UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y

BIOTECNOLOGÍA

DATOS INFORMATIVOS
Carrera: Alimentos
PAE N°: 03

Asignatura: Análisis Instrumental Fecha de Realización: 28/10/2020

Docente: Esteban Mauricio Fuentes Pérez Fecha de Presentación: 1/11/2020

Nivel: Tercer Semestre “A” Ciclo Académico: Oct 2020-Febrero 2021

Integrantes: Suarez Estefanía

Tuarez María
Ulloa Michelle

TEMA: CURVA DE CALIBRACION CON ESTANDAR INTERNO

I. OBJETIVOS

Objetivo general

 Desarrollar curvas de calibración por medio de adición de un patrón

interno.

Objetivo especifico

 Conocer la aplicación de la cromatografía de gases en el área de

alimentos.
 Identificar las ventajas y desventajas que existen al aplicar
calibración con patrón interno o externo y la adición de un estándar.
II. RESULTADOS

1. Ejercicio de aplicación del empleo de la técnica de preparación de curvas de

calibración con el empleo de estándar interno
Se analizan trazas de benceno en una muestra de agua, usando análisis del
espacio de cabeza. Se adicionan a la muestra y a los estándares una cantidad fija
del estándar interno tolueno, 10 ppb. Elaborar la curva estándar correspondiente
y determinar la concentración del benceno a la muestra de agua.

Tabla 1. Datos proporcionados por el ejercicio

[Benceno] en Área del benceno Área del tolueno
ppb
10 252 376
15 373 370
25 636 371
Muestra 533 368

 Cálculo demostrativo de la obtención de la concentración

benceno/tolueno.

Fórmula:

[𝒃𝒆𝒏𝒄𝒆𝒏𝒐]
𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 =
[𝒕𝒐𝒍𝒖𝒆𝒏𝒐]
𝑷𝒂𝒕𝒓ó𝒏 𝟏
10
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =
10

𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 =
𝟏

 Cálculo demostrativo de obtención del área benceno/ tolueno

Fórmula:

Á𝒓𝒆𝒂 = Á𝒓𝒆𝒂 𝒃𝒆𝒏𝒄𝒆𝒏𝒐

Á𝒓𝒆𝒂 𝒕𝒐𝒍𝒖𝒆𝒏𝒐
Patrón 1
252
Á𝑟𝑒𝑎 =
376
Á𝒓𝒆𝒂 = 𝟎. 𝟔𝟕𝟎𝟐
 Tabla 2. Concentraciones del benceno y tolueno

Concentración(ppm)
Patrón Benceno Tolueno [B]/[T]
1 10 10 1
2 15 10 1.5
3 25 10 2.5
Muestr
X 10
a

Tabla 3. Áreas del benceno y tolueno

ÁREA
Patrón Benceno Tolueno B/T
1 252 376 0.6702
2 373 370 1.0081
3 636 371 1.7143
Muestr
533 368 1.4484
a

Aárea vs Concetración de benceno /tolueno

2
1,8
1,6 = 0.6975x - 0.0317
1,4 y
R² = 0,9 999
Área benceno/tolueno

1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0

00,511,522,5 3
[benceno]/[tolueno]

Figura 1. Curva de calibración

  Cálculo del área B/T, y la concentración de benceno

[𝑏𝑒𝑛𝑐𝑒𝑛𝑜]
𝑦=
[𝑡𝑜𝑙𝑢𝑒𝑛𝑜]

533
𝑦=
368

𝑦 = 1.4484

𝒚 = 𝟎. 𝟔𝟗𝟕𝟓𝒙 − 𝟎. 𝟎𝟑𝟏𝟔

á𝒓𝒆𝒂𝑩/𝑻 + 𝟎. 𝟎𝟑𝟏𝟔 ∗ [𝒕𝒐𝒍𝒖𝒆𝒏𝒐]

[𝑩𝒆𝒏𝒄𝒆𝒏𝒐] =
𝟎. 𝟔𝟗𝟕𝟓

1.4484 + 0.0316 ∗ [10𝑝𝑝𝑏]

