Quito - Ecuador

NORMA TÉCNICA ECUATORIANA NTE INEN 1529-9:1990

FECHA DE CONFIRMACIÓN: 2012-10-29

CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS.

DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA O AUSENCIA DE
COLIFORMES (UTILIZANDO MEDIO LÍQUIDO)

Primera edición

FOODS MICROBIOLOGICAL CONTROL. DETERMINATION OF COLIFORM PRESENCE OR ABSENCE (LIQUID MEDIUM)

First edition

DESCRIPTORES: Microbiología de los alimentos, determinación de la presencia o ausencia de coliformes

AL 01.05-307
CDU: 663.1
ICS: 07.100.30
 CDU: 663.1
ICS: 07.100.30 AL 01.05-307

Norma Técnica CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS NTE INEN

Ecuatoriana DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA O AUSENCIA
Obligatoria DE COLIFORMES (UTILIZANDO MEDIO LÍQUIDO) 1529-9
1990-02

1. OBJETO

1.1 Esta norma establece el método rápido para detectar la presencia o ausencia de
microorganismos coliformes.

2. ALCANCE

2.1 Este método es útil para productos con baja carga de coliformes o para detectar coliformes
psicrotrofos.

3. TERMINOLOGIA

3.1 Coliformes (Coli-aerógenes). Bacterias de forma bacilar, Gram negativas, aerobias y anaerobias
facultativas, móviles e inmóviles, no esporuladas que en presencia de sales biliares u otros agentes
selectivos equivalentes fermentan la lactosa con producción de ácido y gas cuando se incuban a 30 ±
° °
1 C los productos refrigerados y 35 ± 1 C los productos que se mantienen a temperatura ambiente, y
se utiliza el medio y método descrito. Este grupo es utilizado como indicador del grado de higiene.

4. RESUMEN

4.1 Este método se basa en la utilización de caldo selectivo verde brillante bilis-lactosa (BGBL), o
similar y tubos Durhan para determinar la cantidad de muestra en la que se puede detectar coliformes
(gas).

5. EQUIPO Y MATERIAL DE VIDRIO

5.1 Equipo usual en un laboratorio microbiológico, en particular:

3
5.1.1 Pipetas serológicas de punta ancha de 1, 5 y 10 cm graduadas en 1/10 de unidad.

5 . 1 . 2 Tu bo s d e 1 5 0 x 1 6 m m y d e 1 2 5 x 1 2 m m

5.1.3 Tubos Durham de 50 x 6 mm

5.1.4 Erlenmeyer de 500 y 1 000 cm 3

(Continúa)

DESCRIPTORES: Microbiología de los alimentos, determinación de la presencia o ausencia de coliformes.

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3
5.1.5 Frascos de boca ancha de 250, 500 y 1 000 cm con tapa de rosca autoclavables.

5.1.6 Gradillas

5.1.7 Balanza de capacidad no inferior a 2 500 g y de 0,1 g de sensibilidad.

5.1.8 Incubador regulable, rango de temperatura de 25 - 70 ± 1 °C.

5.1.9 Autoclave

5.1.10 pH-metro

6. MEDIOS DE CULTIVO Y DILUYENTE

6.1 Caldo verde brillante bilis-lactosa (BGBL) o similar. Preparación (ver caldos de cultivo Norma
INEN 1 529).

6.2 Solución de Peptona al 0,1% preparación (ver reactivos Norma INEN 1 529-1).

7. PREPARACION DE LA MUESTRA

7.1 Preparar la muestra según uno de los procedimientos indicados en la Norma INEN 1529-2

8. PROCEDIMIENTO

8.1 Con una pipeta estéril transferir 10 cm3 de la dilución 10 -1 a un tubo que contenga 10 cm3 de
caldo verde brillante-bilis-lactosa (BGBL) o similar de concentración doble y un tubo Durhan. (No debe
transcurrir más de 15 minutos entre la preparación de las diluciones y la siembra).

Este inóculo corresponde a 1 g ó cm3 de muestra.

3 3 -1
8.2 Con otra pipeta de 1 cm estéril transferir 1 cm de la dilución 10 a un tubo que contenga
10 cm3 de caldo BGBL de concentración simple y un tubo Durhan. Este inóculo corresponde a
0,1 g ó cm3 de muestra.
3 2
8.3 Con una nueva pipeta estéril transferir 1 cm de la dilución 10- a otro tubo que contenga
10 cm3 de caldo BGBL de concentración simple y un tubo Durhan. Este inóculo corresponde a
0,01.g ó cm 3 de muestra.

(Continua)

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8.4 Si es necesario, continuar de esta manera con otras diluciones. En general, se debe sembrar
las diluciones necesarias a fin de obtener un resultado negativo en la dilución más alta.

8.5 Incubar los tubos por lo menos 24 horas a 30± 1 °C para productos refrigerados y a 35 ± 1°C
para productos que se mantienen a temperatura ambiente. Al analizar productos mantenidos en
refrigeración es conveniente prolongar la incubación 24 horas más.

