Análisis Microbiológico del Agua

Microbiología y Biotecnología
Juan Pablo Delgado

Introducción:
Realizar un análisis del agua es fundamental, debemos comprobar que sea potable para su
consumo, tanto humano o industrial. Y es porque el agua tiene numerosos usos a nivel casero
o industrial. Se usa tanto para procesos de fabricación, como para lavado de maquinaria o
aseo personal. Sin olvidar del importante uso para consumo humano.
Para ello la resolución 2125 de 2007 establece las características que debería tener un medio
acuoso para ser considerado potable, para determinar por medio de bioindicadores si el medio
acuoso no es potable. Para ello, se busca la presencia de la bacteria E. coli o la presencia de
los microorganismos coliformes totales, si en el medio hay alguno de estos dos, se considera
que el medio acuoso no es potable.
En esta práctica se hará las técnicas de presencia-ausencia y filtración de membra.
Objetivos:
• Evaluar si hay presencia o ausencia de microorganismos patógenos para el ser
humano.
• Determinar si las pruebas son positivas o negativas para E. coli o coliformes totales
Lista de materiales:
1. Erlenmeyer
2. Kit comercial (Ready Cult)
3. Filtro por membrana
4. Agar selectivo (Cromo Cult)
5. Caldo Ec-mug
6. Lampara de luz violeta
7. Caldo Billis Verde Brillante
8. Campana Durham

Procedimiento:
A. Presencia-Ausencia
1. La técnica de presencia-ausencia consiste en determinar si hay presencia o
ausencia de E. coli o coliformes totales. Para ello se van a tomar tres muestras
diferentes de 100 ml y se agrega cada una a un Erlenmeyer esterilizado.
2. Una vez se tiene los Erlenmeyers llenos, se le agrega un kit comercial
llamado: Ready Cult. Una vez se añade a cada muestra se agita la muestra
 para que se disuelva completamente y se procede a anotar el primer color que
haya salido.
3. Se incuba durante 24 horas a 35 grados centígrados.
4. Una vez pasa el periodo de incubación se procede hacer la lectura, para ello
se debe observar si hay algún cambio de color en la muestra con respectó al
primero color que se tenía anteriormente.
Si hay cambio de color quiere decir que hay presencia de coliformes totales.
Pero si la muestra tiende a tener fluorescencia, quiere decir que hay presencia
de la bacteria E. coli.

B. Filtración por membrana

Esta técnica se divide en dos partes; la presuntiva y la confirmativa, esta se realiza en
dicho orden.
1. Presuntiva:
I. Se va tomar una muestra de 100 ml y dicha muestra se agrega a un
sistema de filtración que implementa el filtro de membrana, este
sistema de filtración hará un procedimiento de “colador” para la
muestra.
II. Una vez realizado el proceso de filtración se toma el filtro de
membrana y se añade sobre la superficie de un agar selectivo Cromo
Cult.
III. Cuando ya se añade el filtro de membrana al agar, se pasa a incubar
durante 24 horas a 35 grados centígrados.
IV. Para la lectura de este se lee si son de color rojo o color azul. Si son
de color rojo, quiere decir que son sospechosas para coliformes totales
y si son de color azul, quiere decir que son sospechosas para E. coli.

2. Confirmativa:
I. Cada colonia sospechosa se siembra en un medio confirmativo, un
medio para E. coli y otro medio para coliformes totales.
II. Para las colonias de E. coli se siembran en un caldo Ec-mug y se
dejarán incubando durante 24 horas a 42 grados centígrados. En
cambio, para las colonias de coliformes totales se incubarán en un
caldo llamado Billis Verde Brillante, añadido con una campana
Durham. Estas colonias se incubarán durante 24 horas a 35 grados
centígrados.
III. Para la lectura de las colonias de E. coli, se busca determinar si hay
fluorescencia en el medio, para ello se lleva el tubo de ensaño junto a
una lampara de luz violeta. Si hay fluorescencia la muestra es positiva
para bacteria E. coli, si no, será negativo.
IV. Para la lectura de coliformes totales se busca la producción de gases.
Si hay producción de gas será positiva para coliformes, si no, será
negativo.