Generalidades:

Estructura y Función Bacteriana

MICROBIOLOGÍA GENERAL
CARLOS VALENCIA BASTO
MSc Biología Molecular y Biotecnología
Dominios
de la Vida
Cocos y Bacilos
ESTRUCTURA CELULAR BACTERIANA

Madigan et al, 2015

Cápsulas

Madigan et al, 2015

Composición de algunas cápsulas bacterianas
PARED CELULAR BACTERIANA O PEPTIDOGLICANO
 Pared Celular

Madigan et al, 2015

 Gram
Positiva

Madigan et al, 2015

Gram Negativa

Madigan et al, 2015

Gram Positiva
Gram Negativa
Primer colorante (cristal violeta):
Básico, en contacto con las bacterias
cargadas negativamente reacciona
coloreándolas.
Tinción Gram
Solución mordiente (Yodo de Gram):
Fija las tinciones y aumenta la afinidad
entre el colorante y las bacterias.

Agente decolorante (alcohol-acetona):

Disolvente orgánico que se utiliza como
lavado para eliminar colorante no fijado.

Colorante de contraste (safranina):

Colorante básico de distinto color al
primer colorante.

Bacterias Gram (+) Se tiñen de púrpura

por el cristal violeta y retienen la
coloración por su gruesa capa de
peptidoglicanos.

Bacterias Gram (-) Perderán la coloración

inicial del cristal violeta por su delgada
capa de peptidoglicanos y se teñirán de
rojo debido a la safranina.
 PASO A PASO
TINCIÓN GRAM

Madigan et al, 2015

 Bacillus anthracis (ANTRAX) – Gram Positiva
Disponibles en: http://4.bp.blogspot.com/_Nqz0b5yddaM/SxODVPneQaI/AAAAAAAAAC8/xHvmvfANQ_E/s1600/Gram_Stain_Anthrax.jpg
http://www.seprin.com/alerta6.htm
Escherichia coli – Bacteria Gram Negativa
Disponible en:
http://www.tecnicoenfermeria.com/2009/09/uso-de-tinciones-en-microorganismos.php
Funciones de la membrana plasmática de los
procariotes
1. Barrera osmótica y de permeabilidad.
2. Localización de los sistemas de transporte para solutos específicos (nutrientes, iones).
3. Generación de energía, involucrando sistemas de transporte de electrones
fotosintéticos cadena respiratoria, establecimiento de la fuerza de protones, ATPasa
que sintetiza ATP transmembranal.
4. Síntesis de lípidos de la membrana (incluyendo lipopolisacáridos en Gram negativos).
5. Síntesis de mureína (Pared celular).
6. Ensamblaje y secreción de proteínas extracitoplasmáticas.
7. Coordinación de la replicación del ADN y la segregación con la formación del septo y
la división celular.
8. Quimiotaxis (motilidad per se y funciones de sensibilidad).
9. Localización de sistemas enzimáticos especializados.
Estructura de los fosfolípidos de la Membrana
plasmática
 Mecanismos de transporte
• Difusión Simple

• Transporte mediado por Proteínas

Transporte Pasivo - Difusión facilitada
Canales Iónicos
Proteínas transportadoras
Transporte Activo
Permeasas
Bombas
Sistemas de transporte en la membrana
celular de bacterias
Ribosomas
Flagelos
Tipos de Flagelos

A. Monótrica
(Vibrio)
B. Lofótrica
(Pseudomonas)
C. Anfítrica
(Espirilos)
D. Perítrica
(Enterobacterias)
Motor Molecular del Flagelo
Magnetosoma - Magnetotaxismo
 Fimbrias y Pilus Sexual

Madigan et al, 2015

Endosporas (Bacillus - Clostridium)

Madigan et al, 2015

 Fases de la
formación de la
Espora
Comparación Endospora Vs Célula Vegetativa
Nucleoide: Material genético bacteriano

Cromosoma Plásmido
 Genómica Bacteriana
Se basa en la secuenciación o determinación del
orden preciso de los nucleótidos en un cromosoma
bacteriano, para identificar sus genes (ORFs-Open
Reading Frame), con sus potenciales funciones
metabólicas.

