Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
1
Los recursos con los que debe contar para el desarrollo de la actividad son los
siguientes:
2
• Observe el material de vidrio y pida al Tutor y coordinador que le enseñe su
adecuada manipulación (cajas de petri, pipetas diferentes volúmenes, pipetas de
pasteur).
• El material de vidrio en microbiología siempre debe ser utilizado estéril por lo
que debe ser empacado con papel kraft antes de ser sometido a un proceso de
esterilización. Tenga especial cuidado con la manipulación del material ya que se
puede contaminar con microorganismos provenientes de las manos.
• Identifique las asas bacteriológicas y reciba las indicaciones de uso por parte del
Tutor o coordinador de laboratorio
• Una vez hecha la lectura de los medios de cultivo, quite la cinta de enmascarar.
y entregue el material al grupo encargado de la esterilización.
• Después del proceso de esterilización, espere a que el material este frío para
proceder con el lavado de la siguiente manera:
Vestimenta
• Usar vestimenta del laboratorio que cumpla con los siguientes requisitos: Bata
de color claro (blanco) que permita visualizar su limpieza, con cierres o
cremalleras en lugar de botones u otros accesorios, sin bolsillos ubicados por
encima de la cintura.
• Usar zapatos cerrados que sean antideslizantes.
• Es obligatorio el uso de gorro (cofia) y tapabocas mientras se encuentra en el
laboratorio.
• Las personas que utilicen lentes deben asegurarse a la cabeza mediante bandas
• cadenas u otros medios ajustables.
• El uso del celular está restringido dentro del laboratorio.
3
La actividad consiste en:
Introducción
El organismo humano es considerado como un hospedero que puede albergar
numerosos microorganismos, que solamente desarrollarán un poder agresor si las
condiciones normales de este hospedero se ven alteradas por situaciones adversas
intrínsecas o extrínsecas, favoreciendo así, la aparición de diferentes procesos
infecciosos y de síntomas clínicos.
Flora normal: está constituida por todos aquellos microorganismos que pueden
albergarse en un individuo sano, sin cambiar su condición normal, pero cuando
ocurre alguna alteración, ya sea por causas externas o internas, aquellos
microorganismos varían su comportamiento pasivo tornándose agresores activos y
desarrollando procesos infecciosos.
4
en la empresa o industria.
Objetivos
5
• Frasco de boca ancha
• Cuenta colonias
Procedimiento
Antes de desinfectar
• Marque una de las cajas de agar nutritivo y otra de agar Saboureaud con cinta de
enmascarar (en la base de la caja), así: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y
SUPERFICIE ANTES DE LIMPIAR.
• Escoja una superficie en el laboratorio (mesones, pisos, pared, etc.)
• Delimite el sitio a muestrear (4x4 cm. aproximadamente)
• Encienda el mechero de bunsen.
• Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para
humedecer el algodón. Escurra el hisopo en las paredes internas del tubo. Coloque
el tubo en la gradilla.
• Pase el hisopo humedecido sobre toda la superficie delimitada
• Cerca del mechero, abra la caja de agar nutritivo marcada y pase suavemente el
hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja.
• Cerca del mechero abra la caja de agar sabouraud marcada y realice el mismo
procedimiento que con el agar nutritivo. Cierre la caja.
• Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y cloro.
• Deje las cajas ya sembradas en su sitio de trabajo.
6
Procedimiento de desinfección
Una vez hecho el procedimiento anterior, limpie la zona delimitada con agua y jabón.
Enjuague, seque y luego desinfecte con alcohol, agua mezclada con cloro o algún
desinfectante de su interés. Deje secar.
Después de Limpiar
Efectúe el mismo procedimiento que realizó en Antes de desinfectar, pero recuerde
marcar las cajas de petri (agar nutritivo y Saboureaud) con SUPERFICIE DESPUÉS
DE DESINFECTAR.
c. Evaluación de Manipuladores
• Marque una de las cajas de agar nutritivo con cinta de enmascarar (en la base de
la caja), así: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y FLORA HUMANA ANTES DE
LAVADO DE MANOS.
• Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para
humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla.
• Pase suavemente el hisopo humedecido sobre cada uno de los dedos y uñas del
manipulador. (Escoja la mano dominante del manipulador)
• Cerca del mechero abra la caja de agar Baird-Parker y de McKonkey/SS marcada
y pase suavemente el hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie.
Cierre la caja.
• Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y cloro.
• Deje las cajas ya sembradas en su sitio de trabajo.
Procedimiento de Limpieza
El manipulador debe lavarse las manos como rutinariamente lo hace.
