. Reactivos
Ácido sulfúrico Almidón
Yodato de potasio Agua destilada
Yoduro de potasio Timol
Tiosulfato de sodio 0,1 M Preparado farmacéutico

a) Asegúrese que el electrodo se encuentra sumergido en la disolución antes de

comenzar la valoración.
b) Evitar que el imán toque el electrodo cuando se realiza la valoración ya que
este se podría romper.
Disolución de ácido sulfúrico 0,5 M. Se toman 2,77 mL de ácido sulfúrico

comercial, se transfieren a un matraz aforado de 100 mL, al que previamente se ha
añadido un poco de agua destilada, y se completa con agua destilada hasta el enrase.

Disolución de yodato de potasio 0,02 M. Se pesan 1,07 g de yodato de potasio y se
disuelven completamente con unos 200 mL de agua destilada. La disolución se
transfiere a un matraz aforado de 250 mL y se enrasa con agua destilada.
Disolución de almidón al 10 % (p/v). Añadir 10 g de almidón soluble y 5 mg de
timol en 100 mL de agua destilada. Calentar y agitar la mezcla hasta que se produzca la
disolución.
15.5.3. Estandarización del tiosulfato de sodio 0,1 M:
Rellenar la bureta con la disolución de tiosulfato de sodio 0,1 M (Na2S2O3).

Tomar 25 mL de la disolución de KIO3 0,02 M y colocarlos en un erlenmeyer de 250
mL. Añadir 10 mL de la disolución de H2SO4 0,5 M y 1 g de KI sólido. Agitar la
mezcla hasta la total disolución (Esquema 2).
8I- + IO3- + 6H+ 3I3- + 3H2O
Esquema 2. Reacción redox de formación del ión triyoduro.
Adicionar el tiosulfato de sodio desde la bureta hasta que la disolución tome

un color amarillo pálido. Seguidamente, añadir al erlenmeyer 2 mL del indicador de
almidón hasta observar la disolución de color azul. A continuación, seguir adicionando
tiosulfato de sodio hasta que desaparezca el color azul (Esquema 3). Repita la
valoración, al menos dos veces, y obtenga la concentración exacta de la disolución de
Na2S2O3 a partir de un valor medio.
I3 - + 2(S2O3)2- 3I- + (S4O6)2-
Esquema 3. Reacción redox de valoración del ión triyoduro con tiosulfato.
15.5.4. Determinación de vitamina C:
15.5.4.1. Valoración con indicador químico
Pesar, aproximadamente, 1 g de preparado farmacéutico (anotar el peso

exacto) y disolverlo en un vaso de precipitados con, aproximadamente, 50 mL de agua
destilada. En un erlenmeyer de 250 mL pesar 1 g de KI sólido, añadir 25 mL de la
disolución de KIO3 0,02 M, 10 mL de la disolución de H2SO4 0,5 M y la disolución
del comprimido (lavar el vaso que contenía la disolución del comprimido con dos
pequeñas alícuotas de agua destilada y adicionar los líquidos de lavado al erlenmeyer).
Homogeneizar bien la disolución.

Adicionar el tiosulfato de sodio, previamente estandarizado, desde la bureta
hasta que la disolución tome un color amarillo pálido. Seguidamente, añadir al
erlenmeyer 2 mL del indicador de almidón hasta observar la disolución de color azul.
A continuación, seguir adicionando tiosulfato de sodio hasta que desaparezca el color
azul (Esquema 3). Repita este proceso, al menos dos veces, y obtenga la concentración
de ácido ascórbico en la disolución a partir de un valor medio.
15.5.4.2. Valoración potenciométrica
Pesar, aproximadamente, 1 g de preparado farmacéutico (anotar el peso

exacto) y disolverlo en un vaso de precipitados con, aproximadamente, 50 mL de agua
destilada. Pesar 1 g de KI sólido en un vaso de precipitados de 250 mL, añadir 25 mL
de la disolución de KIO3 0,02 M, 10 mL de la disolución de H2SO4 0,5 M y la
disolución del comprimido (lavar el vaso que contenía la disolución del comprimido
con dos pequeñas alícuotas de agua destilada y adicionar los líquidos de lavado al
erlenmeyer). Homogeneizar bien la disolución. Valorar con la disolución de Na2S2O3 ,
previamente estandarizada, utilizando un valorador potenciométrico con electrodo
combinado de Pt (Figura 15.2).
(a) Rellenar la botella del valorador potenciométrico con la disolución de Na2S2O3

0,1 M, previamente estandarizada.


magnitud medida pulsando <select> hasta que aparezca “U” en la pantalla.
Confirmar “U” pulsando <enter>.

con la disolución en el agitador
e introducir la bureta y el
electrodo en la disolución, con
cuidado de que el imán no
golpee las paredes del electrodo
durante la agitación. Al pulsar
<start> comenzará la
valoración. Durante la
valoración la primera línea de la
pantalla muestra el valor de U
Figura 15.3. Detalle de la pantalla del
actual y el volumen de reactivo
valorador en el transcurso de la
valorante dosificado (Figura
valoración.
15.3).
(e) Tan pronto como se haya alcanzado un punto de equivalencia, el valorador lo

muestra en la segunda línea de la pantalla. Dejar que la valoración continúe
durante cierto tiempo, hasta aproximadamente U = 150 e interrumpir entonces
con <stop>. En la primera línea de la pantalla aparece ahora “DET U” y en la
segunda línea se muestra el punto de equivalencia encontrado (Figura 15.4).
Figura 15.4. Detalle de la pantalla del valorador al finalizar la valoración.

Potenciometría - Determinación de vitamina C en preparado farmaceutico
(f) Para imprimir la curva de valoración pulsar repetidamente <def> hasta que
15.6. Resultados
1. A partir del volumen de disolución de Na2S2O3 gastado en las valoraciones
realizadas, teniendo en cuenta la estequiometría de las reacciones que tienen
lugar, calcular la cantidad de ácido ascórbico que contiene el preparado
farmacéutico (expresar los resultados en mg de ácido ascórbico por
comprimido).
2. Comentar los resultados obtenidos con ambos métodos: valoración con
indicador y valoración potenciométrica.
4. Comprobar si el valor obtenido de ácido ascórbico coincide con el indicado
por el laboratorio farmacéutico en el envase.
15.7. Cuestiones
1. De los dos métodos de valoración utilizados en la práctica ¿cuál es más
preciso?, ¿cuál es más rápido?
2. ¿Qué ventajas tienen las valoraciones potenciométricas frente a las que
utilizan indicadores químicos?
3. ¿Qué error puede cometerse si la disolución de almidón utilizada como
indicador no se hubiera conservado correctamente y estuviera hidrolizada?

Potenciometría - Determinación de estaño en hilo de soldar
Práctica 16. DETERMINACIÓN DE ESTAÑO EN UNA
ALEACIÓN DE ESTAÑO Y PLATA MEDIANTE
VALORACIÓN POTENCIOMÉTRICA
16.1. Introducción
El estaño es un elemento químico de número atómico 50 y símbolo Sn.
Ocupa el lugar 49 entre los elementos de la corteza terrestre. Es un metal plateado,
maleable, que no se oxida fácilmente con el aire y es resistente a la corrosión. Se
obtiene, principalmente, a partir de la casiterita (SnO2), mineral con un contenido de
estaño entorno al 87 %. Una de las características más llamativas del estaño es que a
temperaturas por debajo de los 13 ºC se transforma en un polvo amorfo de color
grisáceo conocido como estaño gris. Los objetos de estaño que sufren esta
descomposición presentan un aspecto moteado, por lo que a este proceso se le
denomina enfermedad o peste del estaño. El estaño ordinario al partirse produce un
sonido característico llamado “grito del estaño”.
Las aplicaciones del estaño son muy variadas. Se encuentra en muchas

aleaciones (bronces, latones) y se usa para recubrir otros metales protegiéndolos de la
corrosión. Así, se usa como revestimiento protector del cobre, del hierro y de diversos
metales usados en la fabricación de latas de conserva. También se emplea para
disminuir la fragilidad del vidrio, en fungicidas, tintes, dentífricos (SnF2), pigmentos y
en materiales de soldadura, por ejemplo, en el hilo de soldar.
La composición de la aleación metálica empleada en el proceso de soldadura

es un elemento de gran importancia. Esta aleación suele estar compuesta por la unión
de estaño con plomo, cobre o plata, en distintas proporciones, encontrándose en el
mercado en forma de hilo enrollado sobre un carrete, varilla, lingote, etc. Puesto que
estas aleaciones funden a una temperatura no muy alta, de entre 180 y 270 ºC, se
utilizan habitualmente para soldar conductores eléctricos, principalmente las de
estaño-plomo, ya que proporcionan soldaduras de gran resistencia y las probabilidades
de daños en los circuitos y piezas eléctricas son pequeñas. Las aleaciones estaño-plata
y estaño-cobre son más idóneas para la unión de tubos de cobre (saneamiento, gas y
calefacción) debido a su gran resistencia a presión y cambios de temperatura.
Puesto que las propiedades de las aleaciones de estaño pueden variar en

función del contenido de éste, la determinación de estaño en estas aleaciones adquiere
especial interés. Así, este metal puede determinarse por métodos gravimétricos,
volumétricos o mediante el empleo de diversas técnicas instrumentales tales como la
espectroscopía de absorción atómica. En esta práctica se pretende determinar el
contenido de estaño en un hilo de soldar (aleación de estaño y plata). Para ello,
previamente se deberá realizar una disolución ácida de la muestra. Posteriormente, el
estaño se determinará en la disolución problema obtenida mediante una valoración
potenciométrica.

16.2. Objetivos
4. Determinar el contenido de estaño en una aleación de estaño y plata.

Bureta Balanza analítica
Embudo de vidrio Electrodo combinado de platino
Kitasato de 500 mL Estufa
Matraces aforados de 250 y 500 mL Goma adaptadora
Matraces erlenmeyer de 100 mL Imán
Pipeta Pasteur con tetina de goma Pinza de bureta
Pipeta de 10 mL Placa calefactora
Placa filtrante de poro nº 4 Sistema de succión a vacío
Probeta de 100 mL Soporte
Varilla de vidrio Tijeras
Vasos de precipitados de 250 y 500 mL Valorador potenciométrico
Vidrio de reloj o pesasustancias Granatario
16.4. Reactivos
Ácido clorhídrico 1, 10-Fenantrolina
Ácido sulfúrico Acetona
Dicromato de potasio Agua destilada
Sal de Mohr Muestra de hilo de soldar
Sulfato ferroso heptahidratado

a) La disolución de la muestra se debe realizar en campana extractora debido a la

producción de vapores altamente tóxicos.
b) Asegúrese que el electrodo se encuentra sumergido en la disolución antes de
comenzar la valoración.
c) Evitar que el imán toque el electrodo cuando se realiza la valoración ya que
este se podría romper.

Disolución de dicromato de potasio 0,04 M. Se toman 2,9418 g de K2Cr2O7 y se

disuelven completamente en unos 200 mL de agua destilada. La disolución se
transfiere a un matraz aforado de 250 mL y se completa con agua destilada hasta el
enrase.
Disolución de sal de Mohr 0,13 M. Se pesan 25,4891 g de (NH4)2Fe(SO4)2· 6 H2O y
se disuelven completamente con unos 400 mL de agua destilada. La disolución se
transfiere a un matraz aforado de 500 mL, se añaden 10 mL de ácido sulfúrico
comercial y se enrasa con agua destilada.
Disolución de ferroína. Se pesan 1,485 g de 1, 10-fenantrolina y 0,695 g de
FeSO4·7H2O y se disuelven completamente con unos 80 mL de agua destilada. La
disolución se transfiere a un matraz aforado de 100 mL y se enrasa con agua destilada.
16.5.3. Estandarización del dicromato de potasio 0,04 M:
Rellenar la bureta con la disolución de sal de Mohr 0,13 M. Tomar 10 mL de

la disolución de dicromato de potasio 0,04 M y colocarlos en un erlenmeyer de 100
mL. Añadir 2 gotas de ferroína y agitar de forma manual para homogeneizar la
disolución. Valorar con la sal de Mohr hasta que en la disolución se observe un
cambio de color persistente (Esquema 1). Repita la valoración, al menos dos veces, y
obtenga la concentración de la disolución de K2Cr2O7 a partir de un valor medio.
Cr2O72- + 14 H+ + 6Fe2+ 2 Cr3+ + 6 Fe3+ + 7 H2O
Esquema 1. Reacción redox del anión dicromato con la sal de Mohr.
16.5.4. Determinación de estaño:
16.5.4.1. Disolución de la muestra
Pesar aproximadamente 1 g de hilo de soldar y lavar con acetona los restos de

materia orgánica que pueda contener. Posteriormente, se seca en la estufa durante
unos instantes para eliminar la acetona.
La muestra se corta con unas tijeras en trozos de unos 3 mm de longitud para

que la disolución sea más rápida. En un vaso de precipitados de 250 mL se lleva a
cabo la disolución de la muestra (Figura 16.1a) adicionando sobre ella 50 mL de ácido
clorhídrico comercial. Se calienta a 100 ºC en una placa calefactora hasta completar su
disolución (debe realizarse en campana extractora debido a la producción de
vapores altamente tóxicos). Tras la disolución de la muestra se observa la aparición
de un precipitado que será eliminado por filtración con placa del nº 4 y sistema de

succión a vacío (Figura 16.1b). Una vez filtrada la disolución, la placa se lavará con
agua destilada y el filtrado se transfiere a un vaso de precipitados de 500 mL, en el que
se han añadido previamente 100 mL de la disolución de K2Cr2O7 previamente
estandarizada. El kitasato se lavará con agua destilada y se transferirán las aguas de
lavado al vaso de precipitados, agitando la mezcla hasta su completa homogenización.
(a) (b)
Figura 16.1. (a) Proceso de disolución y (b) filtración de la muestra.
Por último se valorará la disolución problema con la disolución de la sal de

Mohr 0,13 M utilizando un valorador potenciométrico con electrodo combinado de Pt
(Figura 16.2).

(a) Rellenar la botella del valorador potenciométrico con la disolución de la sal de

Mohr.
magnitud medida pulsando <select> hasta que aparezca “U” en la pantalla.
Confirmar “U” pulsando <enter>.

con la mezcla preparada en el
agitador e introducir la bureta y
el electrodo en la disolución,
con cuidado de que el imán no
golpee las paredes del electrodo
durante la agitación. Al pulsar
<start> comenzará la
valoración. Durante la
valoración la primera línea de la
pantalla muestra el valor de U
Figura 16.3. Detalle de la pantalla del
actual y el volumen de reactivo
valorador en el transcurso de la
valorante dosificado (Figura
valoración.
16.3).
(e) Tan pronto como se haya alcanzado un punto de equivalencia, el valorador lo
muestra en la segunda línea de la pantalla. Dejar que la valoración continúe
durante cierto tiempo, hasta aproximadamente U = 500 e interrumpir entonces
con <stop>. En la primera línea de la pantalla aparece ahora “DET U” y en la
segunda línea se muestra el punto de equivalencia encontrado (Figura 16.4).
Figura 16.4. Detalle de la pantalla del valorador al finalizar la valoración.

