CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Datos y resultados
FECHA:
GRUPO:
NOMBRE:DANIEL ARREDONDO
DAVID ZAPATA
RUBEN DARIO ARANGO

HORA M-V; 7-10

1. Objetivos:
- Determinar la presencia de Clostridium perfringens sulfito reductores de
muestras de alimentos.
- Familiarizarse con los mtodos de aislamientos de bacterias anaerbicas en
alimentos.
-Tomar conciencia de los peligros que ocasionan la presencia de estos
microorganismos en los alimentos.
2. Describa brevemente lo que realizo en el laboratorio.
Para realizar esta prctica utilizamos como alimento queso tipo mozarella en
lonchitas llevada por el compaero David, hicimos la homogenizacin en el
stomacher, pesando 10 gramos de queso en la bolsa estril y adicionando 90
mL de agua peptonada, llevndolo por 30 segundos al stomacher; luego se
dejo 5 minutos en reposo, y se procedi a hacer las respectivas diluciones
aadiendo 1mL de la homogenizacin en 9 mL de agua peptonada esta sera
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la dilucin 10 , de esta se transfiere otro mL al segundo tubo con otros 9
mL de agua peptonada, siendo la dilucin

103 .

Luego de hacer estos preparados de llevar un mL de cada dilucin a tubos de

ensayo con tapa estriles, esto lo hacemos por duplicado por su respectiva
dilucin, luego de esto se lleva a bao mara por 10 minutos, esto con el fin de
que la espora germine, para a continuacin someterlos a un bao de agua fra
por un rato determinado.
Ya despus de haber pasteurizado cada tubo se le va a adicionar el agar a
una temperatura de 45 mas o menos, hasta aprox un poco ms de la mitad
de cada tuvo, homogenizando el cultivo con el caldo, y llevando a bao de
agua fra hasta solidificar la muestra. Luego se le adiciona una pequea capa
del mismo agar y se dejo solidificar para asegurar una anaerobiosis, para su
ptimo crecimiento.
Luego de dejarlos solidificar, se lleva a una incubacin 35 2 C por 72 horas.
Despus de su tiempo de incubacin hicimos la lectura de los tubos, pero
como esta bacterias es de las mas difcil que aparesca, por la inocuidad de los
alimentos, no obtuvimos resultados positivos en la muestra.

3. Medio de cultivo utilizado, temperatura y tiempo de incubacin.

Cultivo: SPS Agar (sulfito Polimixina Sulfadiazina)
Incubacin: 35 2 C por 72 horas.
4. Dibuje y describa las colonias en crecimiento del agar y las clulas
observadas al microscopio.
No se presentaron colonias de Clostridium perfringens, en ningunas de las
diluciones, entonces confirmamos la ausencia de este microorganismo
En su lugar deberamos a ver visto unos puntos negros suspendidos en el
agar en todo el tubo o en el fondo apilado

5. Explique el fundamento de la reaccin en el agar.

SPS Agar (sulfito Polimixina Sulfadiazina) es una modificacin del original
Wilson & Blair medio para la deteccin de clostridios. El presente medio
betters la formulacin de Mossel y tambin la modificacin posterior de
Angelotti et al. Se logra una mayor selectividad para C. perfringens con el
Adems de Sulfadiazina y polimixina.
Los sustratos nutricionales constituidas por la triptona y el extracto de levadura
se complementan con el polisorbato, que tambin permite la recuperacin de
las clulas ms delicadas. Las condiciones anaerbicas se mejoran por la
tioglicolato, que permite el uso del medio en las placas sin
los tubos de Miller-Pritchett, utilizados por Mossel y Wilson-Blair.
El sistema de diferencial consta de sulfito de sodio y citrato frrico que
permite la deteccin de sulfito reduccin de organismos, que forman negro
Colonias debido a precipitado de sulfuro ferroso.

6. Parmetros segn la legislacin Colombiana:

Con arreglo a lo dispuesto en el Reglamento sobre Vigilancia y Control
Sanitario de Alimentos y Bebidas aprobado por Decreto Supremo N 007-98SA y los Principios para el Establecimiento y la Aplicacin de Criterios
Microbiolgicos para los Alimentos (CAC/GL-21(1997)) del Codex
Alimentarius, la presente Norma establece:
Segn lo emitida por el ministerio de salud en las muestras representativas de
alimentos para Clostridium perfringens se deben presentar menos de 100
u.f.c esto por el factor de dilucin de la muestra, se tienede la siguiente
manera:
n=5

C=2

m=10 M=100

7. Resultados:
En la lectura del laboratorio, no observamos ningn Clostridium perfringens.
No se lograron observar ningunos puntos negros en los tubos.
Por no haber salido ningn tubo positivo lo reportamos con el tubo de la
dilucin de 0.1; entonces hay < 100 u.f.c
8. Conclusiones:
El alimento en este caso el queso se encontraba en ptimas condiciones de
calidad, pues ninguno de los tubos presento presencia de los puntos negros,

que son los que evidencian, adems el Clostridium perfringens es difcil que se
presente en alimentos, lo aseguraba tambin la maestra
9. Medidas preventivas
La prevencin total no es posible; sin embargo, los alimentos que han sido
cocinados adecuadamente estn libres de peligro. El riesgo ms alto es la
contaminacin cruzada, que ocurre cuando el alimento cocido entra en contacto
con los ingredientes crudos o contaminados, o con superficies contaminadas
(como por ejemplo las tablas para picar).
Adems de esto hacer unas desinfecciones constante haciendo un intercambios
de diferentes desinfectantes, para evitar la adaptacin de estos a los medios

10. Realice las preguntas de la gua.

En qu condiciones favorecen el crecimiento de este microorganismo en

carnes cocidas? Explique.

En la mayora de los casos, la causa actual del envenenamiento

por C.perfringens es el abuso en las temperaturas de los alimentos preparados.
Un nmero pequeo de organismos est presente normalmente despus de la
elaboracin del producto, y pueden multiplicarse hasta llegar a niveles muy
peligrosos durante su enfriamiento y almacenamiento. Las carnes y sus derivados
son los ms implicados.
En aquellas instituciones que brindan servicios de alimentacin (tales como las
cafeteras de los colegios, los hospitales, las casas de cuidado de nios y
ancianos, las crceles, etc.), se dan las causas ms comunes de ocurrencia de
envenenamiento por Cl. perfringens , debido a que ah se preparan grandes
cantidades de alimentos con muchas horas de anticipacin.

Mencione dos caractersticas morfolgicas importantes de este

microorganismo?

Clostridium perfringens es una bacteria anaerbica (incapaz de crecer en la

presencia de oxgeno), con forma de bastn, Gram-positiva y formadora de
esporas. Est distribuida ampliamente en el medio ambiente y se encuentra
frecuentemente en el intestino de los humanos as como tambin en el de varios
animales domsticos y salvajes. Sus esporas sobreviven en el suelo, en los
sedimentos y en las reas sujetas a la polucin fecal tanto humana como animal.