Food Sci.
Biotecnología 19
(2): 471-478
(2010) DOI 10.1007 / s10068-010-0066-
2
ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
Optimización estadística de medios para la producción de dextrano
por Leuconostoc sp., Aislado de la masa fermentada de Idli
Shaileshkumar D. Sawale y SS Lele
Recibido: 10 de octubre de 2009 / Revisado: 10 de diciembre de 2009 / Aceptado: 14 de diciembre de 2009 / Publicado en línea: 30
de abril de 2010
© KoSFoST y Springer 2010
Resumen El presente estudio informa la optimización
estadística de los medios para la producción de dextrano
para las bacterias del ácido láctico, aisladas de la masa
idli fermentada tradicional india. El análisis de
secuenciación morfológica, bioquímica y 16S rRNA
identificó la cepa como Leuconostoc mesenteroides. Se
aplicó una metodología estadística secuencial compuesta
por Plackett-Burman y la metodología de superficie de
respuesta (RSM) para mejorar la producción
fermentativa de dextrano. Una ecuación polinómica
cuadrática sugerida por el modelo RSM fue luego
validada experimentalmente. El rendimiento previsto
por modelo fue de 60,73 g / L. La verificación
experimental del modelo resultó en 60.30 g / L de
dextrano. Se encontró que los valores experimentales
estaban muy cerca de los valores predichos y, por lo
tanto, el modelo fue validado con éxito. El medio basal
simple dio 7,83 g / l de dextrano. Así, la producción de
dextrano se incrementó en 7,70 veces sobre el medio
basal no optimizado utilizando estas técnicas
estadísticas. Las características estructurales del
dextrano se determinaron mediante la transformada de
1
Fourier infrarroja, Resonancia magnética nuclear H y
13Ce técnicas espectroscópicas.
Palabras clave: dextrano, transformada de Fourier-
infrarrojo (FT-IR), Leuconostoc, resonancia magnética
nuclear (RMN), metodología de superficie de respuesta
(RSM)
Introducción
Las bacterias del ácido láctico (LAB) son una de las clases
importantes de microorganismos que se sabe que producen
varias biomoléculas de importancia industrial (1). Varios
laboratorios
fueron aislados de la masa fermentada idli, un alimento
fermentado tradicional popular en la India (2). Los LAB
producen varios exopolisacáridos (EPS) que tienen
propiedades estimulantes de la salud, como la estimulación
de la inmunidad, anti-úlcera (3), reducción del colesterol (4)
y propiedades antitumorales y generalmente se consideran
microorganismos seguros (GRAS) (5). Estos polisacáridos
poseen propiedades gelificantes, estabilizantes y espesantes
(6).
El dextrano es un polisacárido producido por varios LAB
como las especies Leuconostoc y Streptococcus (7). Este
biopolímero tiene valores comerciales significativos en
formulaciones sustitutivas de plasma sanguíneo. La anemia
asociada con enfermedad renal crónica se está tratando con
formulaciones parenterales de complejo de hierro-dextrano
como DexFerrum®. yoTambién se usa en muchas
industrias farmacéuticas, químicas y alimentarias, como
aditivo, emulsionante, transportador de drogas y
estabilizador. El dextrano reticulado, es decir, el
sephadex, se usa ampliamente para la separación y
purificación de diversos productos como proteínas y
enzimas (8). La sangre y los productos sanguíneos
tienen disponibilidad limitada, además de aumentar la
preocupación por los riesgos infecciosos e
inmunológicos. Los costos involucrados en la obtención,
almacenamiento y comparación cruzada, procesamiento
y dispersión de dichos productos son de gran interés.
Teniendo en cuenta sus amplias aplicaciones en la
industria farmacéutica, se están realizando esfuerzos para
aumentar la producción de dextrano. Varios investigadores
han informado sobre el efecto de los nutrientes en la
producción de dextrano y dextransucrase a partir de
especies de Leuconostoc (9-15). El tipo, la cantidad, la
longitud y la disposición de las ramas definen las
diferencias en la estructura del dextrano e influyen en la
solubilidad en agua y otras propiedades reológicas.
Shaileshkumar D. Sawale, SS Lele ( ) reuteri (17) contiene Se ha informado que los enlaces α- (1
Departamento de Ingeniería y Tecnología de Alimentos, Instituto de
Tecnología Química, Matunga, Mumbai, 400 019, India
Tel: + 91-22-24145616; Fax: + 91-22-24145614
Email: ss.lelmi@ictmumbai.edu.in
Exopolisacárido obtenido
de Leuconostoc dextranicum (16) y Lactobacillus
→ 6) y α- (1 → 4) son agentes anticancerígenos
prometedores.
En los últimos años, métodos estadísticos experimentales
como Plackett-Burman y metodología de superficie de
respuesta
472 SD Sawale y SS Lele

