FASE 3 – METODOS INSTRUMENTALES

TRABAJO COLABORATIVO 301102_5

ELABORADO POR:
JHON DEIBY CALDERO CODIGO: 1.031.156.685
DIANA LUCIA CABANZO CODIGO:1.022.382698
LAURA MILENA CARRILLO CODIGO: 1.001.345.445
LUZ ZORAIDA ZULUAGA CODIGO: 1.068.973.054
LEIDY MARCELA MARTINEZ FONSECA CODIGO:1.052.413.342

PRESENTADO A:
LADY DIANA CASTAÑEDA
TUTORA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

BOGOTÁ, CUNDINAMARCA
CEAD JAG
MAYO 7 2020
INTRODUCCION

METODOS INSTRUMENTALES
Los métodos instrumentales permiten a través de la medida de una propiedad
fisicoquímica por medio de un instrumento analítico el cual traduce la medida
como una señal al lenguaje humano, la separación, cuantificación e identificación
de especies químicas en una muestra problema. Para obtener información del
analito es necesario proveerle un estímulo, generalmente en forma de energía
electromagnética, eléctrica, mecánica o nuclear.  El estímulo sobre el sistema bajo
estudio genera una respuesta que aportara información analítica. 
Los instrumentos analíticos generalmente están constituidos por las siguientes
partes: Generador de señales, Transductor de entrada o detector Procesador de
señales Y Transductor de salida o dispositivo de lectura

ESPECTROSCOPIA UV-VIS 
El principio básico del método de espectroscopia UV-Vis es la absorción de
energía radiante de las moléculas en la región del espectro UV-Vis (190 nm-360
nm). En esta región del espectro las moléculas sufren transiciones electrónicas del
estado basal al estado excitado.  La absorción de esta energía por parte de las
moléculas es debido a que en su estructura presentan ciertos grupos que se
conocen como grupos cromóforos. La mayoría de los grupos insaturados y
heteroatómicos que tienen pares de electrones no compartidos, son cromóforos
potenciales y estos grupos son la base de la elucidación de grupos estructurales
en las moléculas activas en el UV cercano. 
Este método analítico es fundamental para el estudio de ciertos problemas
analíticos específicos, como es el caso de la industria de cosméticos, tiente,
colorantes y pinturas. Adicionalmente, es útil para el estudio de grupos cromóforos
y su influencia en el desplazamiento de ciertos compuestos químicos hacia la
región visible hacen de esta técnica una de las de mayor interés en ésta área. 
Entre las principales aplicaciones de este método instrumental esta:
 Determinación de grupos funcionales en moléculas 
 Determinación de metales en compuestos de coordinación
 Medidas de color
 Determinación cuantitativa
Seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímico
El instrumento analítico consiste en:
1. Una fuente estable de energía radiante
2. Un sistema de lentes, espejos y aberturas (Slits), que definan, colimen (hagan
paralelo) y enfoquen el haz de radiación y un monocromador que separe la
radiación de bandas estrechas de longitud de onda.
3. Un componente transparente a la radiación que contenga la muestra
generalmente una celda de cuarzo. 
4. Un detector de radiación o transductor que recibe la señal de radiación
electromagnética 
5. Un sistema amplificador que produzca o genere una señal eléctrica mucho
mayor a la señal recibida
6. Un sistema de lectura. 
En los métodos espectrométricos la absorbancia se relaciona con la concentración
de la sustancia analizar mediante la siguiente ecuación: 
A=εbc
Donde c se expresa en mol/L, b es la longitud del camino óptico (anchura de la
célula que contiene la disolución de la sustancia) y se expresa en cm, y ε es la
absortividad molar, propiedad característica de cada sustancia correspondiente a
la cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda determinada por
unidad de concentración, siendo sus unidades L mol-1cm-1. Esta relación
matemática es conocida como la ley de Lambert Beer. 
A partir de esta relación lineal es posible la cuantificación de diferentes analitos a
través de curvas de calibración, en las cuales se mide la absorbancia de patrones
de concentración conocida, con el fin de construir una curva en la cual la relación
entre la absorbancia y la concentración es lineal y con los parámetros de la gráfica
y la absorbancia de la muestra problema es posible determinar la concentración
del analito de interés. 

ESPECTROSCOPIA INFRARROJO CON TRANSFORMADA DE FOURIER

(FTIR)
La espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier permite la identificación
de compuestos a través de sus grupos funcionales. El principio fundamental es la
absorción de energía por las moléculas a longitudes de ondas específicas
conocidas como frecuencias de resonancia (vibración). Estas frecuencias de
resonancia son debidas a la presencia de grupos funcionales en la molécula.
Siendo un grupo funcional un grupo de dos o más átomos, enlazados de una
manera específica.
PRINCIPALES APLICACIONES DE ESPECTROSCOPIA FTIR 
La espectroscopia FTIR es ampliamente usada en investigación, y en la industria
para la identificación de moléculas, a través de los grupos funcionales
característicos de cada molécula. Generalmente este tipo de análisis se realiza a
sustancias puras debido a que con las mezclas el espectro sería bastante
complejo, lo que dificulta la identificación de componentes. A través de este
método también es posible hacer seguimiento de reacciones en el cual se
identifica los grupos funcionales del producto esperado o grado de polimerización
como es el caso de los polímeros. 

ANALISIS INSTRUMENTAL
Actualmente los métodos instrumentales son desatinados y utilizados en el mundo
de la industria alimentaria, actualmente estos métodos también son -conocidos
como métodos físico-químicos los cuales utilizan instrumentos analíticos para
diferenciarlos debemos tener en cuenta dos aspectos:
 El fundamento del aparato como sus características y propiedades para su
funcionamiento
 La mecánica y la electrónica del aparato para su mantenimiento
Estos métodos instrumentales abarcan las técnicas analíticas las cuales necesitan
de un aparato o instrumento para realizar la determinación y son clasificados por
técnicas electroquímicas (potenciometrias, conductimetrias, electrogravimetrias),
técnicas ópticas (espectrofotometrías visibles UV, absorción atómica, fotometrías
de llama) y las no espectrospocipas (refractómetros, polarimetrías), técnicas
cromatografías ( cromatografía de gases, cromatografía liquida).
El instrumento analítico es una propiedad que tiene la sustancia donde el
instrumento actúa Generando una señal, que puede provenir de una sustancia,
Transformando la señal en una de naturaleza diferente transducción, Amplificando
la señal, al hacerlo, aumentamos la sensibilidad del instrumento , La amplificación
se consigue mediante la electrónica y Presentando la señal sobre un registro,
sobre una escala.

