LAS PROTEÍNAS

TEMA 2.1. PROTEINAS Y CARACTERÍSTICAS GENERALES.

2.1.1. EXPLICAR EL CONCEPTO E IMPORTANCIA DE LAS PROTEÍNAS. DEFINIR QUE
ES UN AMINOÁCIDO Y EXPLICAR SU ESTRUCTURA GENERAL. CONOCER LOS
FUNDAMENTOS DE LA CLASIFICACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS. EXPLICAR LA
FORMACIÓN EL ENLACE PEPTÍDICO.
I. CONCEPTO E IMPORTANCIA DE LAS PROTEÍNAS
Son las moléculas fundamentales en la organización de la célula, no sólo por su abundancia,
pues constituyen casi la mitad del peso seco, sino por la enorme variedad de funciones que
desempeñan. Están formadas por C, H, O y como bioelemento característico el N. Pero
además puede tener otros como P, S, Fe, Mg etc. Los elementos que dan lugar a estas
moléculas macroprotéicas de elevado peso molecular, se combinan para formar primero unos
monómeros llamados aminoácidos que se unen entre si y dan lugar a las proteínas, con orden
y secuencia determinados genéricamente.
Las proteínas pueden formar dispersiones coloidales en agua pura o en disoluciones salinas.
Además solo son activos en un estrecho margen de pH y temperatura, y su actividad puede
ser alterada por distintas sustancias llamadas efectores.
Los aminoácidos que forman las proteínas se enganchan unas a otras y en realidad tiene
carácter de proteína cuando el nº de aminoácidos supera los 60. Si el nº de aminoácidos
oscila entre 10 y 60 no tiene carácter de proteína y se denomina polipéptido. Si el nº es de 2 a
10 aminoácidos se denomina oligopéptido. Estos dos últimos desempeñan funciones variadas
como hormonas (insulina) venenos, etc.
Las proteínas deben su importancia biológica al número de funciones que desempeñan, entre
las que podemos citar:
A. Catalíticas; la práctica totalidad de las regiones biológicas están catalizadas por enzimas
específicas, de las que existen unas 2.000 distintas en cada célula. Todas ellas son proteínas.
B. Reguladoras; hormonas peptídicas como la insulina (que regula el metabolismo de la
glucosa), la hormona del crecimiento o paratiroidea (que regula el metabolismo del calcio y del
fósforo).
C. Estructurales; forman parte de las membranas celulares, los microtúbulos, cilios, etc. Son
parte importante de las uñas, piel, etc.
D. Transporte; como la hemoglobina que transporta oxígeno por la sangre.
E. Acumulación de sustancias; como la ovoalbúmina de la clara del huevo y la caseína de la
leche, que actúan como proteínas de reserva.
F. Movimiento; la contracción muscular se debe a la interacción de filamentos proteicos de
actina y miosina.
G. Defensa inmunitaria; las inmunoglobulinas dan lugar a los anticuerpos, que se forma como
respuesta a la presencia de sustancias extrañas o antígenos, a los que aglutinan o precipitan.
II. DEFINICIÓN Y ESTRUCTURA GENERAL DE LOS AMINOÁCIDOS.
Las biomoléculas que forman las proteínas se combinan para dar lugar a unidades
monoméricas llamadas aminoácidos, que se unen entre sí siguiendo un orden y número que
residen en nuestro ADN.
Químicamente se caracteriza por poseer un grupo ácido, carboxílico (COOH), un grupo amino
(NH2), unidos covalentemente a un átomo de carbono central, llamado carbono (carbono
asimétrico), al cual también se une un átomo de hidrógeno y una cadena lateral (-R). Las
diferencias entre los aminoácidos proteicos se deben a que cada uno presenta una cadena R
distinta.
ESTRUCTURA GENERAL DE UN AMINOÁCIDO.
 H
NH2 C COOH
R
En condiciones de Ph neutro, los grupos amino se encuentran en gran parte protonados y los
grupos carboxilos desprotonados, por lo que los aminoácidos se comportan en los medios
biológicos como sustancias anfóteras (son tanto ácidos como bases) ya que están
doblemente ionizados.
ESTRUCTURA MOLECULAR DE UN AMINOÁCIDO IONIZADO.
H
NH3+ C COO-
R
PROPIEDADES:
a) Isomería espacial y óptica: El átomo de C que ocupa la posición es asimétrico en todos
los aminoácidos (salvo en la glicina), ya que poseen 4 radicales distintos. Este hecho los hace
ópticamente activos, de modo que en disolución desvían el plano en que vibra un haz de luz
polarizada.
A su vez como los enlaces de los átomos de C poseen una configuración tetraédrica, serán
posibles 2 configuraciones distintas para cada aminoácido, que serán imágenes especulares o
estereoisómeros.
b) Propiedades ácido-base: en disoluciones próximas a 7, los aminoácidos están ionizados.
En este caso el grupo amino capta un protón, actuando como base, y el grupo carboxilo cede
un protón actuando como ácido. Los aminoácidos a Ph neutro se encuentran en estado de
iones híbridos. Formando dipolos. Son por tanto anfóteros ya que pueden actuar tanto como
ácido como base.
c) Solubilidad: La bipolaridad de los aminoácidos y la presencia del radical explica su
solubilidad.
III. CLASIFICACIÓN.
 Según las características que presentan sus cadenas laterales (R) se dividen en:
A. Ácidos: R aporta grupo carboxilo.
B. Bases: R aporta grupos Amino.
C. Neutros polares: R contiene grupos polares capaces de formar puentes de H con otros
compuestos polares.
