Análisis crítico

Pertenece a: Batista, Aron; 4-812-718 y Pinto, Luis; 4-829-1954

Curso de Química Inorgánica (QM-242), Escuela de Química, Facultad de Ciencias naturales y
exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí. David, Chiriquí, República de Panamá.

Articulo: Nanopartículas magnéticas

Tema: Nanopartículas magnéticas de óxido de hierro para el aislamiento de ADN plasmídico

Palabras clave:
Aislamiento, extracción, biocompatibilidad, partículas, oxidación, promisoria, síntesis, reacción,
método de Stöber, plásmido.

Ideas centrales:
 Las nanopartículas de óxido de hierro están compuestas por nano cristalitos de magnetita (Fe 3O4)
o maghemita (y-Fe2O3). Aunque la magnetita posee propiedades ferromagnéticas, si el tamaño
de las nanopartículas es muy pequeño, exhiben propiedades superparamagnéticas.

 Las nanopartículas se pueden alterar mediante la aplicación de un campo magnético externo, por
lo que son ampliamente utilizadas para aplicaciones biomédicas especialmente debido a su
dispersión sin formar agregados magnéticos.

 El ADN plasmídico aislado mediante nanopartículas de óxido de hierro, se ha utilizado

directamente para la restricción de la digestión enzimática.

Resumen
- Para poder realizar la oxidación del hierro es necesario realizar la síntesis de la magnetita, la cual
se realiza mediante el método de coprecipitación de Massart, debido a que esta técnica permite a
reacción del Fe3+ y Fe2+, en un medio alcalino (por lo cual se debe realizar una compensación de pH
para evitar la formación de interferentes), todo este proceso de realiza a temperatura estándar y en
medio de una atmosfera con nitrógeno, ya que evita la oxidación de los metales, debido a que
permite transferir la molécula de oxígeno a otro sistema. El paso siguiente fue realizar la síntesis de
Fe3O4@SiO2, en cual se emplea otro método para la obtención utilizando la técnica de Stöber, y se
deben de crear dos disoluciones buffer de Fe 3O4@SiO2 a pH 5 y 7.
Una vez culminada ambas síntesis se puede proceder a la purificación del ADN plasmídico es
necesario realizar la incubación y lisis celular del Escherichia coli, en el cual se utiliza un plásmido de
pcDNA3.1 Zeo (+) Venus-1 Zipper para purificar el ADN y para extraer el sobrenadante se debe
realizar una purificación en medio básico o alcalina del ADN plasmídico mediante columnas de
intercambio iónico, no obstante se procede a realizar una segunda purificación del ADN, con
precipitación etanólica, en la cual de debe trabajar a un pH 5 con 1 mM de EDTA, para poder realizar
un análisis. La última purificación del ADN plasmídico se efectuará con Fe 3O4@SiO2, tratada como
soporte sólido utilizando el buffer con pH= 7. Se debe perpetrar una cuantificación y análisis del ADN
recuperado, en el cual para verificar la concentración y calidad de las muestras del ADN se utiliza en
espectrofotómetro se realizó visualización del ADN mediante la electroforesis en gel de agarosa al
0,8 %. Para logar ver los resultados de la caracterización de Fe 3O4@SiO2, se debe emplear la
fluorescencia de rayos x para la identificación de Sílice en las magnetitas recubiertas , pero son esta
técnica solo se analizó la presencia o no del pico de emisión del Si por lo cual es necesario emplear
la difracción de rayos X y la espectroscopia IR con transformada de Fourier, los cuales emplean el
procedimiento de mínimos cuadrados para ajustar y comparar los parámetros estructurales
experimentales con los calculadas en un modelo estructural teórico.
Planteamiento del problema
¿Pueden obtenerse recubriendo las nanopartículas magnéticas de Fe 3O4 sin tratar en condiciones
normales y luego separar los agregados con centrifugación prolongada a velocidades relativamente
altas?

