ALUMNOS:

Chapoñan Cajusol Hugo

Díaz Villa Alisson
Medina Ñopo Jessica
Ortega Santisteban Marly
Sandoval Flores Juan
Segura Caro José

PROFESORA:
Graciela Olga Albino Cornejo
 TITULACIÓN DE VIRUS

I. INTRODUCCIÓN
Titulación es la estimación del número de virus o unidades infecciosas por unidad de
volumen, en este método las unidades formadoras de placa (UFP) varias monocapas
celulares o cultivos se infectan con diluciones seriadas de la suspensión del virus. Las
técnicas de titulación viral son en muchos casos un paso previo y necesario para
desarrollar otros tipos de estudios tales como: ensayos de neutralización, determinación
de actividad antiviral de un extracto dado, ensayos de identificación viral como en el
caso de virus influenza (ensayo de inhibición de la hemaglutinación), etc.

La cantidad de virus presente en una muestra se calcula por diversos métodos: métodos
donde no se mide la capacidad infecciosa de las partículas virales (Microscopía
electrónica y Hemaglutinación) y los métodos donde se mide la capacidad infecciosa de
la partícula viral, entre estos están los que se relacionan a ensayos donde no se cuenta el
número de partículas infecciosas presentes en el inóculo pero en su lugar se obtiene un
valor para el título de ese virus donde la medida está basada en el principio de todo o
nada (si hay efecto citopático o no, si está el animal vivo o muerto). Dosis infectante
50%, Dosis letal 50%.

Aquí el título viral es definido como aquella dilución de virus que infecta o mata el 50%
de la población inoculada. También están los ensayos donde el número de partículas
virales infecciosas presentes en la suspensión original es cuantificada, son los más
comunes y entre estos están el ensayo de plaqueo (formación de placas en monocapas
de células susceptibles), la formación de pústulas o lesiones en la membrana
corioalantoidea de embriones de pollo, la formación de focos de crecimiento en
monocapas celulares (se utiliza para virus tumorales que no destruyen las células en las
cuales se multiplican y por ende no producen placas, pero sin embargo hacen que la
morfología celular cambie y que las células se multipliquen más rápidamente que las
células no infectadas, formando focos de células transformadas que pueden ser visibles
a simple vista).
 II. OBJETIVO
Determinar las partículas virales de un inóculo mediante la técnica de la titulación.

III. MATERIALES

MATERIAL BIOLÓGICO

 Cepa: Escherichia coli

 Inóculo viral (Bacteriófago).

MATERIAL DE LABORATORIO

 Medio de cultivo: Agar Triptosa.

 Caldo doble concentrado de Triptosa.
 Agar agua.
 Tubos de ensayo.
 Placas Petri.
 Ansas bacteriológicas.
 Pipetas.
 Gradilla.

IV. PROCEDIMIENTO
1. En una gradilla colocar de 8 a 9 tubos.
2. Agregar 2.7 ml de caldo Triptosa a cada tubo.
3. Con una pipeta estéril agregamos al primer tubo 0.3 ml del filtrado
(Bacteriófago).
4. Mezclamos y otra vez retiramos 0.3 ml y se vierte en el segundo tubo, repetir el
proceso hasta llegar al octavo tubo, no agregar al tubo nueve ya que es el tubo
control.
5. Filtrar el agua residual.
6. Para cada tubo corresponder un tubo con 1 ml de agar agua peptonada diluido. Y
para cada tubo también corresponder una placa con agar Triptosa.
 7. De cada tubo de la primera serie, se coloca 0.1 ml al tubo con agar agua
peptonada más 3 a 4 gotas de la cepa problema.
8. Verter cada tubo de la segunda serie que son los tubos de agar agua peptonada
con 0.1 ml de cada tubo de la primera serie más las gotas de la cepa problema, todo
esto de cada tubo se vierte a una placa (cada placa por cada tubo) con agar triptosa.
9. Luego incubar a 37°C por 18 a 24 horas.
10. Luego hacer la lectura de las placas de las diluciones hechas (10-1 – 10-8).
11. Se observarán calvas o placas (espacios libres de bacteria por dilución), se
observará la morfología de las clavas que serán de acuerdo a la cepa problema.
12. Por último, calcular el título.

V. RESULTADOS
Al realizar la titulación se obtuvo

Diluciones N° de calvas
10-1 Incontables
10-2 Incontables
10-3 Incontables
10-4 Incontables
10-5 Incontables
10-6 70
10-7 9
10-8 2
Dilución 10-1: N° de calvas: Incontables Dilución 10 -4: N° de calvas: Incontables

Dilución 10-5: N° de calvas: Incontables Dilución 10 -6: N° de calvas: 70

Dilución 10-7: N° de calvas: 9 Dilución 10 -8: N° de calvas: 2

 Nº de calvas
Título viral=
Dilución ×inóculo

2
Título viral= = 2x109
10−8 × 0.1

VI. CONCLUSIÓN:
 Se concluye que las diluciones más adecuadas a trabajar para obtener un título
viral, serían las diluciones intermedias que van desde la dilución 10-6 a 10-8, ya que
se pudo observar calvas.
 Se concluye que la última dilución que se observaron calvas fue la dilución 10 -8,
con el cual hayamos el título o número de partículas virales lo cual resultó 2 x 109.

VII. REFERENCIAS

Madigan, M y J. Parker, Brock (1997). Microbiología de los microorganismos.

8° edición. Editorial McGraw Hill. México.

Murray, Rosenthal, Pfaller. Microbiología médica. 8° edición. España.