ABSTRACT

La termoterapia seguida del aislamiento y cultivo in vitro de meristemas apicales es un método

conveniente para la erradicación del virus. No obstante, el lapso de procedimiento térmico
frecuenta ser extenso (28 - 50 días) y el rendimiento de plantas viables libres de virus suele ser
bajo (<50%).

INTRODUCCION

Tener material vegetal sano es una acción fundamental para eludir la pérdida de
productividad, gracias a la infección vírica de los árboles frutales. El virus de las manchas
foliares cloróticas de la manzana y el virus del mosaico de la manzana son los primordiales
causantes de las patologías virales en los árboles Pyrus y Malus, ocasionando retraso en el
incremento y pérdida de productividad. La infección por ACLSV además está bastante amplia
en las especies de árboles frutales de hueso, ocasionando patologías a las ciruelas. Los virus
son transmisibles por injerto y persisten en el material de propagación vegetativa de los
árboles infectados, siendo posiblemente la primordial fuente de inóculos.

Por consiguiente, el cultivo de plantas libres de virus tiene la virtud de evadir que otras plantas
o árboles frutales sean contaminados por dichos virus

MATERIALES Y METODOS

Antes de iniciar nuestro procedimiento de erradicación de virus, se determinó el estado de

virus en cultivares tradicionales de Galicia en plantas de campo de manzano y peral
pertenecientes al Banco de Germoplasma del CIAM (Centro de Investigación Agrícola de
Mabegondo, NO de España) mediante Ensayo Inmunoabsorbente Enzimático Ligado a Doble
Anticuerpo Sandwich (DAS-ELISA). Según estos análisis, todos los cultivares seleccionados
dieron positivo para los virus ACLSV y ApMV. Estos esquejes fueron de seis cultivares de
manzano (Malus × domestica) “Cacharela”, “Camoesa”, “Gravillán”, “Ollo Mouro”, “José
Antonio” y “Príncipe Grande”, y dos cultivares de pera (Pyrus communis) “Barburiña” y
“Manteca Oscura”. Hasta ahora, estos seis cultivares tradicionales de manzana y dos de pera
del NO de España nunca habían sido micropropagados. El primer método se aplicó
sumergiendo las estacas cortadas, de aproximadamente 20 cm de largo, en agua destilada en
bolsas de plástico selladas en un baño termostático a una temperatura constante de 51 ° C o
56 ° C durante una hora.

TRATAMIENTO

Después de siete meses desde que se estableció in vitro y se multiplicó, el material vegetal
estaba listo para la termoterapia. Este tamaño facilitó su aislamiento y cultivo, mejorando la
tasa de supervivencia. Para cada cultivar, las puntas de los brotes se cultivaron en placas Petri
con 25 mL del medio de cultivo seleccionado, descrito anteriormente, que cubrimos con discos
de papel de filtro estériles y se colocaron 4 semanas en una cámara de crecimiento a 24 ° C en
condiciones de luz establecidas. Cada meristemo superviviente viable y no hiperhídrico de
cada cultivar se enumeró y se multiplicó para constituir un clon. La RT-PCR se llevó a cabo
según las instrucciones del fabricante (Takara Bio Inc., Japón), utilizando los cebadores
específicos para ApMV 1F y 8F para ACLSV adaptados para la detección del virus de los
manzanos.

RESULTADOS
Solo el tercer método de termoterapia utilizado, aplicado a brotes cultivados in vitro con
aumento gradual de temperatura de 25 ° C a 40 ° C durante 18 días, fue efectivo. La eficacia
para la erradicación del virus se evaluó en función de la tasa de regeneración de las plantas
analizadas libres de virus en seis cultivares de manzana y dos de pera y en las tasas de
supervivencia. Los resultados obtenidos con un tamaño de muestra de 30 se resumen en la
Tabla 1.

Aunque las altas temperaturas aplicadas durante periodos prolongados de tiempo son más
eficaces para la erradicación del virus, también reducen la viabilidad de los brotes cultivados in
vitro, así como su supervivencia. La terapia fue solo de 18 días, pero, a pesar de esto, fue muy
efectiva tanto en la supervivencia como en la erradicación de los dos tipos de virus,
probablemente debido al aumento gradual de 1˚C por día, lo que permitió que las plantas se
adaptaran a las altas temperaturas. El propósito de nuestro estudio fue desarrollar un
procedimiento eficiente con menor tiempo de tratamiento térmico utilizando altas
temperaturas, pero sin afectar la supervivencia de los brotes tratados, aislando pequeños
brotes apicales entre 0,7 - 1,0 mm, con la punta de meristemo, que eran más aptos para
sobrevivir y lograr un alto porcentaje de éxito en la erradicación de virus en manzanos y
perales.