Prctica 1.

VDRL y Rosa de Bengala

VDRL - USR
Antgeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sfilis en Suero sin inactivar, en Plasma y L. C. R. (no requiere reconstitucin) Agente de Diagnstico Introduccin Treponema pallidum, la bacteria que causa la sfilis, una enfermedad que generalmente se transmite por va sexual.

Su diagnstico puede ser serolgico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos: 1. Tipo cardiolipina.- No treponema e inespecficos 2. Antitreponemas especficos
La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratoy VDRL se le conoce como una prueba para sfilis no-treponemica. Es parte de la exploracin inicial de la sfilis e iniciar un tratamiento. Con el mtodo cualitativo empleando la placa presenta floculacin, si se presenta el caso se lleva acabo el mtodo cuantitativo con el o los sueros positivos.

Tambin se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, as como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

Desarrollo

Material Placa cncava Puntillas Aguja No. 21 sin bisel Cronmetro Equipo Pipeta semiautomtica Microscopio

Muestra Suero (Obtener 3 ml. de sangre por puncin venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo Antgeno VDRL y los Sueros de Controles (almacenados 2-8C)

Resultado e interpretacin

Mtodo

cualitativo

1. Depositar 0.05 ml. de suero problema en un anillo de la placa cncava. 2. En otro anillo colocar una gota de suero control positivo y en el anillo siguiente una gota de suero control negativo, extendiendo dentro de los mismos. 3.Aadir una gota del antgeno en suspensin previamente resuspendido en cada muestra con la aguja N.21 4. Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm durante 4 min. (Nota: lo realizamos de forma manual a falta de agitador). Las pruebas que se realizan en un clima extremadamente seco pueden evaporarse, por lo tanto la paca se cubre con la tapa de una caja Petri humedecida.

Valores de referencia

Paciente 1 Paciente 2

Negativo Negativo

CONTROL POSITIVO Presencia de floculacin mediana o grande CONTROL NEGATIVO Ausencia de floculacin

En este caso ambos resultados son negativos lo que indica que ningn paciente tiene sfilis. El examen con resultado positivo puede indicar que usted tiene sfilis. Si el examen es positivo, el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un examen ms especfico para la sfilis. La capacidad del examen VDRL para detectar sfilis depende de la etapa de la enfermedad. La sensibilidad del examen para detectar la sfilis se acerca al 100%

durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas ms tempranas y tardas. Las siguientes afecciones pueden provocar un examen falso positivo, como: VIH Enfermedad de Lyme Ciertos tipos de neumona Malaria Lupus eritematoso sistmico

El siguiente mtodo lo inclu sin embargo por falta de sueros problema positivos en el mtodo cualitativo no se realiz.

Mtodo cuantitativo
1.Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. 2.Colocar en una gradilla 6 tubos y numerarlos. 3.Agregar a cada uno 0.5 ml. de solucin salina al 9%. 4.Depositar 0.5 ml. de suero al tubo 1 y mezclar. 5.Pasar 0.5 ml. del tubo 1 al tubo 2 mezclar. 6.Pasar 0.5 ml. del tubo 2 al tubo 3 mezclar 7.Continuar con este proceso hasta el tubo 6. 8.Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa cncava. 9.Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin bisel a cada dilucin. 10. Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm. Durante 4 min. 11. Leer al microscopio con objetivo seco dbil 10x.
Resultados e interpretacin El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente un resultado positivo. Ejemplo: Si se presenta floculacin hasta el tubo 3 dilucin 1:8, por lo tanto el ttulo ser 1:8. Nota: 1.Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba. 2.Sueros dbiles positivos y fuertes evidencias clnicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenmeno de prozona.