(RSM) se han aplicado para optimizar los medios. recogieron y luego se suspendieron en solución salina y
RSM esUna colección de técnicas estadísticas para nuevamente se extendió 1 cultivo en bucle sobre placas
diseñar experimentos, construir modelos, evaluar de agar sMRS. El proceso se repitió hasta que no hubo
los efectos de varios factores y buscar las cultivos mixtos en cada placa. Pruebas fisiológicas y
condiciones óptimas. RSM se ha utilizado con éxito bioquímicas del LAB aislado.
en la optimización de bioprocesos (18-21). Los
desafíos actuales en la producción de EPS de LAB
incluyen no solo la mejora de la tensión, sino
también la producción mejorada de EPS con
estructuras y tamaños específicos que imparten las
propiedades funcionales deseadas (22). Debido a
esta razón, los biotecnólogos están constantemente
en busca de cepas más nuevas que tengan una
mayor productividad (23-28). Existen informes
limitados o inexistentes sobre la producción de
dextrano en especies de Leuconostoc aisladas de la
masa idli para la producción de expolisacárido.
En el presente trabajo, informamos el aislamiento y la
identificación bioquímica de las bacterias del ácido láctico
aisladas de la masa fermentada de idli. Además, el 16S
rRNA se usó para analizar la especie de cepa. La
composición de los medios basales se ha optimizado en 2
pasos: (i) Método de Plackett-Burman utilizado para la
selección de los componentes de medios más influyentes,
(ii) RSM se utilizó para una mayor optimización para
mejorar el rendimiento utilizando las variables de proceso
influyentes. La estructura del polisacárido también se
analizó mediante técnicas espectroscópicas de resonancia
magnética nuclear (RMN) de infrarrojo por transformada de
Fourier (FT-IR), 1H y 13C.

Material y métodos

Medio El medio MRS se usó para el aislamiento de la

cepa LAB (29). El medio sMRS modificado (glucosa
reemplazada por sacarosa) se usó para el aislamiento y la
producción de dextrano con la siguiente composición:
(g / L): proteosa peptona, 10; extracto de levadura, 5;
extracto de carne de res, 10; sacarosa, 20; citrato de
triammonio, 2; acetato de sodio, 5; Tween 80, 1.0;
MgSO4, 0,1; y MnSO4, 0,05. El pH medio se ajustó a 7,0
antes de la esterilización con vapor (121ºC, 15 psi y 20
min). Los componentes de medios se obtuvieron de Hi-
Media Limited (Mumbai, India).

Aislamiento e identificación de la cepa aislada OneSe

transfirieron g de masa idli a 100 ml de solución salina
estéril. Luego se transfirió un ml de la suspensión
resultante a 9 ml de solución salina estéril y se
prepararon diluciones en serie. Un cultivo en bucle de la
dilución final se extendió sobre placas de agar sMRS
que contenían 0,05% de azida sódica para la inhibición
del crecimiento de células de levadura. Las placas se
incubaron a 30ºC durante 48 h. Las colonias se
cepa se realizaron según el manual de Bergey de
bacteriología sistemática (30). El cultivo se identificó Optimización usando RSM RSM fue adoptado para
adicionalmente según los estudios de 16S rRNA. La mejorar la producción de dextrano utilizando el
secuenciación 16S rRNA se realizó en el Centro Nacional software Design- Expert Version 6.0.10, Stat-Ease Inc.
de Ciencia Celular (NCCS), Pune, India. Se buscó la (Minneapolis, MN,
secuencia obtenida contra la base de datos GenBank y se
realizaron estudios de homología para identificar el
aislado. Inicialmente, la secuencia se analizó en el servidor
del Centro Nacional de Información Biotecnológica
(NCBI) (http: // www.ncbi.nlm.nih.gov). El árbol
filogenético se construyó utilizando el software ClustalW2
del sitio web del Instituto Europeo de Bioinformática
(http://www.ebi.ac.uk). La secuencia se depositó en
GenBank con el número de acceso GQ141831.