D. Neutros apolares: R posee grupos hidrófobos que interaccionan con otros grupos
hidrófobos mediante fuerzas de Van Der Waals.
 En la naturaleza se conocen alrededor de 200 aminoácidos, o más, pero solo 20
forman parte de las proteínas. Estos últimos son los denominados ácidos protéicos, frente al
resto que se denominan aminoácidos no protéicos. De estos 20 aminoácidos protéicos hay
9 que nuestro organismo no puede sintetizar, por eso los tenemos que ingerir en la dieta,
son los denominados aminoácidos esenciales, frente a los aminoácidos no esenciales, que
son aquellos que nuestro organismo puede sintetizar.
IV. EL ENLACE PEPTÍDICO.
Es un enlace de tipo amida secundaria, que se establece entre el grupo carboxilo de un
aminoácido y el grupo amino del otro, liberándose una molécula de agua y formándose un
dipéptido. 3 aminoácidos pueden unirse mediante dos enlaces peptídicos y formar un
tripéptido. Del mismo modo pueden unirse muchos aminoácidos formando polipéptidos y
proteínas.
FORMACIÓN DEL ENLACE PEPTÍDICO.
H O H O H2O H H O
NH2 - C - C + NH2 - C - C ! NH2 - C - CO - NH - C - C
R OH R H R H2O R H
El enlace peptídico posee unas características que determinan la estructura de las proteínas
que se forman. Los átomos que forman el enlace C-N se sitúan en el mismo plano, debido a la
estabilización por resonancia que se produce, lo que confiere un carácter parcial de doble
enlace, cuya rigidez no permite movimientos de rotación entre estos átomos. Se dice entonces
que presentan un efecto de Mesomería, debido a la deslocalización del doble enlace, ya que
el N2 es también al igual que el O2, muy electronegativo y se puede llevar un doble enlace del
O2. En este caso, los electrones del enlace se mueven dentro de la molécula, dando lugar a 2
formas mesómeras. Se produce mesomería debido a esta deslocalización del doble enlace.
Los enlaces que unen los otros átomos de carbono pertenecen a las cadenas laterales y si
que pueden girar.
ESQUEMA DE LA MESOMERÍA DEL ENLACE PEPTÍDICO.
OO
CN!C=N
HH
2.1.2. DISTINGUIR LOS NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS.
En la estructura tridimensional se pueden describir 4 niveles distintos de complejidad
creciente, cada uno de los cuales se puede considerar a partir del anterior y son:
 Estructura primaria: es la disposición lineal de los aminoácidos que se unen mediante
enlace peptídico. De esta forma se obtienen cadenas lineales de aminoácidos enlazados, que
reciben el nombre de péptidos. En su nomenclatura se añade a su denominación el prefijo di-,
tri-, tetra-, poli-, etc, según sean 2, 3, 4, o n respectivamente.
ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA PRIMARIA DE UNA PROTEÍNA.
HRHR
H2N - C - CO - NH - C - CO - NH - C - CO - NH - C ...
RHRH
2. Estructura secundaria: a medida que se sintetizan en los ribosomas, las cadenas
polipeptídicas se pliegan hasta adoptar espontáneamente la configuración espacial más
estable. Existen dos tipos de configuraciones espaciales:
A) Hélice: la sucesión de aminoácidos que definen la estructura primaria se enrolla sobre si
misma, originando una hélice apretada que se estabiliza exclusivamente por los numerosos
puentes de hidrógeno formados por los grupos CO-NH de 2 enlaces peptídicos. Como en esta
disposición no participan las cadenas laterales, secuencias diferentes de aminoácidos, pueden
adoptar esta misma disposición espacial. La hélice da una vuelta, consistente en que los
planos delimitados por los enlaces peptídicos giran alrededor de los carbones , por cada 3´6
aminoácidos y los puentes de H2 se establecen entre los aminoácidos situados cada cuarta
posición.
ESTRUCTURA SECUNDARIA HÉLICE DE UNA CADENA PEPTÍDICA.
B) Laminar: La cadena peptídica queda extendida y se pliega sucesivamente sobre si misma
hacia delante y hacia atrás de manera que diferentes tramos de la cadena, bien aquellos que
discurren en el mismo sentido (paralelos) o bien aquellos que lo hacen en sentido contrario
(antiparalelo), quedan enfrentados unos con otros, y se unen mediante puentes de hidrógeno,
que también se establecen entre los grupos NH y CO de los enlaces peptídicos. El resultado
es que las diferentes regiones de la cadena se asocian para formar láminas plegadas en
zigzag, como se observó por primera vez en la proteína que se encuentra en la seda llamada
fibroína.
ESTRUCTURA SECUNDARIA LAMINAR DE UNA CADENA PEPTÍDICA.
Paralela. Antiparalela.
 Estructura terciaria: es la configuración espacial definitiva que adoptan las diferentes
regiones de la cadena polipeptídica (cada una con su correspondiente estructura secundaria -
hélice y - laminar), como consecuencia de las interacciones establecidas entre diferentes
puntos de la cadena. El resultado es que la estructura secundaria se pliega sucesivamente,
como en un ovillo, hasta formar una proteína globular.
En una proteína globular puede existir una mayor o menor proporción de hélice o láminas ,
pero siempre se produce una distribución tal, que el núcleo interno aparece constituido por
secuencias de configuración - laminar y la superficie recubierta de segmentos con
configuración - hélice. Como las proteínas se encuentran generalmente en el medio acuoso de
la célula, de naturaleza polar, la cadena peptídica tiende a plegarse de manera que los
aminoácidos que posean cadenas hidrófobas se dispongan en el interior de la estructura,
mientras que los que posean restos polares se localizan en la superficie: sin embargo, en las
proteínas de las membranas biológicas ocurre lo contrario, pues al encontrarse inmersa en un
ambiente lipídico y apolar, dispone los aminoácidos con cadenas hidrófobas en la superficie.
