UNIVERSIDAD NACIONAL DE

INGENIERIA
FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
ESCUELA DE INGENIERÍA SANITARIA

IDENTIFICACIÓN DEL GRUPO COLIFORME

SEXTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA SANITARIA 1 SAA-

323E

DOCENTE: ING. TELLO CEBREROS JORGE GILBERTO

INTEGRANTES:

 NUÑEZ QUIROZ, KELLY PATRICIA 20190053H

 ÑAÑEZ MATTA, SAKURA ALEXIA 20190428A
 OLIVARES VALDIVIA, CRISTOFER STIF 20190454B
 RAMIREZ PADILLA, JUAN MIGUEL 20195512K
 SANCHEZ MANRIQUE, MARIANO SANTOS 20192228J

Lima, Perú

2020-I
INDICE

INTRODUCCIÓN..................................................................................................5

OBJETIVOS GENERALES..................................................................................7

FUNDAMENTO TEÓRICO...................................................................................7

PARTE I.............................................................................................................. 13

TECNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: FASE PRESUNTIVA

Y RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTRÓFICAS.......................................13

1.1 OBJETIVOS..............................................................................................13

1.2 TOMA DE MUESTRAS.............................................................................13

Recipientes.................................................................................................13

Procedimiento de toma de muestras.......................................................13

Tamaño de la muestra...............................................................................13

Datos de identificación..............................................................................13

1.3 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO.....................................................13

1.4 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.......................................................13

1.4.1 Recuento de bacterias heterotróficas.............................................13

1.5 RESULTADOS..........................................................................................13

1.6 CONCLUSIONES......................................................................................13

1.7 RECOMENDACIONES.............................................................................13

PARTE II.............................................................................................................13

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: FASE

CONFIRMATIVA Y PRUEBA PARA COLIFORMES FECALES........................13

2.1 OBJETIVOS..............................................................................................13

2.2 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO.....................................................14

2.2.1 Prueba confirmativa.........................................................................14

2.2.2 Prueba de coliformes fecales (medio EC).......................................14

2.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.......................................................14

2
 2.3.1 Prueba confirmativa.........................................................................14

2.3.2 Prueba de coliformes fecales..........................................................15

2.4 RESULTADOS..........................................................................................15

2.5 DISCUCIÓN DE RESULTADOS...............................................................16

2.6 CONCLUSIONES......................................................................................16

2.7 RECOMENDACIONES.............................................................................17

2.8 OBSERVACIONES...................................................................................17

PARTE III............................................................................................................ 17

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: PRUEBA

COMPLEMENTARIA..........................................................................................17

3.1 OBJETIVOS..............................................................................................17

3.2 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO.....................................................18

3.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.......................................................18

3.4 RESULTADOS..........................................................................................19

3.5 CONCLUSIONES......................................................................................19

3.6 RECOMENDACIONES.............................................................................20

PARTE IV........................................................................................................... 20

PRUEBA IMVIC..................................................................................................20

4.1 OBJETIVOS..............................................................................................20

4.2 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO.....................................................20

4.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.......................................................21

4.4 RESULTADOS.....................................................................................21

4.5 CONCLUSIONES.................................................................................22

4.6 RECOMENDACIONES........................................................................22

PARTE V............................................................................................................23

FILTRO DE MEMBRANA PARA COLIFORMES TOTALES..............................23

5.1 OBJETIVOS..............................................................................................23

5.2 MEDIOS DE CULTIVO..............................................................................23

3
 5.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.......................................................23

5.4 RESULTADOS..........................................................................................23

5.5 DISCUSIÓN DE RESULTADOS...............................................................24

5.6 CONCLUSIONES......................................................................................24

5.7 RECOMENDACIONES.............................................................................25

CONCLUSIONES GENERALES........................................................................25

BIBLIOGRAFÍA..................................................................................................26

ANEXOS.............................................................................................................27

APÉNDICE......................................................................................................39

4
INTRODUCCIÓN
La potabilidad del agua es de gran importancia en cuanto a Salud Pública,
ya que ésta puede servir como vehículo de microorganismos patógenos,
es decir, productores de enfermedades llamadas comúnmente "de origen
hídrico" tales como Salmonelosis (Tifoidea y Paratifoidea), Shigelosis,
Cólera, Hepatitis, etc.
Estos microorganismos son todos de origen entérico.
Se sabe que los microorganismos patógenos que llegan a los depósitos de
agua proceden de las descargas intestinales de hombres y animales.
Además, ciertas especies de bacterias, particularmente Escherichia coli, y
varios microorganismos similares, denominados coliformes, Estreptococos
fecales (como Streptococcus faecalis) y Clostridium perfringens, son
habitantes normales del intestino grueso de hombres y animales y en
consecuencia siempre están en las materias fecales. Así pues, la
presencia de cualquiera de estas especies en el agua es evidencia de
contaminación fecal y el camino está abierto a los patógenos ya que se
encuentran en las materias fecales.
La evaluación rutinaria del agua en busca de microorganismos patógenos,
como Salmonella spp. y Shigella spp. puede ser difícil de realizar ya que el
número de estas bacterias son relativamente escasas, por lo que se tiene
que recurrir a pruebas bacteriológicas del agua potable que demuestren la
presencia de microorganismos indicadores que siempre estén presentes
en materia fecal, fácil de demostrar y que sirva de guía para conocer el
grado de contaminación fecal. Surge así el concepto de "Indicador de
contaminación fecal", el cual será utilizado para la valoración de la
potabilidad bacteriológica de las aguas.
De acuerdo con lo anterior, se ha adoptado con carácter general, el
"Grupo
Coliforme" como indicador más digno de confianza.
La OMS incluye dentro del grupo coliforme todos los bacilos aerobios y
anaerobios facultativos Gram negativos, no esporulados, que producen
ácido y gas al fermentar la lactosa, a 35 – 37 °C.

