UNIVERSIDAD NACIONAL DE ROSARIO

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas

Dpto. Química Analítica - Área Química Analítica General

QUÍMICA ANALÍTICA II

TP Nº 4
CROMATOGRAFÍA - CROMATOGRAFÍA
GAS-LÍQUIDO

“Cuantificación de etanol en bebidas alcohólicas.

Uso de patrón interno”

- 2019 -
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 ASISTIR AL LABORATORIO CON LOS SIGUIENTES ELEMENTOS
* Guardapolvo (preferentemente de algodón y mangas largas)
* Guantes de látex
* Anteojos de seguridad
* Propipeta
* Cuaderno de anotaciones
* Calculadora
* Trapo tipo rejilla o rollo de papel absorbente
* Fibra indeleble (para rotular material de vidrio)

MEDIDAS GENERALES PARA MANTENER HIGIENE

Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
* Conocer la ubicación de elementos de seguridad, tales como matafuego y
lavaojos
* No comer ni beber en el laboratorio
* Utilizar guardapolvo abrochado
* Evitar el uso de accesorios colgantes (aros, pulseras, collares, etc.)
* Usar el cabello recogido
* Conservar las mesadas despejadas, sin abrigos o mochilas ni objetos personales

CONSIDERACIONES IMPORTANTES
* Durante la realización de este Trabajo Práctico se realizará el descarte de los reactivos
empleados según su toxicidad. Dichos reactivos se descartarán en distintos envases de acuerdo a
su naturaleza química para su tratamiento adecuado en el laboratorio y en la empresa
recolectora de residuos tóxicos.

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Introducción
En cromatografía existen ciertos parámetros difíciles de reproducir de
experimento en experimento, como por ejemplo el caudal del gas transportador (gas
carrier) y el volumen de la muestra que se inyecta en el cromatógrafo, entre otros.
Por otra parte, el empleo de una recta de calibrado es válido para la
determinación de la concentración de muestras incógnitas si se mantiene el conjunto de
condiciones experimentales bajo las cuales se obtuvo dicha calibración. Por lo tanto,
para eliminar todo tipo de efecto aleatorio producido en la señal obtenida a partir de un
cromatograma debido a estas variaciones involuntarias en el caudal o en el volumen de
inyección, se recurre a la utilización de un patrón interno.
Un patrón interno, en cromatografía, es un compuesto, diferente del analito, que
se agrega en una cantidad exactamente conocida a la muestra incógnita y a cada
estándar de la curva de calibración. Este compuesto debe reunir ciertas características:
poseer una estructura química similar a la del analito a determinar; presentar tiempos de
retención relativamente cercanos al mismo. En cada corrida cromatográfica la relación
(cociente) de las áreas entre el analito y el patrón interno sirve como parámetro analítico
independiente de las variaciones involuntarias en el sistema. Esto se debe a que la
relación entre la respuesta del detector al analito y al patrón interno se mantiene
prácticamente constante puesto que lo que afecta a uno también afectará al otro y en la
misma proporción.
Es importante destacar la diferencia que existe entre el método de patrón interno y
el método de adición de estándar. En el primer caso, la sustancia que se introduce es
diferente al analito. En el segundo, la sustancia patrón adicionada es igual al analito.
En este trabajo práctico, como parte de un proceso de control de calidad, se
desea cuantificar la graduación alcohólica de una bebida comercial (vodka), aplicando
cromatografía gaseosa y empleando el método de patrón interno. El Código
Alimentario Argentino (Capítulo XIV) introduce al vodka como una bebida alcohólica
cuyo contenido de Etanol se encuentra entre 36 a 54%, a 20 ºC. En el control

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bromatológico se acepta una tolerancia analítica de hasta 1% de graduación alcohólica
declarada, de allí la necesidad de disponer de un método de determinación confiable y
reproducible.
Adicionalmente, se discutirá la pertinencia de esta técnica analítica para la
detección/cuantificación de Metanol, un compuesto tóxico que a menudo se ha
encontrado como adulterante en bebidas alcohólicas. El Código Alimentario Argentino
(CAA Capítulo XIV, artículo 1109) admite hasta 50 mg% de Metanol (como alcohol
anhidro) en bebidas alcohólicas, ya que por encima de este valor este compuesto es
altamente nocivo para la salud, pudiendo incluso llegar a provocar la muerte.

Objetivo
➢ Cuantificar el contenido de Etanol de una bebida alcohólica comercial (vodka)
utilizando cromatografía gas-líquido y empleando el método de patrón interno.
➢ Detectar/cuantificar la presencia de Metanol haciendo uso de una solución testigo
de Metanol con adición de patrón interno.

Parte experimental
Instrumento: Cromatógrafo Perkin Elmer Autosystem XL. Columna: capilar PE-17
(polidimetilsiloxano). Longitud: 30 m. Diámetro interno de columna: 0.25 mm.
Temperatura máxima (en condición isotérmica): 280 ºC, Temperatura máxima (con
rampa): 300 ºC. Detector: FID. Gas transportador: N2.
Parámetros establecidos: Temperatura detector: 200 ºC. Temperatura del inyector: 170 ºC.
Temperatura del horno: 50ºC (1 min.)-65ºC (3 min.) (rampa temp. 10ºC/min).
Volumen de inyección: 1 μL. Relación de split: 99/1. Tiempo de análisis: 5.50 min. por
muestra.

Reactivos y materiales:
Estándares de calibración: Etanol/Metanol Matraces de 5,00 mL
Patrón interno: Butanol Micropipeta y tips
Bebida comercial: Vodka (40%) Pipeta para enrasar
Agua destilada Micro-jeringa Hamilton

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Procedimiento:
Inyectar los estándares de calibración y las muestras diluidas 1/100 (soluciones ya
preparadas y provistas por los docentes). Completar los datos de las siguientes tablas:

[EtOH]
[EtOH] [ButOH] [EtOH] / Área Área AEtOH / [EtOH] /
muestradil
% v/v % v/v [ButOH] EtOH ButOH AButOH [ButOH]
% v/v
0 0,25

0,25 0,25

0,50 0,25

0,75 0,25

1,00 0,25

Muestra 0,25
Muestra
Adulterada 0,25
[MetOH]
[MetOH] [ButOH] [MetOH] Área Área AMetOH/ [MetOH]/
muestradil
% v/v % v/v / [ButOH] MetOH ButOH AButOH [ButOH]
% v/v
1,0 0,25
Muestra 0,25
Adulterada

Nota: Todas las soluciones se llevan a volumen final de 5,00 mL con agua destilada.
Obtener los cromatogramas de cada uno de los estándares y de las muestras. Registrar los
valores de las áreas.

Procesamiento de datos:
➢ Construir la curva de calibración. Se grafica (AS/Api) vs. (CS/Cpi), en donde:
AS: área del pico que corresponde al analito para cada estándar.
Api: área del pico que corresponde al patrón interno (Butanol).
CS: concentración de analito para cada estándar de calibración.
Cpi: concentración del patrón interno (Butanol).
➢ Realizar el ajuste lineal del gráfico obtenido (ver Fig.) y en base a ello
determinar la concentración del analito (Etanol) en las muestras incógnitas.
➢ Informar los resultados en % v/v.

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Para determinar el contenido de Metanol se compara el cromatograma obtenido para el
estándar con el de la muestra adulterada y, si lo hubiera, se calcula su concentración a
través del método de estándar externo o testigo único.