(f) Para imprimir la curva de valoración pulsar repetidamente <def> hasta que
16.6. Resultados
1. A partir del volumen de disolución de sal de Mohr gastado en las valoraciones
realizadas y teniendo en cuenta la estequiometría de las reacciones que tienen
lugar, calcular la cantidad de estaño que contiene el hilo de soldar (expresar
los resultados en % en peso).
3. Comprobar si % de estaño calculado para la muestra de hilo de soldar
coincide con el indicado por el fabricante.
16.7. Cuestiones
1. ¿Se podría determinar con este método el contenido de estaño en una
aleación de estaño y plomo?, ¿por qué?
2. ¿Se podría utilizar permanganato potásico para producir la oxidación del
estaño?

Cromatografía en capa fina – Fundamento teórico
VII. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Fundamento teórico
La cromatografía comprende un amplio grupo de técnicas de separación con
gran importancia ya que permiten separar, identificar y/o cuantificar los componentes
de mezclas complejas que por otras técnicas no podrían resolverse. En su sentido más
amplio, la cromatografía está basada en las diferentes velocidades de migración de los
componentes de una mezcla a través de una fase estacionaria bajo la influencia de una
fase móvil.
Entre las distintas técnicas cromatográficas, la cromatografía en capa fina

(TLC, thin-layer chromatography) es una herramienta importante en la industria
farmacéutica para los controles rutinarios de pureza de los medicamentos. También es
habitualmente empleada en la industria alimentaria para el control de aditivos, así
como en numerosos estudios bioquímicos y biológicos.
En esta técnica la separación

se realiza sobre una delgada capa de
fase estacionaria inmovilizada en un
soporte plano, como una placa de
vidrio, aluminio o plástico (Figura 1).
La muestra, en cantidades muy
pequeñas, se coloca en un extremo de
la placa a unos 2 cm del borde. La
separación se efectúa en un recinto
cerrado que contiene fase móvil, la
cual asciende por la placa gracias al
efecto de capilaridad. Cuando la fase
móvil asciende hasta 2-3 cm del borde
superior de la placa la separación se Figura 1. Placas de capa fina.
detiene (Figura 2).
A veces, para obtener una mejor separación de los componentes se realizan

dos desarrollos con fases móviles distintas y en direcciones perpendiculares, esta
técnica se conoce como cromatografía plana bidimensional. El tratamiento de la placa con
un reactivo adecuado permite la visualización de los componentes separados, en el
caso de que éstos no sean coloreados. Alternativamente, pueden utilizarse placas que
llevan incorporado un material fluorescente, de manera que toda la placa presentará
fluorescencia bajo luz UV menos el lugar donde se encuentran los analitos no
fluorescentes que aparecerá sin fluorescencia.

Cromatografía en capa fina – Fundamento teórico
a) b)
Figura 2. Desarrollo de la placa mediante cromatografía en capa fina: (a) antes

de la separación (b) después de la separación.
Para llevar a cabo un análisis cualitativo, las manchas de la placa de capa fina
se caracterizan por la distancia que viajan con respecto a la distancia que recorre la
fase móvil. El parámetro que se emplea para caracterizar esta relación se denomina
factor de retraso (Rf ):
dr
Rf =
dm
donde dr es la distancia recorrida por el compuesto (centro de la mancha) y dm es la
distancia recorrida por el frente de la fase móvil.
El Rf obtenido para un analito no proporciona información suficiente para

poder identificarlo, ya que este valor depende mucho de las condiciones
experimentales Debido a esto, el método utilizado para la identificación tentativa de los
componentes de una muestra problema consiste en depositar en la placa, junto a la
muestra, disoluciones patrón de especies que se espera encontrar en la misma. La
coincidencia de los valores Rf de alguno de los componentes de la muestra con el de
alguno de las disoluciones patrón proporciona una gran evidencia para su identificación.
Sin embargo, para tener una mayor certeza en la identificación es necesario repetir el
ensayo utilizado distintas fases móviles y estacionarias, e incluso diferentes métodos
de revelado.
En algunas ocasiones, la TLC se utiliza con fines cuantitativos, especialmente

cuando no se dispone de otra técnica que se preste con facilidad a esta determinación.
Este tipo de análisis implica que debe depositarse en la placa una cantidad conocida de
muestra y la precisión en la aplicación de la misma suele ser la mayor fuente de error
en este tipo de análisis. Para evaluar la cantidad de cada componente en la muestra se
puede recurrir a distintos procedimientos como, por ejemplo, al método de elución que
requiere raspar la mancha de la placa y, después, extraer el analito con algún disolvente
apropiado para cuantificarlo mediante otra técnica adecuada. Otro procedimiento
alternativo consiste en utilizar un densitómetro de barrido que puede medir la radiación
emitida por la mancha por fluorescencia o reflexión.
Cromatografía en capa fina -Identificación de aspartamo en bebidas light
Práctica 17. IDENTIFICACIÓN DE ASPARTAMO Y SUS
PRODUCTOS DE HIDRÓLISIS EN BEBIDAS
REFRESCANTES MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN
CAPA FINA
17.1. Introducción
Las bebidas refrescantes denominadas “light” o dietéticas, por su bajo
contenido en calorías, deben su sabor dulce al contenido en edulcorantes artificiales
que se utilizan como sustitutos del azúcar común (sacarosa), ya que, presentan un alto
poder edulcorante con un bajo aporte calórico (0,1 a 3,0 cal/100 mL).
El aspartamo es uno de los edulcorantes sintéticos bajos en calorías más
utilizado en refrescos y en preparados alimenticios (principalmente postres y dulces).
Es un polvo blanco e inodoro, unas 200 veces más dulce que la sacarosa, tiene buen
sabor y no produce caries. Es estable en estado sólido, siempre que no se conserve a
temperaturas elevadas, mientras que en en medios acuosos presenta una máxima
estabilidad a pH 4,2 y una rápida degradación a pH <2,5 y pH >5,5. La vía de
degradación es doble: 1) hidrólisis a ácido aspártico y fenilalanina liberando metanol y
2) ciclodeshidratación a dicetopiperacina seguida de hidrólisis (Figura 17.1). Esta
inestabilidad es la responsable de la pérdida de parte del poder edulcorante que sufre
el aspartamo durante el procesado y almacenamiento de los alimentos. Así, se ha
comprobado que en bebidas refrescantes almacenadas a 30 °C durante 6 semanas la
pérdida puede llegar a ser del 30 %.
CH3
O O OH
O
C C
NH2 +H2O NH2
HO HO
C C C CH H 2C C C C CH H2 C
H2 H2
O O
C NH C NH
+ CH3OH
O ASPARTAMO O
L-ASPARTIL-L-FENILALANINA
+ CH3OH + H2O
O OH
O NH2
HO C
HN C
HO C C CH
H2
C C CH CH H2C O CH H2C
H2 C OH
O H2 N
C NH
O
O ÁCIDO ASPÁRTICO FENILALANINA

DICETOPIPERACINA
Figura 17.1. Reacción de hidrólisis del aspartamo.
Los métodos más utilizados para el análisis del aspartamo incluyen la

cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC) y cromatografía en capa fina (TLC).
En esta práctica se van a identificar mediante TLC el aspartamo y sus productos de
hidrólisis en bebidas refrescantes tipo “light”.

17.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía en capa fina.
2. Identificar la presencia de aspartamo, ácido aspártico y fenilalanina en bebidas
refrescantes“light”.

Cámara cromatográfica Lápiz
Matraces aforados de 50 y 250 mL Placa de gel de sílice (8 x 12 cm)
Pipeta Pasteur Probetas de 100 y 250 mL
Pulverizador Varilla de vidrio
Vasos de precipitados de 50 y 250 mL Vidrio de reloj o pesasustancias
Estufa
17.4. Reactivos
Ácido acético Ácido aspártico
Aspartamo Fenilalanina
Ninidrina Acetona
n-butanol Agua destilada
Muestras de bebidas refrescantes “ligh”

a) Es muy importante que se tenga especial cuidado con la placa de gel de sílice
al manipularla. No se debe tocar la fase estacionaria con los dedos.
b) Se debe tener cuidado en preparar la disolución reveladora con acetona, y al
pulverizarla sobre la placa se debe cuidar que sea una pulverización uniforme
por la misma.
Disolución n-butanol/ácido acético/agua, 6/2/2, v/v/v (fase móvil). Se toman

50 mL de ácido acético y 50 mL de agua que se transfieren a un matraz aforado de 250
mL, enrasando con n-butanol.
Disolución de ninidrina al 0.2 %, p/v (disolución reveladora). Se pesan 0,5 g de
ninidrina en un vidrio de reloj y se disuelven en un vaso de precipitados con unos 50
mL de acetona. Transferir a un matraz aforado de 250 mL y enrasar con acetona.

Disolución patrón de ácido aspártico de 120 ppm (p/v). Pesar 60 mg de ácido
aspártico, con la ayuda de un pesasustancias, disolver en un vaso de precipitados de 50
mL con agua destilada y transferirlo a un matraz aforado de 50 mL. Enrasar con agua
destilada.
Disolución patrón de ácido fenilalanina de 120 ppm (p/v). Pesar 60 mg de
fenilalanina, con la ayuda de un pesasustancias, disolver en un vaso de precipitados de
50 mL con agua destilada y transferirlo a un matraz aforado de 50 mL. Enrasar con
agua destilada.
Disolución patrón de aspartamo de 120 ppm (p/v). Pesar 60 mg de aspartamo,
con la ayuda de un pesasustancias, disolver en un vaso de precipitados de 50 mL con
agua destilada y transferirlo a un matraz aforado de 50 mL. Enrasar con agua destilada.
17.5.3. Identificación de aspartamo y sus productos de hidrólisis:
17.5.3.1. Análisis cromatográfico
(a) Activar las placas de gel de sílice por calentamiento en la estufa durante
30 minutos a 100 ºC. Dejar enfriar a temperatura ambiente.
(b) Trazar con lápiz una línea sobre la placa de sílice a 2 cm del borde
inferior de la misma.
(c) Sobre esta línea depositar las
disoluciones patrón (aspartamo,
fenilalanina y ácido aspartico) y las
muestras con una separación
aproximada de 1 cm entre ellas con
ayuda de una pipeta Pasteur (Figura
17.2). Hacerlo de forma que las
manchas no tengan un diámetro
superior a 0,5 cm. Tras depositar
cada disolución bordear
suavemente con el lápiz (no
bolígrafo) el perímetro de la mancha Figura 17.2. Aplicación de las
observada en la placa. Debajo de muestras.
cada mancha anotar una letra para
identificar posteriormente cada
mancha.
(d) A continuación, dejr reposar la placa hasta que las manchas de cada
compuesto se hayan secado.
(e) Introducir la fase móvil en la cámara cromatográfica (Figura 17.3),
teniendo en cuenta que la altura de la misma no debe ser superior a 1 cm.
(f) Introducir la placa en la cámara y cerrarla. Cuando el frente de la fase
móvil se encuentre a unos 2-3 cm del borde superior de la placa, esta se
saca con cuidado y se traza con un lápiz una línea para marcar la distancia
recorrida por la fase móvil.

(g) Dejar reposar la placa en la campana extractora hasta que la fase móvil se
haya secado.
(h) Una vez seca, y con la ayuda de un pulverizador, se rocía la placa con la
disolución reveladora. Dejar reposar la placa en la campana extractora
hasta que el exceso de disolución reveladora se haya evaporado.
(i) Finalmente, se introduce la placa en una estufa a 100 ºC durante 4 min
para la visualización de las manchas.
Figura 17.3. Detalle de la cubeta cromatográfica con la placa en su interior.
17.6. Resultados
1. Calcular el valor de Rf para el apartamo, la fenilalanina y el ácido

aspártico.
2. Identificar la presencia de apartamo, fenilalanina y ácido aspártico en las
bebidas refrescantes “ligt” analizadas.
3. A la vista de los resultados, ¿crees que alguna bebida de entre las
analizadas ha estado conservada en condiciones inadecuadas?
17.7. Cuestiones
1. El valor del Rf ¿depende de la fase estacionaria empleada? ¿y de la fase
móvil?
2. Al cambiar la fase móvil a otra más polar ¿cómo se ve afectado el valor
del Rf de un alcohol? ¿y el de una cetona?

Cromatografía en capa fina -Identificación de ácidos orgánicos
Práctica 18. IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS
EN ZUMOS Y VINOS MEDIANTE CROMATOGRAFÍA
EN CAPA FINA
18.1. Introducción
Las frutas, en general, poseen un sabor ácido debido a la presencia de una
serie de ácidos orgánicos naturales que se encuentran entre un 0,5 – 6 % y que
influyen en el sabor y aroma de las mismas. Los ácidos orgánicos no son nutrientes
esenciales para nuestro organismo, y ninguno de ellos es perjudicial ni dañino para el
estómago, dado que no alcanzan la acidez del jugo gástrico. Dentro de este grupo de
ácidos nos encontramos el málico (manzanas, uvas, cerezas, ciruelas, albaricoques), el
ácido tartárico (uvas) y el ácido cítrico (cítricos, fresas, peras...), entre otros.
En los zumos y vinos además de estos ácidos orgánicos naturales, se

encuentran otros que aparecen como consecuencia de la fermentación, denominados
ácidos orgánicos derivados. Los más importantes son al ácido láctico, en el caso de los
zumos, y el láctico y succínico en el caso de los vinos.
El análisis de ácido málico y tartárico en los zumos es importante para realizar

un control de identidad y autenticidad de la materia prima, un control de pureza y un
control del estado sanitario. El contenido de ácido málico depende de la variedad y
madurez de la fruta, varía entre 0,8 y 3,0 g/L para el zumo de naranja y como mínimo
3,0 g/L para el zumo de manzana. Sin embargo, el ácido láctico indica fermentación y
su valor límite se encuentra en 0,5 g/L para zumos de naranja y manzana.
En los vinos, el ácido tartárico es el más abundante y también el más estable,

pudiendo llegar a suponer más de dos tercios del total. Su aportación al vino es la de
añadir características de fruta madura, sabores frescos y agradables. El ácido málico
proporciona al vino notas ásperas poco agradables. Es mejor tolerado en los blancos.
Su concentración depende de la maduración del fruto (a mayor estado de madurez
menor contenido en málico). La tecnología de la vinificación aprovecha un proceso
natural como es la llamada fermentación maloláctica para transformar el ácido málico
del vino en ácido láctico que produce una reducción de la acidez total del vino y un
aumento de su estabilidad biológica. El ácido succínico aporta sensaciones saladas y
amargas, muy sutiles, y su presencia es apreciada en los vinos de calidad. Por todo ello,
su análisis en los vinos es de gran utilidad en el control de la fermentación y la
estabilidad de los vinos.
Los métodos más utilizados para el análisis de los ácidos orgánicos incluyen la
cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC), cromatografía iónica y
cromatografía en capa fina (TLC). En esta práctica se van a identificar el ácido málico,
tartárico, láctico y succínico mediante TLC en diferentes clases de zumos y vinos.