Punto de vista del autor

- Sintetizar las nanopartículas magnéticas presentes en el óxido de hierro, las cuales son recubiertas
por sílice, las cuales presentas un tamaño inferior a los 12 nm. Por lo cual el proceso Stöber es el
más adecuado, incluso más que el método de Massart. Esto generalmente se logra sembrando una
mezcla de reacción que consiste en agua, etanol y un catalizador con partículas de óxido de hierro y
agregando un precursor de sílice. La hidrólisis y la condensación de los monómeros precursores dan
como resultado la deposición de una capa de sílice sobre las partículas de óxido de hierro. Sin
embargo, este proceso va acompañado de un aumento de la fuerza iónica del medio que promueve
la rápida agregación de partículas de óxido de hierro. El autor también tiene en cuenta que a mayoría
de estos métodos incluyen una etapa de pretratamiento en la que la superficie de las partículas de
óxido de hierro se modifica de una manera que aumenta su estabilidad en soluciones acuosas, por lo
cual la compensación de pH durante la síntesis permitió obtener menores tamaños de partícula; sin
embargo, este parámetro no determinó la eficiencia en la purificación del ADN. Por lo cual el sugiere
que al disminuir la concentración inicial del catalizador durante un período corto para minimizar la
nucleación al reducir la tasa de hidrólisis del precursor y luego aumentar gradualmente la
concentración al nivel óptimo para permitir que la formación de sílice proceda normalmente, es
posible prevenir la agregación sin superficie. modificación. También se informan las propiedades de
las nanopartículas resultantes analizadas mediante espectroscopia, y así como su eficiencia para
extraer ADN genómico de la sepa bacteriana (Escherichia coli), también los autores proponen
mediante ajustes cuidadosos en las concentraciones de reactivos y el orden y la velocidad a la que
se agregan a la mezcla de reacción es posible prevenir la agregación sin emplear ningún
procedimiento adicional. Además, para evaluar la viabilidad de este enfoque, comparan el
rendimiento y la calidad de las muestras de ADN genómico extraída con varias cepas bacterianas
utilizando nanopartículas producidas.

Argumento de apoyo
- La capa de sílice no solo mejora la estabilidad de las nanopartículas magnéticas en soluciones
acuosas, sino que también proporciona un andamio para la unión de diferentes grupos funcionales.
Tales nanopartículas de óxido de hierro recubiertas de sílice (Fe 3O4@SiO2) pueden prepararse
mediante varios métodos. Uno de los métodos más empleados para la síntesis de nanopartículas de
Fe3O4@SiO2 es un procedimiento basado en el proceso sol-gel descrito por Stöber. Este método,
conocido como proceso Stöber, se diseñó originalmente para preparar suspensiones mono dispersas
de nanopartículas de sílice mediante la hidrólisis alcalina y la posterior condensación de tetraetil
ortosilicato (TEOS) en una mezcla de etanol y agua. Aunque los mecanismos que gobiernan la
formación de nanopartículas en la reacción de Stöber no se comprenden completamente, se sabe
que la naturaleza, concentración y relaciones molares de los reactivos influyen en gran medida en la
morfología y el tamaño de las partículas resultantes. Por lo cual la disminución de la relación
volumétrica de agua a etanol por debajo de ciertos niveles da como resultado la formación de una
red de gel en lugar de estructuras de partículas, y en base a diferentes estudios se ha determinado
resultados similares para las estructuras núcleo-capa preparadas mediante modificaciones del
método Stöber.
Aplicaciones
- La nanotecnología es la ciencia que implica el control de átomos y moléculas para crear nuevos
materiales con una variedad de funciones útiles, incluidas muchas que podrían ser excepcionalmente
beneficiosas en muchos campos. Los desafíos básicos que enfrenta la fabricación de nanopartículas
convenientes para productos biológicos incluyen los medios para lograr la monodispersidad, forma y
tamaño controlados, reproducibilidad, escalabilidad y construcción de nanoestructuras complejas.
Las nanopartículas magnéticas son muy costosas de producir en comparación con los materiales
más tradicionales, pero se producen mayores cantidades y, de acuerdo con los principios
económicos normales, su costo unitario de producción puede reducirse, por lo que su precio
disminuye. Dado que las propiedades de las nanopartículas no se comprenden y predicen
fácilmente, existen algunas preocupaciones asociadas con los seres humanos y la agricultura.
Las propiedades magnéticas de los óxidos de hierro se han aprovechado en una amplia gama de
aplicaciones, incluidos sellos y tintas magnéticos, medios de grabación magnéticos, catalizadores y
ferrofluidos, así como agentes de contraste para resonancia magnética y agentes terapéuticos para
tratamiento del cáncer. Estas aplicaciones exigen nanomateriales de tamaños específicos, formas,
características de la superficie y propiedades magnéticas. En aplicaciones de almacenamiento de
datos, las partículas deben tener un estado magnético estable y conmutable que no se ve afectado
por las fluctuaciones de temperatura. Las nanopartículas recubiertas tienen una mayor estabilidad
térmica que sus contrapartes y pantallas dopadas anisotropía magnética uniaxial, lo cual da como
resultado, que las partículas de maghemita modificadas con cobalto son el material predominante
para su uso en cintas de vídeo, cintas de audio de alta polarización y discos magnéticos.