8.6 Al cabo del período de incubación, anotar la dilución más alta que presente gas: la presencia de
éste en las diluciones indica en qué cantidad de muestra se ha podido detectar bacterias coliformes.

8.7 Para el control de rutina en planta, en general no es necesario realizar ensayos confirmatorios.
Pero cuando es necesario, especialmente si se trata de alimentos que contengan otros azúcares que la
lactosa, realizar el ensayo confirmativo según el numeral 7.5 de la Norma INEN 1 529-6.

9. ERRORES DE METODO

9.1 La detección de la presencia o ausencia de coliformes en una determinada cantidad de muestra

está sujeta a los errores inherentes del método, pero esto no invalida el objetivo de obtener
resultados rápidos. Cuando frecuentemente se obtengan resultados ilógicos, revisar cuidadosamente
el método y eliminar todas las probables causas de error (mezcla deficiente de la muestra y/o
diluciones, presencia de inhibidores en los alimentos, etc.)

10. INFORME DE RESULTADOS

10.1 Reportar como presencia o ausencia de coliformes en 1 ó 0,1 ó 0,01 ó etc/g o cm 3 de

muestra.

(Continua)
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NTE INEN 1529-9 1990-02

APENDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

INEN 1 529-1 Control microbiológico de los alimentos. Preparación de medios de cultivo.

INEN 1529-6 Control microbiológico de los alimentos. Determinación de microorganismos
coliformes por la técnica del número más probable.
INEN 15 29-2 Control microbiológico de los alimentos. Preparación de muestras.

Z.2 BASES DE ESTUDIO

Norma Internacional ISO 4831 Microbiology General Guidance for the enumeration of Coliforms -
Most probable number Technique at 30°C. Primera edición. Ginebra 1978.

I.C.M.S.F. Microorganismos de los alimentos 1. Técnicas del análisis microbiológico . Editorial

Acribia, Zaragoza, España.

FAO-FOOD AND NUTRITION PAPER 14/4 Manual of food quality control 4. Microbiological ana-
lysis. Roma 1979.

Food and Drug Administration Bureau of foods Division of Microbiology, Bacteriological Analitical
Manual, 5ta edición. 1978.

Centro Nacional de Alimentación y Nutrición Método de examen microbiológico para alimentos y

bebidas. Normas recomendadas, Manual Práctico, Madrid, 1976.

International Dairy Federation; FIL-IDF-73 Milk and Mild Products count of Coliform Bacteria.
Internacional Dairy Federation. Bruselas, 1974.

Mossel D.A. Moreno García B. Microbiología de los alimentos, Editorial Acribia, Zaragoza, España,
1982.

Harrigan W.F. McLance M.E. Métodos de laboratorio en microbiología de los alimentos y productos
lácteos. León España 1979

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 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Documento: TÍTULO: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS Código:

NTE INEN 1529-9 ALIMENTOS. DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA O AL 01.05-307
AUSENCIA DE COLIFORMES (UTILIZANDO MEDIO
LÍQUIDO)
ORIGINAL: REVISIÓN:
Fecha de iniciación del estudio: 1988-03-28 Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo
Oficialización con el Carácter de
por Acuerdo No.
publicado en el Registro Oficial No.

Fecha de iniciación del estudio:

Fechas de consulta pública:

Subcomité Técnico de: AL 01.05 Microbiología de los alimentos

Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: 1988-07-14
Integrantes del Subcomité:

NOMBRES: INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Dra. Nelly Camba (Presidenta) INSTITUTO NACIONAL DE PESCA-ESPOL

Sr. Fernando Peñafiel BALANCEADOS VIGOR
Dra. Luz Guerrero PASTEURIZADORA QUITO
Ing. Hayde Llerena PASTEURIZADORA QUITO
Ing. Edwin Santamaría GELEC S.A.
Dr. Víctor Villaroel INEDECA NESTLE S.A.
Ing. Mario Paredes UNIVERSIDAD TECNICA DE AMBATO
Dra. Magdalena Baus MINISTERIO DE SALUD PUBLICA
Dra. Rosa de León INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE-QUITO
Dra. Teresa Avila DIRECCION MUNICIPAL DE HIGIENE-QUITO
Ing. Luz Viteri DIRECCION MUNICIPAL DE HIGIENE-
AMBATO
Dar. Hipatia Navas INEN
Ing. Marcelo Prócel (Secretario Técnico) INEN

Otros trámites: ♦4 Esta norma sin ningún cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, según Resolución de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada
mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04 publicado en el Registro Oficial No. 321 del 1998-05-20

Esta NTE INEN 1529-9:1990, ha sido confirmada en 2012-10-29

El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de 1990-02-08

Oficializada como: OBLIGATORIA Por Acuerdo Ministerial No. 156 de 1990-04-25

Registro Oficial No. 433 de 1990-05-09
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17-01-
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