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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BUCARAMANGA - UNAB

ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
FACULTAD DE MEDICINA

CURSO PROCESOS FARMACOLÓGICOS

GUÍA PARA EL TALLER SOBRE “AGONISMO TENDENCIOSO”

1. Después de evaluar la afinidad de cada uno de los análogos sintetizados, fue evaluada la actividad de
cada uno de ellos mediante ensayos de BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer). En
estos análogos fueron evaluadas sus actividades en la activación de dos vías de señalización (Proteína
Gq y reclutamiento de β-arrestina2).

Se presentan a continuación los datos obtenidos de los experimentos realizados con la droga control y con
cada uno de los análogos.

Activación Proteína Gq

Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3

[M] Lectura [M] Lectura [M] Lectura [M] Lectura
10- -0,0255340 10- -0,0493069 10- -0,0565785 10-12 -0,0424959
12 12 12
10- -0,0314000 10- -0,1370335 10- -0,100076 10-11 0,07584965
11 11 11
10- -0,0549716 10- -0,3425444 10- -0,0714184 10-10 -0,0508489
10 10 10
10-9 -0,1975426 10-9 -0,4080045 10-9 -0,0439989 10-9 -0,0259934
10-8 -0,3713506 10-8 -0,4495934 10-8 -0,2485875 10-8 -0,0288614
10-7 -0,5033096 10-7 -0,4436829 10-7 -0,4267504 10-7 -0,0385505
10-6 -0,5345461 10-6 -0,403129 10-6 -0,466669 10-6 0,02748096

Reclutamiento de β-arrestina2

Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3

[M] Lectura [M] Lectura [M] Lectura [M] Lectura
10-12 -0,0031758 10- -0,009902894 10-12 -0,007329 10- 0,01244873
12 12
10-11 0,04312098 10- -0,006089389 10-11 -0,000305 10- 0,009682238
11 11
10-10 0,06136596 10- -0,004563928 10-10 0,158639 10- 0,01455772
10 10
10-9 0,1817811 10-9 -0,009247392 10-9 0,1802265 10-9 0,009268701
10-8 0,2138026 10-8 0,0008301139 10-8 0,1908676 10-8 0,01280326
10-7 0,2184666 10-7 0,07496411 10-7 0,2168541 10-7 0,01635826
10-6 0,2429041 10-6 0,03536281 10-6 0,2589751 10-6 0,01250571
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Los valores de EC50 obtenidos después de realizar la correspondiente regresión no linear fueron:

Activación Proteína G [nM] Reclutamiento de β-arrestina2 [nM]

Control 2.70 Control 0.305
Análogo 1 0.028 Análogo 1 17.3
Análogo 2 13.6 Análogo 2 0.046
Análogo 3 No Converge Análogo 3 No converge

a) Teniendo en cuenta los valores de EC50, realizar las curvas concentración-

respuesta de cada uno de los análogos sintetizados

b) Calcular el pEC50 de cada uno de los análogos:

1. Pasar de nanomolar a Molar el EC50 de los análogos

Activación Proteína G [nM] Reclutamiento de β-arrestina2 [nM]

Control 2 , 7 × 10 -9 Molar [M] Control 3 , 05 × 10 -10 Molar [M]

Análogo 1 2 , 8 × 10 -11 Molar [M] Análogo 1 1 , 73 × 10 -8 Molar [M]

Análogo 2 1 , 36 × 10 -8 Molar [M] Análogo 2 4 , 6 × 10 -11 Molar [M]
Análogo 3 No Converge Análogo 3 No converge
 3

2. Hallar el pEC50 = -Log EC50

Activación Proteína G [M] Reclutamiento de β-arrestina2 [M]
Control pEC50 = -Log EC50 Control pEC50 = -Log EC50
pEC50 = -Log (2, 7 × 10 -9 M) pEC50 = -Log (3, 05 × 10 -10 M)
pEC50 = 8.56 M pEC50 = 9,51 M

Análogo 1 pEC50 = -Log EC50 Análogo 1 pEC50 = -Log EC50

pEC50 = -Log (2, 8 × 10 -11 M) pEC50 = -Log (1, 73 × 10 -8 M)
pEC50 = 10.55 M pEC50 = 7,76 M

Análogo 2 pEC50 = -Log EC50 Análogo 2 pEC50 = -Log EC50

pEC50 = -Log (1, 36 × 10 -8 M) pEC50 = -Log (4, 6 × 10 -11 M)
pEC50 = 7,86 M pEC50 = 10,33 M

Análogo 3 No Converge Análogo 3 No converge

c) ¿Cuál es la diferencia entre EC50 e IC50?

