Está en la página 1de 37

TEMA 8

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN
MOLECULAR UV-VIS
(ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS)
8.1.- TRANSMITANCIA
Transmitancia: fraccin de
radiacin incidente transmitida
por la disolucin.
O
T
P
P
T
8.2.-ABSORBANCIA
La absorbancia de una disolucin aumenta a medida que
aumenta la atenuacin del haz.
T
O
P
P
T A log log
P
T
potencia del haz de radiacin transmitida.

Transmitancia: fraccin de radiacin que una sustancia deja pasar
cuando la REM atraviesa la muestra.
T puede valer desde 0 hasta 1.
%T puede valer desde 0 hasta 100 %
Absorbancia: es la atenuacin de la intensidad de la radiacin cuando
esta incide sobre una muestra. Es la cantidad de energa que la
sustancia toma para pasar a un estado ms excitado.
A aumenta a medida que aumenta la atenuacin de la radiacin.

Cuando no hay absorcin de radiacin P
o
= P
T
y entonces A=0,
mientras que si se absorbe el 99% de la radiacin, solo se transmite el
1%, la A=2


8.3.- RELACIN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIN: LEY DE BEER
Ley de Lambert-Beer: muestra cmo la absorbancia es
directamente proporcional a la longitud b de la trayectoria a travs de
la solucin y a la concentracin c del analito o especie absorbente.
c b a A c b A
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades Lcm
-1
g
-1
, si c=g/L)
b: longitud del camino que recorre la radiacin a travs del medio absorbente.
c: concentracin expresada en g/L (mg/L, ...) Cuando en la ecuacin la
concentracin viene expresada en mol/L, la cte de proporcionalidad se denomina
absortividad molar y se representa por (unidades Lcm
-1
mol
-1
. )
-Disoluciones que contienen ms de una clase de especies
absorbentes:
A = A
1
+ A
2
+ .... + A
n

Como A = b c
A =
1
b c
1
+
2
b c
2
+ . +
n
b c
n

Siendo 1, 2, , n los componentes absorbentes.

8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER

A) Limitaciones reales de la ley
B) Limitaciones Qumicas
C) Limitaciones Instrumentales
La proporcionalidad directa entre absorbancia y
concentracin cuando b es cte presenta desviaciones:
La atenuacin de una radiacin es cuantitativamente
proporcional a ala concentracin de la especie absorbente
8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER
A) Limitaciones reales de la ley
-Disoluciones de concentracin elevada (c > 0.01 M) dan malos
resultados.
-La absortividad a y la absortividad molar dependen del ndice de
refraccin de la muestra.
B) Limitaciones Qumicas
Se produce cuando el analito se disocia, asocia o reacciona con el
disolvente para dar productos que presentan propiedades de
absorcin diferentes de las del analito.
HIn H
+
+ In
-

Color 1 Color 2

Desviacin positiva a 430 y negativa a 570 nm.
8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER
C) Limitaciones Instrumentales
El cumplimiento estricto de la Ley de Beer slo se observa para
radiaciones monocromticas (radiacin formada por una sola
longitud de onda) y stas en la prctica no se consiguen, ya que
con los dispositivos disponibles (filtros, monocromadores) se
obtienen una banda de longitudes de onda ms o menos
simtrica entorno a la deseada.
Otra desviacin: Presencia de radiacin parsita o dispersa.
8.5.- INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN UV-VIS
FOTMETROS
* Instrumento sencillo utilizado para medir la absorbancia y
que emplea filtros de absorcin o interferencia para
seleccionar la longitud de onda.
* Suelen usarse prcticamente en la regin del Visible.
* Ventajas: Son sencillos, bastante econmicos, robustos y
facilidad en cuanto a mantenimiento. Pueden transportarse,
lo que lo convierte en un aparato til para realizar anlisis
espectroscpicos de campo.
* Inconvenientes: No puede utilizarse para obtener
espectros de absorcin.
8.5.- INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN UV-VIS
ESPECTROFOTMETROS
* Instrumento empleado para medir la absorbancia que
utiliza un selector monocromtico para seleccionar la longitud
de onda.
* Puede usarse en la regin UV, Vis e IR.
* Pueden ser de un solo haz o de doble haz.
Diseos instrumentales para fotmetros y espectrofotmetros