5
Las especies clásicas de este grupo son Escherichia coli y Enterobacter
aerogenes.
El microorganismo indicador más comúnmente utilizado es Escherichia
coli,
considerando la OMS preferible emplear la expresión "Coliforme fecal" que
comprende un número ligeramente mayor de variedades, todas ellas de
claro origen fecal e indicadores de contaminación fecal reciente.
Para los efectos del análisis sanitario del agua, se define el Coliforme fecal
como un bacilo aerobio o anaerobio facultativo, Gram negativo, no
esporulado, que fermenta la lactosa con producción de ácido y gas a 44
°C (±0.5 °C) en menos de 24 horas.
El método se basa en la inoculación de alícuotas de la muestra sin diluir
que
pueden ser volúmenes de 50, 10 y 1 mL, ó de 10, 1 y 0.1 mL, o diluida en
caso necesario, en una serie de tubos por triplicado o quintuplicado con un
medio que contiene lactosa (caldo lactosado o caldo lauril triptosa).
La valoración del contenido microbiano de una muestra de agua por el
método del NMP supone la utilización de tablas numéricas que tienen en
cuenta los volúmenes de agua y las cantidades de tubos sembrados en
una o más series.
Realmente consiste en tratar estadísticamente el número de tubos de
cada serie sembrada que resulten positivos después de su incubación.
En cuanto a la investigación de patógenos en agua, no existe un método
único que permita aislar e identificar todos estos microorganismos.
En general, los métodos con los que se obtienen mejores resultados
comprenden una fase de concentración, seguida de técnicas de
enriquecimiento y aislamiento específicas para cada microorganismo.
El procedimiento para la recolección de las muestras de agua para el
análisis bacteriológico depende del tipo de agua que se desee muestrear.
Este se hará de acuerdo con la normatividad mexicana vigente.
Las muestras para el análisis bacteriológico se deben tomar en frascos
muestreadores que se hayan lavado con extremo cuidado y esterilizado.
En su interior añadir, previo a la esterilización, 0.1 mL de solución de
Na2S2O3 (tiosulfato de sodio) al 10%, por cada 120 mL de muestra con el
propósito de neutralizar la acción del cloro que pudiera contener la

6
 muestra, cubriendo además el tapón del frasco hasta el cuello con papel
aluminio.
El análisis bacteriológico de la muestra debe practicarse inmediatamente
después de su recolección. Es por ello que se recomienda que, de no
efectuarse así el análisis, se inicie dentro de las dos horas próximas a la
recolección de la muestra y en ningún caso, este lapso debe de exceder
de 24 horas para agua potable y de 6 horas para otros tipos de agua para
que sea válido el resultado del análisis.
Durante el período que transcurre del muestreo al análisis, se debe
conservar la muestra a 4 °C, con objeto de inhibir la actividad bacteriana
para no obtener resultados falsos o dudosos.

OBJETIVOS GENERALES
 Investigar la presencia de bacterias del grupo coliforme en el agua
 Estos análisis se harán con agua extraída de lugares como: el
estanque de arquitectura, baño de civiles y baño de ambientales.
 Estos análisis se harán mediante la técnica del número más
probable (NMP), usando tubos de fermentación múltiple.
 Realizar pruebas de laboratorio en el agua para determinar si
existen o no, problemas bacteriológicos; estas pruebas consisten
en la determinación de los indicadores bacteriológicos de
contaminación en el agua.

FUNDAMENTO TEÓRICO
1. DEFINICIÓN DEL GRUPO COLIFORME:

Las bacterias coliformes constituyen un conjunto de especies bacterianas.

Estos organismos suelen considerarse como unos indicadores de la
contaminación de alimentos y agua.

Es el grupo de bacterias cuyo representante más importante desde el

punto de vista sanitario es la Escherichia Coli, esta fue detectada en el
siglo XIX por Theodor Escherich. Con el paso del tiempo, esa bacteria
comenzó a ser denominada con el nombre de su descubridor.

Para que una bacteria sea coliforme, debe tratarse de una especie
Gramnegativa y anaeróbica facultativa o aeróbica. Estos se hallan en el

7
 intestino de los animales de sangre caliente y de los seres humanos,
aunque también pueden encontrarse en plantas y en el suelo.

Lo habitual es que las bacterias coliformes lleguen al medio ambiente a

través de las deposiciones de los animales y las personas. De este modo,
cuando se registra la presencia de coliformes en el agua potable, se la
toma como un indicador de contaminación fecal.

El vínculo entre el número de coliformes y la contaminación es: a mayor

cantidad de estas bacterias, más contaminada está el agua. El estado de
las aguas residuales también se analiza a partir de la medición del nivel de
coliformes.

La detección de coliformes en los alimentos es importante para controlar la

seguridad y prevenir de aquellas que pueden provocar enfermedades e
intoxicaciones de gravedad.

Existen diversos mecanismos para eliminar coliformes de los alimentos

como la radiación ultravioleta y el uso de cloro.

2. PRINCIPALES BACTERIAS QUE LO CONFORMAN:

Este grupo es conformado por bacterias en forma de bacilo, gram

negativos. Estos además son capaces de fermentar lactosa, con
producción de gas en 48 horas a una temperatura de 37 °C.

1. Escherichia
2. Klebsiella
3. Enterobacter
4. Citrobacter

Se encontró que no todos los autores incluyen al Citrobacter dentro del

grupo coliforme.

3. FUNDAMENTOS DE LAS PRUEBAS

PARTE II
TÉNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: FASE
CONFIRMATIVA Y PRUEBA PARA COLIFORMES FECALES

8
1. Por cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba
presuntiva, agitándolos previamente para homogeneizar, inocular con tres
asadas un tubo conteniendo caldo LBVB (Figura 17.2).
2. Incubar durante 48 ± 3 h a 35 ± 0.5 "C.
3. Después de la incubación observar la presencia de turbidez y de gas.

INTERPRETACIÓN
• Si se observa turbidez y producción de gas:
La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos
positivos para posteriormente hacer el cálculo del NMP.
• Si no se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez:
• Se consideran negativos, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del
cálculo del NMP, en la Tabla 17.1.

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES FECALES:

1. Por cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba
presuntiva, agitándolos para homogeneizar, Inocular con tres asadas un
tubo conteniendo caldo E.C.