7
Pasos para la coloración Gram
a. Frotis Bacteriano
• Encienda el mechero y esterilice el asa, (curva para el cultivo líquido y recta para
el cultivo sólido) como indicó el tutor. Déjela enfriar cerca del mechero.
• Recoja con el asa estéril una muestra de colonia bacteriana, al lado del mechero.
• En una lámina portaobjetos limpia, desengrasada y marcada, coloque una
pequeña gota de solución salina estéril y realice una suspensión homogénea del
cultivo (si el cultivo es sólido). Si el cultivo bacteriano es líquido coloque una
pequeña gota de éste en la lámina portaobjetos y extiéndala.
• Dejé que el frotis se seque a temperatura ambiente. Luego pase la lámina
portaobjetos por el mechero 3 veces (con el frotis en la parte de arriba) con el fin
de fijar el extendido.
• Coloque la lámina en el soporte de coloración para realizar la coloración de Gram.
b. Coloración
• Coloque sobre el frotis una pequeña cantidad de Cristal Violeta durante 1 minuto
(Debe cubrir el frotis)
• Vierta suavemente, sobre la lámina portaobjetos, agua de la llave, con el frasco
de boca ancha y escurra el exceso de agua.
• Aplique la solución de Lugol por 1 minuto (Debe cubrir el frotis).
• Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua.
• Decolore aplicando Alcohol acetona durante 30 segundos (Debe cubrir el frotis).
• Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua.
• Aplique el colorante de contraste Fucsina durante 1 minuto (Debe cubrir el frotis).
• Por último, lave con agua y deje escurrir sobre papel absorbente a temperatura
ambiente.
• Observe al microscopio con objetivo de 10x, luego de 40x y finalmente con el
Objetivo 100 x (de inmersión) colocando una gota de aceite de inmersión sobre
el frotis.
• Dibuje sus observaciones.
Una vez terminada esta actividad, coloque las láminas portaobjetos usadas dentro
del frasco de boca ancha con agua y cloro. Desconecte el microscopio, limpie sus
lentes con Xilol y pañuelos desechables triple hoja (únicamente), las demás
8
superficies del microscopio puede limpiarlas con los paños absorbentes y alcohol
antiséptico.
9
estos sistemas de siembra.
d. Siembra en profundidad
• Marque la caja de Petri estéril con el número de grupo, la fecha y Siembra en
Profundidad.
• Abra ligeramente la caja cerca del mechero.
• Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur
plástica, transfiera 1 ml de este cultivo a la base de la caja de Petri estéril.
• Descarte la pipeta en el frasco de boca ancha con cloro.
• Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice
movimientos suaves sobre el mesón, en el sentido de las agujas del reloj, luego,
al contrario, en forma de L y L invertida, y por último en forma de 8. Esto garantiza
una distribución homogénea de las bacterias en todo el agar para facilitar su
posterior recuento.
Procedimiento Final
• Reúna todas las cajas de agar nutritivo con la tapa hacia arriba y los tubos,
envuélvalos con cinta de enmascarar y márquelos con el número del grupo.
Incubar a 37 ºC por 24 a 48 horas.
• Reúna todas las cajas de agar Saboureaud con la tapa hacia arriba, envuélvalas
con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo. Incubar a
temperatura ambiente por 3 a 5 días.
Resultados
10
a. Flora Ambiental: De acuerdo al medio de cultivo utilizado identifique el
número y las características macro y microscópicas de las colonias.
Número de Características
Cepa
colonias Macroscópicas
Características Microscópicas
Antes de desinfectar
11
Agar Nutritivo/Agar Saboureaud
Número de Características
Cepa
colonias Macroscópicas
Características Microscópicas
Después de desinfectar
Número de Características
Cepa
colonias Macroscópicas
Características Microscópicas
12
c. Evaluación de Manipuladores: De acuerdo al medio de cultivo utilizado
identifique el número y las características macro y microscópicas de las
colonias.
Número de Características
Cepa
colonias Macroscópicas
Características Microscópicas
Número de Características
Cepa
colonias Macroscópicas
13
Características Microscópicas
Características Microscópicas
Cuestionario
14
Segunda práctica: Condiciones de crecimiento y Metabolismo Bacteriano
Introducción
colorantes: cristal violeta, verde brillante, que inhiben los organismos gram positivos
por lo que solamente crecerán los gram negativos.
