TRABAJO DE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS

MÉTODOS DE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS

POR SU TAMAÑO: DIALISIS Y ULTRAFILTRACIÓN.

DIALISIS
Proceso de separar moléculas de una solución por
diferencia del índice de difusión a través de una
membrana semipermeable.
Una solución de varios tipos de moléculas es puesta
en un bolso semipermeable de diálisis (acetato de
celulosa u otro). El bolso de diálisis sellado se coloca
en un envase con una solución diferente, o agua pura.
Las moléculas lo suficientemente pequeñas como
para pasar a través de los poros (a menudo agua, sales
y otras moléculas pequeñas) tienden a moverse en la
dirección de la concentración más baja.
ULTRAFILTRACION
Es el paso de agua y solutos producido por una
diferencia de presiones a los dos lados de la
membrana. De esta forma se favorece el paso de agua
y las moléculas que la acompañan.
OSMOSIS
Desplazamiento de líquido a través de una membrana
semipermeable desde el lado de menor
concentración al de mayor concentración. Sirve para
equiparar las densidades a ambos lados de la
membrana.
CENTRIFUGACION
La centrifugación aprovecha las propiedades de
tamaño, forma y densidad de las proteínas para
separarlas de otras moléculas que presentan
características distintas. Como resultado, el efecto de
la gravedad para cada proteína es diferente.
TIPOS: Diferencial y gradiente.
POR SU SOLUBILIDAD: PRECIPITACIÓN.
PRECIPITACIÓN SALINA
La solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de
aminoácidos que, establecen enlaces (puentes de
hidrógeno) con moléculas de agua. Aumentan
solubilidad a concentraciones bajas y precipitan a
altas concentraciones salinas.
SALTING IN: Las proteínas globulares aumentan su
solubilidad al incrementar la concentración de sales.
SALTING OUT: Disminuye la solubilidad cuando se
aumenta en exceso la concentración de sales y
entonces precipitan. Es decir, se basa en la exclusión
del cosolvente, en este caso la sal.

POR SU CARGA ELÉCTRICA: ELECTROFORESIS,

CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION
Separadas en base a la diferencia de sus tamaños.
Aun moléculas cuyo tamaño es relativamente
parecido pueden ser separadas mediante la adecuada
selección del gel.