1- ¿Qué es cinética enzimática, como se expresa la ecuación de Michael

Menten, como se determina esta ecuación, y qué significado tiene?

La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de muchas

reacciones enzimáticas. Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude
Menten. Este modelo sólo es válido cuando la concentración del sustrato es mayor
que la concentración de la enzima, y para condiciones de estado estacionario, es
decir, cuando la concentración del complejo enzima-sustrato es constante.

Determinación de constantes[editar]
Para determinar la velocidad máxima de una reacción enzimática, la concentración de
sustrato, ([S]) se aumenta hasta alcanzar una velocidad constante, de formación de producto.
Esa es la velocidad máxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la enzima
están saturados con sustrato.

Diagrama de velocidad de reacción y constante de Michaelis-Menten.

Velocidad de reacción[editar]
La velocidad V indica el número de moléculas del sustrato que se convierten en producto por
segundo. Con concentraciones crecientes de sustrato[S], la enzima va acercándose
asintóticamente a su velocidad máxima Vmax, pero nunca la alcanza. Por esta razón, no hay un
valor de [S] determinado para la Vmax. De todas formas, se puede definir un parámetro
característico de la enzima empleando la concentración de sustrato a la cual se alcanza la
mitad de la velocidad máxima (Vmax/2).

Constante de Michaelis[editar]
Artículo principal: Constante de Michaelis

Aunque es imposible medir exactamente la concentración de sustrato que da Vmax, las enzimas
pueden caracterizarse mediante la concentración de sustrato a la cual la velocidad de
reacción es la mitad de la velocidad máxima. Esta concentración de sustrato se conoce como
constante de Michaelis-Menten (KM).
Para enzimas que exhiben una cinética de Michaelis-Menten simple esta constante representa
la constante de disociación del complejo enzima-sustrato (ES) (o la inversa de la afinidad entre
 enzima y sustrato). Valores bajos indican que el complejo ES está unido muy fuertemente y
raramente se disocia sin que el sustrato reaccione para dar producto.
En estos casos se obtendrá una KM diferente según el sustrato específico sobre el que actúe
la enzima (como sucede en el caso de enzimas que actúan sobre sustratos análogos) y según
las condiciones de reacción en que se realicen las mediciones.

2- ¿Qué es el Km de una enzima, qué importancia tiene ese valor?

os estudios sistemáticos del efecto de la concentración inical del sustrato sobre la actividad enzimática
comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de catálisis enzimática. En 1913, Leonor
Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta teoría y
propusieron una ecuación de velocidad que explica el comportamiento cinético de los enzimas.

Para explicar la relación oservada entre la velocidad inicial (v 0) y la concentración inicial de sustrato
([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren en dos
etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo
enzima-sustrato da lugar a la formación del producto, liberando el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinéticas individuales de cada proceso y también reciben
el nombre de constantes microscópicas de velocidad. Según esto, podemos afirmar que:

 v1 = k1 [E] [S]

 v2 = k2 [ES]
 v3 = k3 [ES]

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que

la concentración total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reacción) es:
 [ET] = [E] + [ES]

Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

Este modelo cinético adopta la hipótesis del estado

estacionario, según la cual la concentración del complejo
enzima-sustrato es pequeña y constante a lo largo de la
reacción (Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de
formación del complejo enzima-sustrato (v 1) es igual a la
de su disociación (v2+ v3):

v1 = v2 + v3

Además, como [ES] es constante, la velocidad de

formación de los productos es constante:

v = v3 = k3 [ES] = constante.

Como v1=v2+v3, podemos decir que:

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

Despejando [ES], queda

que:   , siend

o   , en donde la expresión
(k2+k3)/k1 se ha sustituído por KM, o constante
de Michaelis-Menten. Este enlace nos aporta
una explicación sobre las razones que hacen de
la KM un parámetro cinético importante.

Por lo tanto, en el estado estacionario, la

velocidad de formación del producto es:

v = v3 = k3 [ES] =

Para cualquier reacción enzimática, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos
extremos:

 A concentraciones de sustrato pequeñas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los términos
entre paréntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante, k obs, de forma que la
expresión queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual la reacción es un proceso cinético de
primer orden.
 A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de reacción es
independiente de la concentración del sustrato, y por tanto, la reacción es un proceso cinético de
orden cero. Además, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo
parámetro, la velocidad máxima de la reacción (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que
se alcanzaría cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.

Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general de la velocidad, (la fórmula recuadrada

anteriormente), obtenemos la expresión más conocida de la ecuación de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuación de

Michaelis-Menten. Se dice que su cinética no es
Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostéricos,
cuya gráfica v frente a [S] no es una hipérbola, sino
una sigmoide (Figura de la derecha). En la cinética
sigmoidea, pequeñas variaciones en la [S] en una zona
crítica (cercana a la KM) se traduce en grandes
variaciones en la velocidad de reacción.