2. Incubar durante 24 horas a 44 ± 0.5 "O, observar presencia de turbidez y

gas

INTERPRETACIÓN
• Si se observa turbidez y producción de gas: La prueba se considera
positiva, debiendo anotar el número de tubos
positivos para posteriormente hacer el cálculo del NMP.
• Si no se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez:
• Se consideran negativos, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del

Cálculo del NMP en la Tabla 17.1

PARTE IV
PRUEBA INVIC
INDOL
El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación
reductiva de triptófano y esta reacción es llevada a cabo por algunas
bacterias que poseen las enzimas triptofanasas. Pera detectar la
producción de indol, se utiliza el medio de agua peptona y la lectura de la

9
prueba se realiza con el reactivo de Kobacs (p-dimetilaminobenzaldehído).
En caso de que la prueba de positivo, se debería producir una coloración
rosa/rojiza.

ROJO METILENO
El rojo metilo es un indicador del pH. Actúa entre 4,2 y 6,3, variando de pH
= 4,2 (rojo) a pH = 6,3 (amarillo). Permite determinar la presencia de
ácidos que se producen durante la fermentación. La lectura debe de ser a
las 48 – 72 h, ya que, transcurrido ese tiempo, todos los ácidos no
estables habrán desaparecido y solo quedarán, en la muestra, los ácidos
estables.

VOGES-PROSKAUER
Esta prueba se utiliza para ver si hay fermentación butanodioica (2-3-
butanodiol). El reactivo para utilizar es el de Voges – Proskauer. Esta
prueba se compone de dos reactivos, el VPA y el VPB. El primero, es
KOH y el segundo es ∝-naftal. Se utiliza el medio de Clrk y Lubs.

CITRATO
Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son
capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales
amónicas inorgánicas, como única fuente de nitrógeno, provocando la
alcanización del medio. El medio para utilizar será el citrato de Simmons,
que contiene citrato de sodio, fosfato de amono y azul de bromotimol,
como indicador de pH.

Solo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse

en este medio y liberarán iones amonio, los cuales harán que el medio
cambie de verde a azul oscuro.

PARTE V:

TÉCNICA DEL FILTRO DE MEMBRANA (FM) PARA MIEMBROS DEL

GRUPO DE LOS COLIFORMES

10
Los puntos más importantes de esta técnica son los siguientes: Es una
técnica altamente reproducible, puede utilizarse para estudiar volúmenes
grandes de una muestra, proporciona resultados numéricos más rápidos
que el método de los tubos múltiples, controla las posibles situaciones de
urgencia en relación con el agua potable, con esta técnica además se
podrán estudiar distintas aguas naturales. Pero se debe tener en cuenta
las desventajas que tiene, y es que en aguas con elevada turbidez o que
contienen bacterias no coliformes o en caso de que no se haya utilizado
anteriormente la técnica de filtro de membrana es preferible llevar a cabo
pruebas paralelas mediante la técnica de fermentación en tubos múltiples
demostrar la aplicabilidad y comparabilidad de la técnica del FM.
DEFINICIÓN
Esta técnica consta de la identificación y el recuento de las colonias de los
microorganismos retenidos en la superficie de un filtro, antes de comenzar
se debe conocer el volumen de la muestra de agua.
Además, esta muestra debe ser incubada en un medio de cultivo durante
un tiempo y a una temperatura adecuada.
Al estudiar cultivos purificados de bacterias coliformes, se observa una
reacción de citocromo oxidasa (CO) negativa y una de (ONPG) positiva.
En esta técnica, todas las colonias rojas, rosadas, azules blancas o
incoloras que no tienen brillo no son consideradas como coliformes.
La turbidez producida por la existencia de algas u otro tipo de material
puede impedir el estudio de un volumen de muestra suficiente para
obtener resultados significativos.
La presencia de un elevado número de no coliformes o de sustancias
tóxicas puede dar lugar a un cálculo de coliformes inferior al real.
APLICACIONES
La técnica del FM es aplicable al estudio de las aguas saladas, pero no de
aguas residuales que solo han recibido un tratamiento primario, seguido
de cloración, debido a su turbidez en muestras de grandes volúmenes o a
su contenido en metales o compuestos orgánicos tóxicos del tipo de los
fenoles.
El método destinado a recuperar los microorganismos en condiciones
anómalas para los coliformes fecales llamada técnica de fermentación en
tubos múltiples, se utiliza para detectar los coliformes totales alterados en

11
el agua potable tratada y en las aguas residuales secundarias o terciarias
coloradas. Además, se requiere se usa siempre que los resultados deban
utilizarse para obligar al cumplimiento de las normas.
Puede emplearse una modificación para coliformes fecales de la técnica
del filtro de membrana, si los estudios paralelos con la técnica de
fermentación en tubos múltiples muestran resultados comparables para
tipos de muestra específicos de una localización.
El volumen estándar que se va a filtrar en las muestras será:
 Si es de agua potable es de 10 ml
 Si es agua de grifo: utilizar 100ml de muestra
 Si es agua potable: 100ml
Agua de ríos: se debe diluir 0.1 o 0.01 dependiendo de la turbidez
Si se tiene una muestra de mayor contenido bacteriano, la dilución será de
10^-3. El agua potable tratada no debe contener coliformes por 100 ml.
Para otro tipo de aguas o en análisis especiales, pueden utilizarse
muestras de mayor o menor volumen.
Si comparamos los resultados obtenidos con el método de los tubos
múltiples y el de filtro de membrana, se muestra una mayor precisión de
este último. Ya que los datos de ambas pruebas dan resultados numéricos
más exactos. En el caso de aguas naturales, es lógico esperar que el 80%
de los análisis de filtro de membrana estén dentro de los límites de
confianza del 95 por 100 de los resultados de la prueba completa de tubos
múltiples. Es de esperar que los resultados de la prueba de tubos
múltiples superen los del filtro de membrana, debido a una desviación
estadística positiva.
E. Medio de cultivo
Se utiliza el Caldo Endo para el recuento de coliformes totales. Este es un
medio para el aislamiento selectivo de los coliformes totales pues lleva
inhibidores para el resto de los microorganismos. El lauril sulfato y
desoxicolato que forman parte de la fórmula del medio permite crecer a las
coliformes lactosas positivo, pero inhibe el crecimiento del resto de
bacterias acompañantes. Las colonias lactosa positivo se colorean de rojo
por la liberación de fucsina del sulfato de fucsina. Las colonias de E. coli y
de los coliformes muestran generalmente un brillo metálico.