Para comprender mejor el significado de la estructura de las proteínas y su relación con la
función que desempeña se ha establecido recientemente otro nivel más de organización que
se conoce como dominio de la proteína.
Los dominios están formados por determinadas combinaciones de hélice y láminas que
resultan particularmente estables, hasta el punto que aparecen los mismos dominios en
proteínas diferentes. Esto puede explicarse desde el punto de vista evolutivo, considerando
que cierta secuencia de aminoácidos fue tan útil para las estructuras y funciones que
desempeñan, que han tendido a repetirse una y otra vez como clichés estructurales en
diferentes proteínas, es decir, cuando determinado dominio ha probado su eficacia, parece
que se utiliza repetidamente (probablemente desempeña funciones similares en muchas de
ellas).
Un ejemplo lo tenemos en las enzimas que usan como coenzimas determinados nucleótidos,
como el NAD+, el NADP+, el FAD+, el ANP+, etc, todos ellos con estructura y función
diferentes, presentan en su superficie el mismo dominio que constituye el área de unión de los
nucleótidos a los enzimas y se denomina plegamiento de mononucleótido.
ESTRUCTURA TERCIARIA DE UNA PROTEÍNA GLOBULADA (mioglobina).
4. Estructura cuaternaria; se manifiestan en las proteínas (fibrosa o globulosa) formadas por
la asociación de varias cadenas peptídicas. Proteínas globulares que presentan estructura
cuaternaria están compuestas por la asociación de dos o más cadenas con estructura
terciaria.
Estas subunidades proteicas o protómeros, que constituyen la estructura cuaternaria, se
pueden autoensamblar en el interior de la célula para formar estructuras mayores, como
dímeros (citocromo c), tetrámeros (hemoglobina) etc.
La estructura cuaternaria de las proteínas (o la terciaria en aquellas que solo presentan
estructura terciaria), es responsable de su actividad biológica. La estructura cuaternaria
depende de la terciaria, esta de la secundaria que a su vez depende de la primaria, es decir
de la secuencia de aminoácidos que componen cada una de las cadenas polipeptídicas.
NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS.
Estruct.2aria. Estruct. 3aria Estruct. 4aria.
2.1.3. RECONOCER ALGUNAS PROPIEDADES ESENCIALES DE LAS PROTEÍNAS.
 Solubilidad: las proteínas son macromoléculas solubles en medios acuosos cuando
adoptan la conformación globular; dicha solubilidad se basa en la interacción de las cargas
eléctricas, positivas y negativas, distribuidas en la superficie de la proteína con las moléculas
de agua (dipolos) de su entorno, que da lugar a la llamada capa de solvatación (moléculas de
agua rodeando a un ión).
Si añadimos sales, por ejemplo sulfato amónico, a una disolución de proteínas en agua, llega
un momento en el que la concentración de iones amonio (NH4+) y SO42- es tan elevada que
se produce una competencia con las cargas eléctricas de las proteínas. El resultado es la
pérdida por parte de las proteínas de su capa de solvatación, porque las moléculas de agua
forman estas capas alrededor de los iones; es como si los iones robasen el agua de
conformación que rodea a las proteínas, que ven reducida así su solubilidad y precipita.
 Especificidad: las propiedades físicas y químicas de una molécula de proteína dependen
casi por completo de los grupos funcionales contenidos en las cadenas laterales de los
aminoácidos que quedan expuestos en su superficie, es decir, del plegamiento de la cadena o
cadenas peptídicas y de la configuración geométrica que adopten en el medio acuoso.
Estos grupos definen una superficie activa, pues son capaces de interaccionar con otras
moléculas mediante enlaces débiles no covalentes, y pertenecen a una pequeña fracción de
aminoácidos distribuidos por la superficie de la proteína, el resto de la cadena peptídica sólo
es necesaria para mantener la forma y rigidez precisa de la proteína, con el fin de que las
superficies activas se encuentren en la posición correcta.
El funcionamiento de la mayoría de las proteínas se basa en la unión selectiva con diferentes
moléculas, pues la única molécula que puede unirse fuertemente con una proteína es aquella
cuya geometría complementaria le permite adaptarse exactamente a la superficie activa. Esta
especificidad se basa en el plegamiento particular de cada proteína que, en último término,
depende de la secuencia de aminoácidos.
Por tanto, cualquier cambio en la secuencia de aminoácidos de una proteína puede ocasionar
una modificación de las estructuras secundarias, terciarias y cuaternaria (si la tiene) que
provoca la alteración de la geometría de la superficie activa y, en consecuencia, la
disminución o pérdida de su funcionalidad biológica. Un ejemplo de esto lo constituye la
anemia falciforme.
 Desnaturalización: la desnaturalización de las proteínas consiste en la pérdida de su
configuración espacial característica y como consecuencia de ello, es la anulación de su
función biológica, cuando se someten a condiciones ambientales desfavorables; por ejemplo,
el calor excesivo, la acción de sustancias que varían el Ph, la presencia de determinados
iones o la intervención de agentes físicos (electricidad, presión etc.) pueden provocar la
ruptura de puentes de hidrógeno, puentes disulfuro o el resto de interacciones débiles, menos
consistente que los enlaces peptídicos, que mantienen las configuraciones secundaria,
terciaria y cuaternaria de las proteínas.