Por consiguiente, de acuerdo a la habilidad que tienen los microorganismos para
crecer sobre medios de cultivo específicos, así como la formación de colonias
características y una morfología especial, se pueden clasificar en 4 importantes
grupos:
15
(Enterobacterias y Pseudomonas).
d. Anaerobios estrictos
De otra parte, el paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo ya sea líquido
o sólido, se denomina siembra o inoculación. El paso de una muestra microbiana de
un medio de cultivo a otro se denomina resiembra. Estos procedimientos se pueden
realizar de diferentes formas y dependerá de las características de la muestra, del
medio en el que se van a sembrar o resembrar, del tipo de material que se utilice,
etc. Entre los métodos más importantes de siembra están: estrías, agotamiento,
rejilla y profundidad.
Objetivos
Materiales y reactivos
16
o S.S. agar (SS)
o Mc Conkey (McCk)
• Hisopos estériles
• Sensidiscos
• Pinzas estériles
• Hipoclorito de sodio al 5%
• Aceite mineral estéril
• Asas bacteriológicas
• Pipeta estéril
• Gradilla
• Incubadora
• Nevera
Procedimiento
a. Influencia de la temperatura
b. Influencia del pH
17
• Marque los tubos de la siguiente manera
✓ Tubo de tioglicolato: No. del grupo, fecha, no. de bacteria y TIOGLICOLATO.
✓ Tubo de Caldo Nutritivo: No. del grupo, fecha, no. de bacteria y AEROBIO.
✓ Tubo de Caldo Nutritivo: No. del grupo, fecha, no. de bacteria y ANAEROBIO.
• Esterilice el asa recta o curva y déjela enfriar
• Recoja con el asa estéril la bacteria indicada y siembre en los tubos marcados.
• Esterilice el asa.
• Adicione 2 ml de aceite mineral estéril a los tubos de tioglicolato y al tubo para
anaerobios.
Una vez realizados los tres procedimientos anteriores (a, b, y c) separe el tubo
marcado con 4 ºC y 55 ºC, y entréguelos al coordinador del laboratorio para que los
lleve a incubar a las temperaturas correspondientes. Los otros tubos envuélvalos en
cinta de enmascarar, márquelos con el número del grupo y entréguelos al coordinador
para incubarlos a 37 ºC.
✓ Tubos con agar inclinado (TSI, LIA, CIT): Realice una punción en el fondo del
tubo y una estría en la superficie.
✓ Tubo con medio semisólido (SIM): Realice una sola punción hasta el fondo del
tubo.
✓ Tubos con medio líquido (BRILLA, CN): Suspenda la cepa bacteriana en el medio
líquido y gire varias veces el asa.
✓ Cajas de agar (AN, EMB, SS, McCk): Utilice el sistema de siembra de rejilla para
obtener unidades formadoras y colonias individuales.
• Finalmente envuelva los tubos y cajas con cinta de enmascarar, márquelos con el
número del grupo y llévelas a incubar a 37 ºC durante 24 a 48 horas.
• Para esta prueba el estudiante debe traer un alimento envasado en cualquier tipo
de presentación (bolsas, enlatados o tetra-pack), herméticamente cerrados.
18
• Inicialmente debe hacerse una inspección previa de los envases donde se
visualicen las marcas de identificación y manchas o corrosión que se observen en
los envases o cualquier anomalía que indique defectos del producto.
• En el caso de los enlatados se deben detectar abolladuras, depresiones del borde,
picos, pliegues, pestañas salientes y defectos de solapados.
Procedimiento
Resultados
19
1.1. a. Influencia de la temperatura
1.2.
Temperatura Crecimiento
(To) (Positivo/Negativo)
4º C
37º C
55º C
Crecimiento
pH
(Positivo/Negativo)
3.0
7.0
11
Tensión de Crecimiento
O2 (Positivo/Negativo)
Aerobio
Anaerobio
Microaerófilo
20
PARTE II: METABOLISMO MICROBIANO
Agar MacConkey
Agar EMB
Agar XLD
TSI
LIA
Simmons Citrato Agar
SIM
BRILLA
Klinger Agar
Cuestionario
21
5. De acuerdo a los resultados de los factores extrínsecos indique en qué tipo de
alimento se puede encontrar este microorganismo.
Introducción
En la elaboración de los alimentos intervienen muchas variables, como, por ejemplo:
materias primas, superficies de trabajo, equipos e instrumentos, envases,
manipuladores, etc. lo que lleva a que el producto final tenga una carga microbiana
normal y que debe estar acorde con los rangos legales permitidos. Por consiguiente,
los niveles microbianos de un alimento son indicadores del proceso o elaboración del
alimento, señalando si hay buenas o malas prácticas de manufactura. Es importante
destacar que la implantación de buenas prácticas de manufactura en la industria
alimenticia permite elaborar productos idóneos e inocuos para el consumidor.