En estos análisis instrumentales se debe trabajar y usar unos métodos parecidos a

los de la calibración como serie de patrones y el método de las adiciones estándar
Método de calibración con patrones: consta de dos partes así
Calibrado del aparato: se calibra con soluciones de concentración conocida
(patrones), Éstas se preparan por dos métodos: Método directo: se pesan
cantidades exactas de sustancias patrón y se llevan a un volumen conocido, lo
que da lugar a una concentración conocida.
- Método de las diluciones: se sigue el método directo para preparar una solución
madre y a partir de ésta se preparan soluciones hija diluyendo volúmenes
conocidos de la solución madre.

Medida de la muestra: se mide la solución muestra y se determina su

concentración mediante la curva de calibrado realizada previamente con las
soluciones de concentración conocida.

Método De La Adición Estándar: Consiste en añadir a la muestra un único

volumen conocido de una solución de concentración perfectamente establecida.
En cualquier caso, a partir de las medidas de una determinada propiedad analítica,
correspondientes a la muestra y a la muestra incluyendo las adiciones patrón, se
puede determinar la concentración de la sustancia analizada.

Los análisis instrumental tiene unas Ventajas e inconvenientes frente a los

métodos químicos de análisis, los métodos instrumentales son más rápidos, más
selectivos, Suelen tener una mayor sensibilidad y detectar menor cantidad de
componente, cuentan con más precisión en cuanto los métodos clásico de
gravimetría y volumetría pero los errores no se cometen en la medida de la
propiedad en el aparato, sino en las operaciones previas, que son las mismas que
las utilizadas en los métodos clásicos.

 Muestreo para obtener una muestra representativa de todo el material

 Acondicionamiento de la muestra, disolución, concentración...
 Separación del componente del resto de los que puedan interferir en la
medida.

QUE ES LA CROMATOGRAFÍA

La cromatografía se define como la técnica física de separación en la que los

componentes de una muestra debido a las interacciones químicas hidrofóbicas,
hidrofílicas, Van der Waals, electrostáticas, y físicas se distribuyen entre dos
fases: una de ellas permanece fija (fase estacionaria) mientras que la otra se
mueve (fase móvil) en contacto con ella en una dirección definida.

El proceso cromatografico ocurre como resultado de repetidos equilibrios de

distribución de los componentes de la muestra entre las dos fases no miscibles
entre sí. Estos equilibrios se describen por ecuaciones simples que suponen la
transferencia de un analito entre la fase estacionaria y la fase móvil. Se denomina
constante de distribución o coeficiente de distribución a la constante de este
equilibrio:
KD es la constante de distribución
CA,s es la concentración molar del analito A en fase estacionaria
CA,m es la concentración molar del analito A en la fase móvil

En todo proceso cromatografico la fase móvil es la encargada de transportar los

solutos a través de la fase estacionaria en ambas fases los componentes a
separar se distribuyan de distinta manera entre ellas, los compuestos con mayor
fuerza por la fase estacionaria irán más lentos y los menor fuerza, avanzaran a
mayor velocidad transportados por la fase móvil. Cuando entran en contacto se
produce el equilibrio de distribución.

CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS CROMATOGRAFICAS

Según si estado físico de las fases

a. Cromatografía Gas-Liquido: este tipo de cromatografía utiliza como fase móvil

un gas y como fase estacionaria un líquido.
b. Cromatografía Gas-Solido: esta modalidad de cromatografía se caracteriza por
tener como fase móvil un gas y como fase estacionaria un sólido.
c. Cromatografía Liquido-Liquido: en este caso la fase móvil, al igual que la fase
estacionaria, es un líquido.
d. Cromatografía Liquido-Solido: en este tipo de cromatografía la fase móvil es un
líquido y la fase estacionaria un sólido.

Según el mecanismo de separación:

a. Cromatografia de adsorción: los componentes de la muestra son retenidos

mediante adsorción selectiva en la superficie de un sólido de elevada superficie
específica que constituye la fase estacionaria. Las moléculas de soluto y
disolvente (fase móvil) compiten por las posiciones en el adsorbente.
Este mecanismo es el más habitual en cromatografía liquido-solido.

b. Cromatografia de reparto: la fase estacionaria es un líquido que se encuentra

Impregnando un soporte sólido. El soluto se reparte entre la fase estacionaria
liquida y la fase móvil de acuerdo con su solubilidad en cada de ellas

c. Cromatografia de intercambio ionico: la fase estacionaria es un sólido que

contiene grupos cargados positiva o negativamente, teniendo la capacidad de
separar especies ionicas. Los solutos de carga opuesta a la fase estacionaria son
atraídos por esta mediante fuerzas electrostáticas
Cromatografia de exclusión molecular: en este tipo de separación cromatografica,
la fase estacionaria está constituida por un polímero entrecruzado de tamaño de
poro definido. Las moléculas grandes, no compatibles con el tamaño de poro,
siguen su avance, mientras que las mas pequeñas quedan retenidas en los
intersticios del gel. Esta modalidad cromatografía es útil para especies neutras de
alto peso molecular realizándose la separación en funcion de su tamaño.

e. Cromatografia de afinidad: permite la separación de mezclas por su interacción

especifica con un determinado ligando actividad: enzima sustrato, antígeno-
anticuerpo.

Según la disposición o configuración de la fase estacionaria.

Cromatografia en columna: la fase estacionaria se encuentra empaquetada en el

interior de una columna generalmente fabricada en acero, polímero o vidrio.