3- ¿Qué es un inhibidor enzimático, cuántas cuales de

inhibidores y cómo reaccionan hay, de ejemplo de cada
clase
nhibidores enzimáticos

Un inhibidor enzimático es algún compuesto que

impide que alguna, o algunas, enzimas catalicen.
Este tipo de compuestos son específicos, o sea que
pueden inhibir a un grupo de enzimas pero no
tener ninguna actividad con otras enzimas. Los
inhibidores, dependiendo de la forma en que
actúan se han clasificado en dos grandes grupos:
 
· Inhibidores irreversibles
· Inhibidores reversibles
 
Los inhibidores reversibles a su vez se dividen en
dos subgrupos:
 
· Inhibidores reversibles competitivos
· Inhibidores reversibles no competitivos
 
A continuación se analiza la forma en que actúa
cada uno de ellos.
 
INHIBIDORES IRREVERSIBLES
 

Este tipo de compuestos se unen, de manera

irreversible, con el grupo R de algún aminoácido de
la enzima, formando un complejo enzima -
inhibidor (EI), el cual es incapaz de llevar a cabo el
acto de catálisis, debido a que el complejo EI no
puede unir al sustrato para formar ES:

6.9
 

Una enzima que colisiona con un inhibidor de este

tipo y forma el complejo enzima inhibidor, queda
incapacitada para seguir catalizando.
Generalmente estos compuestos son muy tóxicos,
si su concentración es muy alta, dentro de un
sistema viviente, pueden detener una vía
metabólica debido a la pérdida total de alguna de
las enzimas que catalizan esa serie de reacciones.
Figura 6.16.
 
INHIBIDORES REVERSIBLES
 
A diferencia de los inhibidores irreversibles, los
reversibles reaccionan con la enzima, pero el
complejo enzima inhibidor producido puede
separarse para formar la enzima libre más el
inhibidor. Mientras I permanezca unido a E la
enzima es inactiva puesto que no puede unir al
sustrato:

6.10

La enzima libre, producida por la reacción que

transforma EI en E + I, no se ha modificado y por lo
tanto tiene actividad catalítica. Además, la enzima
libre puede colisionar, o con una molécula de
inhibidor, o con una de sustrato. En el primer caso
forma EI y en el segundo ES, el cual se rompe en E
+ P. La probabilidad de que una molécula de
enzima encuentre una molécula de sustrato, o de
inhibidor, depende de la concentración a la que se
encuentren estas moléculas, si hay más inhibidor
que sustrato, es más probable que se forme EI que
ES. Hay dos tipos de inhibidores reversibles los
cuales se estudian por separado. Figura 6.17.

INHIBIDORES REVERSIBLES COMPETITIVOS

 
Este tipo de inhibidores tienen la característica de
ser químicamente muy parecidos al sustrato, de tal
manera que pueden ocupar el sitio activo de la
enzima, pero ésta no los transforma, mientras el
inhibidor esté dentro del sitio activo el verdadero
sustrato no puede entrar y por lo tanto no es
posible que se forme ES y no hay formación de
producto. Si usamos el ejemplo de la cerradura y la
llave, podemos pensar en una llave que entra en la
chapa pero no puede abrirla porque no es la
correcta. Sin embargo, mientras la llave
inadecuada esté dentro de la chapa, no es posible
que entre la llave correcta. Figura 6.18.

Los inhibidores reversibles se estudian en el

laboratorio disponiendo series de recipientes. Por
ejemplo, suponga que se tienen tres series, cada
una con cinco tubos. Los tubos de cada serie se
numeran: 1, 2, 3, 4, y 5 para la primera serie; 1',
2', 3', 4', y 5' para la segunda y 1'', 2'', 3'', 4'' y 5'' la
tercera. En los quince tubos se dejan constantes
los siguientes factores: temperatura, tiempo de
incubación, pH y [E]. La concentración de sustrato
va en ascenso en cada uno de los tubos de cada
serie, pero será igual en sus homólogos, por
ejemplo: a los tubos 1, 1' y 1'' no se les agrega
sustrato y van a ser los controles. A los tubos 2, 2' y
2'' se les agrega una determinada cantidad de
sustrato pero la misma en todos estos tubos. A los
recipientes 3, 3' y 3'' se les agrega más sustrato que
los anteriores por lo que los tubos 5 de cada una de
las series son los que tienen una concentración
mayor de sustrato. Finalmente, a los tubos de una
serie no se les agrega inhibidor, a todos los tubos
de otra serie se les pone inhibidor a la misma
concentración y a la tercera serie se les agrega
inhibidor a una concentración mayor de la que se
les puso en la serie anterior.
 