12
Se utiliza este medio para la identificación y recuento de coliformes en
agua, leche y otros líquidos mediante filtración sobre membrana y está
incluido en las recomendaciones de la APHA "American Water Works
Association and Water Pollution Control Federation: Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater, 2004 ".
Medio sólido selectivo, que se prepara en placas para filtración de
membrana.
Medio líquido selectivo, que se deposita en placas de cultivo que llevan
una almohadilla absorbente (aproximadamente 2 mL por placas).

PARTE I

TECNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: FASE

PRESUNTIVA Y RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTRÓFICAS
1.1 OBJETIVOS
1.2 TOMA DE MUESTRAS
Recipientes
Procedimiento de toma de muestras
Tamaño de la muestra
Datos de identificación
1.3 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
1.4 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.4.1 Recuento de bacterias heterotróficas
1.4.2 Prueba presuntiva: Determinación del NMP de coliformes totales
1.5 RESULTADOS
1.6 CONCLUSIONES
1.7 RECOMENDACIONES

PARTE II

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: FASE

CONFIRMATIVA Y PRUEBA PARA COLIFORMES FECALES
2.1 OBJETIVOS
 Confirmar la presencia de los microorganismos (bacterias)
presentes en los tubos positivos tras una prueba en el agar BVLB.

13
  Se determinará la presencia de coliformes totales y fecales.
 Se espera que todos los tubos que dieron positivo en la fase
presuntiva se confirmen en el medio brillante bilis.
 Se analizará a todos los tubos que dieron positivo en la fase
presuntiva del NMP de coliformes fecales, estos tubos se
inocularan en el medio EC.
2.2 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
2.2.1 Prueba confirmativa
 Caldo bilis verde brillante al 2%
 Medio Les Endo
2.2.2 Prueba de coliformes fecales (medio EC)
 Caldo EC
2.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
2.3.1 Prueba confirmativa
Medio Bilis Verdes Brillante
1. Llévense a la fase de confirmación todos los tubos primarios en los
que haya aparecido cualquier cantidad de gas o de crecimiento
acido a las 24 horas de incubación. Si se observa una fermentación
activa o un crecimiento de ácido antes de las 24 horas, los tubos se
llevarán al medio de confirmación sin esperar a que transcurran las
24 horas. Si hay otros tubos primarios con crecimiento acido
después de 48 horas de incubación, también se llevarán a la fase
de confirmación
2. Agítense suavemente o háganse rotar los tubos primarios que
muestren gas o crecimiento acido suficiente para que se produzca
una resuspensión de los microorganismos.
3. Con un asa estéril de 3mm de diámetro, pásese un asa completa
de cultivo al tubo de fermentación que contiene el medio verde
brillante de lactosa bilis o introdúzcase un aplicador de madera
estéril en el cultivo, de al menos 2.5 cm, retírese rápidamente e
introduzca hasta el fondo en el tubo de fermentación del medio
mencionado.
4. Repítase y deséchese el aplicador. Repítase esta operación en
todos los tubos posiblemente positivos.

14
 5. Incúbese el medio de verde brillante de lactosa bilis a 35±0.5°C
durante 48±3 horas.
6. La formación de cualquier cantidad de gas en el vial invertido en el
medio de fermentación verde brillante de lactosa bilis a las 48 3
horas constituye un resultado positivo en la fase confirmativa.

Medio Les Endo

1. Siémbrese asépticamente una placa de agar LES Endo por cada
tubo de medio verde brillante lactosa bilis que haya producido gas;
la operación debe realizarse lo antes posible tras la detección del
gas.
2. Siémbrese las placas de forma que se asegure la existencia de
algunas colonias aisladas, separadas por menos de 0.5cm.
3. Incúbese las placas invertidas a 35 0.5 °C durante 24 2 horas.
4. Las colonias que se desarrollan en el agar LES Endo pueden ser
típicas (rosas a rojo oscuras con un brillo verde metálico
superficial), atípicas (rosas, rojas, blancas o incoloras sin brillo) a
las 24 de incubación o negativas (todas las demás)
2.3.2 Prueba de coliformes fecales
Medio IC
1. Estúdiense todos los tubos de fermentación presuntivos que hayan
mostrado alguna cantidad de gas o un fuerte crecimiento durante
las 48 horas de incubación en la prueba de confirmación.
2. Agítense suavemente o gírense los tubos de fermentación que
muestran gas o un fuerte crecimiento.
3. Con un asa estéril de metal de 3mm de diámetro o un aplicador de
madera estéril, pásese el cultivo de cada tubo de fermentación al
medio EC.
4. Incúbese los tubos con medio EC inoculados en un baño de agua a
44,5 0.2 °C durante 24 horas.
5. Deposítense todos los tubos con EC en un baño de agua antes de
que transcurran 30 minutos de inoculación y manténgase a una
profundidad suficiente como para que el agua del baño este a un
nivel superior al que tiene el medio en los tubos.

15
2.4 RESULTADOS
a) PRUEBA CONFIRMATIVA
Tabla N°, Resultado del medio caldo bilis verde brillante

Dilución (mL)
Muestra T°C
1 10-1 10-2
Grifo baño FIC 23.5 - - -
Grifo baño FIA 21 1/5 1/5 0/5

Estanque de
19.5 - - -
Arquitectura
Fuente: Salazar Torres, Joshep
Tabla N° Resultados del medio Les Endo
Muestra Tipo de Colonia
Baño FIC Atípica
Baño FIA Atípica
Estanque de Arquitectura Típica
Fuente: Salazar Torres, Joshep
b) PRUEBA DE COLIFORME FECALES
De los datos recogidos del informe del año 2017, se observó que
no hay crecimiento de coliformes fecales, es por ello que no se hizo
un cuadro para comparar estos resultados esperados.