8.6.- ESPECIES ABSORBENTES
A) Absorcin por compuestos orgnicos
Dos tipos de e
-
son responsables de que las molculas absorban radiacin
UV-Vis:
- e
-
compartidos que participan directamente en la formacin de enlaces y
que estn asociados a ms de un tomo.
- e
-
externos no compartidos, localizados preferentemente entorno a
tomos como O, S, N y halgenos.(e situados en orbitales no enlazantes
n)
a la que absorbe una molcula depende de la fuerza con que
retiene a sus distintos e
-
.
Enlaces sencillos C-C o C-H: de la regin del UV de vaco (<180 nm)
Enlaces dobles o triples: de la regin del UV
Compuestos orgnicos que contienen S, Br y I: absorben en la regin UV
8.6.- ESPECIES ABSORBENTES
A) Absorcin por compuestos orgnicos con grupos cromforos

n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y
halgenos.
n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y
halgenos.
220.0 240.0 260.0 280.0 300.0
Longitud de onda (nm)
0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Etinilestradiol (26 mg/L)
Gestodeno (5.4 mg/L)
Levonorgestrel (7.2 mg/L)
HO
CH
3
OH
C CH
ETINILESTRADIOL (ETE)
CH
2
OH
C CH
CH
3
O
LEVONORGESTREL (LEV)
CH
2
OH
C CH
CH
3
O
GESTODENO (GTD)
NaSO
3
N=N
SO
3
Na
HO
COONa
NaSO
3
N = N
OH
SO
3
Na
Tartracina (E-102)
A. Anaranjado (E-110)
8.6.- ESPECIES ABSORBENTES
B) Absorcin por compuestos inorgnicos
-Los espectros presentan mximos de absorcin anchos y poca estructura
fina.
-Excepcin: iones de la serie de los lantnidos y actnidos. Los e
-
(4f
y 5f) responsables de la absorcin estn apantallados de influencias
externas por e
-
situados en orbitales de n cunticos elevados.
Consecuencia: bandas de absorcin estrechas y estn relativamente poco
afectadas por la naturaleza de las especies asociadas a ese in y por el
disolvente.
- Iones y complejos de las 2 primeras series de transicin: son
coloreados al menos en alguno de sus estados de oxidacin. La
absorcin de radiacin Vis se debe a transiciones de e
-
entre orbitales d
llenos y vacos que difieren en energa a causa de los ligandos unidos a
los iones metlicos. La diferencia de energa entre orbitales d depende
del estado de oxidacin del elemento, su posicin en la Tabla peridica y
la clase de ligando unido a ese in.

8.6.- ESPECIES ABSORBENTES
C) Absorcin de transferencia de carga
- Complejo de transferencia de carga: consta de un grupo
dador de e
-
unido a un aceptor de e
-
.
- Cuando uno de estos compuestos absorbe radiacin, se transfiere
un e
-
del dador a un orbital localizado preferente en el aceptor.
- El estado excitado es un producto de un proceso de oxidacin
/reduccin.
- Complejos inorgnicos y orgnicos.
-Se caracteriza por tener absortividades molares mayores de las
habituales (
Max
> 1000), circunstancia que conduce a una gran
sensibilidad.
8.7.- APLICACIONES
CARACTERSTICAS DE LOS MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
- Amplia aplicabilidad.
- Elevada sensibilidad: los lmites deteccin 10
-4
a 10
-5
M.
- Selectividad de moderada a alta.
- Buena exactitud: errores de concentracin 1-5% o incluso menores.
- Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotomtricas.
- Se prestan a una fcil automatizacin.
CAMPO DE APLICACIN
- Especies absorbentes: compuestos orgnicos que contengan grupos
cromforos y especies inorgnicas como son los metales de transicin.
- Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo
para producir un compuesto absorbente.
8.7.- APLICACIONES
APLICACIONES MEDIOAMBIENTALES
8.7.- APLICACIONES
MEZCLAS DE ANALITOS
8.7.- APLICACIONES
VALORACIONES FOTOMTRICAS Y ESPECTROFOTOMTRICAS
Las medidas espectrofotomtricas son tiles para localizar
puntos de equivalencia en valoraciones siempre que uno o ms
de los reactivos o productos absorban la radiacin.
Curva fotomtrica: representacin de la absorbancia
(corregida por la variacin de volumen) en funcin del volumen
de valorante.
Valoradore fotomtricos con fibras opticas
Son hebras finas de materiales como el vidrio, silice
fundido o plstico. Su diametro oscila entre 0,05m y 0,6cm.
Son muy utilizados en medicina.
La trasmisin de la luz se produce por reflexin interna,
para que sea total se recubre la fibra con material de indice de
refraccin menor que el de la fibra.
Tambin existen los sensores de fibra ptica(optrodos).
Esto permite instrumentos para la medida in-situ.
Si queremos detectar la contaminacin de la bahia de Cdiz.
Tenemos una fuente de radiacin que se trasmite traves de la
fibra ptica, al final se encuentra un reactivo que va a
reaccionar con el analito en cuestin, esta reaccin va a
provocar una variacin de la radiacin incidente, que se va a
recoger a travs de otra fibra ptica hasta el detector.
A