Una vez concluido el tiempo de incubación se
detiene la reacción y se mide cuantitativamente la
cantidad de producto que se formó en cada uno de
los tubos, con lo que se puede obtener la velocidad
de la reacción. Así se pueden formar parejas de
puntos ([S], v0), la primera serie (tubos 1,2,3,4 y
5), representa los datos de la acción de la enzima
sobre el sustrato sin la presencia de inhibidor. En
los datos obtenidos con los tubos 1', 2', 3', 4' y 5', se
tiene la actividad de la enzima con la presencia de
una determinada concentración de inhibidor y con
los resultados de la serie 1'', 2'', 3'', 4'' y 5'', se tiene
la acción de la enzima con una concentración de
inhibidor mayor que en la serie anterior. A los
datos de cada uno de los tres experimentos se les
calcula el recíproco (1/[S], 1/v 0) y se grafican. Si el
inhibidor es competitivo se obtiene la gráfica
característica que se presenta en la Figura 6.19:
Figura 6.19 Inhibición competitiva. (Figura elaborada por el autor).

Del análisis de la gráfica de la Figura 6.19 se

obtienen varias características que presentan los
inhibidores competitivos:
 
1. Observe el lector que las rectas obtenidas con la
presencia, o ausencia de inhibidor, interceptan al
eje y (1/v0), en el mismo punto, y como, de
acuerdo con la ecuación de Henderson -
Hasselbach, el intercepto es igual a 1/V max, se
puede concluir que un inhibidor competitivo no
modifica la velocidad máxima de la enzima. El
que una enzima encuentre un inhibidor, o un
sustrato, para formar los complejos respectivos,
depende de la concentración de estas substancias.
Si la concentración de sustrato se hace mucho
mayor que la de inhibidor, es mucho más probable
que la enzima casi siempre colisione con sustrato y
la inhibición se hace imperceptible, por lo que la
enzima puede llegar a su velocidad máxima.
2. Por otro lado, las rectas tienen una pendiente
más grande a medida que la concentración del
inhibidor aumenta. De acuerdo con la ecuación de
Henderson - Hasselbach, la pendiente de una recta
sin inhibidor es igual a Km/Vmax, si los inhibidores
competitivos no modifican Vmax la única forma de
aumentar el quebrado anterior es aumentando la
Km, de tal manera que los inhibidores
competitivos producen un aumento de la Km de la
enzimaun inhibidor competitivo disminuye la
afinidad de la enzima por el sustrato. Esto mismo
expresado en términos más sencillos, es
equivalente a decir que .
 
INHIBIDORES REVERSIBLES NO COMPETITIVOS
 

A diferencia de los inhibidores competitivos, los no

competitivos se unen a la enzima en un sitio
específico diferente al activo. De esta propiedad se
deriva su nombre, pues no compiten con el
sustrato para ocupar el sitio activo. Aún más, este
tipo de compuestos puede tener una estructura
química totalmente diferente a la del sustrato. Se
piensa que al unir a la enzima un inhibidor de este
tipo, se produce un cambio en su estructura
tridimensional que altera la configuración del sitio
activo, imposibilitando el reconocimiento del
sustrato. Cuando EI se rompe, la enzima adquiere
su conformación activa. Figura 6.20.

Figura 6.21 Inhibición no competitiva. (Figura elaborada por el autor).

Se supone que la gráfica que se presenta en la
Figura 6.21 fue obtenida de un experimento similar
al que se describió en la sección anterior,
solamente que el inhibidor usado es no
competitivo. En este caso se puede hacer énfasis
en lo siguiente:
 
1. Las rectas con o sin inhibidor interceptan al
eje x (1/[S]), en el mismo punto y de acuerdo a la
ecuación de Michaelis - Menten, ese punto vale -
1/Km, por lo que se puede concluir que: los
inhibidores no competitivos no afectan la K m de
la enzima, es decir, no alteran la afinidad de la
enzima por su sustrato.
2. Las rectas sin inhibidor interceptan al
 

eje y (1/v0), en puntos más bajos que las que sí

tienen. A mayor concentración de inhibidor, el
intercepto está más arriba. Cuando no hay
inhibidor, el punto de intersección es igual a
1/Vmax. Para que este punto se desplace hacia
arriba y coincida con los puntos de intersección de
las rectas con inhibidor, Vmax debe ser más
pequeña. Esto significa que la presencia de un
inhibidor no competitivo disminuye la velocidad
máxima de la enzima.
4- ¿Cómo y por qué se utiliza la determinación de la actividad
de una enzima en el suero para el pronóstico de una
alteración metabólica?.