3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente despus de los 4 min. puede secarse la reaccin y dificultad en la interpretacin. 4.El antgeno en suspensin debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.
Conclusiones Esta prueba cualitativa VDRL nos permite identificar a los pacientes con sfilis, enfermedad producida por la bacteria Treponema pallidum; se trata de una prueba rpida y certera que permite el inicio de un tratamiento eficaz evitando que avance y pueda ser controlada satisfactoriamente. En caso de que los resultados sean positivos es necesario comprobar con la Prueba Rpida de Regina (RPR) y examen FTA-ABS, que son aun ms exactas. Referencias Prueba proporcionada por LICON. Laboratorios Licon, S. A., reactivo. http://www.clinicadam.com/salud/5/003515.html http://www.ferato.com/wiki/index.php/VDRL

ROSA DE BENGALA
Antgeno Brucelar Amortiguado para el Diagnstico de Brucelosis

Introduccin Es una prueba, basada en la aglutinacin como respuesta a la presencia de alguna de las aglutininas de Brucella (abortus, mellitensis y suis). Bacterias causantes de la Brucelosis, organismos virulentos e infecciosos para el hombre que adquiere generalmente por va mucocutnea, por consumir carne contaminada con la bacteria, abrasiones o cortes en la piel, inhalacin de aerosol o contaminacin de la conjuntiva; invadiendo el sistema linftico y puede alcanzar a diversos rganos. Por ello se realiza la prueba de Rosa de Bengala por ser una prueba sensible y rpida que permite una aproximacin diagnstica inmediata.se empela sobre todo en las zonas no endmicas, como mtodo de "despistaje". Emplea como antgeno una suspensin bacteriana a la que se ha aadido el colorante rosa de bengala, enfrentndola al suero sin diluir del enfermo.

Desarrollo

Material Placa cncava Puntillas Cronmetro

Equipo

Pipeta semiautomtica Microscopio

Muestra Suero (Obtener 3 ml. de sangre por puncin venosa, centrifugar y separar el suero)

 Control Positivo de Brucella Control Negativo de Brucella

Reactivo Antgeno Rosa de Bengala

Procedimiento 1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero. 2. Utilizando la pipeta automtica adicione 30 L de la muestra del paciente en un crculo de la placa. 3. Mezcle suavemente el Antgeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogneo, despus coloque 30 L en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (Usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles. 4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. 5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Nota : Despus de este tiempo(4 min.) la lectura ya no es vlida.

Resultado e interpretacin

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenz a mezclar Es el tiempo lmite ptimo para la observacin de ciertas aglutininas que se revelan lentamente puesto que se pueden presentar reacciones no especficas.

Valores de referencia

Paciente 1

Negativo

Paciente 2

Negativo

CONTROL POSITIVO Presencia de aglutinacin indica la existencia de anticuerpos especficos. CONTROL NEGATIVO Ausencia de aglutinacin.

Ambos resultados fueron negativos lo que indica que los pacientes no tienes Brucelosis o no han estado en contacto con la bacteria indicada. Se pueden presentar falsos negativos, que se limitan a enfermos con procesos de pocos das de evolucin y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado. NOTA: El aislamiento del agente etiolgico mediante hemocultivos es de suma importancia.

Conclusiones

Esta prueba cualitativa de Rosa de Bengala es un mtodo considerado eficaz en el diagnstico de brucelosis, que permite dar al paciente un tratamiento en caso de

que sea positivo el resultado, sin embargo por tratarse de una prueba cualitativa se debe comprobar con algunas otras como:Aglutinacin Lenta Estndar o Aglutinacin Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

V.D.R.L. (Venereal Disease Research Laboratory)

Fundamento: Es una prueba serolgica realizada en medicina con sensibilidad y especificidad para complementar el diagnstico de sifilis.

Cualquier enfermedad por treponema s causa un VDRL positivo: sfilis, frambesiapinta, bejel, fiebre recurrente, leptospirosis,enfermedad de Lyme y otrasborreliosis. Resul tados reactivos tambin resultan con otras enfermedades infecciosas, comotuberculosis, lepra,neumococo, endocarditis infecciosa,mononucleosis infecciosa, neumonas virales, sarampin, varicela, paludismo ytripanosomiasis.
Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se pueden producir en repuesta al Treponema pallidum, la bacteria que causa la sfilis. El examen es similar al examen de reagina plasmtica rpida (RPR) ms nuevo.