18.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía en capa fina.
2. Identificar la presencia de diferentes ácidos orgánicos (acido láctico, málico,
succínico y tartárico) en zumos y vinos.

Cámara cromatográfica Lápiz
Matraces aforados de 50 y 250 mL Placa de gel de sílice UV254 (8 x 12 cm)
Pipeta Pasteur Pipeta aforada de 5 mL
Probetas de 100 y 250 mL Pulverizador
Varilla de vidrio Vasos de precipitados de 50 y 250 mL
Vidrio de reloj o pesasustancias Estufa
Cámara de revelado con lámpara de UV
18.4. Reactivos
Ácido acético Ácido cítrico
Ácido láctico Ácido Málico
Ácido succínico Acido tartárico
Azul de bromofenol Acetato de n-butilo
Etanol Agua destilada
Muestras de vinos Muestras de zumos

a) Es muy importante que se tenga especial cuidado con la placa de gel de sílice
al manipularla. No se debe tocar la fase estacionaria con los dedos.
b) Se debe tener cuidado en preparar la disolución reveladora con acetona, y al
pulverizarla sobre la placa se debe cuidar que sea una pulverización uniforme
por la misma.
Disolución acetato de n-butilo/ácido acético, 2/1, v/v (fase móvil). Con una
probeta se toman 80 mL de acetato de n-butilo y 40 mL de ácido acético y se mezclan
a un vaso de precipitados de 250 mL.

Disolución de azul de bromofenol en etanol (disolución reveladora). Se pesan
0,1 g de azul de bromofenol en un vidrio de reloj y se disuelven en un vaso de
precipitados con unos 50 mL de etanol. La disolución resultante se transfiere a un
matraz aforado de 100 mL y se enrasa con etanol.
Disolución patrón de ácido málico de 6.000 ppm (p/v). Pesar 0,3 g de ácido
málico, con la ayuda de un pesasustancias, y disolver en un vaso de precipitados con
unos 30 mL de etanol. Transferir a un matraz aforado de 50 mL y enrasar con etanol.
Disolución patrón de ácido láctico de 6.000 ppm (p/v). Tomar con ayuda de una
pipeta aforada 5 mL de ácido láctico. Transferirlos a un matraz aforado de 50 mL y
enrasar con etanol.
Disolución patrón de ácido succínico de 6.000 ppm (p/v). Pesar 0,3 g de ácido
succínico, con la ayuda de un pesasustancias, y disolver en un vaso de precipitados con
Disolución patrón de ácido tartárico de 6.000 ppm (p/v). Pesar 0,3 g de ácido
tartárico, con la ayuda de un pesasustancias, y disolver en un vaso de precipitados con
18.5.3. Identificación de ácidos orgánicos:
18.5.3.1. Análisis cromatografíco
(a) En primer lugar, se han de activar las placas de gel de sílice por
calentamiento en la estufa durante 30 minutos a 100 ºC. Transcurrido el
tiempo dejar enfriar a temperatura ambiente.
(b) Trazar con lápiz una línea sobre la placa de sílice a 2 cm del borde
inferior de la misma.
(c) Sobre esta línea depositar las
disoluciones patrón (acido láctico,
málico, succínico y tartárico) y las
muestras con una separación de
aproximadamente 1 cm entre ellas,
con ayuda de una pipeta Pasteur
(Figura 18.1). Hacerlo de forma que
las manchas no tengan un diámetro
superior a 0,5 cm. Tras depositar
cada disolución bordear con el lápiz
(no bolígrafo) suavemente el
perímetro de la mancha observada Figura 18.1. Aplicación de las
en la placa. Debajo de cada mancha muestras.
anotar una letra para identificar
posteriormente cada mancha.
(d) A continuación, se deja reposar la placa hasta que las manchas de cada
compuesto se hayan secado.

(e) Introducir la fase móvil en la cámara cromatográfica (Figura 18.2),
teniendo en cuenta que la altura de la misma no debe ser superior a 1 cm.
(f) Introducir la placa en la cámara y cerrarla. Cuando el frente de la fase
móvil se encuentre a unos 2-3 cm del borde superior de la placa, esta se
saca con cuidado y se traza con un lápiz una línea para marcar la distancia
recorrida por la fase móvil.
Figura 18.2. Detalle de la cubeta cromatográfica con la placa en su interior.
(g) Dejar reposar la placa en la campana extractora hasta que la fase móvil se
haya secado.
(h) Una vez seca, se pone la placa en la cámara de revelado con lámpara de
UV (Figura 18.3) y se identifican los compuestos presentes que
aparecerán como manchas claras sobre la placa fluorescente.
(i) Finalmente, se saca la placa de la cámara y con la ayuda de un
pulverizador se rocía con la disolución reveladora. Dejar reposar la placa
en la campana extractora hasta que el exceso de disolución reveladora se
haya evaporado. Transcurridos unos minutos, en la placa aparecerán
manchas de color amarillo frente al resto de la placa que debe aparecer
con un color verde.
Figura 18.3. Cámara de revelado provista de lámpara de radiación UV.

18.6. Resultados
1. Calcular el valor de Rf para el acido láctico, málico, succínico y tartárico.

2. Identificar la presencia de estos ácidos en las muestras de zumos y vinos
analizadas.
18.7. Cuestiones
1. El valor del Rf ¿depende de la fase estacionaria empleada?, ¿y de la fase
móvil?
2. ¿Cómo se podría determinar la calidad de un vino según un análisis por
cromatografía de capa fina?

Cromatografía de líquidos de alta eficacia – Fundamento teórico
VIII. CROMATOGRAFÍA DE LIQUIDOS DE ALTA
EFICACIA
Fundamento teórico
La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC, high performance liquid
chromatography) es una de las técnicas cromatográficas más utilizadas en la actualidad.
Esta técnica de separación se basa en la distinta distribución de los componentes de
una muestra entre dos fases: una fase estacionaria, situada en el interior de un tubo
estrecho o columna y una fase móvil líquida que se mueve a través de la primera,
arrastrando en su movimiento a la muestra. Dependiendo de la naturaleza de la fase
estacionaria se establecerán distintos tipos de interacción entre los componentes de la
muestra y la misma, lo que da lugar a los diversos tipos de cromatografía existentes, entre
los que destacan: a) la cromatografía sólido-líquido o de adsorción, con fases estacionarias de
sílice o alúmina; b) la cromatografía líquido-líquido o de reparto; cuando la fase estacionaria es
un líquido soportado sobre un relleno inerte; c) la cromatografía iónica, si la fase estacionaria
tiene grupos funcionales cargados y d) la cromatografía de exclusión por tamaños, cuando la
fase estacionaria son partículas porosas en cuyos poros penetran los analitos en grado
inverso a su tamaño. En la Figura 1 se muestra el esquema de un HPLC.
Registro
cromatograma
Muestra
Columna Adquisición
bomba Detector de datos
Fase móvil Desechos
Figura 1. Esquema de un cromatógrafo de líquidos.
En un equipo de HPLC la
muestra se introduce por medio de una
válvula de inyección con ayuda de una
microjeringa (Figura 2) y es arrastrada
por la fase móvil pasando a alta presión a
través de la columna gracias a una bomba.
Es importante que la bomba genere un
flujo reproducible y uniforme, libre de
pulsaciones. La separación de los
analitos se producirá en la columna, en
cuyo interior se sitúa la fase estacionaria Figura 2. Válvula de inyección.
(Figura 3).

Figura 3. Columnas típicas para HPLC.
En cromatografía de líquidos es muy importante que la fase móvil no tenga

partículas en suspensión, que pueden obturar los tubos conectores, la bomba o la
columna, ni gases disueltos. Debido a esto la fase móvil debe ser filtrada a vacío a
través de filtros de membrana adecuados en función de la naturaleza de la fase móvil
(celulosa, nylon, etc) de tamaño de poro muy pequeño (Figura 4.a). Además, en el
interior del recipiente donde se deposita la fase móvil se coloca un filtro de acero
inoxidable, que impide que las posibles partículas sólidas existentes entren en el
sistema cromatográfico. Este filtro tiene una elevada superficie para evitar que haya
una restricción de flujo desde el reservorio hasta la bomba (Figura 4.b).
Filtro
(a) (b)
Figura 4. (a) Filtración a vacío de la fase móvil. (b) Detalle del filtro situado en
el interior del reservorio para la fase móvil.

Los analitos separados entran al detector, cuya respuesta se visualiza en forma de
cromatograma en un registrador o en la pantalla de un ordenador. El detector más
común en HPLC es el detector de absorbancia UV-Vis por su sensibilidad y amplio intervalo
de respuesta lineal. Muchos de estos detectores utilizan una fuente de luz UV-Vis
(lámpara de deuterio, xenon o wolframio), un monocromador para elegir la longitud de
onda óptima, una celda de flujo en forma de Z (Figura 5) por la que pasa el efluente de
la columna y una fila de fotodiodos para registrar el espectro de todos los analitos que
pasan por el detector.
eluyente
ventanas
Luz UV detector
desecho
Figura 5. Celda del detector de absorbancia UV-Vis.
Por tanto, en función de la naturaleza de la muestra se seleccionará una columna

adecuada, capaz de separar los componentes de dicha muestra. Después, se efectuará la
elección de una fase móvil que produzca una retención, selectividad y resolución
adecuadas para dichos componentes. A la vista del cromatograma resultante (Figura 6) se
podrán variar las condiciones hasta lograr la mejor separación.
tRB
Respuesta del
detector tRA
tM
inyección
tiempo
Figura 6. Separación de una mezcla de compuestos por HPLC.
Entre los parámetros cromatográficos más importantes a tener en cuenta cabe

destacar los siguientes:

• Tiempo de retención (tr): Tiempo que transcurre entre la inyección del analito y el
momento en que el centro de la banda del compuesto alcanza el detector.
• Tiempo muerto (tm): Tiempo que tarda la fase móvil en alcanzar el detector.
Experimentalmente se calcula como el tiempo necesario para que la mayoría de
las moléculas de un compuesto que no es retenido en la fase estacionaria (M)
alcancen el detector.
• Tiempo de retención corregido (tr’): Es la diferencia entre el tiempo de retención para

un analito y el tiempo muerto. Indica el tiempo que el compuesto está retenido en
la fase estacionaria.
• Factor de retención (k): Se define como la relación entre el tiempo que el compuesto
pasa en la fase estacionaria y en la fase móvil:
k = tr’ / tm
• Factor de separación (α): Es el cociente entre el tr’ de la especie más retenida (B) y el
tr’ de la especie menos retenida (A):
α = trB’ / trA’
• Resolución (Rs): Es una medida cuantitativa de la capacidad de una columna para

separar dos bandas adyacentes. Se calcula como:
trB - trA
Rs = 1,18
W 1/2A + W1/2B
siendo W1/2 es el ancho del pico a la mitad de su altura.
• Número de platos teóricos (N): Cantidad adimensional que expresa la eficacia de una
columna, es decir, su capacidad para dar bandas estrechas. Se puede calcular a
partir de un pico cromatográfico como:
N = 5,54 (tr / W1/2)2
• Altura de plato teórico (HETP): Permite expresar la eficacia de la columna en

unidades de longitud. Es la longitud de la columna dividida por el N:
HETP = L / N

Cromatografía iónica
La cromatografía iónica es un tipo de cromatografía de líquidos de alta
eficacia que se basa en la separación de analitos iónicos mediante el uso de resinas de
intercambio iónico como fase estacionaria. Las resinas de intercambio iónico suelen
ser copolímeros del estireno con divinilbenceno. Sobre estas resinas podemos tener
grupos funcionales cargados negativamente, resinas de intercambio catiónico (que se
utilizan para separar especies catiónicas) o grupos funcionales cargados positivamente,
resinas de intercambio aniónico (que se utilizan para separar aniones) (Figura 7). Los puntos
activos más comunes en las resinas de intercambio catiónico son los grupos de ácido
fuerte como ácido sulfónico (-SO3-). Los intercambiadores aniónicos contienen,
principalmente, grupos de base fuerte como amina cuaternaria (-N(CH3)3+).
- +
- +
- +
- +
Intercambio catiónico Intercambio aniónico
Figura 7. Representación esquemática de las resinas de intercambio iónico.
En este tipo de cromatografía, la mayor o menor retención de los analitos

depende de la competencia que se establece entre los iones de la fase móvil y los
analitos por los puntos activos de la fase estacionaria. La elución se produce como
consecuencia del desplazamiento del analito de la fase estacionaria por parte de los
iones presentes en la fase móvil. Así, cuando una analito A- entra en una columna
rellena con una resina de intercambio aniónico se establece el siguiente equilibrio:
Resina- N(CH3)3+ E- + A- móvil ↔ Resina- N(CH3)3+A- + E- móvil
donde E- es el anión que se encuentra en la fase móvil que compite con el analito por
los puntos activos de la fase estacionaria. La constante para este equilibrio (Kex) es:
Kex = [A- est ] [E- móvil] / [E- est] [A- móvil]
Kex recibe el nombre de coeficiente de selectividad ya que representa la afinidad de la resina

por el ion A- con respecto a otro ion (E-). Cuando Kex es un valor alto, la fase sólida
tiene una gran tendencia a retener los iones y cuando Kex es pequeña sucede lo
contrario.