Distribución de las enzimas en los espacios extra e intracelular En la célula las ez pueden
encontrarse en el líquido celular (citosol) o bien pueden estar fijadas a determinadas organelas
(ej. Adheridas a las mitocondrias). Hay enzimas 100 % citoplasmáticas es decir que se
encuentran solamente en el citosol, a estas se las llama uniloculadas. Por ejemplo GPT
(glutámico-pirúvico transaminasa) ó LDH (láctico deshidrogenasa). Otras enzimas están en un
cierto porcentaje en las organelas y otro porcentaje en el citoplasma, es decir que son
biloculadas, como la GOT (glutámico-pirúvico transaminasa) que está 60% en el citoplasma y
40% en mitocondria, MDH (malato deshidrogenasa) 50 % en citoplasma y 50% en mitocondria.
En las células somáticas normales, las actividades catalíticas de las numerosas enzimas se
mantienen muy constantes, ya que existe un equilibrio entre la síntesis y la degradación
enzimática, pero constantemente llegan al espacio extracelular pequeñísimas cantidades de
muchas enzimas intracelulares. En muchas enfermedades orgánicas está aumentada la salida
de enzimas desde el interior celular, esto puede deberse por un aumento de la permeabilidad
de las membranas celulares, o bien por disolución de la estructura celular. De esta manera se
originan modificaciones del nivel enzimático en el plasma sanguíneo, de indudable valor que
ayudan a realizar un diagnóstico. Variantes enzimáticas Las enzimas se subdividen en 3 grupos:
1) Isoenzimas: son variaciones en la molécula de la enzima que le da características físico-
químicas (distinto pH, distinto Km, diferente acción de inhibidores y activadores) e
inmunológicas diferentes, localización o lugares de origen diferentes; de modo que realizan el
mismo tipo de reacción y actúan sobre el mismo sustrato pero en condiciones distintas. Las
causas de estas múltiples formas enzimáticas pueden ser 3: La información genética para
estas moléculas enzimáticas están localizadas en distintos genes. Por ejemplo la MDH tiene 3
isoenzimas que están codificadas en los cromosomas 1, 4 y 6. Cuando los monómeros
constituyentes de una ez (ez oligoméricas) están codificadas en genes diferentes. Por ejemplo
la LDH, tiene 2 monómeros el M se encuentra en el cromosoma 11 y el H se encuentra en el
cromosoma 12. Mutaciones: hay genes que codifican para ciertas ez que están predispuestos
a mutar más que otros. Por ejemplo la Glutámico Deshidrogenasa (GLDH), presenta hasta 50
formas diferentes, todas son normales, pero difieren en algunos aminoácidos, estas
diferencias aminoacídicas se deben a mutaciones puntuales. 2) Heteroenzimas: enzimas de
función semejante, específica de las diversas especies biológicas, por ejemplo la LDH del
hombre y del conejo. 3) Aloenzimas: variante de ez e isoez condicionadas genéticamente que
solo aparecen en determinados individuos de una misma especie. La mayoría de las
aloenzimas no conducen a las manifestaciones patológicas. Sirven para caracterizar el tipo
bioquímico de un individuo. Por ejemplo hay aloenzimas de la Glucosa-6-Fosfato
Deshidrogenasa y de la Pseudocolinestearasa. Fundamentos clínicos de la enzimología Las ez
plasmáticas se clasifican de acuerdo a Bücher en 3 grandes grupos: Enzimas Plasmoespecíficas:
Serían las enzimas que tienen su lugar de acción en el plasma. Estas enzimas son sintetizadas
en determinados tejidos y vertidas a la sangre activamente, que es su lugar de acción, donde
se encuentran su sustrato y su coenzima. Por ejemplo las enzimas del complejo protrombínico,
lipoproteinlipasa, plasminógeno y pseudocolinesterasa. Este grupo de enzimas son
sintetizadas fundamentalmente por el hepatocito y son muy activas en el plasma (a diferencia
de otras que si están aumentadas indican daño). Entonces de este grupo de ez nos interesa
saber sus valores inferiores; porque una disminución de su actividad (normalmente alta en
suero) indica una alteración en la síntesis, y como la mayoría son producidas en el hígado esto
nos estaría indicando una alteración de la funcionalidad hepática. Enzimas secretadas o
exocitoenzimas Son enzimas secretadas por glándulas ó tejidos muy especializados, su lugar
de acción está alejado, es el caso de las enzimas digestivas segregadas por el páncreas y que
van al duodeno a ejercer su acción, como por ejemplo la amilasa, lipasa, tripsina, etc.
Clínicamente, estas enzimas en sangre están en baja actividad. Aumentarían sus niveles en la
patología aguda como la pancreatitis y en casos de patología crónica, donde la glándula está
hipofuncionante, por lo que su actividad estaría disminuida en su lugar de acción; en este caso
en duodeno. Enzimas celulares o endocitoenzimas Son todas las enzimas que tienen su lugar
de acción dentro de la misma célula que las sintetiza, no tienen acción en plasma por falta de
sustrato y de coenzima. Se dividen es 2 grupos: CATEDRA DE BIOQUIMICA – FACULTAD DE
MEDICINA - UNNE Página 2 ENZIMAS 1) Ubicuas: Son todas las que intervienen en el
metabolismo general como por ejemplo LDH, MDH, ALT o Alanina-aminotransferasa, AST o
Aspartato-aminotransferasa. A estas ez se las denomina comúnmente transaminasas y su otra
sinonimia es GPT y GOT. 2) Organoespecíficas: Enzimas especificas de determinados órganos ó
tejidos que actúan en procesos metabólicos específicos de ciertos tejidos. Por ejemplo la
GLDH, y SDH. División de las enzimas que aparecen en el plasma según su origen Grupo
Ejemplos Especificas del plasma Protrombina, plasminógeno, ceruloplasmina,
lipoproteinlipasa, pseudocolinstearasa De secreción Amilasa pancreática, salival, fosfatasa
prostática, pepsinógeno. Enzimas celulares De vías principales LDH; MDH; Glicerol-3- fosfato