Métodos de Secuenciación Genómica

Primera generación: Secuenciación de Sanger por dideoxis

Segunda generación: Pirosecuenciación 454, Illumina, SOLiD

Tercera generación: HeliScope, PacBio

Cuarta Generación: Ion Torrent , Nanopore (MinION)

 Metagenómica – Secuenciación de los
genomas bacterianos de muestras no
cultivables (ambientales, microbiotas
asociadas a plantas, animales y humanos)

Transcriptómica – Es el estudio de la
expresión de los genes de una célula, un
tejido o una bacteria, para ello se secuencian
los ARNm que producen en un momento
determinado.

Metataxonómica – Es el estudio de las

relaciones taxonómicas y/o evolutivas en una
muestra de microorganismos no cultivables, a
través de la secuenciación y análisis de los
genes del ARN ribosomal (Regiones variables
de la subunidad 16S)

Metatranscriptómica – Es el estudio de la
expresión génica en muestras de
comunidades bacterianas no cultivables
Kuroda et al, 2001
 COMPARACIÓN ENTRE CROMOSOMAS Y PLÁSMIDOS
BACTERIANOS
CROMOSOMA PLÁSMIDOS
Tamaño: 450.000 bp - 8 Mbp* Tamaño: 1500 bp - 150.000 bp
*Mega pares de bases – más de un millón.
Genes que controlan su replicación Genes que controlan su propia replicación

Genes metabólicos de la bacteria No poseen genes metabólicos

Transposones Transposones
Islas de patogenicidad* No poseen islas de patogenicidad
*Segmentos del cromosoma que poseen secuencias de genes de
patogenicidad y/o virulencia

Genes de resistencia a antibióticos Genes de resistencia a antibióticos

Genes de virulencia (Exotoxinas) Genes de virulencia (Exotoxinas)
 Tipos de Plásmidos
Virulencia
Resistencia
De producción de
antibióticos
Conjugación
Funciones
Metabólicas

Nikaido, 2009
 Mecanismos de Dispersión de la
Resistencia
Expansión clonal por división binaria
Mediada por plásmidos – Mecanismos parasexuales
(Conjugación tipo I y II)
Mediada por Bacteriófagos (Transducción)
Transformación
Mediada por Transposones
Mediada por Integrones
Mediada por cassettes de genes
EXPANSIÓN CLONAL POR
DIVISIÓN BINARIA
Madigan et al, 2015
Madigan et al, 2015
DISPERSIÓN DE LA RESISTENCIA MEDIADA POR
PLÁSMIDOS
Bordeleau, E; Ghinet, MG; Burrus, V. Diversity of Integrating Conjugative Elements in
Actinonbacteria. Mobile Genetic Elements 2:2, 119 – 124 (2012)
DISPERSIÓN MEDIADA POR BACTERIÓFAGOS
 Transformación
Bacteriocinas

Las bacterias pueden tomar

fragmentos de ADN desnudo del
medio e insertarlos en sus
cromosomas
 Dispersión Mediada por
Transposones

 Se conocen como “Genes saltarines”

 Pueden llevar uno o varios genes de resistencia a antibióticos
 Pueden moverse libremente de los cromosomas a los plásmidos y viceversa
Nikaido, 2009
Dispersión Mediada por Integrones

 Son elementos móviles del ADN (Integrasa en sitios att)

 Moviliza cassettes de genes
 Su movilidad puede ser mediada por plásmidos o por cromosomas
 Hay 4 clases de integrones (Consultar las 4 clases, similitudes y diferencias)
 MECANISMOS DE RESITENCIA
BACTERIANA A LOS ANTIMICROBIANOS
1.Modificación del blanco del antibiótico

2.Inactivación del antibiótico a través de enzimas

bacterianas como las beta-lactamasas

3.Impermeabilización de la bacteria ante el antibiótico

4.Mecanismo de eflujo
Modificación del blanco del antibiótico

Poelhsgaard y Douthwaite, 2005. Nat. Rev. Microbiol. 3: 870 – 881 (2005)

Inactivación del
antibiótico
Impermeabilización de la
bacteria frente al
antibiótico
Bombas de Eflujo

Pos, 2009
Pos, 2009
Pigmentos
 Pigmentos
• Pulquerrimina: Pigmento rojo que contiene hierro en su molécula, es sintetizado por Cándida
pulcherrima, levadura aislable de zumos de frutas, flores con néctar y el tracto gastrointestinal
de las abejas.