Cuando se rompen los enlaces débiles y se deshacen las estructuras secundaria, terciaria y
cuaternaria, las proteínas se transforman en filamentos lineales y delgados que se entrelazan
unos con otros hasta formar compuestos fibrosos e insolubles en agua.
Si las condiciones ambientales que provocan la desnaturalización duran poco tiempo o son
poco intensas, esta es temporal y reversible: cuando cesan las condiciones desfavorables, la
proteína se pliega de nuevo y adopta su configuración original; lo que demuestra que la forma
de una proteína no es más que la conformación más probable y más estable y que solo
depende de la secuencia de sus aminoácidos y del medio en el que se encuentran.
Pero si los cambios ambientales son intensos y persistentes, los filamentos protéicos son
incapaces de recuperar su forma original y permanecen de modo irreversible en el estado
fibroso, insoluble en agua y sin actividad biológica. Un ejemplo de desnaturalización
irreversible es la coagulación de la albúmina del huevo por cocción, que pasa de tener
estructura globular y soluble en agua a adoptar forma fibrosa e insoluble.
 TEMA 2.2. LAS ENZIMAS.
2.2.1. EXPLICAR EL CONCEPTO DE ENZIMA COMO BIOCATALIZADOR. DEFINIR
ENERGÍA DE ACTIVACIÓN.
I. CONCEPTO DE ENZIMA.
En los seres vivos se producen continuamente infinidad de reacciones químicas. Para que
éstas se realicen con normalidad es necesario que ocurran de forma ordenada y rápida.
Enzimas, vitaminas y hormonas, junto con los oligoelementos son los catalizadores de las
reacciones químicas que tienen lugar en las células de los seres vivos.
Los catalizadores son sustancias que, sin consumirse en el proceso, intervienen en las
reacciones químicas aumentando la velocidad de reacción. Las enzimas son proteínas
especializadas, muy específicas y de elevado poder catalítico; esto quiere decir, que permiten
que reacciones que tienen lugar a velocidades muy bajas se realicen a mayor velocidad a las
temperaturas que le son propias a los seres vivos. Actúan permitiendo a las sustancias que
han de reaccionar que se encuentren sobre la superficie o debilitando los enlaces de algún
compuesto, uniéndose a él y facilitando así su ruptura.
Las enzimas con proteínas globulares, solubles en agua y que se difunden con facilidad en los
líquidos orgánicos, catalizando miles de reacciones químicas.
Atendiendo a los elementos que las forman, podemos distinguir:
 Enzimas formadas exclusivamente por proteínas, ya sean de una o más cadenas
polipeptídicas.
 Holoenzimas: enzimas que se componen de una parte proteica denominada
apoenzima y una parte no proteica denominada cofactor. El cofactor puede ser un elemento
metálico como Fe, Mg... cuando el cofactor es una molécula orgánica que se halla unida por
enlaces covalentes a la parte proteica de la enzima se le denomina grupo prostético. Si la
molécula orgánica se halla unida a la apoenzima por interacciones no covalentes (débiles)
reciben el nombre de coenzimas.
Generalmente las enzimas se denominan con el nombre del sustrato sobre el que actúan, al
que a veces se añade el nombre de la función que desempeña seguido del sufijo -asa. Por
ejemplo: sacarasa, que hidroliza la sacarosa, o la amilasa que hidroliza el almidón o el lactato
de deshidrogenasa, que cataliza la oxidación del ácido láctico.
Las enzimas pueden actuar:
 Con especificidad baja; actúan sobre un determinado enlace
 Con especificidad media; actúan sobre determinadas moléculas (haxosas).
 Con especificidad alta o de sustrato; actúan sobre un sustrato determinado, por ejemplo
la ureasa, que actúa sobre la aurea.
 Con estereoespecificidad; actúan sobre un estereoisómero - D o - L.
 Con proquilaridad; algunas enzimas tienen la capacidad de hacer que un compuesto que
no tiene carbono asimétrico pase a tenerlo al añadirle una molécula en un determinado lugar.
EJEMPLO:
 Con capacidad de corrección y edición; éste es el caso de DNA- polimerasa, que forma
la cadena de DNA cogiendo nucleótido tras nucleótido; luego es capaz de corregir la base
equivocada y sustituirla por la base correspondiente.
 Con capacidad de regulación: las enzimas pueden estar sometidas a múltiples
mecanismos de regulación. Ejemplo, la glucógeno fosforilasa, esta encima esta regulada por
la concentraión de calcio en el músculo. Si aumenta la concentración de calcio se produce la
reacción para obtener glucosa. Si disminuye se obtiene la reacción contraria.
II. CONCEPTO DE ENERGÍA DE ACTIVACIÓN
Las reacciones químicas se pueden describir como superficies energéticas, en la que las
moléculas de los sustratos y de los productos se encuentran alojados en el fondo de
profundos pozos. Para que una molécula de sustrato se transforme en un producto, sus
átomos deben trasladarse a través de las superficies energéticas, desde un pozo a otro: en
primer lugar, los átomos de la molécula del sustrato deben abandonar su pozo y alcanzar una
cresta, para lo cual necesitan ganar energía, que luego han de ceder cuando vuelven a caer
en otro pozo estable, (el del producto).
El punto más elevado de esta trayectoria no es más que un instante efímero del viaje que
conduce desde el sustrato hasta el producto, y corresponde al estado de transición o estado
activado (Es), un estado indispensable y altamente energético en el que los enlaces de la
molécula del sustrato en parte se mantienen y en parte estan rotos.