[𝑩𝒆𝒏𝒄𝒆𝒏𝒐] =
0.6975

[𝑩𝒆𝒏𝒄𝒆𝒏𝒐] = 𝟐𝟏. 𝟐𝟏𝟗𝒑𝒑𝒃

III. DISCUSION

El método de calibración a partir de estándares internos se encuentra en la misma

muestra del analito a estudiar, agregando una especie diferente llamado patrón interno y
se calcula la relación de respuesta para el patrón interno y el analito, siendo
proporcional a la concentración, este método debe poder distinguir el analito de muestra
y el patrón interno, cualquier perdida de muestra que se produzca después de agregar el
patrón interno debe ser similar para las dos sustancias, permaneciendo igual las
proporciones, los estándares internos se pueden utilizar en cromatografía,
espectroscopia y electroquímica (Dosal & Villanueva, 2008)

Un patrón interno es una sustancia que se agrega en una cantidad constante a una
muestra blanco y patrón de un análisis, un estándar interno puede compensar errores
sistemáticos y aleatorios. Para compensar errores por el método de estándar interno
debe existir y estar disponible una especie química de referencia. La especie química de
referencia no debe causar interferencias diferentes de las del analito. No debe haber
contaminación del analito en los materiales utilizados para preparar el estándar interno.
Además, ambas especies químicas deben estar presentes en concentraciones que sean
porciones lineales de su línea de calibración. Debido a la dificultad para encontrar una
especie química de estándar interno apropiada, el método del estándar interno no se
utiliza tan frecuentemente como otros métodos de compensación de errores (Holler &
Crouch, 1982).
Los análisis basados en la altura del pico cromatográficos se los pueden realizar por un
método cuantitativo, en donde, los picos bien definidos, agudos, estrechos y simétricos
es cuando existe mayor precisión, siendo inversamente proporcional al ancho del pico,
siendo este método afectado bajo condiciones de temperatura, caudal, velocidad de la
muestra. El análisis basado en el área es más precisos comparados con las alturas, en l
mayoría de os cromatógrafos actuales incluyen sistemas electrónicos para su lectura,
con la información obtenida, s puede realizar una representación de las áreas en función
de sus respectivas concentraciones, que permiten establecer una relación lineal como se
observa en la (Figura.1), para obtener la concentración de la muestra madre (González
de Buitrago, 2010).

IV. CUESTIONARIO
1. ¿Qué producto se empleará como patrón interno en los siguientes análisis?
a) Metanol y alcoholes superiores en vinos por cromatografía de gases;
Metanol
 4-Metil-2-pentanol: riqueza ≥ 98 %. (CAS nº 108-11-2)
También se pueden utilizar:
 3-pentanol: riqueza ≥98% (CAS nº 584-02-1)
 4-metil pentan-1-ol: riqueza ≥98% (CAS nº 626-89-1)
 Nonanoato de metilo: riqueza ≥98% (CAS nº 1731-84-6)
 Alcoholes superiores
 n-butanol HPLC
(Constanza, 2015; Jean, 2014; Rincón et al., 2005)

b) Cuantificación de ácidos grasos por cromatografía de gases de sus

correspondientes ésteres metílicos;
 Tricaprina (Fluka)
 Ácidos margárico (17:0) y erúcico (22:1n-9)

c) Determinación de colesterol en productos grasos de origen animal.

 Ácido phidroxibenzoico
(Constanza, 2015; Jean, 2014; Rincón et al., 2005)
 2. Elabore una tabla que resuma las ventajas y desventajas del empleo de
calibración con estándar externo, método de adición de estándar y
aplicación de estándar interno.