A diferencia de otros tipos de cromatografía de líquidos, la cromatografía
iónica requiere, en algunas ocasiones, el uso de una columna supresora que se coloca
inmediatamente después de la columna analítica. Esta columna está rellena de una
segunda resina de intercambio iónico que convierte los iones del disolvente en
especies moleculares no iónicas o poco ionizadas, sin alterar los iones del analito. La
utilidad que presentan estas columnas es que permiten aumentar considerablemente la
sensibilidad de los detectores de conductividad que se utilizan en cromatografía de
intercambio iónico ya que, de lo contrario, la elevada conductividad de la fase móvil,
en general, tiende a enmascarar la de los analitos. Así, cuando se separan aniones, se
eligen muchas veces mezclas de carbonato y bicarbonato sódico como eluyente. En
este caso la columna supresora contiene una resina de intercambio catiónico y el
producto de la reacción en la misma es el ácido carbónico muy poco disociado que no
contribuye de manera significativa a la conductividad. La reacción en la columna
supresora es entonces:
Resina-SO3 - H+ + Na+ (ac) + HCO3- (ac) ↔ Resina-SO3 - Na + + H2CO3 (ac)
Por otro lado, cuando se separan cationes y se elige HCl como eluyente, la
columna supresora será de intercambio aniónico en forma de hidróxido y el producto
de la reacción será agua:
Resina-N(CH3)3+OH- + H+ (ac) + Cl- (ac) ↔ Resina-N(CH3)3+Cl- + H2O (ac)
Un inconveniente de las columnas supresoras es que conviene regenerarlas

periódicamente (de ordinario cada 8 ó 10 h) a fin de convertir sus rellenos otra vez a la
forma ácida o básica original. Debido a esto, en algunos cromatógrafos se colocan tres
“unidades” o columnas supresoras idénticas, de manera que mientras una se está
utilizando, la segunda está siendo regenerada (mediante el paso de una disolución de
ácido o base fuerte) y la tercera está siendo lavada con agua. Una vez que el análisis ha
finalizado, se produce un giro en el rotor y la columna que acaba de ser lavada se
utiliza para la supresión. De esta forma se puede trabajar de manera prácticamente
continua (Figura 8).
ELUATO H2 0
H2SO4
1 2 3
DESECHO DESECHO
DETECTOR
Figura 8. Representación esquemática de un sistema de tres columnas

supresoras.

HPLC - Determinación de paracetamol y ácido acetilsalicílico en un fármaco
Práctica 19. DETERMINACIÓN DE PARACETAMOL Y

ÁCIDO ACETIL SALICÍLICO EN UN PREPARADO
FARMACÉUTICO MEDIANTE HPLC
19.1. Introducción
La Aspirina® es un medicamento de múltiples acciones terapéuticas
comprobadas como analgésico, antiinflamatorio, antifebril y protector vascular. Fue
sintetizada por Felix Hoffmann en 1897 y, actualmente, es uno de los medicamentos
más consumidos en el mundo produciéndose unas 50.000 toneladas al año. Su
principio activo, el ácido acetilsalicílico, se obtiene mediante la esterificación de ácido
acético y ácido salicílico en forma de cristales de color blanquecino, alargados y de
sabor amargo:
O O
O
C C O
H3C OH
OH
O
+ + H3C C OH
OH H3C O
O C CH3
Acido salicílico
Anhidrido acético Aspirina O
(Acido acetilsalicílico)
El paracetamol es un compuesto que posee unas propiedades analgésicas y

antipiréticas similares a las del ácido acetilsalicílico pero no presenta actividad
antiinflamatoria. El paracetamol se utiliza desde finales del siglo XIX en el tratamiento
del dolor moderado agudo y crónico. Se obtiene en forma de cristales de color blanco
a partir de la reacción de p-aminofenol y anhídrido acético:
O
HO HO O
H 3C O
+ O + H3C C OH
H3C
NH2 N CH3
O H
p-amonifenol paracetamol
anhidrido acético
(4-acetamidofenol)
Tanto el ácido acetilsalicílico como el paracetamol pueden contener

impurezas, fundamentalmente debido a una reacción de síntesis incompleta o a la
hidrólisis de parte del producto durante su aislamiento. Por este motivo, es importante
controlar su pureza en los preparados farmacéuticos. De entre los métodos existentes
para llevar a cabo la determinación cuantitativa de ambos compuestos, cabe destacar
las técnicas cromatográficas. Entre éstas se encuentran la cromatografía líquida de alta
eficacia, la cromatografía de gases y, más recientemente, la cromatografía de líquidos
acoplada a masas. En esta práctica llevará a cabo la determinación cuantitativa de estos
compuestos en un preparado farmacéutico mediante HPLC en fase inversa con
detección ultravioleta a 230 nm.
19.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía de líquidos.
2. Aprender el manejo de un equipo de HPLC.
3. Determinar el contenido de ácido acetilsalicílico y paracetamol en un
preparado farmacéutico.

Matraces aforados de 10, 50, 100 y 250 mL Pipetas graduadas de 5 y 10 mL
Probeta de 100 y 50 mL Vasos de precipitados de 100 mL
Vidrio de reloj o pesasustancias Pipetas Pasteur
Balanza analítica Baño de ultrasonidos
Columna cromatográfica C18 Microjeringa de 100 µL
Jeringas de plástico Filtros membrana de nylon
Equipo de cromatografía con detector de absorción UV-Vis
19.4. Reactivos
Ácido acetilsalicílico
Ácido acético para HPLC
Uracilo
Paracetamol
Acetonitrilo para HPLC
Agua Milli-Q
Muestra de preparado farmacéutico

Disolución de ácido acético al 1 % (v/v). Se transfieren 5 mL del ácido acético

comercial a un matraz aforado de 500 mL, enrasando con agua Milli-Q.
Disolución de acetonitrilo/ácido acético al 1 % (20/80, v/v, fase móvil). Se
transfieren 400 mL de la disolución de ácido acético al 1% a un matraz aforado de 500
mL, completando con acetonitrilo hasta el enrase.
Disolución madre de paracetamol 1.000 ppm (p/v). Se disuelven 0,050 g de
paracetamol en aproximadamente 25 mL de fase móvil. La disolución resultante se
transfiere a un matraz aforado de 50 mL y se enrasa con fase móvil.

Disolución de ácido acetilsalicílico 1.000 ppm (p/v). Se disuelven 0,050 g de

ácido acetilsalicílico en aproximadamente 25 mL de fase móvil. La disolución
resultante se transfiere a un matraz aforado de 50 mL y se enrasa con fase móvil.
Disolución de uracilo 1.000 ppm (p/v). Se disuelven 0,050 g de uracilo en
aproximadamente 25 mL de fase móvil. La disolución resultante se transfiere a un
matraz aforado de 50 mL y se enrasa con fase móvil.
19.5.2. Determinación de paracetamol y ácido acetilsalicílico:
19.5.2.1. Disolución del preparado farmacéutico
Se pesan en una balanza

analítica 0,02 g de muestra y se
disuelven en, aproximadamente, 50
mL de fase móvil. La disolución
resultante se transfiere a un matraz
aforado de 100 mL que se enrasa con
la disolución de la fase móvil.
Posteriormente, se toma una alícuota
de unos 10 mL y se hace pasar a través
de un filtro de membrana de nylon,
con un tamaño de poro de 0,45 µm,
con ayuda de una jeringa de plástico
(Figura 19.1). Figura 19.1. Filtración de la
disolución problema.
19.5.2.2. Preparación de disoluciones patrón
A partir de las disoluciones madre de ácido acetilsalicílico y paracetamol de

1.000 ppm (p/v) se prepararan cinco disoluciones patrón de 10 mL que contengan
concentraciones entre 40 y 10 ppm (p/v) de ácido acetilsalicílico y entre 20 y 5 ppm
(p/v) de paracetamol y se enrasarán con la disolución de la fase móvil. Se agitarán
manualmente los matraces con la finalidad de homogeneizar las disoluciones.
La Figura 19.2 muestra el cromatógrafo de líquidos que se va a utilizar en esta

práctica. Para realizar el análisis, en primer lugar, se debe encender el cromatógrafo y
seleccionar el método de trabajo adecuado. A continuación, se coloca la fase móvil
(previamente desgasificada durante unos 10 min en un baño de ultrasonidos) en el
recipiente para la misma y se aumenta el flujo, lentamente, hasta alcanzar un valor final
de 1,0 mL/min. Por último, se debe acondicionar la columna dejando pasar la fase
móvil durante unos 10 min.
Figura 19.2. Cromatógrafo de líquidos.
Una vez acondicionada la columna, se pueden ir introduciendo en el

cromatógrafo las disoluciones preparadas. Para ello, con la válvula de inyección en
posición de “carga” introducir, en primer lugar, la disolución de uracilo con ayuda de
una microjeringa de 100 µL (Figura 19.3a). Seguidamente, girar rápidamente la
válvula a la posición de “inyección” para su introducción en la columna (Figura 19.3b).
(a) (b)
Figura 19.3. Detalle de la válvula de inyección: (a) posición carga, (b) posición
inyección.
Procediendo de la misma manera, introducir en el cromatógrafo las

disoluciones madre de 1.000 ppm (p/v) de ácido acetilsalicílico y de paracetamol.
Finalmente, inyectar las disoluciones patrón preparadas de ácido acetilsalicílico y
paracetamol para la obtención de las rectas de calibrado de cada analito y la disolución
problema de la muestra. Imprimir los cromatogramas obtenidos en cada caso y anotar
las áreas y los tiempos de retención de los picos correspondientes a los analitos de
interés.

19.6. Resultados
1. Calcular el tiempo de retención, tiempo de retención corregido y el factor de
retención para cada analito.
2. Calcular el factor se separación y la resolución entre ambos analitos en las
condiciones de trabajo.
3. Construir una recta de calibrado para cada analito con los datos de las áreas
de los picos obtenidos en los cromatogramas correspondientes a las
disoluciones patrón inyectadas. Obtener los valores de la ordenada en el
origen, la pendiente y el coeficiente de correlación de dichas rectas.
4. Obtener la concentración de ácido acetilsalicílico y paracetamol en el
preparado farmacéutico (expresada en % en peso) a partir de la ecuación de la
recta de calibrado y de la medida de las áreas de los picos obtenidos en los
cromatogramas correspondientes a la disolución problema.
19.7. Cuestiones
1. ¿Cómo se podría determinar la longitud de onda de trabajo más adecuada
para llevar a cabo el análisis cromatográfico del paracetamol y ácido
acetilsalicílico utilizando el detector de absorbancia UV-Vis?

HPLC - Determinación de cafeína, aspartamo y ácido benzoico en bebidas
Práctica 20. DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA,

ASPARTAMO Y ÁCIDO BENZOICO EN BEBIDAS
REFRESCANTES MEDIANTE HPLC
20.1. Introducción
Las bebidas conocidas popularmente como refrescos o bebidas refrescantes
son bebidas no alcohólicas preparadas, principalmente, a base de agua potable o
mineral. En función de su composición atienden a distintas denominaciones. Así, las
bebidas de cola se consideran bebidas refrescantes de extractos y son elaboradas con
extractos de frutas o de partes de plantas comestibles. En las bebidas refrescantes se
permite la adición de una cantidad variable de azúcar, además de un gran número de
aditivos.
La cafeína es un alcaloide del grupo de las xantinas que se adiciona en algunas

bebidas refrescantes por su acción estimulante. En los refrescos de cola, este
compuesto procede del extracto de nuez de cola, un fruto tropical que la contiene de
modo natural. La cafeína se encuentra además en muchos alimentos de uso cotidiano
como el café, el té y el chocolate. El aspartamo (E951) es un edulcorante artificial no
calórico descubierto en 1965 y comercializado en los años ochenta. Es un polvo
blanco e inodoro, unas 200 veces más dulce que la sacarosa que se emplea en
numerosos alimentos bajos en calorías o “light”. Cuando se encuentra seco o
congelado es estable pero cuando se conserva en medio líquido a temperaturas
superiores a 30 °C se descompone y pierde su poder edulcorante. El ácido benzoico
(E-210) es uno de los conservantes más utilizados. Es un compuesto que presenta un
anillo aromático y es un sólido incoloro poco soluble en agua fría pero bastante
soluble en agua caliente o disolventes orgánicos. Es muy útil contra mohos, levaduras
y bacterias en alimentos de carácter ácido, por lo que es muy utilizado como
conservante en bebidas refrescantes.
CH3 OH
O
N O O OCH3
N
O
N
N CH3 HOOC N
H
H3C NH2
O
cafeina aspartamo
cafeína aspartamo ácido
Acido benzoico
benzóico
De entre los distintos métodos existentes para llevar a cabo la determinación

cuantitativa de aditivos en alimentos, cabe destacar las técnicas cromatográficas, como
la cromatografía líquida de alta eficacia y la cromatografía de gases, y las técnicas
electroanalíticas. En esta práctica se va a llevar a cabo la cuantificación de cafeína,
aspartamo y ácido benzoico en una bebida de cola “light” mediante HPLC en fase
inversa con detección ultravioleta.
20.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía de líquidos.
2. Aprender el manejo de un equipo de HPLC.
3. Determinar el contenido de cafeína, aspartamo y ácido benzoico presentes en
una bebida de cola “light”.

Cromatógrafo de líquidos con detector de absorbancia UV-Vis
Matraces aforados de 10, 50, 250 y 500 mL Pipetas aforadas de 5 mL
Pipetas graduadas de 1 y 2 mL Pipetas Pasteur
Probeta de 100 y 50 mL Vasos de precipitados de 100 mL
Vidrio de reloj o pesasustancias Baño de ultrasonidos
Balanza analítica Microjeringa de 100 µL
Columna cromatográfica C18 Filtros de membrana de nylon
Jeringa de plástico
20.4. Reactivos
Ácido benzoico Ácido fosfórico para HPLC
Cafeína Aspartamo
Metanol para HPLC Agua Milli Q
Muestras de bebidas refrescantes

Disolución de ácido fosfórico al 0,5 % (v/v). Se transfieren 2,5 mL de ácido

fosfórico comercial a un matraz aforado de 500 mL y se enrasa con agua Milli-Q.
Disolución de la fase móvil metanol/ácido fosfórico 0,5 % (30/70, v/v). Se
transfieren 75 mL de la disolución de ácido fosfórico al 0,5 % a un matraz aforado de
250 mL y se completan con metanol para HPLC hasta el enrase.
Disolución madre de cafeína 1.000 ppm (p/v). Se disuelven 0,050 g de cafeína en
aproximadamente 25 mL de agua Milli Q. La disolución resultante se transfiere a un
matraz aforado de 50 mL y se enrasa con agua Milli Q.
Disolución madre de aspartamo 1.000 ppm. Se disuelven 0,050 g de aspartamo y se
en aproximadamente 25 mL de agua Milli Q. La disolución resultante se transfiere a
un matraz aforado de 50 mL y se enrasa con agua Milli Q.
Disolución madre de ácido benzoico 1.000 ppm. Se disuelven 0,050 g de ácido

benzoico en aproximadamente 25 mL de agua Milli Q. La disolución resultante se
transfiere a un matraz aforado de 50 mL y se enrasa con agua Milli Q.
20.5.2. Determinación de cafeína, aspartamo y ácido benzoico:
Se toman 5 mL de la muestra con una pipeta aforada, se llevan a un matraz

aforado de 10 mL y se enrasa con fase móvil. Posteriormente, se agita el matraz para
homogeneizar la disolución y se pasa a través de un filtro de nylon con un tamaño de
poro de 0,45 µm (Figura 20.1).
Figura 20.1. Filtración de la disolución problema.
A partir de las disoluciones madre de cafeína, aspartamo y ácido benzoico de

