Electroporación
Celulas tripsinizadas
conteo celular
determinacion de densidad celular
Preparación de la transfección de
la solución
se le agrega 82µl del reactivo Nucleofactor
posteriormente se agrega 18µl del
suplemento
Transferencia
la supención con células y ADN se se
homogeniza
luego se transfiere a la cubeta de
electroporación con una pipeta
Incubación
37ºC /16-18 horas luego de la transfeción
Precipitacion de células
centifugación 100xg/10minutos
Resuspención
resuspender el pellet celular con los 100µl de
la solución de tranferencia
se homogeniza la muestra
Programacion del equipo
se ajusta la configuración del sistema de
electroporación apropiado para la muestra
se coloca la cubeta y se inicia el programa
seleccionado, se retira la cubeta una vez
terminado el proceso
Remoción del sobrenadante
con una pipeta estéril, separar el
sobrenadante del pellet donde se
encuentran las células
Adición
en un tubo de centrifuga agregar la muestra
se agrega 1-5µl ADN
Medio de cultivo precalentados
apenas retado ela cuveta se le agregará
500µl de medio de cultivo precalentado
con una pipeta pasteur se distribuira la
muestra a en 3 pocillos de una placa de 6
pocillos, se homogeniza con movimientos
circulares