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Amilasa
Amilasa
I. OBJETIVO:
- Determinar l actividad enzimática de una amilasa extraída de trigo
germinado, usando almidón residual
- Determinar la actividad específica de la amilasa vegetal.
ALMIDON DE CEBADA:
El almidón es un polímero semicristalino de glucosa de gran abundancia en
la naturaleza. La cantidad de almidón contenido en el grano de cereal varia,
pero generalmente oscila entre el 60 y 75 % del peso del grano. El almidón
presente en los granos es el más importante de los carbohidratos para fines
industriales resultando preciso degradarlo enzimáticamente con una 1
gelatinización previa por acción de calor o sometiéndolo a un intenso
trabajo mecánico. El almidón consta de dos fracciones: amilosa y
amilopectina.
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA | Laboratorio de Bioquímica General
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA ALFA AMILASA VEGETAL
III. MATERIALES:
Equipos:
- Estufa
- Espectrofotómetro
Materiales y reactivo:
IV. PROCEDIMIENTO:
- Extracción de la amilasa:
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ALMIDON
ALMIDON RESIDUAL
TUBOS (ml) INICIAL
I II III IV
SUSTRATO 1.0 1.0 1.0 1.0
Incubar: 30°C – 5 min.
EXTRACTO DE ENZIMA --- 0.1 0.2 0.3
Incubar: 30°C – 15 min.
ACIDO CLORHIDRICO 0.5N 1.0 1.0 1.0 1.0
Reposar: T. ambiente – 5 min.
AGUA DESTILADA 9.9 9.8 9.7 9.6
LUGOL 0.5 0.5 0.5 0.5
V. CALCULOS Y RESULTADOS:
ABSORVANCIA
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 0.872 0.063
II 0.526 1.197
III 1.860 1.587
IV 3.054 2.792
- Determinación de la actividad enzimática:
Concentración (mg/ml)
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 8.72 0.63
II 5.26 11.97
III 18.60 15.87
IV 30.54 27.92
Promedio 18.13 18.59
unidades de enzima
AE=
mg de proteina
Proteína (mg/ml)
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 8.72 0.63
II 5.26 11.97
1
III 18.60 15.87
IV 30.54 27.92
Promedio 18.13 18.59
ACTIVIDAD ENZIMATICA
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 0.06662844 0.06666667
II 0.066673 0.06666667
III 0.06666667 0.06666667
IV 0.06666667 0.06666547
50 Semillas de trigo
TRIRUTAR (Mortero)
Buffer: 10 ml
Cloruro de Calcio AGREGAR
Buffer: 10 ml
Cloruro de Calcio FILTRAR (Embudo + gasa)
AMILASA
VI. DISCUSION:
1
VII. CONCLUSIONES:
1
Logramos determinar la actividad
enzimática en las dos experiencias
realizadas con semillas germinadas de trigo
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DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA ALFA AMILASA VEGETAL
VIII. CUESTIONARIO:
CUESTIONARIO
1.- En la síntesis de arginina a partir de acido glutámico se observaron las 1
siguientes reacciones
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DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA ALFA AMILASA VEGETAL
Glu ------ N ac. Glu ------ Orn ------ Cit ------ Arg
Indica cuales son los sustratos y productos correspondientes para estas enzimas
mediante un cuadro.
2.-Por que se sometieron las raicillas del cereal a un proceso físico y químico en el
proceso de extracción?
fragmentar en pedazos más pequeños con la ayuda de un mortero pero aun así
siguen conservando su naturaleza, luego se da el proceso químico donde se va a
filtrar la parte liquida que seria la amilasa de las semillas con la ayuda de una gasa
,luego a este extracto se le van agregando una seria de reactivos lo cual permitirán
transformarla en un preparado enzimático para posteriormente utilizarla en
diferentes pruebas.
RAÍCES DE YUCA
1
RALLADO
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA ALFA AMILASA VEGETAL
IX. BIBLIOGRAFIA:
Foster, N; Burchett, L and Paulsen, Bioquimica,Editorial Reverte,
Espana,G. 1998.
Benech-Arnold, R. and Sanchez,Biologia de las Plantas,Primera
Edicion,Editorial Bermejo . 2004.
Almonte.Carlos,Manual de Quimica Organica,Quinta Edicion, 2010.
Barabado.Oscar,Microbiologia Alimentaria,Tercera Edicion,2001.