1.000 ppm (p/v) se prepararán cinco disoluciones patrón de 10 mL que contengan
concentraciones entre 20 y 60 ppm de cafeína, entre 75 y 175 ppm de aspartamo y
entre 20 y 60 ppm de ácido benzoico y se enrasarán con la disolución de la fase móvil.
Se agitarán manualmente los matraces con la finalidad de homogeneizar las
disoluciones.
La Figura 20.2 muestra el cromatógrafo de líquidos que se va a utilizar en esta

práctica. Para realizar el análisis, en primer lugar, se debe encender el cromatógrafo y
seleccionar el método de trabajo adecuado. A continuación, se coloca la fase móvil
(previamente desgasificada durante unos 10 min en un baño de ultrasonidos) en el
recipiente para la misma y se aumenta el flujo, lentamente, hasta alcanzar un valor final
de 1,0 mL/min. Se debe acondicionar la columna dejando pasar la fase móvil durante
unos 10 min.
Figura 20.2. Cromatógrafo de líquidos.
Por último, seleccionar la longitud de onda de trabajo adecuada en el detector

a la vista de los espectros de absorción UV-Vis mostrados en la Figura 20.3 para la
cafeína, aspartamo y ácido benzoico.
2
cafeína
ac.benzoico
1,5
aspartamo
Abs 1
0,5
0
190 240 290 340 390
-0,5
nm
Figura 20.3. Espectros de absorción UV-Vis para la cafeína, aspartamo y ácido

benzoico.
Una vez acondicionada la columna se pueden ir introduciendo en el

cromatógrafo las disoluciones preparadas. Para ello, con la válvula de inyección en
posición de “carga” introducir, en primer lugar, la disolución de uracilo con ayuda de
una microjeringa de 100 µL (Figura 20.3a). Seguidamente, girar rápidamente la
válvula a la posición de “inyección” para su introducción en la columna (Figura 20.3b).
(a) (b)
Figura 20.3. Detalle de la válvula de inyección: (a) carga (b) inyección.
Procediendo de la misma manera, introducir en el cromatógrafo las

disoluciones de 1.000 ppm de aspartamo y ácido benzoico. Finalmente, inyectar las
disoluciones patrón preparadas para la obtención de las rectas de calibrado de cada
analito y la disolución de la muestra problema. Imprimir los cromatogramas obtenidos
en cada caso y anotar las áreas y los tiempos de retención de los picos
correspondientes a los analitos de interés
20.6. Resultados
1. Calcular el tiempo de retención, tiempo de retención corregido y el factor de
retención para cada analito.
2. Calcular el factor se separación y la resolución entre ambos analitos en las
condiciones de trabajo.
3. Construir una recta de calibrado para cada analito con los datos de las áreas
de los picos obtenidos en los cromatogramas correspondientes a las
disoluciones patrón inyectadas. Obtener los valores de la ordenada en el
origen, la pendiente y el coeficiente de correlación de dichas rectas.
4. Obtener la concentración de aspartamo, cafeína y ácido benzoico en las
bebidas (expresada en % en peso) a partir de la ecuación de la recta de
calibrado y de la medida de las áreas de los picos obtenidos en los
cromatogramas correspondientes a la disolución problema.
20.7. Cuestiones
1. ¿Se puede ver modificado el espectro de absorción UV de un compuesto en
función del pH?
2. ¿Cómo se puede predecir el orden de elución de los analitos en cromatografía
en fase inversa en función del pKa de los mismos?

HPLC – Determinación de aniones en aguas residuales
Práctica 21. DETERMINACIÓN DE ANIONES EN AGUAS

RESIDUALES MEDIANTE CROMATOGRAFÍA IÓNICA
21.1. Introducción
Las aguas residuales se generan como consecuencia de la actividad humana
tanto de tipo doméstico y urbano como industrial. Aproximadamente el 59 % del agua
que se consume en los países desarrollados se destina al sector industrial, un 30 % a
consumo agrícola y el resto a consumo doméstico. Este agua contamina nuestros
recursos hídricos y nos da idea de la importancia que tiene hoy día el tratamiento de
aguas residuales antes de su vertido.
Típicamente, el tratamiento de aguas residuales consiste en una separación

física inicial de los sólidos de la corriente de agua, seguido de la conversión progresiva
de la materia biológica disuelta en una masa sólida mediante el uso de bacterias.
Finalmente, una vez que la masa biológica es separada, el agua tratada puede
desinfectarse adicionalmente por procesos físicos o químicos.
Además de los parámetros típicos analizados en las aguas residuales, como

DBO y DQO, es importante el análisis de los aniones presentes. El nitrato es una de
las formas de nitrógeno de mayor interés en las aguas residuales. Es un nutriente
esencial para muchos autótrofos fotosintéticos y una concentración alta es indicio de
una elevada mineralización de compuestos nitrogenados. Los fosfatos son un
contaminante importante sobre todo en las aguas de cultivo debido al gran uso de
fertilizantes y tienen muchos efectos sobre el organismo, por lo que su análisis
también es importante. El cloruro es uno de los iones de mayor presencia en todos los
tipos de agua y confiere al agua un sabor salado, por lo que en aguas potables su límite
se encuentra en 250 ppm. Los sulfatos suelen aparecer en las aguas residuales en
grandes cantidades debido al uso de ácido sulfúrico .Valores por encima de 250 ppm
pueden producir efectos purgantes además de conferir cierto carácter amargo al agua.
El contenido de aniones en las aguas residuales puede verse afectado no sólo

durante el tratamiento a que es sometido el agua residual sino también durante el
almacenamiento de la muestra antes de su análisis. Por este motivo, su análisis debe
realizarse a ser posible inmediatamente después de la toma de la misma. La actividad
microbiológica puede ser la responsable del cambio producido en el contenido de
nitratos, nitritos y amoníaco. Además, los sulfatos pueden ser reducidos a sulfitos y el
cloro residual a cloruro, mientras que por oxidación se pueden ver modificados
también los fluoruros.
En esta práctica se va a determinar el contenido de aniones, nitratos, fosfatos,

cloruros y sulfatos, en muestras de agua residual mediante cromatografía iónica,
utilizando una columna de intercambio aniónico con supresión química.

21.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía iónica.
2. Aprender el manejo de un cromatógrafo iónico.
3. Determinar el contenido de nitratos, fosfatos, cloruros y sulfatos en muestras
de agua residual.

Cromatógrafo iónico con detector de conductividad
Columna cromatográfica de intercambio aniónico (Metrosep A Supp 4)
Matraces aforados de 10 y 500 mL Pipetas aforadas de 5 y 10 mL
Vasos de precipitados de 100 mL Vidrio de reloj o pesasustancias
Balanza analítica Precolumna Metrosep A Supp 4/5
Filtros de membrana de nylon Jeringa de plástico
21.4. Reactivos
Ácido sulfúrico
Carbonato de sodio anhidro
Hidrógeno carbonato de sodio
Acetona
Agua Milli-Q
Patrón comercial de aniones de 10 ppm
Muestras de agua residual

Disolución de NaHCO3 (2,4 mM), Na2CO3 (2,5 mM) / 2 % acetona. Se pesan

132,5 g de carbonato de sodio anhidro, 100,75 g de hidrógeno carbonato de sodio y se
disuelven en, aproximadamente, 50 mL de agua Milli-Q. Las disoluciones resultantes
se transfieren a un matraz aforado de 500 mL, se añaden 10 mL de acetona y se enrasa
con agua-Milli Q.
Disolución de ácido sulfúrico 50 mM. Se transfieren 1,3 mL de ácido sulfúrico
comercial a un matraz aforado de 500 mL y se enrasa con agua Milli-Q.

21.5.2. Determinación de nitratos, fosfatos, cloruros y sulfatos:
Se toman aproximadamente 5 mL de la muestra de agua residual con una

jeringa de plástico y se pasan a través de un filtro de nylon con un tamaño de poro de
0,45 µm (Figura 21.1).
Figura 21.1. Filtración de la muestra.
A partir de la disolución patrón comercial de nitratos, fosfatos, cloruros y

sulfatos de 10 ppm se prepararán tres disoluciones patrón de 10 mL que contengan
concentraciones de 1, 3 y 5 ppm de cada ión y se enrasarán con agua Milli-Q. Se
agitarán manualmente los matraces con la finalidad de homogeneizar las disoluciones.
La Figura 21.2 muestra el cromatógrafo iónico que se va ha utilizar en esta

práctica.
Figura 21.2. Cromatógrafo iónico.

Para realizar el análisis se deben seguir los siguientes pasos:
(a) Encender el cromatógrafo y el ordenador.

(b) Seleccionar el método de trabajo adecuado.
(c) Colocar en los recipientes adecuados el eluyente o fase móvil, el ácido
sulfúrico 50 mM y agua Milli-Q (Figura 21.3).
Figura 21.3. Detalle de los recipientes para la fase móvil, el ácido y el agua
Milli-Q del cromatógrafo iónico.
(d) Encender la bomba de pistón, que bombea la fase móvil y la bomba

peristáltica que bombea tanto el ácido sulfúrico como el agua Milli-Q
(necesarios para realizar la supresión). Poner un flujo de bombeo de 1,0
mL/min (Figura 21.4) y bombear la fase móvil durante diez minutos para
acondicionar la columna.
Bomba pistón
Bomba peristáltica
Figura 21.4. Detalle de la bomba de pistón y de la bomba peristáltica.

Introducir en el cromatógrafo las disoluciones patrón de 1, 3, 5 y 10 ppm de

nitratos, fosfatos, cloruros y sulfatos para la obtención de las rectas de calibrado de
cada ión. Para ello:
(a) Hacer click sobre “Start” (Figura 21.5a).

(b) Completar la información relativa a las condiciones de inyección en la pantalla
del ordenador (Figura 21.5b) y presionar “Ok”..
(a) (b)
Figura 21.5. Detalle de la pantalla de selección de las condiciones de inyección.
(c) Hacer click sobre “Fill” (Figura 21.5a) para cargar la muestra en el bucle o
loop con ayuda de una jeringa tal y como se muestra en la Figura 21.6, y
rápidamente hacer click sobre “Inject” (Figura 21.5a) para introducir la
muestra en la columna.
Figura 21.6. Detalle de la inyección.

Procediendo de la misma manera, introducir en el cromatógrafo las distintas

muestras de agua residual. Imprimir los cromatogramas obtenidos en cada caso y
anotar las áreas y los tiempos de retención de los picos correspondientes a todos los
iones de interés.
21.6. Resultados
1. Construir una recta de calibrado para cada ión con los datos de las áreas de
los picos obtenidos en los cromatogramas correspondientes a las disoluciones
patrón inyectadas. Obtener los valores de la ordenada en el origen, la
pendiente y el coeficiente de correlación de dichas rectas.
2. Obtener la concentración de nitratos, fosfatos, cloruros y sulfatos en las
muestras de agua (expresada en ppm) a partir de la ecuación de la recta de
calibrado y de la medida de las áreas de los picos obtenidos en los
cromatogramas correspondientes a las mismas.
21.7. Cuestiones
1. ¿Cómo varía la concentración de los iones analizados en las diferentes
muestras de agua residual proporcionadas?, ¿a qué son debidas estas
variaciones?
2. A la vista de los cromatogramas obtenidos, ¿se podría cuantificar algún otro
ión presente en la muestra utilizando este mismo método de trabajo?
3. Indica qué reacción tendrá lugar durante la regeneración de la columna
supresora con el H2SO4.
4. Calcular el número de platos teóricos de la columna y la altura de plato a
partir del componente más retenido.

HPLC – Determinación de fluoruros en pasta de dientes
Práctica 22. DETERMINACIÓN DE FLUORUROS EN

PASTA DE DIENTES MEDIANTE CROMATOGRAFÍA
IÓNICA
22.1. Introducción
La pasta de dientes que utilizamos hoy en día contiene aproximadamente
unos diez componentes distintos. Algunos de ellos tienen la función de limpiar,
proteger, dar sabor o consistencia, etc. El componente principal es el carbonato de
calcio (yeso) finamente dividido u otro polvo mineral, como el óxido de aluminio, que
son ligeramente abrasivos y ayudan a eliminar el sarro depositado en los dientes.
Generalmente, para dar el color blanco típico de la pasta se añade óxido de titanio.
Por el contrario, las pastas de tipo gel transparente deben su poder abrasivo a
compuestos de sílice, a los que se agregan colorantes. Otros ingredientes son un
agente aglutinador y espesante, como puede ser el alginato, un detergente, para limpiar
y crear espuma, mentol y un humectante, como la glicerina, para que la pasta no se
seque. Por último, dependiendo del tipo de pasta se añaden algunos agentes más
específicos como pueden ser fluoruros, determinados desinfectantes o agentes
blanqueantes (bicarbonato de sodio).
El fluoruro es la forma iónica del fluor, tiene carga negativa y presenta mucha
afinidad por los cationes. En el ser humano la mayor parte del fluoruro está presente
en los tejidos calcificados, huesos y dientes, debido precisamente a su afinidad por el
calcio. Por este motivo los fluoruros presentes en la boca son retenidos en la placa
dental a través del calcio y contribuyen a controlar las lesiones producidas por la caries
dental. Esto es así ya que inhiben la desmineralización del esmalte sano o estimulan su
remineralización. Sin embargo, en niños en período de formación bucal su uso
excesivo puede ser perjudicial ya que puede producirse fluorosis. La fluorosis dental es
un proceso de hipomineralización del esmalte dental provocada por un aumento de la
porosidad. Como consecuencia de la fluorosis dental severa el esmalte se vuelve
quebradizo y aparecen manchas marrones.
La concentración de fluoruros en las pastas dentales suele estar entre 1.000 y

1.100 ppm y las formas más usuales en que se añade son fluoruro sódico,
monofluorofosfato sódico y fluoruros de amonio cuaternario. Entre los métodos más
utilizados para la su determinación se encuentran los métodos potenciométricos,
utilizando un electrodo selectivo de fluoruros, y los métodos espectrofotométricos
mediante la formación de un complejo coloreado con alizarina.
En esta práctica se va a determinar el contenido de fluoruros en distintas

muestras de pastas dentales mediante cromatografía iónica, utilizando una columna de
intercambio aniónico con supresión química.

22.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía iónica.
2. Aprender el manejo de un cromatógrafo iónico.
3. Determinar el contenido de fluoruros en diferentes muestras de pasta de
dientes.

