Código FLA-23 v.

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Guía Unificada de Laboratorios
MICOLOGIA CLINICA
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1. Titulo

Guía No 4
TECNICA DE MICROCULTIVO

2. Objetivo General
Aplicar la técnica de Microcultivo por el método de Ridell, para favorecer la esporulación de hongos.

2.1 Objetivos Específicos

Conocer el fundamento y procedimiento de la técnica de Microcultivo
Aplicar la técnica en la identificación de hongos.

3. Marco Teórico
La técnica de microcultivo se conoce también como técnica de cultivo en microplaca (microslide), técnica de Ridell o
cultivo en bloque. Se recomienda realizarla cuando los montajes de cultivos en caja de petri, no permite la
visualización de estructuras de reproducción asexual para lograr la identificación del hongo, o cuando se desea tener
montajes permanentes con estructuras de hongos.

El objetivo de esta técnica de cultivo es favorecer la esporulación de los hongos, para ello se le deben proporcionar
condiciones adecuadas como son: humedad y un medio de cultivo favorable para tal fin. Los medios de cultivos más
utilizados son Czapeck, Papa Dextrosa Agar-PDA, Corn meal Agar, Agar de Arroz, todo depende del hongo a estudiar.

Aunque la técnica es un poco tediosa, permite obtener preparaciones donde se pueden preservar estructuras y se
observa una mejor disposición de las conidias.

4. Materiales, Equipos e Insumos

4.1 Materiales:

Elementos de bioseguridad: Bata manga larga, guantes, gorro, careta.

Cajas de petri sin esterilizar
Papel filtro, o papel absorbente
Bajalenguas
Agua destilada estéril
Pipeta estéril
Agujas de disección- asas micológicas
Rollo de Esparadrapo ancho
Tijeras
Esmalte transparente
Láminas portaobjeto
Laminillas cubreobjeto
Fósforos

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Daisy Janeth Carvajal B Versión 2 de 2
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Fecha: Septiembre de 2009 Fecha: Fecha:
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Cintas de Enmascarar
Toalla de papel
Hojas de bisturí

Cada grupo de laboratorio debe llevar el siguiente material: Láminas portaobjeto, laminillas cubreobjeto, papel
absorbente, papel kraft, bajalenguas, tijeras, cinta de enmascarar, esmalte transparente, fósforos. Hojas de bisturí.

4.2 Medios

Cultivos de hongos ambientales en Agar sabouraud

Medios de cultivo: Agar Papa Dextrosa, Agar de Arroz, Agar Malta, Agar Czapeck

5. Reactivos:

Azul de Lactofenol

6. Procedimiento

Técnica de Microcultivo

El procedimiento debe realizarse sin movimientos bruscos y sin corrientes de aire, para no generar aerosoles y así
evitar la contaminación del cultivo.

1. Preparar con anterioridad el siguiente material estéril: en una caja de petri colocar una base de papel
filtro, sobre él colocar una varilla de vidrio, o un bajalenguas,o un aplicador que servirán de soporte para
colocar una lámina portaobjeto y 3 laminillas cubreobjeto.
2. Cortar, con un bisturí estéril, un bloque de 1 cm2 del agar para esporulación seleccionado y colocarlo
sobre la lámina portaobjetos estéril,
3. Inocular cada ángulo del bloque con una pequeña porción de la colonia estudiada, usando una aguja de
disección.
4. Tomar con una pinza estéril uno de los cubreobjetos estériles, pasarlo suavemente por el mechero y
colocarlo de inmediato y directamente sobre la superficie del bloque de agar inoculado. El calentamiento
del cubreobjeto produce un sellado firme con el agar.
5. Humedecer el papel filtro del fondo de la caja 5 ml de agua destilada estéril. (Figura 1)
6. Tapar la caja, sellarla con cinta por los bordes y marcarla.
7. Incubar a temperatura ambiente (25-30C), revisando periódicamente, hasta visualizar con el microscopio
el crecimiento del hongo en el cubreobjetos. Este tarda aproximadamente una semana, depende del
tiempo de generación del hongo sembrado.

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Figura 1. Montaje de microcultivo-método de Ridell

Lectura del microcultivo

Cuando se observa esporulación entre el agar y el cubreobjetos, la preparación está lista para ser desmontada.
1. Con una pinza se levanta el cubreobjeto de la superficie del bloque de agar, cuidadosamente para no alterar
el micelio que se adhiere a él.
2. Colocar el cubreobjeto sobre una gota de azul de lactofenol depositada en un segundo portaobjeto.
3. Las preparaciones realizadas pueden preservarse, bordeando las márgenes del cubreobjeto con esmalte de
uñas transparente
4. Observar la preparación con objetivos de bajo (10X)y mediano poder (40X), identificando el hongo que ha
esporulado.

7. Nivel de Riesgo

Nivel 2 (Medio)

8. Bibliografía

ESCOBAR M, y otros. Micología. Manual de Laboratorio. Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de

Medicina, Universidad de Antioquia. 1.995

KONEMAN E. y otros. Diagnóstico microbiológico. Texto y Atlas a Color. Tercera Edición. Editorial Médica
Panamericana.

9. Anexos

CONSULTA
Cuál es la utilidad y composición de los siguientes medios de cultivo: Agar harina de maíz o Corn meal agar, Medio de
arroz, Czapeck almidón agar, Medio de Borelli, medio de Kamiski, Agar Malta.

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