Objetivos
Materiales y reactivos
22
• Incubadora
Procedimiento
1 caja con Agar Baird Parker con los siguientes datos en la base:
23
3 Tubos tapa rosca estériles con los siguientes datos:
Pipetas estériles
10-1
10-2
10-3
• Con la pipeta marcada 10-1 tome 1 ml del frasco inicial (90 ml de agua peptonada)
y adiciónelo a todo el material marcado 10-1: 1 caja de mesófilos, 1 hongos y
levaduras, 1 tubo de TSN, 3 tubos de BRILLA y un mililitro al tubo de agua
peptonada 10-2.
• Con la pipeta marcada 10-2 tome 1 ml del tubo de agua peptonada 10 -2 y
adiciónelo a todo el material marcado 10-2: 1 caja de mesófilos, 1 hongos y
levaduras, 1 tubo de TSN, 3 tubos de BRILLA y un mililitro al tubo de agua
peptonada 10-3.
• Con la pipeta marcada 10-3 tome 1 ml del tubo de agua peptonada 10 -3 y
adiciónelo a todo el material marcado 10-3: 1 caja de mesófilos, 1 hongos y
levaduras, 1 tubo de TSN, 3 tubos de BRILLA.
• Descarte las pipetas en el frasco de boca ancha.
• Lleve los tubos de TSN a ebullición durante 15 minutos.
• Tome las 3 cajas de petri desocupadas, vierta el medio de cultivo SPC y mezcle
el medio sobre la superficie del mesón (siembra en profundidad).
• Deje solidificar el agar
• Agregue una segunda capa de agar a los tubos de TSN, deje solidificar.
• Separe las cajas según el agar que contienen.
Lleve a incubar todo el material marcado, recuerde que las cajas de hongos y
levaduras son a temperatura ambiente. Lave y entregue el material como la primera
práctica, recuerde las recomendaciones de lavado y descarte de material
contaminado.
Resultados
24
• Realice los cálculos e informe los resultados.
Mesófilos (SPC)
Dilución Lectura
10-1
10-2
10-3
Dilución Lectura
10-1
10-2
10-3
Estafilococo (BAIRD-PARKER)
Dilución Lectura
10-1
10-2
10-3
Dilución Lectura
10-1
10-2
10-3
Dilución Lectura
10-1
10-2
10-3
25
Cuestionario
• Resumen
• Palabras claves
• Introducción
• Metodología (para cada práctica)
26
• Resultados y análisis (para cada práctica)
• Conclusiones y referencias bibliográficas con normas APA
Material que se
Agente de Temperatura de Equipo utilizado puede esterilizar
esterilización Uso (si se aplica) por este método.
Esterilización con
calor seco
Esterilización con
calor húmedo
Radiaciones
Filtración
27
Segunda práctica: Condiciones de crecimiento y Metabolismo Bacteriano
• Entregar el informe del trabajo colaborativo con los resultados obtenidos para
cada una de las prácticas, utilizando la siguiente estructura (Tipo artículo):
• Resumen
• Palabras claves
• Introducción
• Metodología (para cada práctica)
• Resultados y análisis (para cada práctica)
• Conclusiones y referencias bibliográficas con normas APA
28
Computador
Internet (Acceso a videos)
Software Excel
Software VirtualPlant
Software ComBase
Requerimientos generales:
29
3. Después de haber realizado el registro, ingresa con el usuario y contraseña y luego
clic en el botón entrar. Una vez ingresa a la página principal, siga los pasos indicados
en procedimiento:
30
1. Ingresar a la siguiente dirección: http://plantasvirtuales.unad.edu.co/
2. Cada estudiante debe registrarse en el simulador abriendo una cuenta (Sí ya tiene
cuenta ingrese con su usuario y contraseña).
31
3. Después de haber realizado el registro, ingresa con el usuario y contraseña que
registro y luego clic en el botón entrar.
4. Una vez ingresa con su usuario y contraseña encuentra una ventana en donde le dan
la bienvenida y están reportados sus datos,
32
5. Ir a la pestaña tutorial, ubicada en la parte superior
6. Al dar clic en la pestaña tutorial, se abre una ventana, en donde va a encontrar videos
y documentos. Debe dar clic en el Video denominado, Módulo complejo. Es importante
que observe y escuche con detenimiento el video tutorial, para tener claridad sobre el
recorrido por el complejo agroindustrial.
33
7. Luego de observar y escuchar el video tutorial, debe cerrar la ventana
34
9. Una vez ingresa al complejo industrial, siga los pasos indicados en procedimiento.
Procedimiento
6. Seleccione uno de los microrganismo del listado. Recuerde que este debe estar
en el grupo de los microorganismos causantes de contaminación del producto con
el que está trabajando.