= a

. b. C
El espectrofotmetro convencional Un espectrofotmetro
convencional enfoca la luz policromtica de la fuente en un
monocromador. Este tiene como componentes principales una
ranura de entrada, un elemento que dispersa la luz en sus
longitudes de onda componentes (en general una red de
difraccin), y una ranura de salida que permite seleccionar la
longitud de onda deseada.
Esa luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al
detector. Las mediciones fotomtricas se hacen en base a la
relacin entre la potencia de luz que alcanza al detector cuando
est interpuesta la muestra (P) y cuando no lo est (P0) o
cuando est interpuesto un blanco.
detector
fuente
El espectrofotmetro de dispositivo de diodos
El espectrofotmetro de dispositivo de fotodiodos (diode array,
de diodos fue introducido a mediados de los 70. Utiliza una
ptica invertida respecto del convencional: toda la luz de la
fuente atraviesa la muestra, luego es dispersada en un
monocromador que en lugar de una ranura de salida tiene en el
plano focal un dispositivo que integra en un pequeo circuito
varios cientos de detectores tipo fotodiodo de silicio. El nmero
de elementos vara actualmente entre 64 y 4096, siendo los
ms comunes de 512 y 1024 elementos.
Cada elemento del dispositivo recibe luz de un rango particular
de longitudes de onda, y un ordenador procesa los datos
recibidos. Las principales ventajas del espectrofotmetro de
dispositivo de fotodiodos son que para obtener un espectro no
hace falta mover ningn elemento, y los espectros se obtienen
en forma casi instantnea.

0.1nm de resolucin
2 nm de resolucin
diodos
Resolucin espectralPara nuestro propsito, nos concentraremos en los
aspectos prcticos, y aqu lo ms importante es saber qu resolucin
necesitamos para nuestro trabajo, y esa resolucin est expresada en general
como ancho espectral del instrumento (spectral bandwidth).
Como regla general, el ancho de media banda instrumental debe ser como
mximo 1/10 del ancho de media banda espectral de la banda de absorcin a
medir. Dado que la mayora de las molculas en solucin presentan en fase
lquida bandas de absorcin con anchos medios entre 20 y 40nm, un
instrumento con resolucin de 2nm es generalmente adecuado. A veces
encontramos casos particulares (Ej.: cianocobalamina vitamina B12) con
bandas de anchos del orden de 10nm. En este caso, la cuantificacin con un
instrumento de 2nm dara un error por defecto del orden del 2-3%, mientras
que con un equipo de 1nm de ancho de banda el error sera despreciable.

En el caso de medicin de gases o vapores, las interacciones son menores y por
lo tanto las bandas de absorcin tambin, por lo que en general se requieren
instrumentos de alta resolucin (0,1nm).
Hay dos parmetros que afectan directamente la resolucin de un
monocromador: la densidad de lneas de la red y la distancia focal. La
resolucin es directamente proporcional a cada uno de estos parmetros. Sin
embargo, al aumentar la densidad de lneas de la red aumenta la dispersin y
disminuye la eficiencia reflectiva aparente, lo que se corrige aumentando el
ancho de ranura (lo que disminuye la resolucin). Aumentar la distancia focal
tambin tiene su costo: el monocromador se hace ms grande, disminuyen las
tolerancias pticas y mecnicas y las especificaciones para el alineamiento se
hacen ms estrictas.
Por supuesto tambin aumenta el precio.

Avantes es la empresa lder, con la serie AvaSpec, en el diseo
y fabricacin de espectrmetros miniaturizados con entrada
por fibra ptica para aplicaciones en el UV, VIS, y NIR.Estos
espectrmetros estn basados en un diseo de ptica
integrada, sin partes mviles, recogiendo la luz mediante fibra
ptica , dispersndola por medio de una red de difraccin , en
un detector lineal CCD , CMOS, PDA Array de InGaAs.
Proporcionan una resolucin de hasta 0,04 nm dependiendo de
la red de difraccin y de la rendija de entrada seleccionada. En
la serie AvaSpec 2048 el espectrmetro est basado en un
monocromador simtrico del tipo Cerny-Turner, de 75 mm de
distancia focal , con un detector lineal CCD de 2048 pixels
conectado a una tarjeta electrnica con un convertidor A/D de
14 bits y una interfase USB/RS232. Incorpora un conector
SMA que permite acoplar un amplia lnea de fuentes de luz y
sondas por fibra ptica , sensores qumicos y otros accesorios.