Columna cromatográfica de intercambio aniónico (Metrosep A Supp 4)
Matraces aforados de 10, 25 y 500 mL Pipeta aforada de 5 mL
Pipetas graduadas de 1, 2 y 5 mL Pipetas Pasteur
Balanza analítica Jeringa de plástico
Precolumna Metrosep A Supp 4/5
Filtros de membrana de nylon
22.4. Reactivos
Acido sulfúrico
Carbonato de sodio anhidro
Hidrógeno carbonato de sodio
Agua Milli-Q
Patrón comercial de fluoruros de 10 ppm
Muestras de pasta de dientes

Disolución de NaHCO3 (1,8 mM) y Na2CO3 (1,7 mM), fase móvil. Se pesan 95,2
g de carbonato de sodio anhidro, 71,5 g de hidrógeno carbonato de sodio y se
disuelven en, aproximadamente, 50 mL de agua Milli-Q. Las disoluciones resultantes
se transfieren a un matraz aforado de 500 mL y se enrasa con agua-Milli Q.
Disolución de ácido sulfúrico 38 mM. Se transfiere 1,0 mL de ácido sulfúrico
comercial a un matraz aforado de 500 mL y se enrasa con agua Milli-Q.

22.5.2. Determinación de fluoruros:
Se pesan 1,25 g de cada una de

las muestras de pasta de dientes y se
disuelven en aproximadamente 10 mL
de agua Milli-Q. La disolución
resultante se trasvasa a un matraz
aforado de 25 mL y se enrasa con agua
Milli-Q. Posteriormente, se toma una
alícuota de 10 mL y se pasa a través de
un filtro de nylon con un tamaño de
poro de 0,45 µm con ayuda de una
jeringa de plástico (Figura 22.1).
Figura 22.1. Filtración de la
muestra.
A partir de la disolución patrón comercial de fluoruros de 10 ppm se

prepararan tres disoluciones patrón de 10 mL que contengan concentraciones de 1, 3
y 5 ppm de fluoruros y se enrasarán con agua Milli-Q. Se agitarán manualmente los
matraces con la finalidad de homogeneizar las disoluciones.
La Figura 22.2 se muestra el cromatógrafo iónico que se va ha utilizar en esta

práctica.


(c) Colocar en los recipientes adecuados el eluyente o fase móvil, el ácido
sulfúrico 38 mM y agua Milli-Q (Figura 22.3).
Figura 22.3. Detalle de los recipientes para la fase móvil, el ácido y el agua
Milli-Q del cromatógrafo iónico.
(d) Encender la bomba de pistón, que bombea la fase móvil y la bomba

peristáltica que bombea tanto el ácido sulfúrico como el agua Milli-Q
(necesarios para realizar la supresión). Poner un flujo de bombeo de 1,0
mL/min (Figura 22.4) y bombear la fase móvil durante diez minutos para
acondicionar la columna.
Bomba pistón
Bomba peristáltica
Figura 22.4. Detalle de la bomba de pistón y de la bomba peristáltica.

Introducir en el cromatógrafo las disoluciones patrón de 1, 3, 5 y 10 ppm de

fluoruros para la obtención de la recta de calibrado. Para ello:

del ordenador (Figura 22.5b) y presionar “Ok”.
(a) (b)


muestras de pasta de dientes. Imprimir los cromatogramas obtenidos en cada caso y
anotar las áreas y los tiempos de retención de los picos correspondientes a los
fluoruros.
22.6. Resultados
1. Construir una recta de calibrado con los datos de las áreas de los picos
obtenidos en los cromatogramas correspondientes a las disoluciones patrón
inyectadas. Obtener los valores de la ordenada en el origen, la pendiente y el
coeficiente de correlación de dicha recta.
2. Obtener la concentración de fluoruros en las muestras de pasta de dientes
(expresada en ppm) a partir de la ecuación de la recta de calibrado y de la
medida de las áreas de los picos obtenidos en los cromatogramas
correspondientes a las mismas.
22.7. Cuestiones
1. A la vista de los cromatogramas obtenidos, ¿se podría cuantificar algún otro
ión presente en la muestra utilizando este mismo método de trabajo?, ¿cuáles?
2. ¿Cómo se podría identificar cada uno de los picos presentes en la disolución
patrón comercial?
3. Indica que reacción tendrá lugar durante la regeneración de la columna
supresora con el H2SO4.

Cromatografía iónica - Determinación de sodio en sílice
Práctica 23. DETERMINACIÓN DE SODIO EN SÍLICE

MEDIANTE CROMATOGRAFÍA IÓNICA
23.1. Introducción
La sílice es un sólido incoloro, en estado puro. Aparece como componente de
muchos materiales naturales (arena, granito, calizas, arcillas, ...). Puede presentarse en
forma cristalina (cuarzo) o en forma amorfa en depósitos sedimentarios naturales o
como producto de síntesis. La sílice cristalina es el dióxido de silicio (SiO2) cristalizado
y es muy perjudicial para la salud, ya que produce una enfermedad pulmonar conocida
como silicosis. Se utiliza mucho en la fabricación de vidrios, cerámicas, cementos, etc.
La sílice amorfa se sintetiza generalmente por eliminación de parte del agua de un
precipitado gelatinoso de ácido silícico, obtenido como resultado de la hidrólisis de
silicato de sodio con ácido clorhídrico. Su fórmula química molecular es SiO2 x n
H2O. La sílice es químicamente estable, excepto en presencia de ácido fluorhídrico y
bases fuertes. No se descompone por el calentamiento y es insoluble en agua y en
cualquier otro disolvente orgánico.
La sílice amorfa deshidratada,

comercializada bajo el nombre de
silicagel ®, es un compuesto con gran
capacidad de absorción de agua,
debido a su elevada porosidad, y por
ello se usa habitualmente como agente
desecante (Figura 23.1). Según el
método de preparación, puede
presentar estructuras y tamaños de
poro diferente, pudiendo algunas llegar
a absorber hasta un 40 % de su propio
peso en agua. Figura 23.1. Silicagel ®.
Otra aplicación importante de la sílice es como fase estacionaria sólida para

cromatografía y como soporte para fases estacionarias líquidas, utilizadas tanto en
cromatografía de gases como en cromatografía de líquidos de alta eficacia.
El ión sodio es uno de los contaminantes más importantes que puede

contener la sílice como consecuencia del proceso de síntesis. Entre las técnicas mas
utilizadas para la determinación de sodio en este tipo de muestras se encuentran la
espectrometría de emisión atómica y la cromatografía iónica. En esta práctica se va a
determinar el contenido de sodio en diferentes muestras de sílice mediante
cromatografía iónica utilizando una columna de intercambio catiónico con detección
conductimétrica.

23.2. Objetivos
1. Aprender el fundamento de la cromatografía iónica.
2. Aprender el manejo de un equipo de cromatografía iónica.
3. Determinar el contenido de iones sodio en muestras de sílice.

Columna cromatográfica de intercambio catiónico Metrosep C2 (4 x 100 mm)
Matraces aforados de 10, 50 y 500 mL Pipetas aforadas de 5 mL
Balanza analítica Precolumna Metrosep C2
Filtros de membrana de nylon Jeringa de plástico
23.4. Reactivos
Ácido tartárico
Ácido dipicolínico
Agua Milli-Q
Disolución patrón de sodio de 10 ppm
Muestras de sílice

a) Extreme las precauciones en el manejo de las muestras de sílice. Evitar el

contacto con piel y ojos. El polvo es irritante para el tracto respiratorio.
Disolución de ácido tartárico 4,0 mM/ácido dipicolínico 0,75 mM (fase móvil).

Se pesan 0,3 g de ácido tartárico y 0,0625 g de ácido dipicolínico y se disuelven en
aproximadamente 50 mL de agua Milli-Q. Las disoluciones resultantes se transfieren a
un matraz aforado de 500 mL, y se enrasa con agua Milli-Q.

23.5.3 Determinación de sodio:
Para la extracción del sodio se preparará una suspensión de la muestra al 5 %

en agua. Para ello, se pesan en una balanza analítica 2,5 g de la muestra de sílice, se
colocan en una vaso de precipitados y se añaden 50 mL de agua Milli-Q,
perfectamente medidos. La suspensión se mantiene con agitación durante 30 min. Una
alícuota de unos 10 mL se pasa través de un filtro de membrana de nylon con un
tamaño de poro de 0,45 µm con ayuda de una jeringa de plástico (Figura 23.2) para su
posterior análisis en el cromatógrafo.
Figura 23.2. Filtración de la suspensión de sílice.
A partir de la disolución patrón de sodio de 10 ppm se prepararán tres

disoluciones patrón, de 10 mL, que contengan concentraciones de 1, 3 y 5 ppm y se
enrasarán con agua Milli-Q. Se agitarán manualmente los matraces con la finalidad de
La Figura 23.3 se muestra el cromatógrafo iónico que se va ha utilizar en esta

práctica.

(c) Colocar el eluyente o fase móvil en el recipiente adecuado.
(d) Encender la bomba de pistón, que bombea la fase móvil, y poner un flujo de
bombeo de 1,0 mL/min (Figura 23.4). Bombear la fase móvil durante 10 min
para acondicionar la columna.
Bomba pistón
Figura 23.4. Detalle de la bomba de pistón.

Introducir en el cromatógrafo las disoluciones patrón de 1, 3, 5 y 10 ppm de sodio

para la obtención de la recta de calibrado. Para ello:

del ordenador (Figura 23.5b) y presionar “Ok”.
(a) (b)


muestras de sílice. Imprimir los cromatogramas obtenidos en cada caso y anotar las
áreas y los tiempos de retención del pico correspondiente al sodio.
23.6. Resultados
1. Construir una recta de calibrado para el ión sodio con los datos de las áreas de
los picos obtenidos en los cromatogramas correspondientes a las disoluciones
patrón inyectadas. Obtener los valores de la ordenada en el origen, la
pendiente y el coeficiente de correlación de dichas rectas.
2. Obtener la concentración de sodio en las muestras de sílice (expresada en
ppm) a partir de la ecuación de la recta de calibrado y de la medida de las
áreas de los picos obtenidos en los cromatogramas correspondientes a la
disolución problema.
23.7. Cuestiones
1. ¿A la vista de los cromatogramas obtenidos se podría cuantificar algún otro
ión presente en la muestra utilizando este mismo método de trabajo?
2. Calcular el número de platos teóricos de la columna y la altura de plato a
partir del componente más retenido.

Cromatografía de gases – Fundamento teórico
IX. CROMATOGRAFÍA DE GASES
Fundamento teórico
La cromatografía de gases (GC, gas chromatography) es una técnica de separación
que se ha estudiado y utilizado intensamente durante muchos años para resolver una
gran variedad de problemas analíticos. Gracias a ello, se han encontrado condiciones
válidas para la separación de un gran número de compuestos por lo que, hoy en día, es la
técnica a elegir para la separación de compuestos orgánicos e inorgánicos térmicamente
estables y volátiles. En cromatografía de gases la separación de los componentes de la
muestra problema se lleva a cabo en base a su distinto reparto entre una fase gaseosa
que fluye (fase móvil o gas portador) y una fase estacionaria. En cromatografía gas-líquido, la
fase estacionaria es un líquido que recubre la pared interior de una columna o un soporte
sólido, mientras que la cromatografía gas-sólido utiliza un sólido adsorbente como fase
estacionaria. En la Figura 1 se muestra el esquema de un cromatógrafo de gases.
Figura 1. Esquema de un cromatógrafo de gases.
La muestra (generalmente un
líquido volátil o un gas) se introduce,
normalmente, con la ayuda de una
microjeringa a través de un septo en un
inyector caliente donde se vaporiza.
Entonces, es arrastrada rápidamente
hacia la columna mediante el gas portador
(He, N2 o H2). Después de pasar por la
columna que contiene la fase estacionaria, 0 2 6 10 14 18 min
los analitos separados llegan al detector
cuya respuesta se visualiza en forma de Figura 2. Separación de una mezcla
cromatograma en un registrador o en la de compuestos por GC.
pantalla de un ordenador (Figura 2).

En la mayoría de las separaciones por GC se utilizan columnas capilares o
tubulares abiertas (Figura 3.a), que se caracterizan por una mayor resolución, rapidez
de análisis y sensibilidad en comparación con las columnas empacadas. Se fabrican,
por lo general, de sílice fundida y tienen longitudes entre 15 y 100 m y diámetros
internos entre 0,1 y 0,53 mm. Estas columnas se enrollan para permitir su colocación
en el interior de un horno (Figura 3.b) que permite un control preciso de la
temperatura de separación. Sin embargo, no es necesario que la temperatura de la
columna sea mayor que el punto de ebullición de todos los analitos de la muestra, sino
lo bastante elevada para que cada analito tenga la suficiente presión de vapor a fin de
ser eluído en un tiempo razonable.
(a) (b)
Figura 3. (a) Columna tubular abierta. (b) Detalle del horno con la columna en
su interior.
Uno de los detectores más

utilizados en GC para el análisis de
compuestos orgánicos es el detector de
ionización de llama (FID). Este detector
mide la corriente que puede pasar entre
un par de electrodos con polarización
opuesta colocados a ambos lados de
una llama formada con una mezcla de
hidrógeno y aire, donde se quema el
efluente de la columna (Figura 4). La
corriente generada y, por lo tanto, la
respuesta del detector depende
entonces de la cantidad de átomos de Figura 4. Detector de ionización de
carbono ionizables que entran en la llama.
llama por unidad de tiempo.
La cromatografía de gases, además de ser una técnica de separación importante,

permite identificar y cuantificar los componentes de una muestra problema. Cuando se
utiliza la cromatografía para análisis cuantitativo, normalmente se preparan varias

disoluciones patrón que contienen concentraciones crecientes y conocidas del analito. El
área (o altura) de cada pico cromatográfico se representa frente a la concentración del
analito en las disoluciones patrón. La pendiente y la ordenada en el origen de la mejor
línea recta que pase por los puntos puede calcularse estadísticamente mediante análisis
de regresión utilizando el método de los mínimos cuadrados. Se obtiene entonces una
recta de calibrado gracias a la cual podrá determinarse la concentración del analito en la
muestra problema.
Otro método de calibrado muy utilizado en GC es el método del estándar interno.

Este método se utiliza en GC cuando la cantidad de muestra a inyectar en el
cromatógrafo varía de un análisis a otro por razones difíciles de controlar (como ocurre
cuando se utilizan microjeringas para inyectar cantidades muy pequeñas de muestra).
El método del estándar interno se basa

en añadir tanto a las disoluciones
patrón como a la disolución problema
de la muestra una cantidad fija de una 1200
sustancia pura (estándar interno, SI). Se
analito
1000 Area SI
Área / Area
analito analito/muestra
muestra Área SI
SI
determinan las áreas (o alturas) de los
/ Área
800
SI / Area
picos cromatográficos para el analito y 600
analito
para el SI y se calcula el cociente de las 400
Area
C analito muestra
áreas (o alturas). Entonces, se Área 200
0
representan estos cocientes frente a las 0 2 4 6 8 10
concentraciones del analito en las CC(ppm)

(ppm)
disoluciones patrón y se obtiene la recta

de calibrado (Figura 5). A partir de la
relación de áreas (o alturas) obtenida Figura 5. Método del estándar
para los picos del analito y SI en la interno.
disolución problema, podremos
conocer su concentración.
Cuando la respuesta relativa del instrumento al analito y al SI se mantiene

constante a lo largo de un determinado intervalo de concentraciones, la cuantificación
puede también llevarse a cabo utilizando una única disolución patrón (de
concentración conocida y situada dentro del intervalo lineal) a la que se le añade una
cantidad conocida del SI. A partir de esta disolución se calcula el factor de respuesta (F)
para el analito con respecto al estándar interno:
F = (A/C)a/(A/C)SI
donde A es el área, C es la concentración, a es el analito y SI es el estándar interno.