35
7. Modifique las condiciones de pH y temperatura y observe cómo varía la curva de
inactivación y explique su comportamiento.
8. Establezca en el software el pH que debe tener el alimento y/o producto con el
que está trabajando. Una vez realizado esto, modifique las condiciones de
temperatura para lograr la inactivación del microorganismo al cabo de 1h de
proceso.
9. Indique el valor de temperatura encontrado y prediga sí con las condiciones de
proceso descrito en el punto 2 logrará inactivarse el microorganismo.
• Resumen
• Palabras claves
• Introducción
• Metodología
• Resultados y análisis del procedimiento realizado
• Conclusiones y referencias bibliográficas con normas APA
36
Trabajo individual en el formato indicado
• Todos los integrantes del grupo deben participar con sus aportes en el
desarrollo de la actividad.
• Antes de entregar el producto solicitado deben revisar que cumpla con todos
los requerimientos que se señalaron en esta guía de actividades.
• Solo se deben incluir como autores del producto entregado, a los integrantes
del grupo que hayan participado con aportes durante el tiempo destinado para
la actividad.
Tenga en cuenta que todos los productos escritos individuales o grupales deben
cumplir con las normas de ortografía y con las condiciones de presentación que se
hayan definido.
En cuanto al uso de referencias considere que el producto de esta actividad debe
cumplir con las normas APA
En cualquier caso, cumpla con las normas de referenciación y evite el plagio
académico, para ello puede apoyarse revisando sus productos escritos mediante la
herramienta Turnitin que encuentra en el campus virtual.
37
no haya coincidencia entre ella y la referencia” y liberal f) “El reproducir, o copiar con
fines de lucro, materiales educativos o resultados de productos de investigación, que
cuentan con derechos intelectuales reservados para la Universidad.”
Las sanciones académicas a las que se enfrentará el estudiante son las siguientes:
a) En los casos de fraude académico demostrado en el trabajo académico o
evaluación respectiva, la calificación que se impondrá será de cero puntos sin perjuicio
de la sanción disciplinaria correspondiente.
b) En los casos relacionados con plagio demostrado en el trabajo académico
cualquiera sea su naturaleza, la calificación que se impondrá será de cero puntos, sin
perjuicio de la sanción disciplinaria correspondiente.
38
de 60 puntos de distinguen algunos de los microorganismos de importancia en la
la actividad. industria de alimentos y/o no reconocen las características de un
análisis microbiológico y/o no realizan la actividad
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 5 puntos y 0 puntos
Segundo criterio
de evaluación:
Nivel alto: Participa activamente el desarrollo de la actividad,
presentando sus avances individuales relevantes en el tiempo
Criterios de establecido en la guía de actividades.
participación: Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
Presentación de entre 15 puntos y 10 puntos
avances individuales
oportunos, según lo
Nivel medio: Participa en el desarrollo de la actividad pero no
solicitado en la guía de realiza los aportes relevantes y/o completos y/o no los realiza en el
aprendizaje práctico. tiempo establecido en la guía de actividades.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 10 puntos y 5 puntos
Este criterio
representa 15 Nivel bajo: No participa en el desarrollo de la actividad ni
presenta aportes individuales oportunos y relevantes.
puntos del total
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
de 60 puntos de
entre 5 puntos y 0 puntos
la actividad
39
industria de alimentos elementos relacionados con la microbiología y/o no realizan la
y análisis actividad.
microbiológico de Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
alimentos, mediante entre 5 puntos y 0 puntos
el desarrollo del
componente práctico.
Este criterio
representa 15
puntos del total
de 60 puntos de
la actividad
Cuarto criterio de
evaluación:
Nivel alto: Usan las normas APA para citar y referencias en el
Criterios de forma: documento.
Diligenciamiento Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
correcto del formato entre 10 puntos y 8 puntos
dado para el informe
del componente
práctico. Uso de
Nivel medio: Usan las normas APA inadecuadamente para citar y
normas APA para referencias en el documento.
presentar la Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
bibliografía y citas entre 8 puntos y 4 puntos
bibliográficas.
Nivel bajo: No usan las normas APA para citar y referencias en el
Este criterio documento.
representa 10 Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
puntos del total entre 4 puntos y 0 puntos
de 60 puntos de
la actividad
40
Tipo de actividad: Independiente
Número de actividad: 2
41
solicitado en la guía de Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
aprendizaje práctico. entre 3 puntos y 2 puntos
Tercer criterio de
evaluación:
43