Cromatografía plana, cromatografía en capa fina: la fase estacionaria está

extendida sobre un soporte solido inerte de vidrio, plástico o aluminio. La muestra
para análisis se aplica por medio de un tubo capilar sobre la superficie de una
capa fina adsorbente en forma de banda o punto.

Cromatografia en papel: se denomina de esta forma a la cromatografía

plana que emplea celulosa como fase estacionaria.

Parámetros cromatográficos

Se denomina cromatografía al registro de las señales de respuesta producidas en

el detector ante la presencia de los analitos a la salida de la columna
cromatográfica. Corresponde al registro del perfil de concentración, o masa, de los
componentes de la muestra como función del movimiento de la fase móvil o como
volumen eluido desde la introducción de la muestra. Al trabajar a caudal constante
de fase móvil, se registra la señal analítica del detector frente al tiempo
transcurrido desde el momento en el que la mezcla se puso en contacto con
ambas fases. De esa manera, esos tiempos representan el volumen de fase móvil
necesario para la elución del analito.

El número de señales registradas (picos cromatográficos) representa el número de

compuestos separados y suministra información acerca del grado de complejidad
de la muestra. A partir del cromatograma se obtienen los datos necesarios para
llevar a cabo los análisis cualitativo y cuantitativo.
 Identificacion
cualitativa
La identificación cualitativa
de los componentes de la
muestra está basada en la
evaluación de la posición
de los picos.
Identificacion
cuantitativa
El área bajo el pico
cromatográfico permite la
valoración cuantitativa de
la cantidad relativa de cada
sustancia.

Para seleccionar correctamente un método analítico, es esencial definir con

claridad la naturaleza del problema analítico, y esta definición requiere:

1. Saber que exactitud se requiere.

2. De cuanta muestra disponemos.

3. El intervalo de concentraciones en el que está el analito.

4. Cuáles son los componentes de la muestra que interfieren.

5. Conocer las propiedades físicas y químicas de la matriz de la muestra.

6. La cantidad de muestras que hay que analizar.

PARTE COLABORATIVA
Estudiante Alimento Contaminante Origen de la Límite
contaminación permisible
(mg/kg)
Grupo Fresas Malation Fumigación 1.0
colaborativo

Análisis del analito: Malation

El Malathion es considerado un pesticida que se agrupa dentro de los

organofosforados, estos son sustancias que no perduran en el ambiente por
mucho tiempo, sino más bien son fácilmente degradables, sin embargo y dado su
fácil adquisición y manejo libre se pueden presentar contaminaciones por ingestión
y contacto con la piel.
La interacción de los plaguicidas, el suelo y el agua también es muy importante ya
que el impacto sobre el suelo si puede ser más persistente sobre todo en
aplicaciones aéreas donde un porcentaje considerable del producto llega al suelo
o cuerpos de agua, así también como resultado del lavado ocasionado por las
lluvias, o bien, por el arrastre provocado por el viento.
Métodos de análisis
Algunos métodos empleados para determinar pesticidas organofosforado y
organoclorinados en agua los mencionan Starilova y Dedkow 1988 en Rusia,
enumerando, Cromatografía, Espectroscopia, Electroquímico y Bioensayo.
Manzour et al., 1989 emplearon la técnica de cromatografía de gas para
determinar y confirmar el conocimiento de degradación de productos pesticidas en
agua de Diazinon, Paratión Malatión, Betaendosulfan y Cianazina.
Efectos por intoxicación

El Malathion es un inhibidor de la colinesterasa de baja toxicidad para los

mamíferos, una vez en contacto con cualquier superficie de la piel y ojos penetra
rápidamente en el cuerpo. La ropa contaminada por el producto debe quitarse
inmediatamente y toda la piel debe lavarse escrupulosamente, la exposición
repetida a inhibidores de colinesterasa tales como el Malathion 57% EC puede
causar repentinamente un incremento de las susceptibilidad a la dosis de
cualquier inhibidor de colinesterasa.

Entre los principales signos de una intoxicación con organofosforados se

encuentran la visión borrosa, rinorrea, broncorrea, sialorrea, broncoespasmo,
cianosis, diaforesis, náuseas, vómito, diarrea, cólico abdominal, incontinencia de
esfínteres, bradicardia, Calambres, mialgias, fasciculaciones, debilidad, parálisis
flácida, hiperglicemia, Cefalea, ansiedad, confusión, irritabilidad, alteración del
estado de conciencia, ataxia, depresión respiratoria, convulsiones

Plantea el procedimiento de la preparación de muestra para análisis.