Tabla 4. Ventajas y desventajas de métodos

VENTAJ DESVENTAJAS
AS
 Calibra instrumentos y
 Al corregir con blanco la
procedimientos cuando
muestra, existen factores
no hay efectos de
como: la incorrecta
interferencia de la
preparación de blancos,
Calibración matriz de componentes
efecto de matriz y la
sobre la disolución del
con estándar contaminación de las
analito
externo muestras, de esta manera
 Predice la concentración
evitaría la predicción de
desconocida
la concentración
 Es el método más
sencillo

 Con el incremento de la  Es un proceso muy

señal de solución, complicado
obtiene la concentración  Necesita un material
Método de
del analito que había diferente para cada
adición de
antes de la adición adición de patrón
estándar
 Obtiene el efecto matriz  Se hace más de una
adición
sea contrarrestado
a cada muestra
 Obtiene resultados  Tiene como problema
exactos y precisos, al hallar una sustancia que
Aplicación
equilibrar el efecto de pueda ser utilizada como
de estándar errores no controlados patrón interno
interno  Es un método complicado
Fuente:(Espejo, 2016)
 3. Presente un glosario de los principales términos utilizados referentes a este
tema.
Blanco: sustancia que no contiene analito y similar a la muestra en
analizar Calibración: acción que establece una relación entre el valor de
magnitud y la indicación de un sistema de medida.
Cromatografía: es un método físico, cuyo objetivo es separar elementos
de una mezcla.
Muestra: cantidad seleccionada de una sustancia, además ofrece
información sobre una característica determinada
Análisis: es un proceso que tiene como objetivo dividir un tema en
fragmentos pequeñas para una mejor compresión
(Bermejo Moreno & Moreno Ramírez, 2014)

V. CONCLUSIONES
 Una curva de calibración consta de representar gráficamente una señal la
cual es medida en función de la concentración de un analito, para
graficar hay que hallar la probabilidad y las concentraciones, de manera
que el eje de las x va a hacer las concentraciones y el eje de y la
probabilidad. El patrón interno no se encuentra presente en la matriz de
la muestra y además es compactible con la muestra.
 En el área de alimentos es muy importante la cromatografía de gases, ya
que ayuda a separar compuestos de forma que les beneficie, como el
análisis de las características de los aceites esenciales, la evaluación de
especies volátiles de los alimentos.
 Al utilizar estos métodos, se analizan los pos y contras, como que
algunos son más sencillos que otros y ayudan a tener un resultado más
preciso y exacto, sin embargo, al aplicar estándar interno se pude
dificultar hallar una sustancia, la cual pueda ser utilizada como patrón
interno.
VI. RECOMENDACIONES
 Procurar realizar una cantidad elevada de patrón interno que permitan
afianzar los conocimientos teóricos.
 Al resolver un problema nivel laboratorio tener en cuenta los aportes
positivos y negativos del método que podrían inferir en el objetivo de la
práctica.
 Conocer más sobre las técnicas cromatográficas y las distintas
aplicaciones en el área de alimentos, puesto que es una técnica altamente
utilizada y con grandes contribuciones para el analista.
VII. BIBLIOGRAFÍA

Bermejo Moreno, R., & Moreno Ramírez, A. (2014). Analisis Instrumental (Primera
Ed). http://books.google.com.co/books?id=7kqqf47xB1cC
Constanza, I. (2015). Estandarización para el laboratorio de análisis de aguas y
alimentos de la universidad tecnológica de Pereira del método para la
determinación de metanol, etanol y alcoholes superiores en bebidas espirituosas
a través de cromatografía de gases (gc-fid) (Vol. 151).

Dosal, M. A., & Villanueva, M. (2008). Introducción a la metrología química: Curvas

de calibración en lo métodos análiticos. Antología de Química Analítica
Experimental.

Espejo, M. (2016). Importancia de la calibración en los laboratorios de

química analítica (Vol. 0, Issue 0).

González de Buitrago, J. M. (2010). Cromatografía. In Técnicas y Métodos de

Laboratorio Clínico. https://doi.org/10.1016/b978-84-458-2029-2.50014-8

Holler, J., & Crouch, S. R. (1982). A Química Analítica. In Quimica Nova (Vol. 5, Issue
4).

Jean, M. (2014). Determinación del metanol en el vino por cromatografía de gases.

Rincón, N., César, P., Alfonso, J., Castellanos, S., De, P., & Fernanda, L. (2005). Gas
chromatography determination of fatty acid alkyl esters (methyl and ethyl) in the
presence of mono., di- and triglycerides. Ingeniería e Investigación, 25(1), 58–62.