Deshidrogenasa; 1,6 difosfo-fructo-aldolasa; GOT; GPT. Organoespecificas Ez del ciclo de la
urea; glucosa-6-fosfatasa; 5´ND. Para la valoración enzimática hay que tener en cuenta: a)
Distribución de las enzimas; o sea conocer la topología enzimática frente a un aumento de una
enzima para saber que correlación clínica tiene. b) Localización de las enzimas dentro de la
célula; para poder entender que tipo de daño sufrió la misma. Por ejemplo si encontramos un
aumento de enzimas citoplasmáticas indica que la alteración no es tan severa, pero si además
aumentan las enzimas mitocondriales significa que existen en ese tejido focos necróticos que
permiten el pasaje de las mismas que solamente aparecen en sangre en casos de necrosis
intracelular. c) Conocer el tiempo de vida media de esa enzima; para poder interpretar los
tiempos de desaparición de esas actividades enzimáticas aumentadas. Por ejemplo si estamos
frente al aumento plasmático de una enzima de vida media larga, llevará más tiempo la
normalización de sus valores desde el momento de su entrada al plasma. En cambio, si están
aumentado los valores de cierta ez y su vida media es corta, esta se normaliza más
rápidamente. Determinación de enzimas séricas hepáticas El hígado es una glándula
importante porque allí no solo se realiza la síntesis proteica, sino también la detoxificación de
una serie de compuestos que deben ser eliminados de nuestro organismo. Contiene un gran
número de enzimas, pero las que tienen mayor interés clínico son las transaminasas, la
fosfatasa alcalina, la gammaglutamiltranspeptidasa y 5´ND. Schmidt y colaboradores llegaron a
determinar que no todas las células del hígado tenían la misma concentración enzimática, sino
que la concentración dependía del tipo de metabolismo que desarrollaba y esto está en
relación con la disponibilidad de oxigeno que tienen los hepatocitos. Los hepatocitos cercanos
al espacio porta tienen mayor disponibilidad de oxigeno que los hepatocitos cercanos a la
vena centrolobulillar, por lo cual es diferente el incremento de enzimas en sangre ya sea que
provengan de hepatocitos de la zona centrolobulillar o periportal. Transaminasas Son enzimas
que realizan reacciones de transaminación (consiste en la transferencia del grupo amino de
una aminoácido dador a un cetoácido aceptor; convirtiéndose el aminoácido dador en un
cetoácido y el cetoácido aceptor en un aminoácido) dando lugar a aminoácidos y cetoácidos
distintos de los originales. En el hígado se han detectado no menos de 60 reacciones de
transaminación, pero las únicas transaminasas con valor clínico son la GOT y la GPT. Estas
enzimas no son específicas del hígado y se hallan también en músculo, corazón, páncreas y
cerebro. La GOT está constituida por dos isoenzimas, una citoplasmática y otra mitocondrial,
mientras que la GPT es exclusivamente citoplasmática. Las concentraciones normales de estas
enzimas en plasma traducen la normal destrucción de las células que las contienen, el cociente
normal GOT/GPT es de aproximadamente 1,3. En todas las enfermedades hepáticas que
cursan con necrosis celular existe hipertransaminasemia, más intensa cuanto más aguda sea la
lesión. Las hepatitis víricas y tóxicas, y más raramente la insuficiencia cardíaca de instauración
súbita y el hígado de shock, suelen producir niveles más de 10 veces superiores a los normales.
El hallazgo de una elevación moderada de las transaminasas (menos de 10 veces los valores
normales) es más difícil de interpretar y puede corresponder a una hepatitis crónica, a una
hepatitis aguda de poca intensidad, a la fase de regresión de una hepatitis aguda, pero
también a una cirrosis, a una enfermedad biliar o a muchos otros procesos. Un cociente
GOT/GPT superior a la unidad con hipertransaminasemia moderada sugiere una hepatopatía
alcohólica o neoplásica. Gammaglutamiltranspeptidasa La γGT, conocida también como
gammaglutamiltransferasa, cataliza la transferencia de grupos gammaglutamil de un péptido a
otro o de un péptido a un aminoácido. El tejido más rico en esta enzima es el riñón, seguido
del páncreas, el hígado, el bazo y el pulmón. En las células se localiza en las membranas,
fundamentalmente del retículo endoplásmico liso, en los microsomas, en la fracción soluble
del citoplasma y en los conductillos biliares. Los valores séricos normales de γGT difieren en
ambos sexos, siendo más CATEDRA DE BIOQUIMICA – FACULTAD DE MEDICINA - UNNE Página
3 ENZIMAS elevados en los varones que en las mujeres. La γGT aumenta en la mayoría de las
enfermedades del hígado, por lo que su especificidad es escasa. La γGT es una enzima
sumamente sensible, aumenta en menor o mayor grado en todas las hepatobiliopatías, los
mayores aumentos se ven en procesos obstructivos o neoplásicos, también está aumentada
en hepatitis. Los aumentos más importantes se observan en procesos tumorales, en la
colestasis intrahepática o extrahepática por proliferación de conductillos biliares, además su
síntesis es inducida por el alcohol y también por barbitúricos Tener en cuenta estos 2 factores
cuando se solicita su determinación. La actividad de la enzima es inhibida por estrógenos y
progesterona, importante a tener en cuenta porque existe una colestasis del embarazo que
cursa con γGT normal por estar inhibida la ez por esas 2 hormonas que están aumentadas en
el embarazo. La γGT es una enzima sumamente sensible, aumenta en todas las
hepatobiliopatías, en menor o mayor grado. La γGT es un parámetro muy útil para el control
de los pacientes alcohólicos, aunque también pueden traducir la exposición a tóxicos
industriales. La interrupción del consumo de alcohol, en ausencia de otras causas de inducción
