PRACTICA # 14 ESPIROQUETAS

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

Al finalizar la sesión Nº 14, el estudiante estará en capacidad de

identificar en forma apropiada el agente causal de la sífilis dentro la
familia Treponemataceae
Al finalizar la sesión Nº 14, el estudiante estará en capacidad de
describir correctamente los métodos realizados en el laboratorio
para el diagnostico presuntivo y confirmativo del Treponema pallidum.

ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL REQUERIDOS

Blusa de laboratorio
Guantes
Pelo recogido

MATERIALES

Guía de laboratorio
Colores

Fundación Universitaria de Ciencias de la Salud. Guías de Microbiología médica-2017

INTRODUCCIÓN

El agente causal de la sífilis pertenece a la familia Treponemataceae, el cual

agrupa tres géneros de bacterias de importancia clínica; Leptospira, Borrelia y
Treponema, cuya característica es tener una pared celular flexible, lo que hace
que se presente en forma de espiral.

En esta práctica de laboratorio, haremos referencia al Treponema pallidum,

agente causal de la sífilis, enfermedad de transmisión sexual (ETS). El hombre se
infecta a través de una persona infectada que presente lesiones mucosas.

Si la enfermedad no es tratada a tiempo puede pasar desde una fase primaria con
la aparición de un chancro sifilítico, a una fase secundaria con diferentes
manifestaciones neurológicas y finalmente a sífilis terciaria con compromiso de
SNC, aneurisma sifilítico o gomas sifilíticos.

El diagnóstico de laboratorio está basado en la detección de anticuerpos o en la

visualización directa del Treponema.

DETECCION DE ANTICUERPOS INESPECIFICOS

Son pruebas de tamizaje (o screening en el habla inglesa) que poseen alta

sensibilidad (Capacidad de detectar los enfermos con un resultado positivo, pocos
falsos negativos) pero baja especificidad (Capacidad de detectar los NO enfermos
con un resultado negativo, pocos falsos positivos), en otras palabras, con estas
pruebas se puede detectar la mayoría de paciente con sífilis, pero debido a su baja
especificidad, se obtendrá un número considerable de falsos positivos (pacientes
SIN enfermedad pero con la prueba positiva). Su principal utilidad es el
diagnóstico presuntivo de la enfermedad y el seguimiento al tratamiento.

Son pruebas cuya lectura se realiza teniendo en cuenta el grado de floculación, se

fundamentan en la detección o presencia de reaginas (Anticuerpos inespecíficos)
utilizando como antígeno la cardiolipina; se pueden realizar cualitativa y
cuantitativamente. Las más comunes son el V.D.R.L. (Venereal Disease Research
Laboratory) y el R.P.R. (Rapid Plasma Reagin) ambas detecten anticuerpos séricos
inespecíficos y se conocen como “no treponémicas”

Es importante tener en cuenta que las pruebas “no treponémicas” han sido
recomendadas por ser rápidas, baratos y convenientes para examinar un gran
número de sueros, o como indicadores de la actividad clínica de la sífilis, en el
control de la terapéutica ya que los títulos iniciales se reducen a los 6-12 meses
después de un tratamiento eficaz, llegando a ser indetectables varios años
después.

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Para diagnosticar la enfermedad del SNC, se debe utilizar El VDRL en muestras
de LCR.

Las causas de falsos positivos con pruebas no treponémicas son diversas e incluyen
a enfermos con colagenosis, edad avanzada, uso de drogas por vía parenteral,
enfermedad crónica hepática, (hepatitis) infecciones crónicas graves (T.B.C.,
V.I.H.) y otra enfermedades como artritis, mononucleosis infecciosa, lepra,
paludismo, entre otras, aunque vale la pena aclarar que los títulos de anticuerpos
anticardiolipina que se obtienen de estos paciente son “bajos” (en general hasta
1:8).

Técnica de laboratorio:

VDRL:

Se toma suero del paciente, si se usa líquido cefalorraquídeo sólo se debe

centrifugar. Luego, la muestra se mezcla con un antígeno, que es una solución salina
tampón de cardiolipina,y lecitina adosadas a partículas de colesterol. Esta prueba
se puede realizar en lámina y observarse al microscopio.

Los resultados de la prueba de VDRL en lámina se informan como no reactivos (no

hay floculación), y reactivos si se observa un precipitado grueso (floculación
definitiva). Todos los sueros reactivos deben ser diluidos seriadamente; a cada
dilución se le realiza la prueba de VDRL, y se informa el título máximo obtenido.