Mantenimiento del cultivo y preparación del inóculo El

cultivo aislado designado como UICT / LI18 se rayó en
los sesgos MRS y se mantuvo para incubación a 28 ±
2ºC durante 24 h. Estas inclinaciones se mantuvieron a
4ºC para experimentos adicionales y se subcultivaron
mensualmente. El inóculo se preparó en matraces
Erlenmeyer de 250 ml que contenían 100 ml de medio
sMRS estéril (180 rpm durante 12 horas a 25ºC). A
menos que se mencione lo contrario, todos los
experimentos se llevaron a cabo a 25ºC y la densidad
óptica del inóculo se ajustó a 1,0 antes de la inoculación
y se usó un 2% de inóculo. La temperatura y el tamaño
del inóculo fueron optimizados previamente por el
método de 1 factor a la vez (datos no mostrados).

Selección de los componentes de medios influyentes

para el modelado de procesos El diseño factorial de
Plackett-Burman se utilizó para seleccionar
componentes medios significativos que afectan la
producción de dextrano. La sacarosa, la peptona
bacteriológica, el extracto de levadura, el extracto de
carne de res, el citrato de triammonio, K2HPO4,
MgSO4, MnSO4, acetato de sodio y pH se analizaron
como posibles factores que afectan la producción. Cada
variable se representó en 2 niveles, superior ('alto, +') e
inferior ('bajo,
- ') niveles del rango cubierto por cada variable y la
respuesta (31). Se usó un diseño experimental de 12 tiradas
de Plackett-Burman para seleccionar factores (Tabla 1), y
las respuestas experimentales se analizaron por modelo de
primer orden mediante la siguiente ecuación
Y=β+ o ii

Σβ x

donde Y es la respuesta para dextrano producción, βo es la

intersección del modelo y βi es el coeficiente lineal, yxi es
el nivel de la variable independiente. Este modelo no
describe la interacción entre factores y se utiliza para
evaluar y evaluar factores importantes que influyen en
la respuesta. A partir del análisis de regresión de las
variables, RSM optimizó aún más los factores que
tienen un efecto significativo en la producción de
dextrano.
Optimización estadística de medios para dextrano Producción 473

Tabla 1. Experimentos de diseño de Plackett-Burman

corr
er Extra Extra Acetato
Sacaros Bacteriológico Triammonium MgSO4 MnSO4 pHDummy
cto de cto de de
a KH2PO4 4 4 Dextrano
levadu carne sodio 1)