Conclusión
- Se ha logrado un progreso sustancial en la síntesis de nanopartículas magnéticas mono dispersas
para aplicaciones en nanotecnología y biotecnología. Se han desarrollado métodos que ofrecen
control sobre el tamaño, distribución de tamaño, forma, estructura cristalina, defecto, distribución y
estructura superficial de nanopartículas y sus propiedades magnéticas. Además, este método es
benigno para el medio ambiente y no implica el uso de disolventes o tensioactivos tóxicos. Por lo
tanto, este método de aislamiento de ADN presenta muchas ventajas, como ahorros de tiempo
significativos, mayores rendimientos y mejores eficiencias de purificación, en comparación con los
otros métodos de aislamiento de ADN convencionales. Las células recubiertas directamente CON las
nanopartículas tienen una enorme capacidad para introducir genes en células eucariotas bajo un
campo magnético externo. Además, está muy claro que este método de uso de nanopartículas
magnéticas ha aumentado drásticamente la eficiencia de la transfección génica al minimizar los
efectos citotóxicos de la PEI y reducir el tiempo de incubación de 4 ha 15-20 min.

Reacción personal
- Esta investigación describe el proceso de caracterización y síntesis de metales funcionalizados, los
cuales presentan aplicaciones en el aislamiento de ADN plasmídico. Tanto la magnetita como el
Fe3O4@SiO2, se sintetizaron mediante el método de Stöber, el cual se basó en la coprecipitación
química, la cual se complementó con una funcionalización posterior a la síntesis utilizando sílice.
Una estrategia que me pareció muy interesante, la habilidad de funcionalización la cual se llevo
acabo mediante la coprecipitación in situ de los iones de Fe 3+ y Fe2+, en presencia del quitosano y tris
(hidroximetil) aminometano (Tris), lo cual permitió mediante una caracterización comprender que
mediante la difracción de rayos X, se puede comprobar que la síntesis realizada previamente de las
nanopartículas de magnetita, fue llevada a cabo con éxito, además no se puede omitir a que realizar
la espectroscopia infrarroja permitió identificar los grupos funcionales hidroxilo, silanol y amino en la
superficie de las nanopartículas. No obstante, de acuerdo con los valores de magnetización
obtenidos de remanecía como de saturación, indica que todas las muestras fueron viables para
estudios de bioseparación, mediante un proceso de manipulación magnética. Las nanopartículas
magnéticas presentes en el óxido de hierro al ser sintetizadas y especialmente funcionalizados con
sílice, quitosana y tris presentaron porcentajes de desorción, los cuales se podían comparar con
algunos estudios reportados en la separación del ADN plasmídico, y un dato muy interesante es que,
al utilizar nanopartículas de óxido de hierro, los tiempos de desorción del ADN, fueron muchos mas
rápidos que cuando se utilizaron otro tipo de absorbentes similares. Por lo tanto, considero este
método como eficaz que para la extracción y purificación de ADN a partir de muestras biológicas
complejas

Bibliografía
Articulo: Morejón, L; Wilson, L; Fernández, J; Díaz, C. (2020). Nanopartículas magnéticas de
óxido de hierro para el aislamiento de ADN plasmídico. Recuperado el 05/11/2020, de SciELO
Sitio web: http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S2224-
54212020000200195&script=sci_arttext&tlng=pt

Wahajuddin SA. (2012). Superparamagnetic iron oxide nanoparticles: magnetic nanoplatforms as

drug carriers. Int. J. Nanomedicine. Pp; 9-10.

Wu W, He Q, Jiang C. 2008. Magnetic iron oxide nanoparticles: synthesis and surface

functionalization strategies. Nanoscale Res. Pp; 3, 397–415. (10.1007/s11671-008-9174-9)