RPR:

Es una prueba diseñada para detectar de manera rápida la presencia de reagina en

el suero, examinando macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación,
tiene el mismo fundamento del VDRL y se diferencia porque el Antígeno de
cardiolipina se encuentra recubierto con microparticulas de carbón.

Los falsos negativos se pueden producir por errores técnicos y los falsos positivos
son los mismos que para la prueba de VDRL. Se han desarrollado variantes de esta
prueba en las que la muestra puede ser plasma, sin que se pierda su sensibilidad y
especificidad.

DETECCION DE ANTICUERPOS ESPECIFICOS

Los métodos directos o pruebas treponémicas son utilizadas para confirmar los
resultados de una prueba no-treponémicas (reagina) positiva. Permitiendo la
confirmación de los casos de sífilis de tal manera que se evite la medicación de
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aquellos pacientes cuyas serologías “no treponémicas” fueron reactivas, pero el
resultado en ésta fue negativo. Contribuye a eliminar gastos innecesarios en
antibióticos y por ende, se evita el abuso de éstos que conduce al incremento de la
resistencia al medicamento.

Son conocidas también como pruebas treponémicas dentro de las cuales se

encuentran: el FTA-ABS (Fluorescent Treponemal-Antibody Absorption) y TPHA
(Treponema pallidum, Haemagglutination Assay) y detectan anticuerpos anti-
treponémicas específicos mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta o
hemaglutinación respectivamente.

A pesar de su mayor especificidad, también puede dar falsos positivos en los sueros
con globulinas anormales, factores antinucleares, factor reumatoide, herpes genital,
drogadicción, embarazo y diabetes.

VISUALIZACION DEL TREPONEMA

El treponema no colorea con Gram, podría visualizarse en biopsias coloreadas con

tinción de plata o mediante la técnica de campo oscuro que permite ver los
treponemas móviles en muestras de chancro de sifílis primaria. Esta técnica no está
disponible en los laboratorios de microbiología.

Es importante tener en cuenta que el Treponema. pallidum no ha podido ser

cultivado in vitro y la inoculación del conejo es el único medio disponible para aislar
este microorganismo.

PREGUNTA:

Qué antígeno desencadena la producción de anticuerpos tipo reaginas durante la

infección con Treponema pallidum ?

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A un paciente con sífilis primaria se le ordena una prueba de VDRL. ¿Cuál espera
que sea el resultado? ¿Por qué?

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ACTIVIDAD

A continuación se ilustra la forma en que se leen en el laboratorio las pruebas no

treponémicas, obsérve y compare con las pruebas demostrativas. Realice su propia
lectura y anote los resultados en las tablas correspondientes.

LECTURA DE VDRL

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El siguiente cuadro muestra como se evalúan los resultados de la prueba RPR.

Tipo de Aglutinación RESULTADO

Agregados grandes o (reactivo) Positivo

medianos
Agregados pequeños (reactivo débil) Positivo
débil

Ningún agregado o ligera (No-reactivo) Negativo

rugosidad

Grafique lo observado en el laboratorio

VDRL REACTIVO Y NO REACTIVO

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 RPR REACTIVO NO REACTIVO

CASOS:

MUESTRA No.1 .
Prueba de anticuerpos no específicos realizada en suero proveniente de una
mujer con lupus
Lectura________________________________________________________

Interpretación y conducta médica:

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MUESTRA No.2
Prueba de anticuerpos no específicos realizada en suero proveniente de un
estudiante universitario
Lectura:______________________________________________________

Interpretación y conducta médica:

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MUESTRA No.3
Suero proveniente de un donante de sangre
Lectura:_______________________________________________________

Interpretación y conducta médica:

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PARA RECORDAR

Cuando una prueba no treponémicas da resultados positivos, se debe confirmar el

diagnóstico con las pruebas treponémicas especificas FTA-ABS. Los títulos de
anticuerpos no treponémicas tienden a estar relacionados con la actividad de la
enfermedad; aumentan normalmente con una nueva infección y disminuyen después
del tratamiento. Las pruebas de anticuerpos treponémicas, positivas, a menudo
siguen siéndolo de por vida, a pesar del tratamiento de la enfermedad o de su
actividad.

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