DIAGRAMA DE ENERGÍA PARA UNA REACCIÓN QUÍMICA.
G - variación de energía libre.
Ea - energía de activación.
S - sustrato.
P - producto.
T - tiempo.
La energía que necesita adquirir la molécula de sustrato para alcanzar el estado de transición
constituye la Energía de activación de la reacción y supone una barrera energética que deben
superar todas las moléculas de los sustratos para que transcurra la reacción y se transformen
en productos. Cuanto más alta sea la energía de activación, mayor será la barrera que han de
superar las moléculas de los sustratos, y más difícil será alcanzar el estado de transición; por
lo que la velocidad de la reacción sustrato-producto será más lenta.
Existen dos mecanismos para aumentar la cantidad de moléculas que alcanzan el estado
activado:
1. Aumento de la temperatura: porque por cada 10ºc que aumente se duplica el nº de
moléculas que alcanzan el estado activado.
2. Disminuyendo la E. de activación: las enzimas y en general todos los catalizadores
aceleran las reacciones químicas disminuyendo la energía de activación, es decir, modifican la
topografía de la superficie energética con el fin de que la trayectoria que conduce desde el
sustrato al producto discurrirá por “colinas” menos empinadas, y por ello menos energéticas y
más fáciles de alcanzar.
2.2.2. EXPONER EN QUE CONSISTEN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS. DEFINIR LOS
SIGUIENTES TÉRMINOS: ESTRATO, PRODUCTO, COENZIMA Y COFACTOR. EXPLICAR
EL CONCEPTO DE VITAMINA Y DESTACAR SU IMPORTANCIA COMO PRECURSORES
DE LAS COENZIMAS.
I. MECANISMO DE ACCIÓN ENZIMÁTICA.
La acción enzimática es el conjunto de transformaciones que realiza una enzima en una
reacción química para poder catalizarla, es decir, acelerar el paso del sustrato a producto al
disminuir la energía de activación.
El esquema de acción de una enzima es el siguiente:
E + S ! ES ! EP ! E + P.
En este tipo de reacciones la enzima específica se une a un sustrato (ya que posee una zona
activa llamada Centro Catalítico, que se adapta perfectamente al sustrato), forma un
compuesto enzima - sustrato, transforma el sustrato en producto, estando todavía unido a él y
para finalizar se separa el producto y la enzima, quedando ésta última libre y sin alteraciones
para volver a catalizar una nueva reacción.
 Las variaciones producidas en la energía de activación de una reacción catalizada
enzimáticamente y otra sin catalizar se puede ver en el siguiente diagrama de un modelo
simplificado:
Ea1: Energía de activación de una reacción directa (sin catalizar).
Ea2: Energía de activación de una reacción catalizada.
Durante el transcurso de una reacción enzimática se forman distintos complejos en estado
activado, que se puede esquematizar en el siguiente diagrama:
 (E...S)*, (ES...EP)*, (E...P)*: son compuestos en estado de activación en los que se están
formando los enlaces y son inestables.
 (ES) y (EP): son compuestos estables en los que ya se han formado los enlaces.
II. DEFINIR LO SIGUIENTES CONCEPTOS
 Sustrato: es el elemento que va a reaccionar y se va a transformar en la reacción.
 Producto: es el elemento que se obtiene tras la transformación del sustrato.
 Coenzima: en una holoenzima es la parte no proteica orgánica que se une a la
apoenzima por un enlace débil. Un ejemplo de coenzima son las vitaminas.
 Cofactor: en una holoenzima es la parte no protéica inorgánica que se une al
apoenzima por un enlace débil.
Algunos enzimas carecen en su centro activo de los grupos funcionales para la actividad que
deben realizar, por lo que a menudo utilizan la ayuda de estas moléculas no protéicas, que
fijados en su superficie mediante enlaces covalentes o débiles, aportan los grupos y funciones
químicas de los que carece la enzima. Muchos coencimas son vitaminas del complejo B,
también los grupos hemo, que contiene hierro, cumplen esta misma función en la
hemoglobina, mioglobina, y citocromos. Respecto a los cofactores, es posible que en virtud de
sus propiedades físicas, establezcan enlaces entre diferentes regiones de la cadena
polipeptídica y ayudan a moldear la forma requerida para que se produzca la adaptación
perfecta entre la molécula del sustrato y el centro activo de la enzima.
III. CONCEPTO DE VITAMINA Y SU IMPORTANCIA COMO PRECURSORES DE LAS
COENZIMAS.
Las vitaminas son sustancias orgánicas de naturaleza y composición diferentes y se
caracterizan por ser indispensables para el normal funcionamiento del metabolismo, pero que
resultan imposibles de sintetizar por los organismos, que deben, por tanto ser ingeridos en la
dieta.
Se clasifican atendiendo a su solubilidad en:
 Vitaminas liposolubles; son insolubles en agua. Nunca actúan de coenzimas.
Destacan la vitamina A, D, E y K.
 Vitaminas hidrosolubles; son solubles en agua. En general desempeñan funciones
de coenzima. Destacan la vitamina C o ácido ascórbico y las vitaminas del complejo B: B1
(Tiamina), B2 (Riboflamina), B3 (ác. Pantoténico), B5 (niacina), B6 (piridoxina), Biotina, ác.
Fólico y Covalamina.
Por ejemplo:
 B1 o tiamina: en su forma activada es la TPP (pirofosfato de tiamina) que es una
coenzima de enzimas descarboxilasas y de enzimas que transfieren grupos aldehídos.
 B2 o riboflamina: es un componente de las coenzimas FAD y FMN que participan en
las reacciones de óxidoreducción en la respiración celular.