Entonces, a partir de las áreas obtenidas en el cromatograma de la disolución
problema de la muestra y el factor de respuesta calculado para el analito, es posible
obtener la concentración de analito en la disolución problema mediante la siguiente
expresión:
Ca = (CSI x Aa) / (F x ASI)

GC - Determinación de impurezas en bebidas alcohólicas
Práctica 24. DETERMINACIÓN DE IMPUREZAS EN

BEBIDAS ALCOHÓLICAS DESTILADAS MEDIANTE
CROMATOGRAFIA DE GASES
24.1. Introducción
Las bebidas alcohólicas destiladas son aquellas obtenidas directamente de la
destilación de sustancias azucaradas fermentadas. Entre éstas cabe destacar el brandy
(aguardiente envejecido en vasijas de roble del cual adquiere el bouquet y el color
ambarino característico), el whisky (destilado del mosto producido por fermentación
de cereales, como cebada o maíz, envejecido en vasijas de madera), la ginebra (se
elabora con alcohol rectificado de materias amiláceas aromatizado con bayas de
enebro) y el ron (se obtiene de la destilación de melaza, jugo de caña de azúcar o miel
y que puede ser coloreado con caramelo).
Las sustancias que contienen azúcares fermentan por la acción de las

levaduras, y este proceso transforma los azúcares en etanol. Sin embargo, también se
producen cantidades variables de otros alcoholes como metanol, isopropanol,
propanol, butanol y otros compuestos volátiles. El contenido de metanol en el brandy,
whisky y ron se encuentra entorno a 1.500 mg/L, 1.000 mg/L y 800 mg/L,
respectivamente. Mediante el proceso de destilación es posible separar, por medio del
calor, los distintos componentes del mosto obtenido tras el proceso de fermentación.
En el comienzo y fin del proceso de destilación se obtienen las llamadas cabezas y
colas que contienen la mayor parte de las “impurezas”, por lo que estas fracciones
deben descartarse. En la mitad del proceso sale el alcohol etílico mezclado con agua y
el resto de las impurezas. Las bebidas alcohólicas de mayor calidad se elaboran tras un
proceso muy riguroso de destilación, se destilan incluso de tres a cuatro veces,
eliminando un elevado porcentaje de esas impurezas.
Todas las bebidas alcohólicas destinadas al consumo humano deben cumplir

unas condiciones mínimas en cuanto a su graduación alcohólica, contenido en
impurezas totales, contenido en alcohol metílico y contenido en furfural. El metanol
es el principal componente del destilado en seco de la madera. Es uno de los
disolventes más universales y encuentra aplicación tanto en el campo industrial como
en diversos productos de uso doméstico. El consumo de bebidas adulteradas,
principalmente cuando se les adiciona alcohol metílico ocasiona graves daños a la
salud de las personas (nauseas, vómitos, cólicos, diarrea, dolor de cabeza, trastornos
de la visión, trastornos neurológicos, coma, paro cardiorrespiratorio y muerte).
En la presente práctica se determinará el contenido de distintas impurezas

presentes en bebidas alcohólicas destiladas mediante cromatografía de gases utilizando
un detector de ionización de llama.

24.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía de gases.
2. Aprender el manejo de un cromatógrafo de gases.
3. Identificar las impurezas presentes en diferentes tipos de bebidas alcohólicas.
4. Determinar del contenido de impurezas en diferentas bebidas alcohólicas.

Cromatógrafo de gases con detector de ionización de llama (FID)
Columna cromatográfica (MFE-20, polietilenglicol, 25 m x 0,53 mm d.i)
Microjeringa de 10 µL
Micropipeta automática
Medidor de burbuja
Matraces aforados de 25 mL
Probeta 100 mL
24.4. Reactivos
Nitrógeno (gas portador, flujo: 5 mL/min; gas auxiliar, flujo: 25 mL/min)
Aire (flujo: 300 mL/min)
Hidrógeno (flujo: 30 mL/min)
Etanol, metanol, propanol, butanol, isobutanol, acetaldehído y acetato de etilo
Agua Milli-Q
Muestras de bebidas alcohólicas destiladas

24.5.1 Preparación de disoluciones:
Disolución acuosa de etanol al 40 % (v/v). A partir del etanol comercial se tomará

el volumen correspondiente que se transferirá a un matraz aforado de 250 mL y se
enrasará con agua Milli-Q.
Disolución patrón de metanol (2.000 ppm, v/v). Con la micropipeta automática se
tomarán 50 µL de metanol comercial y se llevarán a un matraz aforado de 25 mL
enrasando con la disolución acuosa de etanol al 40 %.
Disolución patrón de propanol (2.000 ppm, v/v). Con la micropipeta automática
se tomarán 50 µL de propanol comercial y se llevarán a un matraz aforado de 25 mL

Disolución patrón de butanol (2.000 ppm, v/v). Con la micropipeta automática se

tomarán 50 µL de butanol comercial y se llevarán a un matraz aforado de 25 mL
Disolución patrón isobutanol (2.000 ppm, v/v). Con la micropipeta automática se
tomarán 50 µL de isobutanol comercial y se llevarán a un matraz aforado de 25 mL
Disolución patrón acetaldehído (2.000 ppm, v/v). Con la micropipeta automática
se tomarán 50 µL de acetaldehido comercial y se llevarán a un matraz aforado de 25
mL enrasando con la disolución acuosa de etanol al 40 %.
Disolución patrón acetato de etilo (2.000 ppm, v/v). Con la micropipeta
automática se tomarán 50 µL de acetato de etilo comercial y se llevarán a un matraz
aforado de 25 mL enrasando con la disolución acuosa de etanol al 40 %.
Disolución patrón de metanol, propanol, butanol, isobutanol, acetaldehído y
acetato de etilo (1.000 ppm, v/v). Con la micropipeta automática se tomarán 25 µL
de cada uno de los patrones comerciales y se llevarán a un matraz aforado de 25 mL
24.5.2 Análisis cromatográfico:
La Figura 24.1 muestra el cromatógrafo de gases que se va ha utilizar en esta

práctica.
Figura 24.1. Cromatógrafo de gases
en el equipo:
(a) Abrir los gases: nitrógeno, hidrógeno y aire.

(b) Encender el cromatógrafo de gases y el ordenador.
(c) Seleccionar el método de trabajo adecuado.
(d) Con ayuda de las válvulas controladoras de flujo, ajustar el flujo del gas
portador (nitrógeno) a 5 mL/min, del gas auxiliar (nitrógeno) a 30 mL/min,
del aire (300 mL/min) y del hidrógeno (30 mL/min). Para la medida exacta
del flujo utilizar un medidor de burbuja (Figura 24.2).
Figura 24.2. Medida del flujo mediante el medidor de burbuja.
(e) Ajustar la temperatura de trabajo en el horno de la columna a 50 ºC.

(f) Ajustar la temperatura de trabajo en el inyector y FID a 200 ºC.
24.5.2.1. Identificación de impurezas en bebidas alcohólicas
Con ayuda de una microjeringa de

10 µL introducir en el cromatógrafo 1
µL de la disolución acuosa de etanol al
40 % (v/v) y anotar el tiempo de
retención para el etanol (Figura 24.3).
Posteriormente, inyectar 1 µL de las
diferentes disoluciones patrón
preparadas de metanol, propanol,
butanol, isobutanol, acetato de etilo y
acetaldehído de 2.000 ppm (v/v) y
anotar los tiempos de retención para
cada una de estas impurezas. Figura 24.3. Inyección de la
muestra en el cromatógrafo de
gases.
A continuación inyectar 1 µL de cada una de las bebidas alcohólicas
proporcionadas por el profesor y anotar los tiempos de retención de todos los picos
que aparecen en los cromatogramas.
24.5.2.2. Cuantificación de impurezas en whisky mediante el factor de

respuesta utilizando butanol como estándar interno
Con ayuda de una microjeringa de 10 µL, introducir en el cromatógrafo 1 µL de la

disolución patrón de metanol, propanol, butanol, isobutanol, acetaldehído y acetato de
etilo de 1.000 ppm (v/v) y obtener el cromatograma correspondiente. Imprimir el
cromatograma obtenido y anotar las áreas de los picos correspondientes a los analitos
de interés y estándar interno, SI, (butanol).
Finalmente, en un matraz aforado de 25 mL, añadir la cantidad necesaria de

butanol para conseguir una concentración final de 1.000 ppm (v/v) y enrasar con la
muestra de whisky. Introducir en el cromatógrafo 1 µL de esta disolución problema y
obtener el cromatograma correspondiente. Imprimir el cromatograma obtenido y
anotar las áreas de los picos correspondientes a los analitos de interés y SI.
24.6. Resultados
1. Identificar las impurezas presentes en cada una de las bebidas alcohólicas
analizadas.
2. Buscar los puntos de ebullición de cada uno de los componentes analizados y
en función de estos, proponer el orden de elución de dichos compuestos.
¿Coincide el orden propuesto con el orden de elución real?
3. Calcular el factor de respuesta (F) para cada una de las impurezas que se van a
analizar en el whisky, utilizando el butanol como estándar interno, mediante la
siguiente expresión:
F = (A/C)a/(A/C)SI
donde A es el área, C es la concentración, a es el analito y SI es el estándar

interno.
4. Obtener la concentración de las distintas impurezas presentes en el whisky

(expresada en ppm), a partir de las áreas obtenidas en el cromatograma de la
disolución problema de whisky y el factor de respuesta calculado para cada
impureza, mediante la siguiente expresión:
Ca = (CSI x Aa) / (F x ASI)
24.7. Cuestiones
1. ¿Se pueden cuantificar todas las impurezas encontradas en la muestra de
whisky utilizando este método cromatográfico?, ¿por qué?, ¿cómo se podrían
cuantificar?

GC – Aplicaciones cualitativas y cuantitativas de la cromatografía de gases
Práctica 25. APLICACIONES CUALITATIVAS Y

CUANTITATIVAS DE LA CROMATOGRAFÍA DE GASES
25.1. Introducción
Una de las variables más importantes a controlar en una separación mediante
cromatografía de gases es la temperatura de la columna, razón por la cual ésta debe
introducirse en un horno termostatizado. La temperatura de la columna es
inversamente proporcional al tiempo de retención de los analitos. Esto es debido a
que el aumento de la temperatura provoca un aumento en la presión de vapor de los
mismos y, como consecuencia, se produce una disminución en el coeficiente de
distribución. Sin embargo, hay que tener en cuenta que no todos las analitos se afectan
por igual, por lo que el cambio de la temperatura puede mejorar o empeorar la
resolución para una pareja dada de analitos. En la práctica, se utilizan temperaturas
ligeramente superiores al punto de ebullición promedio de los analitos presentes en la
muestra. Para muestras que contienen analitos con un amplio intervalo de puntos de
ebullición es mejor emplear un programa de temperatura.
Para identificar un pico cromatográfico en una muestra problema el método

más simple consiste en comparar su tiempo de retención con el de una disolución
patrón del analito cuya presencia se sospecha. Otra forma más fiable es mediante
cocromatografía, en la que se agrega a la disolución problema una cantidad de la
disolución patrón del analito cuya presencia se sospecha. Si el tiempo de retención del
analito en la disolución patrón es idéntico al del componente de la disolución problema,
el área de este pico aumentará con respecto a la de los otros picos del cromatograma. En
muestras reales complejas, la cocromatografía es casi concluyente cuando se realiza con
dos o más tipos de columnas.
Para el análisis cuantitativo por GC normalmente se utiliza el método del

estándar interno, ya que nos permite corregir las variaciones que se producen de un
análisis a otro en la cantidad de muestra inyectada. Este método se basa en añadir, tanto
a las disoluciones patrón como a la disolución problema, una cantidad fija de un
estándar interno (SI). Se representa el cociente de las áreas del pico cromatográfico del
analito y del estándar interno frente a la concentración del analito en cada disolución
patrón y se obtiene la recta de calibrado, a partir de la cual podemos conocer la
concentración de analito en la disolución problema interpolando en la misma la relación
de áreas obtenida para la disolución problema.
En esta práctica se va a estudiar el efecto de la temperatura de columna en el

proceso de separación de una mezcla de tres compuestos orgánicos mediante
cromatografía gas-líquido. Además, se identificaran dichos compuestos en la mezcla
problema y se cuantificará uno de ellos utilizando el método del estándar interno.

25.2. Objetivos
1. Entender el fundamento de la cromatografía de gases.
2. Aprender el manejo de un cromatógrafo de gases.
3. Estudiar el efecto de la temperatura de columna sobre el proceso de separación
en GC.
4. Realizar un análisis cualitativo por GC mediante la identificación de tres
compuestos orgánicos en una mezcla problema.
5. Realizar un análisis cuantitativo por GC utilizando el método del estándar
interno.

Cromatógrafo de gases con detector de ionización de llama (FID)
Columna WCOT 5 % fenil, 95 % dimetilpolisiloxano (25 m x 0,53 mm d.i)
Microjeringa de 10 µL
Matraces aforados de 10, 25 y 250 mL
Medidor de burbuja
Pesasustancias
Pipetas aforadas de 1, 2, 5 y 10 mL
Pipetas graduadas de 5 y 10 mL
Pipetas Pasteur
Vaso de precipitados de 100 mL
Viales de vidrio de 2 mL
25.4. Reactivos
Nitrógeno (gas portador, flujo: 5 mL/min; gas auxiliar: 25 mL/min)
Aire (flujo: 300 mL/min) Fenol
Hidrógeno (flujo: 30 mL/min) Ciclohexano
Metanol Tolueno
Muestra problema

25.5.1 Preparación de disoluciones:
Disolución madre de tolueno 1 % (v/v) en metanol. Se transfieren 2,5 mL de

tolueno comercial a un matraz aforado de 250 mL y se enrasa con metanol.