Siguiendo un diseño de muestreo aleatorio estratificado, y basados en un estudio
de Nausa (2004, sin publicar), se toman 20 muestras de fresa. La muestra de 1 kg
se procede a su preparación retirando restos de tejidos tales como sépalos, el
cáliz, las hojas en mal estado, el suelo, dependiendo de la matriz, y lavando con
agua del grifo.
Las muestras se almacenan a –20°C en bolsas de polietileno debidamente
codificadas. Teniendo en cuenta las características de la matriz y del analito, se
aplica una misma metodología de extracción para compuestos tales como
organoclorados, organofosforados y piretroides, de manera que puedan
determinarse por cromatografía de gases.
La metodología aplicada se obtuvo como resultado de una evaluación y
adaptación de las técnicas usadas en diferentes laboratorios de control a nivel
internacional (Ghods, 2000; Hernández, 1990).
Se busca eliminar pasos como la partición líquido-líquido, los cuales son muy
dispendiosos y requieren grandes cantidades de solventes, aunque
Actualmente siguen siendo muy usados por los organismos de control en el
análisis de residuos de plaguicidas en material vegetal (Sawyer et al., 1990).
Una vez homogeneizada la muestra se realizó la extracción de la muestra analítica
con acetato de etilo, ya que por no ser completamente miscible con el agua no
requiere de particiones adicionales. Además, el acetato de etilo posee baja
toxicidad y su miscibilidad con el agua es apropiada para permitir una buena
penetración en las células vegetales (Torres et al., 1996).
La limpieza para este tipo de compuestos, organoclorados, organofosforados y
piretroides, se realizó mediante GPC para eliminar interferentes de alto peso
molecular que contienen las matrices en estudio, como clorofilas, pigmentos,
ceras, proteínas, carotenos, entre otros. La limpieza emplea una fase móvil
compuesta por acetato de etilo y ciclohexano, solventes de baja toxicidad. Para el
caso de repollo se llevó a cabo una limpieza adicional mediante una minicolumna
empacada con silicagel y de la cual se eluyeron los plaguicidas con acetato de
etilo (Kadenczki et al.,1992
DIAGRAMA
Propone una posible alternativa de solución al problema identificado a
través de métodos instrumentales.
Una vez realizada la extracción y limpieza de cada una de las matrices, se
procede a la separación e identificación de cada uno de los plaguicidas mediante
cromatografía de gases. Se debe utilizar para el análisis un cromatógrafo de
gases con las condiciones cromatográficas comunes utilizadas en el análisis de
los plaguicidas en las diferentes matrices que son las siguientes: volumen de
inyección 2 µL; inyección en modo splitless pulsado con un pulso de presión. Se
utiliza nitrógeno como gas de transporte en modo de presión constante. Todas las
muestras se deben de inyectar en acetato de etilo. Las condiciones de este equipo
deben ser: solvente de elución acetato de etilo-ciclohexano (1:1); flujo de elución 1
ml/min. Materiales de referencia, reactivos y soluciones. Los materiales de
referencia de plaguicidas con porcentajes de pureza entre 97-100%. Se debe
conseguir el acetato de etilo y el ciclohexano con grado residuos de plaguicidas;
bicarbonato de sodio y silica gel (60-200 mesh) con grado analítico, y sulfato de
sodio anhidro con grado residuos. Se preparan soluciones madre de los materiales
de referencia en concentración cercana a 1.000 µg/ml en acetato de etilo, las
cuales se almacenan a –20°C. Para la obtención de las matrices blanco, exentas
de plaguicidas, se obtienen de fincas donde se cultivan productos orgánicos. Estas
matrices se analizan cromato gráficamente para verificar su utilización como
blancos.
Para que la separación sea eficaz es necesario un sistema que permita la
introducción de la muestra de tamaño adecuado de forma rápida, la introducción
de la muestra grande o demasiado lenta, provoca la aparición de bandas anchas
lo que se traduce a una resolución pobre. El método más sencillo de introducción
es el empleo de una micro jeringa. La muestra se inyecta a través de un tapón de
goma (septum) en una cámara de valorización situada en la cabeza de la
columna.
Las FASES ESTACIONARIAS juegan un papel decisivo, puesto que la fase móvil
es inerte. Deben cumplir una serie de requisitos:
- Su temperatura de ebullición debe estar al menos 100 gr por encima de la
temperatura máxima de trabajo.
- Deben ser estables a temperaturas elevadas.
- Deben ser químicamente inertes (no reaccionar)
Define las relaciones matemáticas para identificar y determinar el analítico
de la problemática identificada.
Datos de experimentales de malathion
Concentraciones de
plaguicidas en las curvas de
calibración (ppm)
concentració Absorbancia
n
1 0.025
2 0.05
3 0.1
4 0.2
5 0.4
6 0.8

X Y X*Y X2
1 0,025 0,025 1
2 0,05 0,1 4
3 0,1 0,3 9
4 0,2 0,8 16
5 0,4 2 25
6 0,8 4,8 36
21 1,575 8,025 91

Calculo m, que es el valor de la pendiente mediante la siguiente fórmula:

 ( Σ x )( Σ y )
Σ xy −
n
m=
( Σ x )2
Σ x 2−
n
Reemplazo lo anterior y obtengo lo siguiente:

(21)(1.575)
8.025−
6
m=
(21)2
91−
6

33.075
8.025−
6
m=
441
91−
6

8.025−5.5125
m=
91−73.5

2.5125
m= =0.143
17.5
Cálculo de b:

Σy Σx
b= y−mx=
n
−( m)
n ( )
1.575 21
b= y−mx=
6
−( 0.143 ) ( )
6

b=0.2625−0.5005

b=−0.24

La ecuación de la recta sería:

y=mx+b
y=0.143 x +(−0.24)

RESOLUCION CROMATOGRAFICA
El análisis cuantitativo empleando cromatografía de gases se basa en la
comparación del área o altura de los picos del analito en la muestra con el área o
altura de los picos de estándares de concentración conocida de la sustancia que
trabajamos. Constituye una medida cuantitativa de la capacidad de una columna
para separar los analitos, la resolución se calcula a partir del cromatograma como:
∆Z 2∆Z
R 5= = =2 ¿ ¿
w A /2+w B /2 w A +w B

Cuando mayor sea R5 mejor separados estarán los picos cromatográficos de los
componentes A y B. La resolución de una columna aumenta al aumentar el
número de platos de la misma y por lo tanto al aumentar la longitud.
De este modo se compensa la variabilidad en el volumen de la muestra
introducido. El estándar interno debe elegirse de tan modo que su pico este bien
separado de los otros constituyentes de la muestra.
EJERCICIOS INDIVIDUALES

ESTUDIANTE 1: DIANA LUCIA CABANZO

1a. Para la determinación del contenido de fosforo en carne por el método de

espectroscopia UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos de absorbancia
para las soluciones estándar:

Estándar Concentración Absorbancia

(ppm)
1 1 0,116
2 3 0,221
3 5 0,347
4 7 0,456
5 9 0,535
6 11 0,588

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la

concentración.

DATOS EXPERIMENTALES
0.7
0.59
0.6
0.54

0.5 0.46
Absorbancia

0.4 0.35

0.3
0.22
0.2
0.12
0.1

0
0 2 4 6 8 10 12
Concentracion ppm
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le
permita determinar la ecuación correspondiente.

Estándar x y x*y x*x

1 1 0,116 0,116 1
2 3 0,221 0,663 9
3 5 0,347 1,735 25
4 7 0,456 3,192 49
5 9 0,535 4,815 81
6 11 0,588 6,468 121
SUMA 36 2,263 16,989 286

Aplicamos la siguiente ecuación de la recta: y=mx+b

m= pendiente de la recta
b=intercepto con el eje y

Estos valores nos permitirán calcular los parámetros m y b de la recta.