 B5 o niacina: precursor de las coenzimas NAD y NADP que intervienen en las
óxidoreducciones, encaminadas a producir energía a partir de carburantes metabólicos y en
la fotosíntesis.
 2.2.3. COMPRENDER DE FORMA GENERAL EL MECANISMO DE ACCIÓN ENCIMÁTICA.
DEFINIR CENTRO ACTIVO Y COMPLEJO ENCIMA-SUSTRATO. EXPLICAR LOS
FENÓMENOS DE AFINIDAD Y SATURACIÓN.
I. MECANISMO DE ACCIÓN ENZIMÁTICA.
La acción enzimática es el conjunto de transformaciones que realiza una enzima en una
reacción química para poder catalizarla, es decir, acelerar el paso del sustrato a producto al
disminuir la energía de activación.
El esquema de acción de una enzima es el siguiente:
E + S ! ES ! EP ! E + P.
En este tipo de reacciones la enzima específica se une a un sustrato (ya que posee una zona
activa llamada Centro Catalítico, que se adapta perfectamente al sustrato), forma un
compuesto enzima - sustrato, transforma el sustrato en producto, estando todavía unido a él y
para finalizar se separa el producto y la enzima, quedando ésta última libre y sin alteraciones
para volver a catalizar una nueva reacción.
Las variaciones producidas en la energía de activación de una reacción catalizada
enzimáticamente y otra sin catalizar se puede ver en el siguiente diagrama de un modelo
simplificado:
Ea1: Energía de activación de una reacción directa (sin catalizar).
Ea2: Energía de activación de una reacción catalizada.
Durante el transcurso de una reacción enzimática se forman distintos complejos en estado
activado, que se puede esquematizar en el siguiente diagrama:
a)(E...S)*, (ES...EP)*, (E...P)*: son compuestos en estado de activación en los que se están
formando los enlaces y son inestables.
b) (ES) y (EP): son compuestos estables en los que ya se han formado los enlaces.
II.DEFINICIONES.
A. Centro activo: el centro activo de un encima suele estar formado por un residuo de
aminoácido, extraordinariamente activo. En algunos casos, la unión del encima a su sustrato
es la que activa algún aminoácido, paso necesario para que se produzca la acción encimática.
Muchas veces, este aminoácido activado forma un enlace covalente transitorio con el sustrato,
lo que facilita la mencionada acción.
El centro activo se une al sustrato contribuyendo con sus cadenas laterales o grupos
catalíticos a la formación o ruptura de enlaces. Generalmente el centro activo constituye una
pequeña parte de la molécula de la encima. Posee una estructura tridimensional en forma de
hueco, donde actúan las cadenas laterales de los aminoácidos con poder catalítico. Estas
además pueden pertenecer a aminoácidos que estan muy separados en la secuencia que
forma la estructura primaria. Por ejemplo en una encima formada por 100 restos de
aminoácidos, los que poseen poder catalítico pueden ocupar las posiciones 5, 23, 56, 57 y 98,
situándose en el centro activo gracias al plegamiento de la cadena polipeptídica.
B. Complejo encima-sustrato: es la unión que se produce entre determinados
biocatalizadores, que es la encima, y al sustrato que pertenece a la reacción que cataliza. La
formación del complejo enzima-sustrato se produce gracias a que en la configuración espacial
de la enzima intervienen distintos grupos de aminoácidos que desempeñan funciones
diversas:
 Ciertos aminoácidos que podemos denominar catalíticos, constituyen el lugar de unión
o centro activo de la encima. Es donde se produce la actividad de la misma.
 Los aminoácidos de unión facilitan la formación del comlpejo encima-sustrato. Otros
aminoácidos suministran lugares de unión adicionales para otros ligandos.
 Otros aminoácidos son necesarios para mantener la estructura tridimensional de la
enzima.
La superficie de la molécula encimática posee una alta reactividad química, debido a las
características de las cadenas laterales de aminoácidos y a la orientación que éstas poseen.
REPRESENTACIÓN DE LA ESTRUCT. MOLECULAR DE UNA ENZIMA CUANDO ACTÚA
SOBRE UN SUSTRATO ESPECÍFICO.
Si la reactividad de estas cadenas laterales es insuficiente para cumplir su función, las
enzimas pueden fijar a su superficie otras moléculas no polipeptídicas, que le sirven de ayuda.
Estos ligandos, que pueden ser tan sencillos como un simple catión metálico (cofactor), o tan
complejos como el grupo hemo de la hemoglobina, y han sido seleccionados en función de la
reactividad que confiere a la enzima sobre la que se une.
La fijación con el sustrato constituye la 1ª fase del proceso catalítico de la enzima. Después de
la fijación se consiguen elevadas velocidades en las reacciones químicas, lo que se puede
explicar:
 Por la correcta posición en la que la enzima coloca al sustrato para las reacciones
químicas.
 Por el aumento en la concentración de las moléculas de sustrato en el centro activo.
 Por la inducción de cambios energéticos que favorecen la ación catalítica: las moléculas del
sustrato pasan por una serie de estados de transición donde la distribución electrónica está
alterada. Las enzimas ayudan a los sustratos a alcanzar un estado de transición concreto, que
acelera determinada reacción.
III. AFINIDAD Y SATURACIÓN.
 Afinidad: la afinidad que tiene una enzima por un sustrato viene determinado por su
especificidad hacia ese sustrato. Así, cuanto más específica es una enzima para un sustrato,
mayor es su afinidad por él.