2.5 DISCUCIÓN DE RESULTADOS

Después de haber realizado el laboratorio, se discutió sobre los
resultados obtenidos en la prueba confirmativa ya que los grupos 1
y 5 no obtuvieron resultados, se puede deber a que los tubos en la
fase presuntiva no fueron realizados correctamente o que en el
procedimiento de este laboratorio no fue el indicado o no se tomó
las precauciones debidas y fue contaminada las muestras. El grupo
3 solo obtuvo 2 tubos con reacciones positivas.
2.6 CONCLUSIONES
 Se confirma la presencia de coliformes en la muestra obtenida del
Grifo del Baño FIA.
 La colonia de la muestra del baño FIA es Atípica
 El NMP de coliformes en el grupo 3 es 40.

16
  En el Baño FIC existe una incongruencia debido a la aparición de
gas sin mostrar algún tipo de crecimiento por lo que se deberá
volver a realizar la prueba para levantar dicha incongruencia.
 La colonia de la muestra del baño FIC es Atípica
 En el estanque de Arquitectura no se puede confirmar la presencia
de coliformes debido que no obtuvimos resultados coherentes en
ninguna de las fases, por lo que se debe a realizar una vez más el
laboratorio.
 La colonia de la muestra del Estanque de Arquitectura es Típica
 Dado los resultados tendremos que determinar el tipo de coliforme
mediante una PRUEBA COMPLEMENTARIA.
 Se comprobó en la fase confirmativa que no hubo crecimiento de
coliformes fecales
2.7 RECOMENDACIONES
 Para el grupo 1 y 5, se debería realizar el laboratorio una vez más
ya que los resultados obtenidos no son concretos y no podemos
confirmar o negar la presencia de coliformes.
 Se recomienda que al realizar una vez el trabajo, se trabaje con
medios de cultivo que se encuentren en vigencia debido a que
puede ser uno de los factores por el cual los resultados no son los
esperados.
2.8 OBSERVACIONES
 Los medios de cultivo en este laboratorio se encontraban vencidos.
 Es posible calcular el NMP del grupo 3 debido a que esa
combinación de reacciones positivas se halla en la tabla de NMP.
 El grupo 1 y 5 no pudieron obtener resultados por lo que no es
posible calcular el NMP en estos casos.

17
PARTE III

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES: PRUEBA

COMPLEMENTARIA
3.1 OBJETIVOS
 Confirmar la presencia de bacilos gramnegativos no esporuladas
como indicador de presencia del grupo coliforme mediante la
tinción de Gram.
 Confirmar la presencia del grupo coliforme mediante la presencia
de gas en el caldo lauril triptosa.
3.2 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
 Caldo Lauril Triptosa
 Agar nutritivo (inclinado)
TINCIÓN DE GRAM
 Safranina
 Lugol
 Metanol
 Acetona
 Cristal violeta
 Aceite de inmersión
 Agua destilada
3.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Seleccionar unas colonias desarrolladas en el Agar Les Endo ya
sean típicas o atípicas.
2. Seleccionar de las placas las colonias típicas mejor definidas, caso
contrario seleccionar las colonias presuntas de grupos coliformes
(de dos a más).
3. Ya seleccionadas las colonias incubarlas en el medio Caldo Lauril
Triptosa con tubo Durham a 35 ± 1°C por 24 ± 2 horas si a pesar
del tiempo no hay presencia de gas extender 24 horas más y en el
Agar Nutritivo inclinado a 35 ± 1°C por 24 ± 2.
4. Si hay presencia de gas realizar la coloración de Gram con la
muestra incubad en el Agar inclinado.

18
 5. Si hay presencia de bacilos gramnegativos no esporulados se
indica que en la prueba completa hay presencia del grupo
coliforme.
6. Si hay presencia de bacilos gramnegativos y grampositivos se
repite el procedimiento desde la prueba confirmativa.
7. Si no hay presencia de gas en el medio Caldo lauril triptosa se
concluye que no hay presencia del grupo coliforme en la prueba
completa.
TINCIÓN DE GRAM
1. Recoger la muestra de bacterias a estudio.
2. Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
3. Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
4. Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y
esperar un minuto.
5. Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de
genciana (Lugol). El Lugol y el violeta de genciana forman un
complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las
células bacterianas.
6. Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y
acetona durante unos segundos.
7. Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina
para distinguir las gramnegativas que aparecerán bajo el
microscopio (en lugar de incoloras) con un tono rosado o rojo.
Lavar con agua.
8. Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se
visualizarán de color violeta las grampositivas y de color rosa-rojizo
las gramnegativas.

3.4 RESULTADOS
Tabla N°

Formación de gas en el
Muestra Coloración Gram
caldo lauril triptosa
Grampositivo
Grifo baño FIA -
(Bacilos)
Grifo baño FIC - Grampositivo

19
 (Cocos)
Gramnegativo
Estanque de
+ (bacilos no
Arquitectura
esporulados)
Fuente: Salazar Torres, Joshep
3.5 CONCLUSIONES
 Presencia de coliforme en el estanque de Arquitectura debido a la
presencia de gas en el caldo lauril triptosa.
 Los resultados de los grifos de baño en la FIC y FIA indican que no
hay presencia de grupos coliformes.
3.6 RECOMENDACIONES
 Al momento de la toma de muestra, usar guantes.
 Revisar el adecuado mantenimiento del tanque de Arquitectura
 Observar que se ejecute adecuadamente el laboratorio.
 Revisar previamente las condiciones de los reactivos y los medios
de cultivo.
 Realizar correctamente la tinción de Gram

PARTE IV

PRUEBA IMVIC
4.1 OBJETIVOS
 Descubrir que pruebas bioquímicas comprende el IMVIC.
 Identificar las rutas metabólicas que se evidencian en el IMVIC.
 Clasificar las enterobacterias en función de la combinación de
resultados del IMVIC.
 Entender que la mayoría de las enterobacterias son de orígenes
fecal.