Para hallar m, usamos la siguiente formula:

( ∑ x)( ∑ y )
∑ xy− n
m= 2
∑ x −¿ ¿ ¿ ¿
Remplazamos valores:

(36)(2,263)
6,989−
6
m= =¿
(36)2
286−
6
6,989−13,578 −6,589
m= =
286−216 70
m=−0,0941285

Para hallar b, usamos la siguiente formula:

b=
∑ y −(m) ∑ x
n n
Remplazamos valores:
2,263 36
b= −(−0,094 )
6 6
b=0,377+ 0,094∗6
b=0,941

Determinamos la ecuación lineal:

y=0,094 x+ 0,941

1b. A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración en una muestra para lo cual se tomó 2 g de harina
y luego de tratarla adecuadamente se llevó a un volumen de 100 mL. La
lectura de absorbancia de esta solución fue de 0,240. Determine la
concentración de fósforo en la muestra de harina.

Aplicamos la ecuación hallada y=0,094 x+ 0,941

0,240=0,094 x +0,941
0,240+0,941
x=
0,094
x=10,25
La concentración de fosforo en la muestra de harina es de 10,25

1c. Indique cuales son las limitaciones de la absorción atómica y a la

emisión atómica.
La sensibilidad en la absorción atómica puede definirse como la concentración del
elemento presente en la solución de muestra que produce una absorción del 1%.
La definición de sensibilidad no tiene ningún valor como guía para la menor
cantidad de un elemento que se puede determinar porque no tiene en cuenta el
nivel de ruido. Al mismo tiempo, la "sensibilidad para la absorción del 1 por ciento"
es un número teórico y variará con la eficiencia de la lámpara, atomizador, sistema
de llama, monocromador y fotomultiplicador. La sensibilidad generalmente se
expresa en términos de pglml para una absorbancia del 1%. La sensibilidad para
el uno por ciento de absorbancia se determina empleando la siguiente expresión.
C0.1 × 0,0044
C 1 %=
0.1
Donde C 1 % es la concentración que da lugar a una absorción del 1 por ciento y
C 0.1 da lugar a una absorbancia de 0.1.

El límite de detección puede derivarse como la concentración (pglml) de un

elemento que da como resultado el desplazamiento de la señal de absorbancia a
una cantidad que equivale al ruido de pico a pico de la línea base. Con el fin de
evaluar si la técnica de absorción atómica es aplicable o no a una determinación
particular de bajo nivel, es una práctica general llevar a cabo una prueba real en el
amplio rango requerido, utilizando la instalación de expansión adecuada. A partir
de los datos obtenidos de tal ejecución, se puede conocer el verdadero límite de
detección.
La absorción atómica no solo se limita a la solución, sino también a soluciones no
acuosas. Como la espectroscopía de absorción atómica no exige la preparación
de muestras, es una herramienta ideal para los no químicos también, por ejemplo,
el ingeniero, el biólogo o el médico solo están interesados en la importancia de los
resultados. La espectroscopía de absorción atómica es un método de análisis
elemental.
Algunas de las ventajas de la ICP-OES son que presenta excelentes límites de
detección y un rango dinámico lineal, su capacidad multi-elemento, una baja
interferencia química y una señal estable y reproducible. Las desventajas son las
interferencias espectrales (muchas líneas de emisión), los gastos y costos de
operación y el hecho de que las muestras normalmente deben estar en una
solución líquida.
1d. Mencione los criterios necesarios en la selección de una fase
estacionaria en cromatografía HPLC.
Tamaños de partículas mucho menor entre 2 y 5 μm ya que la difusión de los
solutos entre las fases móvil y estacionaria se hacen más rápida
Pero ello implica la necesidad de impulsar la fase móvil con un sistema de alta
presión.
Para una fase estacionaria concreta, la naturaleza de la fase móvil es el factor
clave de la separación. Puede trabajarse en dos modalidades:
Isocratica: la composición de la fase móvil permanece contante durante la
separación.
En gradiente: la composición se va modificando durante la separación. Para
trabajar en esta modalidad el cromatógrafo debe disponer de un sistema de
programación de gradiente, que permita la mezcla reproducible de disolventes en
distintas proporciones durante la separación cromatográfica.
Un requisito técnico importante es que los disolventes empleados deben carecer
de gases disueltos, ya que estos pueden provocar serios problemas por formación
de burbujas. Es frecuente por ello la desgasificación de los disolventes.

ESTUDIANTE 2 JHON CALDERON

1a. Para la determinación del contenido de hierro en un alimento por el
método de espectroscopia UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos de
absorbancia para las soluciones estándar:
Estándar Concentració Absorbancia
n (molar)
1 0 0
2 2 0,03
3 4 0,06
4 6 0,08
5 8 0,1
6 10 0,13

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración.
 Absorbancia vs Concentracion
0.7
0.6 f(x) = 0.05 x + 0.08
0.5 R² = 0.98
Absorbancia

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
C(ppm)

-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le

permita determinar la ecuación correspondiente.
Ecuación de la recta
y=ax+ b
Estándar Concentració Absorbanc (x * y) x^2 y^2
n (ppm) ia
1 1 0,116 0,116 1 0,013456
2 3 0,221 0,663 9 0,048841
3 5 0,347 1,735 25 0,120409
4 7 0,456 3,192 49 0,207936
5 9 0,535 4,815 81 0,286225
6 11 0,588 6,468 121 0,345744
36 2,263 16,989 286 1,022611

Ecuación para hallar el valor de a

a=n
∑ xy−¿ ∑ x ∑ y ¿
2
n ∑ x 2−( ∑ x )