enzimática, es seguida de una reducción inmediata de los valores plasmáticos de γGT, hasta
normalizarse completamente al cabo de 6-8 semanas. Fosfatasa Alcalina La FAL sérica tiene
varios orígenes (hígado, riñón, placenta, intestino, huesos, leucocitos), aunque las fuentes más
importantes son el hígado, los huesos y el intestino. Durante el crecimiento, los niveles séricos
son altos debido al aumento de la fracción ósea, que traduce la actividad osteoblástica en el
hueso. Lo mismo ocurre durante el embarazo, sobre todo en el tercer trimestre, en el que las
elevaciones se deben a fosfatasa alcalina de origen placentario. La FAL tiene tres isoenzimas
porque se origina en tres genes diferentes, una isoenzima de origen placentario, una intestinal
y una que se llama no placentaria/no intestinal. Para establecer el origen del aumento de la
fosfatasa alcalina se recurre a la separación electroforética de sus isoenzimas. Otro método
consiste en la determinación de las fracciones termoestable (hepática) y termolábil (ósea). La
modificación de la proporción de ambas fracciones permite conocer cuál es la responsable de
la elevación de los niveles séricos. Sin embargo, en la práctica es suficiente efectuar una
valoración indirecta mucho más sencilla, que consiste en la determinación de otras enzimas
que se elevan en caso de colestasis, como la γGT o la 5-nucleotidasa. El aumento de fosfatasa
alcalina de origen hepático revela obstrucción biliar intra o extrahepática, con ictericia
(coloración amarillenta de piel y mucosas, producidas por el aumento de bilirrubina por
encima de 2 mg/dl) o sin ella, o la existencia de un proceso hepático expansivo, infiltrativo o
de naturaleza granulomatosa. Determinación de enzimas séricas pancreáticas La
comprobación de cifras elevadas de las diferentes enzimas pancreáticas en plasma y orina
apoya fuertemente la existencia de una lesión pancreática. Este hallazgo, junto con la clínica y
los datos obtenidos mediante las técnicas de imagen, constituyen los pilares del diagnóstico de
la pancreatitis aguda. Las principales causas de pancreatitis son las enfermedades de las vías
biliares y el alcoholismo crónico, situación en la que las enzimas pancreáticas elevan sus
niveles en sangre. Sin embargo no existe relación directa entre la duración y la altura de los
aumentos de actividad enzimática en suero con la gravedad y pronostico de esta enfermedad.
Una enzima que se dosa es la amilasa, ya que en la práctica y en condiciones normales, sólo el
páncreas y las glándulas salivales contribuyen de forma significativa al mantenimiento de los
niveles séricos de esta. No obstante, además de originarse en el páncreas, esta enzima
proviene de otros órganos, como las trompas de Falopio, los ovarios, las glándulas salivales, el
intestino, el pulmón, la próstata y el hígado. Por esta razón, procesos inflamatorios
desarrollados en estos órganos pueden provocar elevaciones de las cifras de amilasa. Debido a
la inespecificidad de la ez suele utilizarse como recurso la detección sérica de la fracción P3 de
la amilasa (isoenzima de origen exclusivamente pancreático, aislada por electroforesis) que ha
sido observada de forma casi constante en la pancreatitis aguda y está prácticamente ausente
en los abdómenes agudos de otras etiologías. Pero además pueden emplearse otras
alternativas, como es la cuantificación de la lipasa sérica, que es la segunda determinación
más frecuentemente empleada para diagnóstico de la pancreatitis aguda. La lipasa es más
específica del páncreas, aunque no totalmente, ya que también es producida por el intestino,
la faringe, el riñón y el bazo que en procesos inflamatorios de alguno de estos provocará
elevaciones de la enzima. Otra posibilidad es fraccionar la amilasa en sus isoenzimas salival (S)
y pancreática (P). La inhibición de la isoamilasa tipo S, por un doble anticuerpo monoclonal, es
un método sencillo y rápido que permite juzgar la elevación aislada de la enzima de origen
pancreático, evitando así el problema de confusión con hiperamilasemias extrapancreáticas.
En oposición al aumento de amilasa, que también puede estar elevado en enfermedades no
pancreáticas (ejemplo parotiditis) el aumento de lipasa solo puede deberse a afecciones del
páncreas. La amilasa, se filtra por el glomérulo por su bajo peso molecular, en cambio la lipasa
al presentar un alto peso molecular no se filtra y en consecuencia no aparece en orina. Por tal
motivo, es posible determinar la amilasa en orina, recogiendo la muestra de dos horas. Sin
embargo, en ocasiones, es posible detectar niveles urinarios de amilasa elevados durante algo
más de tiempo que en sangre, ya que en algunos casos la elevación de amilasa sérica puede
ser fugaz. Las enzimas pancreáticas pueden ayudar también en el CATEDRA DE BIOQUIMICA –
FACULTAD DE MEDICINA - UNNE Página 4 ENZIMAS caso de pancreatitis crónica. En esta
enfermedad, la disminución de los niveles de amilasa total, amilasa pancreática, lipasa y
tripsina orientan hacia la existencia de pérdida avanzada de parénquima exócrino. Por el
contrario, su elevación, aunque con intensidad discreta, coincidiendo con brotes de dolor,
señalaría la permanencia de actividad inflamatoria aguda sobre tejido funcionante, aun en el
contexto de enfermedad crónica. No menos importante es el tener en cuenta que en los casos
graves de necrosis pancreática pueden disminuir rápidamente las actividades enzimáticas
elevadas. En las determinaciones enzimáticas que no se realizan con suficiente precocidad
deja de ser posible el comprobar actividades elevadas. Determinación de enzimas séricas en el
infarto de miocardio Creatininafosfokinasa La CK es una ez dimérica formado por monómeros