4.2 REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

PRUEBA DE INDOL
 Tubos con medio agua peptona.
 Reactivo de Kobacs (p-dimetilaminobenzaldehído).
PRUEBA DE ROJO METILENO
 Tubos con medio Clark y Lubs sembrados.
 Muestras.

20
  Rojo de metilo. Si las bacterias llevan a cabo la fermentación ácido-
mixta.
PRUEBA DE VOGES – PROSKAUER
 Reactivo KOH y ∝-naftal.
 Tubos con el medio Clarks y Lubs.
 Muestras.
PRUEBA DE CITRATO
 Tubos inclinados con citrato de Simmons.
 Muestras.
4.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PRUEBA DE INDOL
1. Sembramos los tubos de agua peptonada con las diferentes
muestras y las dejamos en la estufa 24h.
2. Tras 24h en la estufa a 37º, cogemos las muestras y les echamos
5 gotas del reactivo de Kobacs.
3. En caso de que la muestra sea positiva, deberá aparecer un halo
rojo en la superficie, de no aparecer, el resultado será negativo.
PRUEBA DE ROJO METILENO
1. Con el asa de siembra, recogemos un inóculo de muestra y lo
sembramos en uno de los tubos que contenga el medio Clark y
Lubs.
2. Los ponemos en la estufa durante 24 h a 37º.
3. Pasado ese tiempo, los sacamos y cogemos una de las muestras
sembradas (en nuestro caso, serán la 4 y la 7) y le echaremos
cinco gotas de reactivo de Kovacs.
4. Si en la superficie se forma un halo rojo, el resultado será positivo,
de lo contrario, será negativo.
PRUEBA DE VOGES – PROSKAUER
1. Cogemos un tubo con el medio Clark y Lubs y sembramos la
muestra
2. Los metemos a la estufa y los dejamos reposar 24 h a 37º.
3. Una vez pasado ese tiempo, los sacamos y, primeramente, le
echamos 5 gotas de KOH y, seguidamente, 5 gotas de ∝-naftal.
4. Dejamos el tubo abierto hasta que suceda algo.

21
 5. El resultado será positivo si hay un desarrollo de color rojo en
pocos minutos después de una completa agitación del tubo.
6. El resultado será negativo si hay ausencia de color rojo.
PRUEBA DE CITRATO
1. Cogeremos uno de los tubos inclinados con citrato de Simons,
cogeremos un inóculo de la muestra y la sembraremos mediante
agotamiento.
2. La metemos a la estufa 24h a 37º.
3. Sacamos el tubo sembrado y comprobamos resultados.
4.4 RESULTADOS
PRUEBA DE INDOL
Tanto para la muestra nº4 como para la nº7, nos salió resultado
negativo. (Fuente: Salazar Torres, Joshep)
PRUEBA DE ROJO DE METILO
En ambas pruebas salió medio ácido, por lo que la prueba dio
positivo. (Fuente: Salazar Torres, Joshep)
PRUEBA DE VOGES-PROSKAUER
No se pudo determinar el resultado, puesto que hubo una incidencia
con el medio. (Fuente: Salazar Torres, Joshep)
PRUEBA DE CITRATO
En la nº4, pudimos observar un viraje de color, del verde al azul
oscuro. Basándonos en esto, podemos decir que es una bacteria
fermentadora de citrato. (Fuente: Salazar Torres, Joshep)
4.5 CONCLUSIONES
 El IMVIC es una prueba utilizada en microbiología para la
identificación de enterobacterias.
 La prueba de indol evidencia que algunas bacterias son capases de
hidrolizar el aminoácido triptófano
 La prueba de rojo metileno permite detectar si los microorganismos
producen grandes cantidades de acido
 La prueba de Voges –Proskauer es útil para detectar productores de
butanodiol y etanol
 La prueba del citrato es útil para determinar si un organismo es
capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono

22
 4.6 RECOMENDACIONES
 Tener mucho cuidado al momento de combinar las sustancias para
evitar cualquier tipo de accidente.
 Anotar los resultados obtenidos para evitar cualquier tipo de
confusión
 Mantener las pinzas, equipos y demás materiales bien esterilizados

PARTE V

FILTRO DE MEMBRANA PARA COLIFORMES TOTALES

5.1 OBJETIVOS
 Determinar la presencia en el filtro de colonias coliformes de
coloración roja o rojo intenso con presencia de brillo metálico

5.2 MEDIOS DE CULTIVO

 Para este proceso se utilizó el medio de cultivo agar Les Endo,
este es un medio de cultivo microbiológico de color rosa pálido.
Fue originalmente desarrollado para el aislamiento de Salmonella
typhi, pero ahora es utilizado para la detección de coliformes y
otros microorganismos entéricos.
5.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Colocar con pinzas estériles un filtro de membrana estéril (con la
trama hacia arriba) sobre la placa porosa del receptáculo.
2. Situar con cuidado el embudo sobre el receptáculo.
3. Agregar en el embudo 100ml de muestra de agua y encender el
equipo para que el agua pueda pasar a través del filtro.
4. Retirar el embudo y colocando en la placa a 65°C con la finalidad
de desinfectar el embudo para que no contamine la muestra
analizaste.
5. Quitar el filtro de membrana con unas pinzas. Colocándolo en un
aplaca con el medio de cultivo, agar LES Endo.
6. Limpiar el embudo con agua peptonada, retirando del repticulo y
volver a colocarla en agua 65°C
7. Colocar el filtro de membrana y luego el embudo.
8. Agregar los 100 ml de la 2da muestra de agua. Repetir el
procedimiento para las 3 muestras.