( 6∗16,989 )−(36∗2,263)
a= 2
(6∗286)−( 36 )
a=0,048728571
Ecuación para hallar el valor de b

b=
∑ y−¿ a ∑ x ¿
n
2,263−( 0,048728571∗36)
b=
6
2,263−1,75422
b=
6
b=0,0848
El coeficiente de correlación lineal y para ello hallaremos el promedio de los
valores de x y y

x́=
∑ x = 36 =6
n 6

ý=
∑ y = 2,236 =0,3726666
n 6
Concentra Absorbanc X- Y-PY (X- (Y-PY)2 (X- P Py
ción ia PX PX PX)*(Y- x
(ppm) )2 PY)
1 0,116 -5 - 25 0,065877 1,2833 6 0,37716666
0,2566 44 3
7
3 0,221 -3 - 9 0,023002 0,4549
0,1516 58 98
7
5 0,347 -1 - 1 0,000658 0,0256
0,0256 74 66
7
7 0,456 1 0,0833 1 0,006944 0,0833
34 56 34
9 0,535 3 0,1623 9 0,026352 0,4870
34 33 02
11 0,588 5 0,2153 25 0,046368 1,0766
34 73 7
36 2,263 0 0,0270 70 0,169204 3,411 SUMATOR
04 37 IA
Hallamos el valor de R

r=
∑ ( x−xp )∗( y − yp)
√ ∑ ( x−xp )2∗√∑ ( y− yp )2
r=
∑ ( 36−6 )∗(2,263−0,37716666)
√ ∑ ( 36−6 )2∗√∑ ( 2,263−0,37716666 )2
r =0,991463564
Hallamos el valor de R cuadrado.

r 2=0,9914635642

r 2=0,983

2b. A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración en una muestra que luego de tratarla
adecuadamente se llevó a un volumen de 250 mL. La lectura de absorbancia
de esta solución fue de 0,04. Determine la concentración de hierro en la
muestra.

y=ax+ b
y=0,0487 x +0,0848
0,04=0,0487 x +0,0848
0,04−0,0848
x=
0,0487
x=−0,911704312
2c. Indique cuales son los principios básicos de absorción atómica y de un
ejemplo.
Principios básicos de la absorción atómica:

 Todos los átomos pueden absorber luz

 La longitud de onda a la cual la luz se absorbe se especifica para cada
elemento
 La cantidad de luz absorbida es proporcional a la concentración de átomos
absorbentes:
- Permite determinar la concentración de un elemento (analito)
- Partículas monoatómicas en estado gas (UV-visible)
- Análisis cuantitativo de precisión para un metal dado.
- Absorción de la línea atómica característica
- Los metales se analizan individualmente no simultáneamente. Por lo
general no es aplicable a no metales
EJEMPLO:
DETERMINACIÓN DE CALCIO POR ABSORCIÓN ATÓMICA EN MUESTRAS
DE AGUA
Los átomos en estado fundamental pueden absorber energía
Espectroscopia de absorción atómica
l= f (No)
l a concentración

Calibrado experimental
Calibración sin y con reductor de interferencias de la llama (Ca)

Tratamiento de datos
Calibrado sin replicas
Calibrado con replicas
Calibrado no lineal
Metodología determinación del Ca
λ=422,7 nm
Rendija=0,2 nm
Fuel= acetileno
Disminución de la absorbancia del ca por interferencias químicas de la llama aire-
acetileno pueden eliminarse añadiendo un agente “liberador” como Sr](5000
μg l−1 ¿ o la (10000 μg l−1 ¿

estadística de Ca mg L- lectura
regresión 1
Coeficien 0,9942485 0 0,0025
te 9 0 0,0017
Coeficien 0,9885302 0,5 0,031
te 59
0,5 0,0299
R^2 0,9875744
1 0,0429
ajustado 47
error 0,0108531 1 0,0301
tipico 24 3 0,095
observac 14 3 0,1056
ione 5 0,1753
5 0,1679
7 0,2273
7 0,2021
9 0,268
9 0,2584

Análisis de balanza
Grados de libert de cuadradio F Valor
critico
regresión 1 0,121824 0,1218224 1034,231 4,747225
347
residuos 1 0,00141348 0,00011779    
2
total 1 0,12323588      
3

  Coefiient inferior superior

es 95% 95%
ordenada 0,011284 0,00173 0,02085
65 383 471
pendient 0,029014 0,02704 0,03097
 e 018 831 973

GRAFICA

Variación total de los datos SSt

SSt= SSPE+SSFDA+SSREG
n-1=(n-k)+(k-p)+(p-1)
Ho= no hay falta de ajuste
El test de falta de ajuste es una prueba F que compara MS FDA/MSPE con el FCRIT
con (k-2) y (n-k)
Tabla del anova
Fuente g.d.l SS MS F
Regresion P-1=1 SSREG SSREG/1 MSREG/MSRES
Residual n-p=n-2 SSRED SSRED/(n-2)
Falta de k-p=k-2 SSFDA SSFDA/(k-2) MSFDA/MSPE
ajuste
Puro error n-k SSPE SSPE/(n-k)

Total n-1 SST SST

2d. ¿Cuál es la clasificación de los métodos cromatográficos según la
disposición de la fase estacionaria?
Cromatografía en papel
Cromatografía en capa fina
Cromatografía de gases
Cromatografía liquida 

Se debe tener en cuenta la diversidad de métodos cromatográficos para la

elección del método cromatográfico a utilizar se debe tener en cuenta:
Carácter hidrofílico o lipofílico
Carácter iónico 
Peso molecular v

ESTUDIANTE 3 LAURA MILENA CARRILLO

3a. La provitamina A se determina como β-caroteno. Para lo cual se hace una
extracción previa, se purifica por cromatografía de columna y el extracto se
diluye a un volumen conocido y se mide a 450 nm. Para determinar el
contenido de esta sustancia en un alimento se preparó la siguiente curva de
calibración:
Estándar Concentrac Absorbanci
ión (molar) a
1 0 0,0
2 0,3 0,13
3 0,5 0,23
4 0,7 0,36
5 0,9 0,48
6 1,0 0,62

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración.

Grafica Ejercicio 3
0.7
0.6
0.5
Absorbancia

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1
Concentracion
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le
permita determinar la ecuación correspondiente.

