FACULTAD DE

FARMACIA Y BIOQUÍMICA
E.P. FARMACIA Y BIOQUÍMICA
MICROBIOLOGÍA GENERAL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL

BACILOS GRAM-NEGATIVOS II

MSc. Edwin Hualpa Cutipa

ehualpac@unmsm.edu.pe

LIMA, AGOSTO 2020

19/08/2020
 Contenido de la sesión
I. Preguntas de repaso
II. Familia de enterobacterias.
III. Estudios previos en enterobacterias.
IV. Pruebas IMViC.
V. Experimento 1
VI. Laboratorio virtual.
VII. Retroalimentación.
VIII. Conclusiones.
I. Preguntas de repaso
¿Qué sabemos de E. coli?
¿A que se denomina Oportunista?
¿Qué pruebas bioquímicas se usarán para
estudiar enterobacterias?
II. FAMILIA DE LAS ENTEROBACTERIAS
• Presentes de manera común en
el intestino.
• No esporulantes, bacilos gran-
negativos.
• Algunos no son patogénicos.
• Unos cuantos son altamente
patogénicos.
• Algunos de ellos pueden
convertirse en patogénicos.
 III. ESTUDIOS PREVIOS DE ENTEROBACTERIAS
MEDIOS DE CULTIVO

Agar EMB
Agar Eosina y Azul de
Metileno

Inhiben el crecimiento de Gram +

Fig. 1. Agar EMB (Eosin Methylen Blue)

Indicadores de Fermentación de Sacarosa
y Lactosa
 LACTOSE
POSITIVOS (+)

LACTOSE
POSITIVOS (-)

Fig. 2. cultivo de Enterobacterias en Agar EMB (Eosin Methylen Blue)

 ESTUDIOS PREVIOS DE ENTEROBACTERIAS
MEDIOS DE CULTIVO

Agar XLD Agar de Xilosa, Lisina y

Desoxicolato

Medio Selectivo y diferencial

Fig. 3. Agar XLD (Xylose lysine deoxycholate)

Indicadores de la presencia de patógenos

entéricos Salmonella y Shigella.
 SALMONELLA SIGUELLA

Fig. 4. Cultivo de Salmonella sobre Agar Fig. 5. Cultivo de Siguella sobre Agar XLD
XLD (Xylose lysine deoxycholate) (Xylose lysine deoxycholate)
AGAR MAC Posee lactosa, cristal
CONKEY violeta y sales biliares

Fig. 6. Agar Mac Conkey

Fig. 7. Enterobacterias cultivadas sobre Agar Mac Conkey

 REACCIONES IMViC
Conjunto de pruebas bioquímicas que
permiten diferenciar
enterobacterianas a b c d

Cada una de las letras in “IMViC”

simboliza una prueba bioquimica:
• “I” para indol;
• “M” para rojo metilo;
• “V” para Voges-Proskauer, y
• “C” para citrate.
Fig. 8. Reacciones IMViC de un cultivo de E. coli; a. indol
positivo. b. Rojo metilo positivo. c. Voges-Proskauer
negative y d. citrato negative.
 REACCIONES IMViC: test de Indol
Incubar a 35 – Agregar unas gotas
Muestra 37 ºC por 24 – del reactivo de
bacteriana 48 hr. Kovac

a b c d

Muestra Muestra
Caldo de bacteriana
bacteriana en
Triptófano
inoculada crecimiento

Fig. 10. Prueba de indol a partir de un cultivo de E.

coli; a y c. indol negativo. b y d. indol positivo.

Fig. 9. pasos para realizar la prueba de indol.

 REACCIONES IMViC: test de Rojo Metilo
Medio
Medio
estándar
estándar
Muestra MR-VP +
Caldo de MR-VP
bacteriana inóculo
Triptófano
inoculada

Incubar a 37ºC
X
24 – 48 hr
a b c
Estándar Incoculacion con el
microorganismo
Fig. 12. Prueba de rojo metilo de un cultivo de E. coli;
a y b. negativo. c. positivo.
Fig. 11. Pasos para realizar la prueba de Rojo metilo.
 REACCIONES IMViC: test Voges Proskauer

Tubo de Tubo de Tubo de

Tubo de
prueba 1 prueba 2 prueba
prueba 1
Caldo Caldo inoculado sin inóculo
MR-VP MR-VP
10 gotas 1 ml
(5%)

Incubar a 35ºC Incubar a 35ºC

X X
48 hr 48 hr
Tubo de Tubo de
prueba 1 prueba 2
a b

Fig. 11. Prueba de Voges-Praskauer de un cultivo de E.

coli; a. VP positivo. b. VP negativo.
Fig. 8. Pasos para realizar la prueba de Voges-Praskauer.
 REACCIONES IMViC: test de Citrato (simons)
Sin inoculo inoculado

Incubar a 37ºC
X
24 hr
Tubo de Tubo de
prueba 1 prueba 2 a b6
Fig. 14. Prueba de Citrato de un cultivo de Enterococcus
sp.; a. negativo. b. positivo.
Fig. 13. Pasos para realizar la prueba de Citrato.
 Objetivos de la sesión práctica:
• Identificar e interpretar el crecimiento de enterobacterias en los
principales medios selectivos para aislamiento.
• Identificar e interpretar el crecimiento de enterobacterias en las pruebas
bioquímicas e IMViC.
 EXPERIMENTO 1:

MATERIALES
• Microorganismos de ensayo:
•Escherichia coli.
•Shigella
•Salmonella
•Yersinia
Medios de cultivo
• Agar Mc Conkey • Agar LIA.
• Agar EMB. • Agar Citrato de Simons
• Agar SS • Medio MIO.
• Agar XLD.
 EXPERIMENTO 1:
PROCEDIMIENTOS
 Experimento virtual
https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=76&sim=215&cnt=2126
GRACIAS