23
 9. Invertir las placas e incubarlas a 350.5°C durante 22- 24 horas

5.4 RESULTADOS
Luego de haberse incubado por 20 horas.
Tabla N°
Colonias de
Muestra Fecha Temperatura coliformes totales/
100 mL
Grifo baño FIA 25/10/16 20.5°C 0
Grifo baño FIC 25/10/16 23°C 0
Estanque de
25/10/16 21°C 0
Arquitectura
Fuente: Salazar Torres, Joshep
Tabla N°
Muestra Brillo Metálico
Baño FIC -
Baño FIA -
Estanque de Arquitectura -
Fuente: Salazar Torres, Joshep
5.5 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 En esta prueba no se observó la presencia de brillo verde metálico

en las colonias desarrolladas en ninguna muestra de los grupos,
dando un resultado negativo (colonias atípicas).
 Al realizar el recuento de bacterias se obtuvo más colonias sobre
una misma membrana, esto puede dar resultados erróneos debido
a la superpoblación, ya que lo que aparece como una colonia
puede ser originado por varias bacterias bajo condiciones de
hacinamiento. En estos casos debemos volver a muestrear el agua
y analizar muestras más diluidas.
 En todas las muestras esta prueba ha resultado negativa

5.6 CONCLUSIONES
 Ya que en el resultado no hay colonias de coliformes. Se concluye
que no es un método adecuado, se debió repetir el muestreo para
comprobar.

24
  La muestra de agua del estanque de arquitectura siempre se
colectará con algas y éstas crecen en el medio filtrante e
interrumpen el crecimiento de las colonias de coliformes.
 La selectividad del agar Endo se debe a la combinación de sulfito
de sodio y fucsina básica que inhibe ligeramente el crecimiento de
los microorganismos grampositivos.
 Los coliformes fermentadores de lactosa producen colonias
rosadas a rojas, mientras que las colonias de los microorganismos
que no pueden fermentar este carbohidrato son incoloras o rosado
pálido.
 Las colonias típicas de E. coli en el Agar Endo son rosadas con un
brillo verde metálico característico, debido a la elevada producción
de ácidos y aldehídos como producto de la fermentación de la
lactosa.

5.7 RECOMENDACIONES
 Mantener las pinzas, equipos y demás materiales bien
esterilizados.
 Al retirar el embudo se debe colocar en la placa a 65°C con la
finalidad de desinfectar el embudo para que no contamine la
muestra.
 Cuando se quiere hacer este procedimiento se utiliza una placa
más pequeña que el usado en la parte IV.
 Los filtros filiput son adecuados para el equipo de filtro.
 Se deben anotar el día, hora y lugar de la muestra e
inmediatamente después se debe ir al laboratorio.
 Rotular correctamente cada placa Petri para evitar equivocaciones
con respecto a la dilución que se está trabajando.
 El manejo de las membranas se debe realizar con pinzas de punta
plana o guantes de goma para no lesionarlas.
 Retirar con pinzas estériles o flameadas la membrana filtrante.

CONCLUSIONES GENERALES
 En ciertas partes de los experimentos, no se obtuvieron los
resultados deseados es por ello que se tuvo que volver a
realizarlos nuevamente.

25
  En la parte 2 se comprueba que en la fase confirmativa no hubo
crecimiento de coliformes fecales
 En la parte 3 hay presencia de coliformes en el estanque de
Arquitectura debido a la presencia de gas en caldo lauril triptosa
 En la parte 4 de acuerdo con los resultados nos damos cuenta de
que la mayoría de las enterobacterias son de origen fecal.
 Se concluye que no es un método adecuado, se debió repetir el
muestreo para comprobar

BIBLIOGRAFÍA

AUTOR TITULO AÑO PAÍS/ CIUDAD

Chavez de Allain.A Origen y efectos de la

contaminación 2012 Perú-Piura

M. Madigan, J Biología de los 2004 España-Madrid

Martink, J.Parke microorganismos

‘Criterios microbiológicos
Dr.Damer Mora para evaluar la calidad del 2012 Costa Rica
Alvarado agua en sus diferentes
usos’
Análisis y Diseño de
Alessandra María Sistemas de Tratamiento
Caminati Briceño, R de Agua para Consumo 2013 Perú-Piura
Humano y su Distribución
 Camacho, A. M. (2009). UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO. Obtenido
de http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Colif-tot-fecales-Ecoli-
NMP_6529.pdf
 Carrillo Zapata, E. M., & Lozano Caicedo, A. M. (Diciembre de 2008). VALIDACIÓN DEL
MÉTODO DE DETECCIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN AGUA
POTABLE UTILIZANDO AGAR CHROMOCULT. Bogotá D.C.
 Sandoval, A. M., & Carlos, G. (05 de Mayo de 2014). IRC. Recuperado el 25 de Agosto de
2020, de https://www.ircwash.org/sites/default/files/245.11-91AD-9090.pdf
 Universidad Central de Venezuela. (s.f.). Universidad Central de Venezuela. Obtenido de
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_AgarEndo.pdf

26
ANEXOS
Parte II. Técnica de fermentación en tubos múltiples:
Fase confirmativa y prueba para coliformes fecales
Materiales

1. Confirmación de coliformes totales

Caldo Bilis Verde Brillante 2%

27
El Caldo Bilis Verde Brillante 2% es un medio selectivo recomendado por
APHA para el cultivo de coliformes en agua potable, aguas residuales,

alimentos y productos lácteos, y otros productos de interés sanitario

Imagen 1: Caldo Bilis Verde Brillante

Composición

Fórmula Composición
Peptona…………………………………….… 10.0g
Lactosa ……………………………………… 10.0g
Bilis de buey deshidratada…………………. 20.0g
Verde brillante ………………………………. 0.0133g
Agua destilada ………………………………. 1 L
pH final luego de……………………………. 7.2 ± 0.2
la esterilización

Preparación
Añádanse los ingredientes deshidratados al agua, mézclese cuidadosamente
y caliéntese para disolverlos. El pH debe ser de 7.2 0.2 después de la
esterilización. Antes de esta, coloques e en tubos de fermentación suficiente
cantidad de medio como para cubrir al menos parcialmente un vial invertido
después de la esterilización. Ciérrense los tubos con tapones de metal o de
plástico resistente al calor.
Medio LES ENDO
El agar Endo es un medio de cultivo diferencial y ligeramente selectivo
utilizado para la detección de coliformes y otros microorganismos entéricos

28
.
Imagen 3: Agar Les Endo

Composición

Preparación
Suspender 41,5 g del polvo deshidratado en un litro de agua destilada.
Mezclar vigorosamente. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir
durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes.