• Prodigiosina: En medios que contengan hidratos de carbono medra frecuentemente una

bacteria que llevaba el nombre de Bacterium prodigiosus o Micrococcus prodigiosus conocida
también como " hongo de las hostias". Actualmente se la conoce como Serratia marcescens.
Este pigmento de naturaleza pirrólica es de color rojo oscuro, muy parecido al de la sangre. Es
el origen de una de las mas bellas catedrales y del mito de la profanación de la hostia.

• Indigoina: Pigmento azul derivado de las azaquinonas, es excretado al medio por

Pseudomonas indigofera entre otros.
Entre los colorantes fenacínicos el mas conocido es la piocianina producido por
Pseudomonas aeruginosa. Los cultivos de Pseudomonas aeruginosa muestran una
fluorescencia amarillo verdosa al ser examinado bajo tubos fluorescentes o lámpara
ultravioleta, su origen esta en las pioverdinas cromopéptidos que aparecen cuando hay
limitación de hierro, actúan como sideroforos que sirven para captar y transportar hierro al
interior de la célula.
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE OXÍGENO EN EL CRECIMIENTO BACTERIANO
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL CRECIMIENTO BACTERIANO

Madigan et al, 2015

 EFECTO EN LA
CONCENTRACIÓN
DE SALES EN EL
CRECIMIENTO
BACTERIANO

Madigan et al, 2015

EFECTO DEL pH SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

BASÓFILAS

NEUTRÓFILAS

ACIDÓFILAS
Tiempos de generación en el crecimiento bacteriano
de diferentes especies
 QUORUM SENSING

Mecanismo para regular al expresión de genes en función de la densidad celular, a partir

de moléculas secretadas (autoinductores o elicitores).

Tipos de QS:
-Bioluminiscencia
-Biopelículas
-Virulencia
-Esporulación
-Swarming (Movimiento colectivo – enjambre)
 QS Virulencia // Biopelícula

Disponible en el URL: https://www.advancedhealing.com/quorum-sensing-and-biofilm/

 QS-Swarming (Movilidad)

Nickzad A, Lépine F, Déziel E (2015) Quorum Sensing Controls Swarming Motility of Burkholderia glumae through Regulation of Rhamnolipids. PLoS
ONE 10(6): e0128509. doi:10.1371/journal.pone.0128509
 QS- Bioluminiscencia

Disponible en el URL: https://www.canon.com.au/explore/bioluminescence-photography-tips

Biofilms o Biopelículas
Desarrollo de una Biopelícula
 Siembra en
Cajas de Petri
 Antibiograma - Método de difusión en plato
con Sensidiscos
La bacteria inoculada se enfrenta sobre la
superficie del medio de agar a una solución
antibiótica absorbida en discos de papel de
filtro (Sensidiscos).
El medio de cultivo más utilizado es el Agar
Müeller-Hinton. Su pH debe estar entre 7,2-7,4
y grosor entre 4-6 mm.
El inóculo bacteriano debe tener una turbidez
similar al 0,5 de la escala de McFarland y la
inoculación se debe efectuar con hisopo de
algodón estéril.
La lectura se realiza entre 18-24 h, adecuado
únicamente para bacterias patógenas de rápido
crecimiento.
Prueba Epsilon o E-Test
Antibiograma

Método de
dilución en
plato
Esterilización por
Filtración
Esterilización
con Autoclave
Antisépticos y Desinfectantes
 BIBLIOGRAFÍA
Carrol, K; Morse, SA; Mietzner, T; Miller, S. Jawetz, Melnick & Adelberg
Microbiología Médica. McGrawHill-LANGE. 27a Edición. 2016.
Madigan, MT; Martinko, JM and Parker, J. Brock Biology of Microorganisms.
14th Edition. Pearson. 2015.
Murray, P; Rosenthal, KS; Pfaller, MA. Medical Microbiology. Elsevier. 9th
Edition. 2021.
Ryan, K and Ray, G. Sherris Medical Microbiology. An Introduction to
infectious Diseases. Fourth Edition. McGraw-Hill. 2004.
Tille, PM. Bailey & Scott´s diagnostic Microbiology. Elsevier. 14th Edition.
2017.
Tortora, G; Funke, BR; Case, ChL. Microbiology. An Introduction. 11th
Edition. Pearson 2013.
Willey, J; Sherwood, LM; Wolverton, ChJ. Prescott, Harvey and Kelin´s
Microbiology. 7th Edition. McGrawHill. 2008.