Tanto EC50 como IC50 hacen referencia a concentraciones de un ligando, para que este pueda hacer una
acción. Pero son acciones y ligando diferentes:
 IC50: es la concentración en la que se tiene la mitad de los receptores de la célula ocupados. Hace
referencia a la afinidad de un ligando por un receptor y no se su capacidad de causar un efecto, en
este caso el ligando es denominado inhibidor o antagonista, y el valor del IC50 sería la concentración
de ligando necesaria para desplazar un agonista en un 50%
 EC50: es la concentración necesaria de un ligando, un agonista, para causar una respuesta del 50%
por parte del tejido, es decir la capacidad de este para causar el efecto

d) ¿Cuál es la diferencia entre afinidad y actividad de una droga?

La afinidad es la capacidad de la droga para unirse con el receptor específico y formar el complejo fármaco-
receptor; mientras que la actividad de una droga es una propiedad que tienen estos, de que una vez se
encuentren unidos al receptor pueda generar un estímulo y desencadenar la respuesta o efecto farmacológico

2. El agonismo tendencioso es un nuevo concepto que ha surgido desde hace aproximadamente 10

años. Está definido como “La capacidad de un ligando/droga de estabilizar conformaciones del receptor
que preferencialmente o selectivamente activen una determinada vía de señalización”. Este tipo de
agonismo se puede calcular matemáticamente mediante el modelo planteado por Kenakin (Kenakin et al.,
2012) que es basado en comparaciones de las razones /KA entre agonistas. Los valores de log( /KA)
también denominados de coeficientes de transducción, representan la fuerza de un agonista en activar una
vía de señalización en un sistema definido.

El valor de Δlog(τ/KA) representa la eficiencia del agonista en activar una via en comparación al
agonista de referencia (control) y es calculado con la siguiente ecuación:

A partir de la resta de los Δlog(τ/KA) será obtenido el valor de tendencia ΔΔlog(τ/KA) dado por la
siguiente ecuación:
 4

A continuación se dan los valores de log(τ/K A) para realizar la correspondiente clasificación de los
análogos.

Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3

Gq β-arr2 Gq β-arr2 Gq β-arr2 Gq β-arr2
8.57 9.47 8.56 9.46 10.06 5.45 6.57 10.51

a) Calcular Δlog(τ/KA) para cada uno de los análogos

Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3
Gq β-arr2 Gq β-arr2 Gq β-arr2 Gq β-arr2
8.57 9.47 8.56 9.46 10.06 5.45 6.57 10.51
Δlog(τ/KA -0,01 -0,01 1,49 -4,02 -2 1,04

b) Calcular ΔΔlog(τ/KA) para cada uno de los análogos

Control Análogo 1 Análogo 2 Análogo 3
Gq β- Gq β-arr2 Gq β-arr2 Gq β-arr2
arr2
8.57 9.47 -0,01 -0,01 1,49 -4,02 -2 1,04

Vía se Vía se Vía se Vía se Vía se Vía se

señalización señalización señalización señalización señalización señalización
1 2 1 2 1 2
ΔΔlog(τ/KA) ΔΔlog(τ/KA) = Δlog(τ/KA) vía ΔΔlog(τ/KA) = Δlog(τ/KA) vía ΔΔlog(τ/KA) = Δlog(τ/KA) vía
1 - Δlog(τ/KA) vía 2 1 - Δlog(τ/KA) vía 2 1 - Δlog(τ/KA) vía 2
ΔΔlog(τ/KA) = (-0,01) -(-0,01) ΔΔlog(τ/KA) = (1,49) –(-4,02) ΔΔlog(τ/KA) = (-2) -(1,04)
ΔΔlog(τ/KA)= 0 ΔΔlog(τ/KA)= 5,51 ΔΔlog(τ/KA)= -3,04

c) Realice la correspondiente clasificación de los análogos en tendenciosos para

proteína Gq, reclutamiento de β-arrestina2 o agonistas balanceados.
Análogo 1: Agonista balanceado no tiene preferencia por ninguna via
Análogo 2: Análogo tendencioso para proteína Gq
Análogo 1: Análogo tendencioso para β-arr2