29
 Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Dejar enfriar a 45-50°C y re
suspender el precipitado por agitación antes de su uso. Se recomienda
preparar exactamente la cantidad de Agar Endo que se va a utilizar

2. Prueba confirmativa de coliformes fecales

Se realizan inoculaciones en caldo EC, provenientes de los tubos del ensayo

previo que mostraron formación de gas, incubar durante 24±2 horas a
44.5±0.2°C. Bajo estas condiciones la formación de gas en caldo EC indica el
origen fecal de las bacterias coliformes.
Cuando se analizan muestras de agua potable, se utilizan 5 tubos de
fermentación, cada uno con contenidos de 10 o 100ml de la muestra y mínimo
3 diluciones. Pero resulta impráctico usar porciones de 100ml.
Cuando se trata de agua no potable, se inoculan los tubos con cantidades
decimales del agua. La selección de éstas va a depender de la densidad
probable de coliformes y la experiencia del analista.
Esta técnica puede también ser usada para sedimentos, haciendo una
dilución de 10 -1. Se pesan 50 gr de muestra (sólida o semisólida) y se
adicionan 450 ml de agua de dilución y se agita por 1 ó 2 minutos. Los
resultados del análisis de los tubos de réplica y diluciones son reportados en
términos del Número Más Probable (NMP).
El valor numérico de la estimación del contenido bacteriano es determinado
por la dilución que mostró ambos resultados positivos y negativos.
La mejor evaluación de la calidad sanitaria del agua depende de la
interpretación de resultados de la técnica de los tubos múltiples o de otros
métodos, posiblemente más precisos y de toda la demás información relativa
al agua que pueda ser obtenida por reconocimiento de la zona. En la Tabla 1.

30
Se muestra la metodología para el análisis de los coliformes totales,
coliformes fecales y estreptococos fecales.
Caldo EC
Medio de cultivo selectivo para determinar la presencia de organismos
coliformes y Escherichia coli a partir de diversas muestras.
La lactosa es la fuente de energía para los microorganismos lactosa positiva,
especialmente coliformes y Escherichia coli con producción de gas. Las sales
biliares inhiben el crecimiento de Gram positivos. La peptona de caseína
proporciona los nutrientes necesarios para el desarrollo de las bacterias y el
cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico. De acuerdo con el volumen
de la muestra en estudio, se siembra en el medio de cultivo. Si es de 1 ml, se
incorpora directamente al Caldo de concentración sencilla y si es mayor, al
caldo de concentración doble para que la concentración final sea la
adecuada. Incubar 48 h a 35ºC.

Imagen 2: Caldo EC
Composición

Fórmula Composición
Cloruro de sodio………………………… 5.0g
Fosfato dipotásico………………………… 4.0g
Fosfato monopotásico…………………… 1.5g
Lactosa ……………………………………. 5.0g
Sales biliares………………………………. 1.5g
Peptona biotriptasa………………………... 20.0g

31
 pH 6.9±0.2

Preparación
Añádanse los ingredientes al agua, mézclese cuidadosamente y caliéntese
para disolverlos. El pH debe ser de 6.9 0.2 después de la esterilización. Antes
de esterilizar, colóquese la mezcla en los tubos de fermentación, cada uno
con un vial invertid, y con una cantidad de medio suficiente para que cubra, al
menos parcialmente, al vial después de la esterilización. Ciérrense los tubos
con tapones de metal o de plástico resistente al calor.

Procedimiento: Medio verde brillante lactosa bilis

Procedimiento: Medio EC

32
33
34
PARTE III
CALDO LAURIL TRIPTOSA
COMPOSICIÓN (gramos por litro)
TRIPTOSA 20
LACTOSA 5.0
CLORURO DE SODIO 5.0
LAURIL SULFATO DE SODIO 0.1
FOSFATO DIPOTÁSICO 2.75
FOSFATO MONOPOTÁSICO 2.75
pH final 6.8±0.2
AGAR NUTRITIVO
COMPOSICIÓN (gramos por litro)
PLURIPETONA 5.0
EXTRACTO DE CARNE 3.0
CLORURO DE SODIO 8.0
AGAR 15.0
pH FINAL 7.3±0.2

PARTE IV
PRUEBA INVIC
INDOL
Materiales
 Tubos con medio agua peptona.
 Reactivo de Kobacs.
 Libreta y bolígrafo.
 Asa de siembra.
 Mechero Bunsen.
 Mechero.
 Pipeta Pasteur.

35
 Imagen 1: Indol

ROJO METILENO
Materiales
 Tubos con medio Clark y Lubs sembrados.
 Pipeta Pasteur.
 Asa de siembra.
 Mechero Bunsen.
 Muestras.
 Mechero.
 Rojo de metilo. Si las bacterias llevan a cabo la fermentación ácido-
mixta.
Imagen 2: Rojo de metilo
VOGES-PROSKAUER
Materiales
 Reactivo KOH y ∝-naftal.
 Tubos con el medio Clarks y Lubs.
 Muestras.
 Asa de siembra.
 Mechero Busen.
CITRATO
Materiales
 Tubos inclinados con citrato de Simmons.
 Muestras.
 Asa de siembra.
 Mechero Bunsen.
 Mechero.
 Libreta y bolígrafo.
PARTE V
FILTRO DE MEMBRANA PARA COLIFORMES TOTALES

36
Medio líquido selectivo Endo-
MF

Se deposita en placas de
cultivo que llevan una
almohadilla absorbente.

Aproximadamente se colocan 2
mL de medio de cultivo por
placa.

Composición:

Peptona de caseína 10,0 g, 

Peptona de carne 10,0 g, 
Extracto de levadura 1,5 g, 
Lactosa 12,5 g, 
Cloruro sódico 5,0 g, 
Fosfato potásico 5,75 g, 
Lauril sulfato sódico 0,05 g, 
Desoxicolato sódico 0,10 g, 
Sulfito sódico 2,10 g
Fuscina básica 1,05 g, 
Agua destilada 1 L

pH: 7,2 aproximadamente a 25

ºC
En la placa se coloca sobre el
medio de cultivo el filtro de
membrana (una vez filtrada el
agua).

37
38