Método de mínimos cuadrados

Con los datos anteriores procedemos hallar algunos datos adicionales y aplicar las
fórmulas para determinar los valores de m y b, así como los valores de R
cuadrado.
Estánda X Y X*Y X*X Y*Y
r
1 0 0 0 0 0
2 0,3 0,13 0,039 0,09 0,0169
3 0,5 0,23 0,115 0,25 0,0529
4 0,7 0,36 0,252 0,49 0,1296
5 0,9 0,48 0,432 0,81 0,2304
6 1 0,62 0,62 1 0,3844
∑ 3,4 1,82 1,458 2,64 0,8142

Ecuación de la recta
y=ax+ b
Donde:
a = corresponde a la pendiente de la recta
b= punto de corte con el eje y

Ecuación para hallar el valor de a

 a=n
∑ xy−¿ ∑ x ∑ y ¿
2
n ∑ x 2−( ∑ x )

( 6∗1,458 )−(3,4∗1,82)
a=
(6∗2,64)−( 3,4 )2
8,748−6,188
a=
15,84−11,56
a=0,59813084
Ecuación para hallar el valor de b

b=
∑ y−¿ a ∑ x ¿
n
1,82−(0,59813084∗3,4 )
b=
6
1,82−2,033644856
b=
6
b=−0,035607476
Ahora hallamos el coeficiente de correlación lineal y para ello hallaremos el
promedio de los valores de x y y

x́=
∑ x = 3,4 =0,566667
n 6

ý=
∑ y = 1,82 =0,3033333
n 6
Ahora usaremos los datos de la siguiente tabla:
Estánd (X-XP)*(Y-
X Y X-XP Y-YP (X-XP)2 (Y-YP)2
ar YP)
- -
1 0 0 0,566666 0,303333 0,321111 0,092011 0,1718888
67 33 11 11 89
- -
2 0,3 0,13 0,266666 0,173333 0,071111 0,030044 0,0462222
67 33 11 44 22
- -
3 0,5 0,23 0,066666 0,073333 0,004444 0,005377 0,0048888
67 33 44 78 89
0,133333 0,056666 0,017777 0,003211 0,0075555
4 0,7 0,36
33 67 78 11 56
5 0,9 0,48 0,333333 0,176666 0,111111 0,031211 0,0588888
 33 67 11 11 89
0,433333 0,316666 0,187777 0,100277 0,1372222
6 1 0,62
33 67 78 78 22
0,713333 0,262133 0,4266666
∑ 3,4 1,82
    33 33 67
XP YP
0,566666 0,303333
67 33

Hallamos el valor de R

r=
∑ ( x−xp )∗( y − yp)
√ ∑ ( x−xp )2∗√∑ ( y− yp )2
0,426666667
r=
√ 0,71333333∗√ 0,26213333
r =0,986691372
Hallamos el valor de R cuadrado.

r 2=0,9866913722

r 2=0,97355986

3b. A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración de provitamina A en una muestra para lo cual se
tomó 10 mL y se llevó a un volumen de 100 mL. La lectura de absorbancia de
esta solución fue de 0,21. Determine la concentración de provitamina A en la
muestra.
Para hallar el valor de la concentración aplicamos la ecuación de la recta indicada
anteriormente.
y=ax+ b
y=0,59813084 x−0,035607476
0,21=0,59813084 x−0,035607476
0,21+0,035607476
x=
0,59813084
x=0,410625
La concentración de la muestra de la provitamina A es de 0,4106
3c. ¿Cuáles son las propiedades que debe tener una molécula para que sea
posible cuantificarla por espectroscopia UV-Vis?
Las propiedades para que una molécula pueda ser leída por medio de
espectroscopia UV –VIS, son las siguientes:
- Que sea lo suficientemente grande mayor a 400nm
- La muestra no puede ser opaca ya que esto dificulta el paso de luz a
través de la misma.
- No estar diluida

3d. ¿Qué papel juega el coeficiente de partición del compuesto en la

separación por cromatografía?
El coeficiente de participación de un compuesto hace referencia a la concentración
que presenta el mismo y es característico de cada compuesto, al ser característica
de cada producto, el coeficiente influye de una manera radical en cada ensayo y
entre ellos el ensayo de cromatografía, entre mayor sea el coeficiente mayor será
el volumen de retención.

ESTUDIANTE 4 LUZ ZORAIDA ZULUAGA

4 a. Para determinar la concentración de plomo en un alimento se construyó
la siguiente curva de calibración:

Estándar Concentración Porcentaje

(ppm) de
Tramitancia
(%)
1 30 56
2 45 39
3 60 28
4 85 21
5 100 15

A partir de los datos de la tabla:

Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración teniendo en cuenta que:
A=2-Log %T

Estandar Absorbancia Concentración (ppm) X X*Y X2

Y

1 0,25 30 7,5 900

2 0,4 45 18 2025
3 0,55 60 33 3600
4 0,67 85 57 7225
5 0,82 100 82 10000
Sumatoria 2,69 320 197,5 23750
s

Absorbancia vs Concentración
0.9
0.8
f(x) = 0.01 x + 0.04
0.7 R² = 0.98
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
Concentración (ppm)

Ecuación de la recta
y=mx+b
Dónde:
m = corresponde a la pendiente de la recta
b= punto de corte con el eje y

Ecuación para hallar el valor de a

m=n
∑ xy−¿ ∑ x ∑ y ¿
2
n ∑ x 2− ( ∑ x )
 ( 5∗197,5 )−( 320∗2,69)
m=
(5∗23750)−( 320 )2
987,5−860,8
m=
118750−102400
m=0,007749235474
Ecuación para hallar el valor de b

b=
∑ y−¿ m ∑ x ¿
n
2,69−( 0,007749235474∗320)
b=
5
2,69−2,479755352
b=
5
b=−0,04204892966
Ahora hallamos el coeficiente de correlación lineal y para ello hallaremos el
promedio de los valores de x y y

x́=
∑ x = 3,4 =0,566667
n 6

ý=
∑ y = 1,82 =0,3033333
n 6

4 b. A partir de la curva anterior, determine la concentración de plomo en mg

en cada 100 g de muestra, si un 1,0 g de una muestra problema, se disolvió a
100 mL y se midió dando una Tramitancia de 28 %
y=mx+b
y =0,55
m = 0,00775
b =0,043
x = concentración de plomo ppm
y=mx+b
0,55=0,00775 x + 0,043
0,55−0,043=x
0,00775
65,41 = x ppm = 65,41 mg.