Cuando se mantiene cte la concentración de una enzima, se observa que el incremento en la
velocidad de reacción es proporcional al incremento en la concentración del sustrato. Este
proceso se mantiene hasta que en cierto momento los incrementos en las concentraciones de
sustrato no provocan un incremento significativo de la velocidad.
Este fenómeno llevó a Michaelis - Menten a formular una teoría general de acción enzimática.
Vm . [ S ]
V=
Km + [ S ]
En dicha ecuación V es la velocidad de reacción enzimática; Vm es la velocidad máxima de
reacción, es decir, la velocidad a la cual la enzima está trabajando a su máximo rendimiento;
[ S ] es la concentración de sustrato y Km es la cte de Michaelis - Menten, que representa la
concentración del sustrato a la que una enzima alcanza la mitad de la velocidad máxima.
Km proporciona una idea de la afinidad de la enzima por el sustrato; a menor Km, mayor
afinidad.
REPRESENTACIÓN DEL EFECTO DE LA [ S ] SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN.
El valor de Km permite:
 Determinar la enzima idónea de una reacción.
Km A < Km B
Ez A > afinidad.
 Determinar el sustrato idóneo de una enzima, porque la Km es específica para cada
reacción.
 Conocer cual es la concentración habitual de sustrato en el medio, porque normalmente la
concentración de sustrato coincide con Km
  Cuanto menor sea Km, mayor será la afinidad de la enzima por el sustrato, porque se llega
antes a la velocidad máxima.
 Saturación: la saturación es el punto en el cual la enzima está trabajando a su máximo
rendimiento, y aunque aumenta la concentración de sustrato en el medio, no provoca un
incremento en la velocidad de la enzima.
El concepto de saturación está directamente relacionado con la velocidad máxima, ya que
este parámetro es la velocidad a la cual trabaja la enzima cuando está saturada.
2.2.4. RECONOCER LA EXISTENCIA DE MECANISMOS DE REGULACIÓN ENZIMÁTICA.
COMENTAR LOS EFECTOS DEL PH Y TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA. DEFINIR PH Y TEMPERATURA ÓPTIMA. EXPONER BREVEMENTE LOS
CONCEPTOS DE ACTIVACIÓN E INHIBICIÓN COMO MECANISMOS DE MODULACIÓN
ENCIMÁTICA.
 MECANISMOS DE REGULACIÓN ENCIMÁTICA.
La regulación encimática es el conjunto de mecanismos que regulan y coordinan la acción
catalítica de las enzimas. Estos mecanismos son muy necesarios porque aunque los enzimas
son necesarios para el desarrollo de los mecanismos, también pueden ser perjudiciales e
incluso letales si su acción no se produce en un momento y en un lugar adecuado. Como
mecanismos de regulación hay diferentes tipos, pero estos se pueden agrupar en dos grupos
atendiendo a la cinética de la enzima:
a) Cinética Micaeliana: Las enzimas que siguen esta cinética están reguladas por la unión de
moléculas que favorecen o perjudican la catálisis enzimática (activadores e inhibidores). En el
proceso de regulación la enzima no varía su estructura.
b) Cinética sigmoidal: a ella corresponden las enzimas alostéricas. Este tipo de enzima
presenta curvas sigmoideas en lugar de las clásicas hipérbolas, al representar
concentraciones de sustrato frente a V. El alosterismo consiste en la existencia de uno o más
centros reguladores, distintos del lugar de unión del sustrato. Las enzimas alostéricas son
oligoméricas y presentan distintos lugares de regulación. La unión de un ligando a la proteína
provoca un cambio conformacional de la enzima que va a alterar su actividad biológica.
 INFLUENCIA DEL PH Y TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENCIMÁTICA. PH Y
TEMPERATURA ÓPTIMA.
Influencia del pH: el pH del medio es el responsable de que los grupos funcionales de las
enzimas puedan estar cargadas positiva o negativamente o posean carga neutra. Estas
variaciones de pH pueden ocasionar un cambio en la estructura tridimensional de las enzimas,
que puede afectar a su actividad.
Existe un pH óptimo en el que la [H+] es idónea para que se produzca la actividad catalítica.
Tb. existe una banda, que oscila entre un valor de pH mínimo y otro máximo, donde la enzima
puede actuar. Para valores situados fuera de esta zona no existe actividad enzimática, dado
que las cadenas polipeptídicas se pueden desnaturalizar.
Por tanto podemos decir que el pH óptimo es el pH en el cual la enzima presenta su actividad
máxima y es diferente para cada tipo de enzima. ACTIVIDAD DE UNA ENZIMA FRENTE AL
pH.
ACTIVIDAD DE DIVERSAS ENZIMAS EN FUNCIÓN DEL pH.
Influencia de la temperatura: las reacciones catalizadas siguen, por regla general, la Ley de
Vant´ Hoff, que establece que cada 10ºC de aumento de temperatura se produce un aumento
en la velocidad de reacción de 2 a 4 veces. Por tanto la temperatura ejerce un efecto:
 Sobre la actividad enzimática; si aumenta la temperatura, aumenta la velocidad de
reacción, pero este aumento no se produce en animales homeotermos.
 Sobre la estabilidad: las enzimas, debido a su naturaleza proteica son termolábiles,
siendo afectadas por las variaciones de temperatura e inactivandose al desnaturalizarse.
Cada enzima posee una temperatura óptima, que es la temperatura a la cual la enzima se
encuentra en su máximo de estabilidad u actividad.
La temperatura óptima en las enzimas humanas suele estar alrededor de los 37ºC.
ACTIVIDAD DE UNA ENZIMA EN FUNCIÓN DE LA TEMPERATURA.