que pueden ser de 2 tipos: M y B. Por lo tanto la CK tiene 3 isoenzimas: CK-MM (localización
muscular) o CK 3 CK-MB (localización cardíaca) o CK2 CK-BB (localización cerebral) o CK1 Los
distintos órganos presentan distribuciones diferentes de las isoenzimas. En el cerebro
solamente se observa CK-BB. La barrera hematoencefálica intacta parece ser impenetrable
para la CK, por lo que en general no debe contarse con la presencia de CK-BB en el suero. En
individuos sanos la actividad total de CK en suero se compone fundamentalmente de CK-MM.
En el infarto, no solo es de importancia la comprobación de la actividad CK-MB sino también
su proporción en la actividad total de la CK. Las determinaciones de CK y CK-MB ayudan
también a reconocer precozmente reinfartos o la extensión del infarto. Además del infarto
pueden encontrarse aumentos de la actividad sérica de la CK y CK-MB en otras lesiones del
miocardio. p.ej. en miocarditis, arritmias graves, intervenciones quirúrgicas. La CK está
aumentada en esfuerzos físicos, inyecciones intramusculares, heridas musculares y daño
hipóxico de los músculos esqueléticos. Este aumento se debe casi exclusivamente a lesiones
de la musculatura esquelética. Láctico Deshidrogenasa Tipo Composición Localización LDH1
HHHH Miocardio, eritrocito, riñón, páncreas LDH2 HHHM Miocardio, eritrocito, riñón LDH3
HHMM Páncreas, pulmón, leucocitos LDH4 HMMM Hígado, músculo esquelético LDH5
MMMM Hígado, músculo esquelético Es una ez. tetramérica formada por la combinación de
dos tipos de cadenas diferentes: las designadas H del miocardio y las M del músculo estriado
esquelético. Estas subunidades pueden combinarse de cinco maneras diferentes dando lugar a
las isoenzimas correspondientes. El infarto de miocardio es la muerte celular de las miofibrillas
causada por falta de aporte sanguíneo a una zona del corazón que en la mayoría de los casos
es a consecuencia de la oclusión aguda y total de la arteria que irriga dicho territorio. Esta
patología ocasiona diversas alteraciones humorales, como leucocitosis y aumento de la
velocidad de sedimentación globular (VSG). No obstante, desde el punto de vista diagnóstico,
sólo tiene importancia el aumento en la actividad sérica de ciertas enzimas, liberadas al
torrente circulatorio como consecuencia de la necrosis. Normalmente en el plasma la
concentración de la LDH 1 es menor que la de la LDH 2. En el infarto la alteración que se
manifiesta es el aumento de LDH1 que llega a valores que superan a la LDH 2. Esta alteración
aparece precozmente antes que los valores de LDH total supere su valor normal y permanece
alterado el isoenzimograma tiempo después que los valores de LDH total retornaron a la
normalidad por eso tiene valor para diagnóstico tardío dado que la alteración de la LDH1 es
patognomónico del infarto, en cambio la LDH2 es característica de los procesos de hemólisis
de los glóbulos rojos. En la práctica se determinan tres de ellas, CK, GOT y LDH, la velocidad
con que se activan es diferente para cada una de ellas. La más precoz es la CK (6-8 hs),
intermedia la GOT (16-48 hs) y más tardía la LDH (24- 60 hs). Los valores de las dos primeras se
normalizan al cabo de 3-4 días, mientras que la LDH permanece elevada entre 8 y 14 días. Es
importante recordar que estas enzimas no son específicas del corazón, puesto que se
encuentran en otros tejidos; por consiguiente, un valor anormal de cualquiera de ellas puede
deberse a un proceso distinto al infarto. Así pues, para sustentar el diagnóstico de necrosis
miocárdica se realizan determinaciones seriadas durante los primeros 3-4 días y se requiere
que muestren la curva de ascenso y su normalización típica para cada una de ellas. La
determinación de las isoenzimas de la CK y de la LDH facilita el diagnóstico y permite conocer
si el aumento se debe específicamente a un infarto de miocardio, ya que las isoenzimas CK-MB
y la LDH1 son casi exclusivas del corazón. Además, la primera puede estar anormalmente
elevada en algunos casos en que la actividad de la CK total es normal. Recientemente se ha
demostrado que ciertos marcadores como la mioglobina pueden ser más precoces, y también
las troponinas T e I, las cuales son más específicas que las enzimas utilizadas clásicamente. Los
valores máximos de estas enzimas presentan una correlación discreta con la extensión de la
necrosis y se han utilizado con fines pronósticos; no obstante, existen muchos factores
diferentes que influyen en el grado de actividad enzimática, por lo que este parámetro sólo
tiene un valor orientativo. CATEDRA DE BIOQUIMICA – FACULTAD DE MEDICINA - UNNE
Página 5 ENZIMAS Desde el punto de vista bioquímico los cambios que se producen en esta
enfermedad son: Iniciada la isquemia (falta de aporte sanguíneo) se producen cambios iónicos
intracelulares, la célula usa el oxígeno disuelto en el espacio intersticial. El miocito pierde
actividad contráctil; Se observa una reducción del metabolismo oxidativo por ende una
disminución de la disponibilidad del ATP, para compensar esto la célula usa las reservas de
creatinina fosfato, allí actúa la CK, la cual es rica en el tejido cardíaco, como consecuencia se
observan cambios electrocardiográficos inespecíficos; Posteriormente se produce la activación
de la glucólisis anaeróbica con aumento de la captación de glucosa, vasodilatación y una
pérdida de potasio y fosfato. Como consecuencia de la activación de la glucólisis anaeróbica se
produce un aumento de la concentración de lactato y protones que ocasiona acidosis celular.
Estos cambios son reversibles y se producen como un intento para tratar de compensar la falta
de oxígeno. Si la isquemia se prolonga en el tiempo estas alteraciones se tornan irreversibles.