Disolución madre de ciclohexano 1 % (v/v) en metanol. Se transfieren 2,5 mL de

ciclohexano comercial a un matraz aforado de 250 mL y se enrasa con metanol.
Disolución madre de fenol (15 g/L) en metanol. Se disuelven 0,15 g de fenol en
aproximadamente 25 mL de metanol. La disolución resultante se transfiere a un
matraz aforado de 100 mL y se enrasa con metanol.
25.5.2 Análisis cromatográfico:
La Figura 25.1 muestra el cromatógrafo de gases que se va ha utilizar en esta

práctica.
Figura 25.1. Cromatógrafo de gases.
(a) Abrir los gases: nitrógeno, hidrógeno y aire
(b) Encender el cromatógrafo de gases y el ordenador.
(c) Seleccionar el método de trabajo adecuado.
(d) Con ayuda de las válvulas controladoras de flujo, ajustar el flujo del gas
portador (nitrógeno) a 5 mL/min, del gas auxiliar (nitrógeno) a 30 mL/min,
del aire (300 mL/min) y del hidrógeno (30 mL/min). Para la medida exacta
del flujo utilizar un medidor de burbuja (Figura 25.2).
(e) Ajustar la temperatura de trabajo en el horno de la columna a 50 ºC.
(f) Ajustar la temperatura de trabajo en el inyector y FID a 250 ºC.

Figura 25.2. Medida del flujo mediante el medidor de burbuja.
25.5.2.1. Separación de los componentes de la mezcla problema: efecto de

la temperatura de la columna
(a) Con ayuda de una

microjeringa de 10 µL (Figura
25.3) introducir en el
cromatógrafo 1 µL de la
mezcla problema y obtener el
cromatograma.
(b) Cambiar la temperatura de la
columna a 60 ºC. Inyectar de
nuevo 1 µl de la mezcla
problema y obtener el
Figura 25.3. Inyección de la
cromatograma.
muestra en el cromatógrafo de
(c) Repetir la inyección tras gases.
cambiar la temperatura de la
columna a 70 ºC.
24.5.2.2. Identificación de los componentes de la mezcla problema
Para llevar a cabo la identificación de los componentes en la mezcla problema

se deben preparar los siguientes viales:
• Vial (1): Metanol puro.
• Vial (2): 1 mL de metanol y 15 gotas (añadidas con pipeta Pasteur) de la
disolución madre de fenol (15 g/L en metanol)
• Vial (3): 1 mL de metanol y 1 gota (añadida con pipeta Pasteur) de tolueno.
• Vial (4): 2 mL de metanol y 1 gota (añadida con pipeta Pasteur) de
ciclohexano.
• Vial (5): 1 gota de muestra problema y 1 gota del vial (3).

Una vez seleccionada la temperatura de trabajo adecuada en la columna,

inyectar en el cromatógrafo 1 µL de los viales (1), (2), (3) y (4) y obtener los
cromatogramas correspondientes, anotando los tiempos de retención para los picos
observados en cada caso. Finalmente, para identificar el pico de tolueno mediante
cocromatografía, inyectar 1 µL del vial (5) y obtener el cromatograma.
24.5.2.3. Cuantificación de tolueno utilizando ciclohexano como estándar

interno
A partir de las disoluciones madre de tolueno y ciclohexano al 1 % (v/v) se

prepararán seis disoluciones patrón en matraces aforados de 25 mL que contengan 1,
2, 3, 5, 7 y 10 mL de la disolución madre de tolueno, respectivamente y 5 mL de la
disolución madre de ciclohexano (estándar interno, SI) en cada uno de ellos. Por
último, se enrasarán con metanol y se agitarán manualmente para homogeneizar toda
la disolución.
Una vez preparadas todas las disoluciones patrón inyectar en el cromatógrafo

1 µL de cada una de ellas, empezando por la de menor concentración. Imprimir los
cromatogramas y anotar los tiempos de retención y las áreas de los picos
correspondientes al tolueno y al ciclohexano. Por último, introducir en el
cromatógrafo 1 µL de la muestra problema y obtener el cromatograma
correspondiente. Imprimirlo y anotar las áreas de los picos correspondientes al
tolueno y al SI.
24.6. Resultados
1. ¿Cómo se ven afectados los tiempos de retención de los analitos al pasar de
50 a 60 ºC y de 60 a 70 ºC?, ¿qué ocurre con el ancho de los picos?, ¿qué
ocurre con la resolución entre los compuestos?
2. ¿Cuál de las tres temperaturas consideras que es más adecuada para realizar la
separación?, ¿por qué?
3. Buscar los puntos de ebullición de cada unos de los componentes de la
muestra problema y del disolvente (metanol). En función de los datos
obtenidos, proponer el orden de elución de dichos compuestos. ¿Coincide el
orden propuesto con el orden de elución real?
4. A partir de los tiempos de retención obtenidos para los picos del metanol,
tolueno, fenol y ciclohexano, identificar dichos compuestos en el
cromatograma de la muestra problema.
5. ¿Qué ocurre con las áreas de los picos cuando se inyecta el vial (5) en
comparación con las áreas de los picos de la mezcla problema?, ¿qué indica
esto?

6. Calcular la relación de áreas para el tolueno y el ciclohexano (Área analito /

Área SI) para cada una de las disoluciones patrón de tolueno y para la muestra
problema.
7. Representar la relación de áreas frente a la concentración de tolueno en cada
una de las disoluciones patrón, obteniendo la ecuación de la recta de calibrado
por el método de mínimos cuadrados.
8. Calcular la concentración de tolueno en la muestra problema a partir de la
relación de áreas calculada para la misma. Expresar los resultados como % en
volumen.
25.7. Cuestiones
1. ¿Cuándo es más adecuado utilizar el método del estándar interno para
cuantificar un analito en una muestra?
2. ¿Cómo podemos identificar mediante GC un analito sin comparar con una
disolución patrón?

ANEXO
Anexo
Tabla 1. λmáx de absorción y εmáx de compuestos que presentan en su estructura

algún grupo funcional característico.
Tipo de
Grupo Funcional λmáx (nm) εmáx transición
Alqueno C C 177 Muy Elevada π → π*
178 Elevada
Alquino C C 196 Elevada π → π*
225 Débil
186 Elevada n → σ*
Carbonilo C O 280 Débil n → π*
C O 180 Elevada n → σ*
Aldehído
293 Débil n → π*
H
O
Carboxilo C 204 Débil n → π*
OH
O
Amida C 241 Débil n → π*
NH2
Azo N=N 339 Débil n → π*
O
Nitro N+ 280 Débil n → π*
O–
300 Débil
Nitroso N O
665 Débil n → π*
O
Nitrato O N+ 270 Débil n → π*
O–
εmáx > 104 Muy elevada, 103 ≤ εmáx ≤ 104 Elevada, εmáx < 103 Débil

Anexo
Tabla 2. Bandas características de los grupos funcionales más importantes
Enlace Tipo de Compuesto Frecuencias (cm-1)

2.850-2.970
C-H Alcanos
1.340-1.470
3.010-3.095
C-H Alquenos
675-995
C-H Alquinos 3300
3.010-3.100
C-H Anillos aromáticos
690-900
O-H Alcoholes, Fenoles 3590-3.650
Alcoholes con puente de
O-H 3.200-3.600
hidrógeno, Fenoles
O-H Ácidos carboxílicos 3.500-3.650
Ácidos carboxílicos con
O-H 2.500-2.700
puente de hidrógeno
N-H Aminas, Amidas 3.300-3.500
C=C Alquenos 1.610-1.680
C=C Anillos aromáticos 1.500-1.600
C≡C Alquinos 2.100-2.260
C-N Aminas, Amidas 1.180-1.360
C≡N Nitrilos 2.210-2.280
Alcoholes, Éteres, Ácidos
C-O 1.050-1.300
carboxílicos, Ésteres
Aldehídos, Cetonas,
C=O Ácidos carboxílicos, 1.690-1.760
Ésteres
1.500-1.570
NO2 Nitrocompuestos
1.300-1.370

Anexo
Tabla 3. Índices de refracción del agua destilada a distintas temperaturas.
Temperatura Temperatura Índice de

Índice de refracción
ºC ºC refracción
10 1,33369 26 1,3324
11 1,33364 27 1,33229
12 1,33358 28 1,33217
13 1,33352 29 1,33206
14 1,33346 30 1,33194
15 1,33339 31 1,33182
16 1,33331 32 1,3317
17 1,33324 33 1,33157
18 1,33316 34 1,33144
19 1,33307 35 1,33131
20 1,33299 36 1,33117
21 1,3329 37 1,33104
22 1,3328 38 1,3309
23 1,33271 39 1,33075
24 1,33261 40 1,33061
25 1,3325
Tabla 4. Índices de refracción de diferentes aceites vegetales.
Tipo de aceite - Tª de trabajo Índice de refracción

OLIVA - 20ºC 1,4677-1,4705
ORUJO - 20ºC 1,4650-1,4707
ALGODÓN - 20ºC 1,463-1,472
GIRASOL - 25ºC 1,467-1,474
CACAHUETE - 25ºC 1,467-1,470
COLZA - 25ºC 1,470-1,474
GERMEN DE MAIZ - 25ºC 1,470-1,474
CARTAMO - 25ºC 1,472-1,476
PEPITA DE UVA - 25ºC 1,473-1,475
SOJA - 25ºC 1,474-1,476

Anexo
Tabla 5. Relación entre el contenido de humedad de una muestra de miel y su

índice de refracción a 20ºC.
Índice de Índice de Índice de

Humedad Humedad Humedad
refracción refracción refracción
(20°C) (%) (20°C) (%) (20°C) (%)
1.5044 13 1.4935 17.2 1.483 21.4
1.5038 13.2 1.493 17.4 1.4825 21.6
1.5033 13.4 1.4925 17.6 1.482 21.8
1.5028 13.6 1.492 17.8 1.4815 22
1.5023 13.8 1.4915 18 1.481 22.2
1.5018 14 1.491 18.2 1.4805 22.4
1.5012 14.2 1.4905 18.4 1.48 22.6
1.5007 14.4 1.49 18.6 1.4795 22.8
1.5002 14.6 1.4895 18.8 1.479 23
1.4997 14.8 1.489 19 1.4785 23.2
1.4992 15 1.4885 19.2 1.478 23.4
1.4987 15.2 1.488 19.4 1.4775 23.6
1.4982 15.4 1.4875 19.6 1.477 23.8
1.4976 15.6 1.487 19.8 1.4765 24
1.4971 15.8 1.4865 20 1.476 24.2
1.4966 16 1.486 20.2 1.4755 24.4
1.4961 16.2 1.4855 20.4 1.475 24.6
1.4956 16.4 1.485 20.6 1.4745 24.8
1.4951 16.6 1.4845 20.8 1.474 25
1.4946 16.8 1.484 21
1.494 17 1.4835 21.2

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Skoog D. A., West D. M., Holler F. J., Crouch S. R.; Fundamentos de Química
Analítica. Ed. Thomson-Paraninfo (2005) 8ª edición.
Universidad Rey Juan Carlos, FREMAP; Seguridad y Salud en Laboratorios:

Recomendaciones de Carácter General. Ed. FREMAP.

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PRÁCTICAS DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

Isabel Sierra, Damián Pérez, Sonia Morante

PRÁCTICAS DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

Editorial DYKINSON, S.L. Meléndez Valdés, 61 - 28015 Madrid

Preimpresión realizada por los autores

SEGURIDAD Y NORMAS DE TRABAJO 17

I. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN UV-Vis 25

II. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN EN EL IR 49

III. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA 67

Prácticas de Análisis Instrumental 9

VI. POTENCIOMETRÍA 131

VII. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA 153

VIII. CROMATOGRAFÍA LIQUIDOS DE ALTA EFICACIA 165

IX. CROMATOGRAFÍA DE GASES 201

10 Prácticas de Análisis Instrumental

En este contexto, el objetivo principal de esta obra es que el alumno entienda

La obra constituye una recopilación de una serie de prácticas, todas ellas

Antes de realizar cualquier tipo de trabajo en el laboratorio, el alumno debe leer

Prácticas de Análisis Instrumental 13

Isabel Sierra Alonso

14 Prácticas de Análisis Instrumental

SEGURIDAD Y NORMAS DE TRABAJO

2. Manipulación de reactivos y material de laboratorio

Las sustancias químicas, en función de su peligrosidad, se clasifican en:

envase original de cualquier reactivo es posible encontrar uno o varios pictogramas

2.2. Recomendaciones generales en el manejo de reactivos

 En la manipulación de sustancias químicas se evitará el contacto con la piel, la

18 Prácticas de Análisis Instrumental

 Los envases de los productos químicos deben mantenerse siempre cerrados,

2.3. Recomendaciones generales en el manejo de material de laboratorio

 Antes de utilizar cualquier material de vidrio debe verificarse su buen estado.

Prácticas de Análisis Instrumental 19

Centrífugas: La carga de la centrífuga debe estar repartida de forma simétrica. Los

Autoclaves: Los equipos deben disponer de un manómetro. Los aumentos y descensos

2.4. Recomendaciones generales para el manejo de residuos

 Los papeles impregnados con reactivos químicos y los guantes no se pueden

3. Actuación en caso de accidente

 Dar la alarma inmediatamente.

20 Prácticas de Análisis Instrumental

3.2. Quemaduras térmicas

 Lavarse con abundante agua durante 10 ó 15 min, empleando si es necesario

3.4 Ingestión e inhalaciones

 En caso de ingestión de un producto químico no provocar el vómito, salvo

 Abrir las ventanas del laboratorio.

Prácticas de Análisis Instrumental 21

¾ Bases: Neutralizar con productos comercializados para la absorción y

3.6 Fuga de gases

 Cortar inmediatamente la alimentación eléctrica del aparato causante de la

22 Prácticas de Análisis Instrumental

Niveles vibracionales Niveles vibracionales

Nivel Electrónico 1 Nivel Electrónico 1

Estado Fundamental Estado Excitado

Figura 1. Proceso de absorción de radiación UV-Vis.

Por tanto, la absorción selectiva 0.4 198 nm

analito permite obtener el espectro de 0.2

absorción característico del mismo 0.1

proporciona información sobre su -0.1

composición y estructura (Figura 2).

Figura 2. Espectro de absorción UV-Vis

Figura 3. Esquema de un espectrofotómetro de UV-Vis de haz simple.

La espectroscopía de absorción UV-Vis se emplea muy frecuentemente para el

La constante a (absortividad) es la capacidad intrínseca del analito para absorber a

El primer paso que se sigue en cualquier análisis cuantitativo mediante

En la manipulación de sustancias químicas se evitará el contacto con la piel, la

Los envases de los productos químicos deben mantenerse siempre cerrados,

Antes de utilizar cualquier material de vidrio debe verificarse su buen estado.

Los papeles impregnados con reactivos químicos y los guantes no se pueden

Dar la alarma inmediatamente.

Lavarse con abundante agua durante 10 ó 15 min, empleando si es necesario

En caso de ingestión de un producto químico no provocar el vómito, salvo

Abrir las ventanas del laboratorio.

Cortar inmediatamente la alimentación eléctrica del aparato causante de la