 ACTIVACIÓN E INHIBICIÓN COMO MECANISMOS DE MODULACIÓN ENZIMÁTICA.
A. ACTIVACIÓN: la activación de una enzima se produce para que ésta aumente su velocidad
de reacción. Esto se consigue en muchas ocasiones mediante la unión de ligandos
activadores al dominio efector, pero hay otras estrategias a nivel celular como:
1. Efecto cascada: algunas reacciones, como la coagulación de la sangre, que permite
contrarestar las hemorragias, deben transcurrir rápidamente a partir del momento en que se
desencadena el estímulo inicial, que en este caso, son determinados componentes liberados
por los tejidos lesionados en pequeña concentración. Este proceso incrementa su velocidad
extraordinariamente mediante el efecto cascada, consiste en una secuencia de reacciones en
la que cada encima cataliza la transformación de una proenzima inactiva (sustrato) en su
correspondiente zona activada (producto) que a su vez cataliza la transformación de otro
proenzima inactivo en su encima activa, y así sucesivamente hasta que el último encima
transforma un sustrato (fibroína).
El efecto cascada de encimas es, por consiguiente, un sistema que permite amplificar la
respuesta final, pues un pequeño número de moléculas estimulantes consigue activar un gran
número de moléculas al final de la serie.
EFECTO CASCADA: cada encima activo activa a su vez 10 moléculas de otra encima en el
siguiente paso, 100 moléculas activadas.
Cada enzima activo, activa a su vez 10 moléculas de otra enzima, en el siguiente paso habrá
100 moléculas.
2. Compartimentación celular: numerosas reacciones transcurren en el interior de orgánulos
y vesículas delimitadas por membranas, donde se produce una mayor concentración de
molécula de sustrato y encimas.
3. Complejos multienzimáticos: en algunos casos las encimas responsables de una
secuencia de reacciones de un proceso metabólico se agrupan y forman un complejo
multienzimático, que evita de este modo las pérdidas de velocidad por dilución, ya que los
productos resultantes de una reacción catalizada por un encima son los sustratos del encima
siguiente, que se encuentra así en su proximidad. Un ejemplo lo constituye el complejo ácido
graso sintetasa, constituido por el conjunto de encimas implicadas en la síntesis de ácidos
grasos.
4. Zimógenos: son encimas que se sintetizan de forma inactiva, y que posteriormente se
transforman en forma activa, por acción de otros encimas o iones. El proceso es irreversible.
5. Enzimas interconvertibles: son encimas que pueden encontrarse en activas o inactivas
pero reversiblemente. Normalmente sufren proceso de compartimentación celular y de efecto
cascada. Esquema:
B. INHIBICIÓN: La inhibición de la actividad enzimática por acción de iones o moléculas es
importante, ya que constituye el mecanismo de control en reacciones metabólicas que tienen
en lugar los seres vivos. Este proceso puede ser reversible o irreversible:
 Inhibición irreversible: En este tipo de inhibición la encima se une covalentemente al
inhibidor, de forma temporal o permanente, presentando una disociación muy lenta. Este tipo
de inhibición se conoce como envenenamiento de la encima. Algunos compuestos
organofosforados, que se utilizan como insecticidas, inactivan la enzima.
En este caso, la unión se realiza con un residuo de un aminoácido esencial en su centro
activo, formando un compuesto covalente estable. El bloqueo de esas enzimas provoca
graves alteraciones del sistema nervioso. El ion CN- bloquea una importantísima enzima
respiratoria, la citocromo oxidasa.
2. Inhibición reversible: en este tipo de inhibición se produce un rápido equilibrio entre la
enzima y la sustancia inhibidora. La inhibición reversible puede ser de 3 tipos:
 Competitiva; el inhibidor se asemeja al sustrato y se une al centro activo de la enzima. Por
tanto el inhibidor compite con el sustrato. Esquema de la actuación de un inhibidor competitivo
frente al sustrato y al enzima.
Los inhibidores competitivos varían la Km de la enzima, cuanto más inhibidor haya, se
necesita más [S] para alcanzar la velocidad máxima (Vm), que no es alterada.
 No competitiva; en este tipo de inhibición el inhibidor puede unirse a la enzima en un lugar
distinto al centro activo, provocando esta unión, un descenso en la velocidad de recambio del
complejo enzima-sustrato. Esquema de actuación del inhibidor no competitivo.
Los inhibidores no competitivos no alteran la Km, pero sí la Vm. La afinidad es la misma, pero
la Vm se va haciendo más pequeña a medida que aumenta [ I ].
 Acompetitiva; el inhibidor no se puede unir a la enzima, sólo al complejo enzima-sustrato.
Una vez unido los 3, no se produce la reacción. Esquema.
Como el inhibidor sólo se une al complejo enzima-sustrato, el que éste se forme beneficia la
unión del inhibidor. Esto se traduce en que en presencia de una mayor [ I ], la Km se va
haciendo cada vez menor. A su vez el inhibidor produce un descenso de la Vm.
Algunas enzimas pueden actuar en cadenas secuenciales, denominadas complejos
multienzimáticos, donde la 1ª enzima que cataliza la 1ª reacción suele ser una enzima
alostérica. Esta reacción en cadena está regulada por feed back. Por ejemplo, la treonina se
convierte en isoleucina en 5 etapas, la primera de ellas catalizada por la treonina desaminasa.
Cuando la concentración de isoleucina es muy elevada, se une a un centro regulador de la
enzima distinto de su centro activo, lo que provoca su inactivación. Cuando la concentración
de isoleucina disminuye, la enzima recupera su actividad