Introduccin:

La sfilis es una enfermedad venrea causada p or Treponema pallidum,espiroqueta estrechamente enrollada, de unos 8 a 15um de largo. La enfermedad sin tratar pasa por tres etapas que se pueden prolongar durante muchos aos.

La sfilis pocas veces se diagnostica mediante la demostracin de organismos en una lesin primaria o secundaria. La fase terciaria que sobreviene despus, es el resultado de la hipersensibilidad tisular de los antgenos treponmicos, no de la presencia de importantes microorganismos viables. Las pruebas serolgicas son importantes para la demostracin del Treponema pallidum, cuyo diagnsticobacteriolgico es muy difcil.

Procedimiento: Material: Placa excavada Pipeta semiautomtica Puntilla Reactivo de VDRL Muestra de suero

1) Separar el suero, y posteriormente agregar una gota de suero y una de suero control positivo. (en excavaciones diferentes) 2) Aadir una gota de la suspensin del antgeno V.D.R.L. previamente agitado. 3) Mezclar durante 4 min. (tiempo exacto). Puede dar un falso positivo

si se deja reposando o se mezcla mas tiempo 4) Observar al microscopio con el objetivo 10x

INTERPRETACIN DE RESULTADOS.
A) Agregados grandes y medianos - Suero positivo. B) Agregados finos y dispersos - Suero dbilmente positivo. C) No se observan agregados - Suero no positivo. Se pueden producir falsas reacciones positivas en individuos con cuadrospatolgicos diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, asma, lepra, malaria, tuberculosis, cancer, diabetes y enfermedades autoinmunes.

ROSA DE BENGALA

Fundamento: Prueba de aglutinacin rpida en placa para la deteccin temprana de aglutininas

especficas deBrucella (Brucella melitensis, abortus y suis). La brucelosis es una enfermedad infecciosa producida por el gnerobrucella. Es una clsica

zoonosis (antropozoonosis) transmisible ocasionalmente al hombre a partir de animales infectados, los cuales eliminan gran nmero de bacterias a travs de los genitales, la leche y las heces.
La brucelosis humana, su denominacin tcnica, es una de las enfermedades bacterianas ms comunes del planeta. Se llama as en honor de Davis Bruce, mdico militar que en 1887 aisl el agente patgeno del bazo de soldados britnicos acuartelados en la isla de Malta. La bacteria recibi el epteto del nombre latino de la isla: Microccocus melitensis (hoy, Brucella melitensis).

TRANSMICION

Introduccion:
Aglutinacin. En sus diferentes modalidades, es la prueba ms utilizada debido a su rapidez y sensibilidad

Rosa de Bengala: Es la prueba mas empleada por permitir una aproximacin diagnstica inmediata. De especial utilidad en zonas no endmicas, en las que se realiza como mtodo de "despistaje". Utiliza como antgeno una suspensin bacteriana a la que se ha aadido el colorante rosa de bengala, enfrentndola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximacin diagnstica en pocos minutos con una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado grado de correlacin con la seroaglutinacin y, por su simplicidad, es muy til como

prueba de despistaje inicial o screening. Sus falsos negativos se limitan a enfermos con procesos de pocos das de evolucin y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

PROCEDIMIENTO: Material: Suero (sangre) Reactivo de rosa de bengala Placa excavada Pipeta semiautomtica

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero. 2. Utilizando la pipeta automtica adicione 30 L de la muestra del paciente en un crculo de la placa. 3. Mezcle suavemente el Antgeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogneo, despus coloque 30 L en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. 5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

Importante: Despus de este tiempo la lectura ya no es vlida. La lectura debe

llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenz a mezclar. Este es un tiempo lmite ptimo en el que se da un espacio para la observacin de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, adems de que se pueden presentar reacciones no especficas.