ra
(UNA) peptona (B) citrato (F (G (H) (K) (L) (g / L)
(C) (RE) (E) ) RA (J)
M
O)
1 10 (-1) 2) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 2 (+1) 1 (+1) 1 (+1) 0,005 (-1) 0,01 (+1) 1 (+1) 6 (-1) 1 7.605
2 30 (+1) 0.1 (-1) 2 (+1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0,05 (+1) 0,01 (+1) 1 (+1) 6 (-1) 1 6.83
3 10 (-1) 0.1 (-1) 2 (+1) 2 (+1) 1 (+1) 0.1 (-1) 0,05 (+1) 0,01 (+1) 0.1 (-1) 8 (+1) -1 3,53
44 10 (-1) 2 (+1) 2 (+1) 0.1 (-1) 1 (+1) 0.1 (-1) 0.005 (-1) 0.001 (-1) 1 (+1) 8 (+1) 1 2.705
55 30 (+1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 1 (+1) 1 (+1) 0,05 (+1) 0,001 (-1) 1 (+1) 8 (+1) -1 8.26
66 30 (+1) 2 (+1) 0.1 (-1) 2 (+1) 1 (+1) 0.1 (-1) 0,05 (+1) 0,001 (-1) 0.1 (-1) 6 (-1) 1 5,75
77 30 (+1) 2 (+1) 0.1 (-1) 2 (+1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0,005 (-1) 0,01 (+1) 1 (+1) 8 (+1) -1 6.205
8 10 (-1) 2 (+1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 1 (+1) 0,05 (+1) 0,01 (+1) 0.1 (-1) 8 (+1) 1 27,55
9 10 (-1) 2 (+1) 2 (+1) 2 (+1) 0.1 (-1) 1 (+1) 0,05 (+1) 0,001 (-1) 1 (+1) 6 (-1) -1 16,455
10 30 (+1) 0.1 (-1) 2 (+1) 2 (+1) 0.1 (-1) 1 (+1) 0.005 (-1) 0.001 (-1) 0.1 (-1) 8 (+1) 1 8.39
11 30 (+1) 2 (+1) 2 (+1) 0.1 (-1) 1 (+1) 1 (+1) 0,005 (-1) 0,01 (+1) 0.1 (-1) 6 (-1) -1 9,915
12 10 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.1 (-1) 0.005 (-1) 0.001 (-1) 0.1 (-1) 6 (-1) -1 16,02

1) Las lecturas son un promedio de 2 determinaciones.

2) Los valores entre paréntesis son variables codificadas, componentes de medios (%, w / v)

ESTADOS UNIDOS); para encontrar los efectos Preparación de dextrano El caldo fermentado se
interactivos de las 4 variables que resultaron ser centrifugó a 11.400 × g, 4ºC durante 30 minutos
significativas de los experimentos de Plackett-Burman. Se (centrífuga J2-MC; Beckman, Fullerton, CA, EE. UU.)
empleó el diseño rotativo compuesto central (CCRD). Los Para obtener un sobrenadante claro. El sobrenadante se
términos codificados y los valores reales se presentan en la usó para la estimación de dextrano. Se añadieron dos
Tabla 2. El análisis de regresión se realizó sobre los datos volúmenes de etanol refrigerado al 96% (v / v) con
agitación constante. La mezcla se dejó reposar durante 1
obtenidos. Se usó una ecuación polinómica de segundo
hora a 4ºC para completar la precipitación de dextrano. El
orden para ajustar los datos mediante un procedimiento de
dextrano se recuperó en papel de filtro Whatman No. 1
regresión múltiple. Esto dio como resultado un modelo
por filtración al vacío y se secó a 70ºC hasta peso
empírico que relacionaba la respuesta medida con las constante (32).
variables independientes del experimento. Para un sistema
de 4 factores, la ecuación modelo es 2 2 2 Análisis estructural de polisacáridos. Espectro FT-IR
Y = β o + β 1A + β 2B + β 3C + del polisacárido se obtuvo usando un espectro FT-IR
β 4 4D + β 11 UNA + β22si + fotómetro (Spectrum RX1; Perkin Elmer, Norwalk, CT,
2 β33C +
β44re + β12AB + β13AC + β14AD + β23BC + β24BD +
β34discos compactos ESTADOS UNIDOS). El polisacárido seco se molió con
polvo de bromuro de potasio y se comprimió en gránulos.
dónde Y (dextrano) es la respuesta predicha; βo es el
1 13
interceptar;1β, β,
2 β3 y β 4 son los coeficientes lineales;1 Se obtuvieron los espectros H y C para el polisacárido
4 1
β,
β22, β33, y β44 son los coeficientes al cuadrado; β12, β13, en el diseño. Para optimizar el nivel de cada factor para una
β14, β23, β24 y β34 son los coeficientes de interacción y respuesta máxima, se empleó el proceso de 'optimización
A, B, C, D, A2, B2, C2, D2, AB, AC, AD, BC, BD y CD numérica'. La combinación de diferentes parámetros
Arkansase variables independientes. La proporción de optimizados, que dio el máximo rendimiento de dextrano, se
varianza explicada por los modelos polinómicos probó experimentalmente para validar el modelo.
obtenidos fue dada por elcoeficiente de determinación
múltiple, R2. los La ecuación polinómica ajustada se expresó
como gráficos de superficie de respuesta tridimensional para
encontrar la concentración de cada factor para la producción
máxima de dextrano. Esto muestra la relación entre las
respuestas y los niveles experimentales de cada factor utilizado
 a 25 C con un espectrómetro de RMN (Modelo AS400;
Varian,Palo Alto, CA, EE. UU.) 400 MHz equipado con
o
VnmrX para Sun Microsystems Ver. 6.1 software
(frecuencia de operación 400MHz para 1H-NMR y 13C-
NMR). Las muestras se disolvieron en OD a una
concentración de 10 mg / ml para 1H-NMR y 40 mg / ml para
el análisis de 13C-NMR. Los desplazamientos químicos 1H 2