5- Enzima o enzimas que se activan o son marcadores en los

siguientes alteraciones metabólicos: en una osteoporosis,
en un infarto del miocardio, en una hepatitis, en una
pancreatitis, en un cáncer de mama, cáncer de próstata.
¿Qué es la prueba de fosfatasa alcalina?
La prueba de fosfatasa alcalina mide los niveles de fosfatasa alcalina (FA) en la sangre. La FA
es una enzima que está en todo el cuerpo, pero principalmente en el hígado, los huesos, los
riñones y el aparato digestivo. Cuando el hígado está dañado, la FA puede filtrarse al torrente
sanguíneo. Los niveles elevados de FA pueden indicar daño en el hígado o enfermedades de
los huesos.

6- Otras enzimas que pueden ser marcadores de alteración

metabólica.

7- A qué se debe que la actividad de una determinada enzima

puede ser marcador de una alteración metabólica.

8- Mencione medicamentos que actúen activando o inhibiendo enzimas

en el metabolismo y diga su mecanismo de acción (ej sulfamidas,
atorvastatina, aspirina, captopril, sildenafilo, penicilinas,
cifrofloxacina.

9- Sulfonamidas. Han sido utilizadas primariamente, para las infecciones del

tracto urinario. En combinación con trimethoprim, también se utilizan para el
tratamiento de otitis, bronquitis, sinusitis y neumonías por Pneumocystis carinii.

10- Fueron las primeras sustancias químicas que se utilizaron para curar y prevenir
las infecciones bacterianas en el humano. De los más de 5000 productos de
esta familia desarrollados por los investigadores, solo 20 se utilizan hoy en día
de manera efectiva pues los gérmenes se han hecho resistentes a ellas

11-Traer otros ejemplos de fármacos que inhiban funciones enzimáticas

además de los mencionados.