4 c. Indique cuales son las aplicaciones de la absorción atómica.

Absorción atómica es una técnica para determinar la concentración de un

elemento metálico determinado en una muestra. Puede utilizarse para analizar la
concentración de más de 62 metales diferentes en una solución

4 d. Mencione las propiedades de la fase estacionaria en la cromatografía de

gases.

La cromatografía de gases es una técnica cromatografía en la que la muestra se

volatiliza y se inyecta en la cabeza de un mechero de una columna
cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte.
A diferencia de los otros tipos de cromatografía, la fase móvil no interactúa con las
moléculas del analito, su única función es la de transportar el analito a través de la
columna.
Columnas. Cromatográficas La selección de estas dependerá de la polaridad de
los componentes que se desean separar y analizar; si la muestra es apolar,
entonces se escogerá una columna con una fase estacionaria lo menos polar.

Detector. Si la columna y el horno son el corazón de la CG (sea CGS o CGL), el

detector es su cerebro. Si el detector no funciona, no tiene sentido separar los
componentes de la muestra, ya que no se sabrá cuáles son. Un buen detector
debe ser sensible a la presencia del analito y responder a la mayoría de los
componentes.

Aplicaciones. Sirve para analizar la cantidad de compuestos halogenados en

fuentes de agua. Asimismo, de los suelos puede determinarse su nivel de
contaminación por pesticidas.

Analiza el perfil de ácido graso de muestras de distintos orígenes, ya sea vegetal o

animal.
ESTUDIANTE 5 LEIDY MARTINEZ
5 a. Para determinar la concentración de calcio en una muestra de leche se
construyó la siguiente curva de calibración:
Estándar Concentración Porcentaje de
(ug/cm3) Tramitancia (%)
1 2,1 86,0
2 4,4 72,0
3 6,8 62,0
4 9,1 54,0
5 11,6 48,0

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la

concentración teniendo en cuenta que: A=2-Log %T

-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le

permita determinar la ecuación correspondiente.
Método de mínimos cuadrados:

Concentració Estánd Porcentaje Absorban XY X2

n ar (x) Tramitanci cia (y)
(ug/cm3) na (%)
2.1 1 86 0.066 0.066 1
4.4 2 72 0.143 0.285 4
6.8 3 62 0.208 0.623 9
9.1 4 54 0.268 1.07 16
11.6 5 48 0.319 1.594 25
Sumatorias 15 322 1.002 3.638 55

Tabla N°1*
Fórmulas:
y=a+bx
Donde :
y=Valor proyectado , estimadoo pronostico de y .
a=Punto donde la recta corta el eje
b=La pendiente de la recta , la tendencia
x=cualquier valor de estandar seleccionado

n ∑ xy−∑ x ∑ y
b= 2
n ∑ x 2−(∑ x)

a=
∑ y −( b∗∑ x )
n n
Obtenemos la ecuación a través de las fórmulas:
Datos de acuerdo con la Tabla N°1:
n=5

∑ xy =3.638
∑ x =15
∑ y=1.002
∑ x 2=55
Aplicamos las fórmulas:

n ∑ xy−∑ x ∑ y
b= 2
n ∑ x 2−(∑ x)

5 ( 3.638 ) −(15)(1.002)
b=
5 ( 55 ) −(15)2
18.19−15.03
b=
275−225
3.16
b=
50
b=0.0632

Tendríamos que la ecuación es:

y=a+bx
y=0.0108+0.0632 x

5b. A partir de la curva anterior, determine la concentración de calcio en una

muestra de leche con una Tramitancia de 58 %
¿????
5c. ¿Cuáles son los pasos a seguir para cuantificar un analito por medio de
espectroscopia UV-Vis?
1. Se efectúa el “background” del equipo poniendo sendas cubetas de
metacrilato llenas de agua del grifo, tanto en el compartimiento de muestra
como en el de referencia.
2. Se aprieta la tecla “MODE” “Modification parameters” “YES”, “Nº” “1” “611”
3. Autozero.
4. Se retira la cubeta de la cámara de muestra, pudiéndose realizar las
medidas a continuación.

5d. ¿Cuáles son las propiedades de la fase móvil que se deben considerar en
cromatografía HPLC para la separación de compuestos? PH, fuerza iónica.
¿?¿¿

CONCLUSIONES

Cualquier instrumento puede ser clasificado de acuerdo con sus funciones,

limitaciones y posibilidades de modificación. Estas cualidades toman una
importancia primordial con relación a un instrumento de medición cuyas
indicaciones deberán aceptarse como verdaderas. Es obvio que las
manipulaciones y procedimientos de operación prescritos por el fabricante,
producirán, ordinariamente, los resultados especificados bajo las condiciones
estipuladas.

Pero también se ha implicado que una característica distintiva de los procesos

instrumentales es que todos requieren algún tipo de calibración inicial o continua.
Por esta razón un análisis dado, realizado instrumentalmente en una o dos
muestras, puede resultar más laborioso y es posible que no proporcione más
información que cuando se hace siguiendo método químico clásico.

BIBLIOGRAFIA
Rodríguez, Alonso, Juan José. (2014). Química y análisis químico (pp. 292-296).
Murcia: Cano Pina. Recuperado
de http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2460/lib/unadsp/reader.action?
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Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D.

(2012). Introducción a la cromatografía líquida de alta resolución (pp. 11-92).
Madrid: Editorial Universidad Autónoma de Madrid. Recuperado
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Rodríguez, Alonso, Juan José. (2014). Química y análisis químico (pp. 329-357).

Murcia: Cano Pina. Recuperado
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Chatwal, G. R., Anand, S. K. (2008). Spectroscopy : atomic and molecular (pp.

409-435). Mumbai: Himalaya Publishing House. Recuperado
de https://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2538/lib/unad-ebooks/reader.action?
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Método de mínimos cuadrados, tomado de

https://es.slideshare.net/arturosanchezpadilla1/mtodo-de-mnimos-cuadrados-
39818851