se referenciaron a D2O interno (4,79 ppm a 25 ° C). Se

o
utilizó el sistema de cromatografía líquida de alta resolución
(HPLC) Waters 2489 con detector de índice de refracción
2414 (Waters Corporation, Milford, MA, EE. UU.) Para
analizar el peso molecular del dextrano obtenido (Waters
HSPGelTM, columna AQ 4; 150 × 6 mm, temperatura de la
columna
o
30 C). Se usó agua de grado HPLC con una velocidad
de flujo de 0,4 ml / min como fase móvil. Se usaron
ésteres de poliglicol de diferente peso molecular como
patrones. EmpowerTM 2 software de datos de
cromatografía utilizado para el análisis.
474 SD Sawale y SS Lele

Tabla 2. Matriz de diseño giratorio compuesto central para RSM que muestra el rendimiento observado y previsto de dextrano
Componentes multimedia (%, w / v) Y, dextrano (g / L) 1)
corre Sacarosa Extracto de Extracto de Acetato de sodio
r carne levadura
(UNA) (SI (C) (R Experimental Predicho
) E)
1 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 32,58 33,77
2)
2 31.25 (+1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 16,11 14.04
3 13,75 (-1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 32,03 29,38
44 22,50 (0) 1.025 (0) 2.000 (+2) 1.025 (0) 23,97 28,17
55 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 35,12 33,77
66 31.25 (+1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 30,83 35,10
77 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 34,28 33,77
8 5,00 (-2) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 24.20 24.40
9 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 0,050 (-2) 32,63 34,53
10 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 30,63 33,77
11 31.25 (+1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 32,91 35,81
12 13,75 (-1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 24,19 26,28
13 22,50 (0) 1.025 (0) 0,050 (-2) 1.025 (0) 60,93 55,52
14 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 35,13 33,77
15 31.25 (+1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 25.25 23,28
diec 13,75 (-1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 48,08 49,68
iséis
17 13,75 (-1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 37,20 36,69
18 22,50 (0) 2.000 (+2) 1.025 (0) 1.025 (0) 37,45 34,72
año
s
19 40,00 (+2) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 5.12 3.72
20 13,75 (-1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 33,97 35,66
21 22,50 (0) 0,050 (-2) 1.025 (0) 1.025 (0) 35,14 36,67
22 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 2.000 (+2) 44,35 41,24
23 13,75 (-1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 37,36 39,53
24 31.25 (+1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 35,57 35,69
25 13,75 (-1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 31,42 28,13
26 31.25 (+1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 20,41 19,86
27 13,75 (-1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 1.512 (+1) 55,20 54,98
28 31.25 (+1) 1.512 (+1) 1.512 (+1) 0,537 (-1) 24,79 26,63
29 22,50 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 1.025 (0) 34,89 33,77
30 31.25 (+1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 0,537 (-1) 27,69 27,23
1) Las lecturas son un promedio de 2 determinaciones. 2) Los valores entre
paréntesis son variables codificadas.

