PRACTICA DE LABORATORIO N° 05

REACCIONES DE PRECIPITACIÓN Y DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS

I. OBJETIVOS
 Realizar la precipitación de proteínas por acción de reactivos químicos
 Analizar las diferentes precipitaciones de proteínas por los diferentes
métodos

II. FUNDAMENTO
Las proteínas son macromoléculas que resultan de la unión de moléculas
polipeptídicas de aminoácidos, son solubles en agua, en sales diluidas, en
disoluciones acuosas de sustancias polares siendo esta una propiedad importante
de las proteínas dependiendo de la secuencia de los aminoácidos.
El proceso de la dilución de las proteínas está íntimamente ligado con la
hidratación de sus macromoléculas, de modo que cualquier factor que altere esta
propiedad, disminuirá la solubilidad de las proteínas en el agua, favoreciendo la
precipitación de estas.
La disminución de la hidratación de las partículas colides de las proteínas, se
produce cuando se les agrega a sus diluciones sustancias deshidratantes, como el
alcohol, acetona, diluciones de sales neutras de metales alcalinos, etc. Esas
sustancias precipitan las proteínas sin el fenómeno de la desnaturalización,
mientras que las sales de metales pesados, ácidos fuertes a ácidos débiles y
taninos precipitan a las proteínas, pero las desnaturalizan. El fundamento de este
fenómeno consiste en la perdida de las propiedades hidrofilicas y la adquisición
de propiedades hidrofóbicas con la perdida de la carga eléctrica.

II.1. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON SULFATO DE

AMONIO
La precipitación reversible de las proteínas se logra por adicción de
disoluciones de sales neutras de metales alcalinos o sales anionicas, por
ejemplo, sulfato de amonio, cloruro de amonio, cloruro de sodio, etc.
Las albuminas tales como ovoalbúmina, albumina sérica y lacto albumina
son fácilmente solubles en agua y en soluciones salinas diluidas. Las
globulinas son también solubles en soluciones salinas pero insolubles en
agua. Los precipitados de las proteínas obtenidas por salificación pueden ser
disueltos de nuevo al disminuir la concentración de sales mediante
disoluciones acuosas. De ese modo la salificación de las proteínas es un
proceso reversible. La salificación de proteínas con ¿ ¿, semisaturada
precipitan globulinas, mientras que con una saturación absoluta precipitan
albúminas.

II.2. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON IONEES DE METALES

PESADOS
 Bajo la influencia de los iones de sales metales y pesados (plomo, oro, plata,
mercurio, etc.) las proteínas se coagulan irreversiblemente. Los iones de los
metales pesados forman con las proteínas complejos estables.
Además, los metales pesados anulan la carga eléctrica y alteran la estructura
secundaria, terciario y cuaternaria de las proteínas.
Con un exceso de sales de metales pesados el precipitado formado se
disuelve.

II.3. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON ÁCIDOS FUERTES

Los ácidos fuertes como: ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico
concentrados causan un precipitado irreversible de las proteínas, debido a la
deshidratación de las proteínas y la perdida de carga.

II.4. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CONN SOLVENTES

ORGÁNICOS
Los disolventes orgánicos como el etanol, acetona y otros, precipitan las
proteínas debido a que ejercen un desplazamiento de proteínas de las
disoluciones acuosas, esto se aplica por la deshidratación de las micelas de
las proteínas. El precipitado proteico puede ser nuevamente solubilizado en
medio acuoso.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES REACTIVOS
 Clara de huevo al 50% de
dilución y filtrado
 Soluciones de sulfato de
amonio saturado y
sobresaturado
 Gradilla con tubos de ensayo
 Solventes orgánicos (etanol y
 Pipetas
acetona)
 Probetas
 Ácidos fuertes (ácido
 Embudo, bagueta, goteros
clorhídrico, sulfúrico, nítrico)
 Soluciones al 5% de metales
pesados (nitrato de plata,
acetato de plomo)
 Reactivo de biuret

IV. PROCEDIMIENTO
IV.1. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON SULFATO DE
AMONIO
 Medir en un tubo de ensayo 2 a 3 ml de disolución de proteína (clara de
huevo)
  Añadir 5 gotas de solución saturada de sulfato de amonio, para observar
la precipitación de globulinas

 Próximamente agregar entre 2 a 3 gotas de reactivo Biuret, para observar

el cambio de color de la solución

IV.2. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON METALES PESADOS

 En dos tubos de ensayo medir 2 a 3 ml de disolución de proteínas
 En uno de los tubos agregar 5 gotas de acetato de plomo al 5%

 Próximamente agregar entre 2 a 3 gotas de reactivo Biuret, para observar

el cambio de color de la solución
  En el otro tubo añadir gota a gota, 5 gotas de nitrato de plata al 3%

 Próximamente agregar entre 2 a 3 gotas de reactivo Biuret, para

observar el cambio de color de la solución

Luego de 15 segundos
aproximadamente

IV.3. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON ÁCIDOS FUERTES

 En tres tubos de ensayo agregar 2 a 3 ml disolución de proteínas

 Enseguida añadir 5 gotas de ácido sulfúrico en contacto de los líquidos

aparece un precipitado de proteínas en forma de pequeño círculo blanco
  Próximamente agregar entre 2 a 3 gotas de reactivo Biuret, para
observar el cambio de color de la solución

Luego de 15 segundos
aproximadamente

 Seguidamente añadir 5 gotas de ácido nítrico en contacto de los líquidos

aparece un precipitado de proteínas en forma de pequeño círculo blanco

 Próximamente agregar entre 2 a 3 gotas de reactivo Biuret, para

observar el cambio de color de la solución

Luego de 15 segundos
aproximadamente

IV.4. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON SOLVENTES

ORGÁNICOS
 En dos tubos de ensayo de miden entre 1 y 2 ml de disolución proteica
 Agregar a uno etanol al 90% y a la otra acetona, mezclar y se observará
un precipitado de proteínas
 acetona etanol

 Próximamente agregar entre 2 a 3 gotas de reactivo Biuret, para

observar el cambio de color de la solución

acetona etanol

Luego de 15 segundos
aproximadamente Luego de 30 segundos
aproximadamente
V. RESULTADOS
COLOR
REACCIÓN VELOCIDAD
INICIO FINAL
Amarillo
¿¿ Amarillo Lenta
verdoso
acetato de pb +albumina+ biuret Blanco Lila pálido Rápido
Ag N O3 +albumina +biuret Amarillo
Marrón Rápido
oscuro
H 2 SO 3 +albumina +biuret Lila Blanco Rápido
HNO 3 +albumina +biuret Lila Blanco Rápido
Violeta
acetona+albumina +biuret Lila Rápido
fuerte
Violeta
etanol+ albumina+ biuret Lila Lento
fuerte

VI. CUESTIONARIO
VII. BIBLIOGRAFÍA