Resultado y discusión
Aislamiento e identificación de la cepa aislada En el
presente estudio, los cultivos se aislaron de fermentados.
idli batter. Estos aislamientos se mantuvieron como reservas de glicerol y se
revivieron en medios MRS. El cultivo UICT / LI18 mostró la producción de
exopolisacárido, por lo tanto, se seleccionó para estudios adicionales. El
cultivo fue cocos Gram-positivos y no móviles. No utiliza arginina, no
produce indol ni reduce los nitratos. Se observó producción de gas. Se
observó producción de limo cuando se cultivó en placas de agar gelatina-
sacarosa. Las pruebas bioquímicas mostraron que el cultivo fue negativo a
catalasa, puede utilizar glucosa, fructosa, sacarosa, galactosa, sorbitol,
rafinosa, lactosa, manosa, inulina y adenina, pero no xilosa y L- arabinosa. El
estudio 16S rRNA mostró alta homología
con Leuconostoc mesenteroides especie (AB326298). La
relación filogenética entre diferentes cepas de
género.Leuconostoc y se realizó nuestro aislado
bacteriano UICT / LI18. Sobre la base del estudio de
secuencia del gen 16S rRNA, el aislado se identificó
comoL. mesenteroides.
Selección de factores influyentes por el diseño de
Plackett-Burman El diseño de Plackett-Burman se adoptó
para seleccionar los componentes medios más
significativos. El diseño junto con la respuesta de
diferentes ensayos experimentales se muestra en la Tabla
1. Los resultados del análisis estándar de varianza
(ANOVA) calculados a partir de las pruebas
experimentales que se muestran en la Tabla 3. Los
coeficientes de contraste permiten la determinación del
efecto de cada componente. Un coeficiente grande, ya
sea positivo o negativo, indica que un factor tiene un
gran impacto en la respuesta. Un coeficiente cercano a
cero significa que
 Optimización estadística de medios para dextrano Producción 475

Tabla 3. Análisis de varianza (ANOVA) para el modelo de Plackett Burman para la respuesta1)

Coeficiente
SourceSum de cuadrícula
DF Media squareF-valueProb> F
estimar
Modelo 534,61 9,934583 10 53,46 265,31 0,0477
UNA 67,75 -2.37625 1 67,75 336,26 0,0347
si 26,83 1.495417 1 26,83 133,17 0,0550
C 46,27 -1.96375 1 46,27 229,65 0,0419
re 45,41 -1.94542 1 45,41 225,38 0,0423
mi 159,03 -3.64042 1 159,03 789,23 0,0227
F 114,91 3.094583 1 114,91 570,30 0,0266
GRAMO 25,62 1.46125 1 25,62 127,16 0,0563
H 1,37 0.337917 1 1,37 6.80 0,2331
J 44,44 -1.92458 1 44,44 220,58 0,0428
K 2.935 -0,49458 1 2,93 14,56 0.1631
Residual 0,20 9,934583 1 0,20
1) R2 = 0.9962; R2 ajustado = 0.9958; Pred R2 = 0.9457; CV = 4.51

un factor tiene poco o ningún efecto. El valor p es la Los factores mencionados y el efecto de sus interacciones
probabilidad de que la magnitud de un coeficiente de sobre la producción de dextrano fueron determinados por
contraste se deba a la variabilidad aleatoria del proceso y CCRD. La Tabla 2 enumera los detalles de los valores
sirve como herramienta para verificar la importancia de reales y codificados empleados en el RSM, así como las
cada uno de los coeficientes. Un valor p bajo indica un respuestas predichas y observadas para la producción de
efecto 'real' o significativo. ANOVA para la producción de dextrano (Y). La ecuación de regresión de segundo orden
dextrano (Y, g / L) indicó que el 'valor F' era 265.31, lo que proporcionó los niveles de producción de dextrano
implicaba que el modelo era 2 significativo. ANOVA indicó comouna función de los valores iniciales de sacarosa,
elValor R de 0.9962. Esto nuevamente aseguró un ajuste extracto de carne de res, extracto de levadura y acetato
satisfactorio del modelo a los datos experimentales, e de sodio que se puede predecir mediante la siguiente
indicó que el modelo podría explicar la variabilidad del ecuación.
99% en la respuesta. La precisión adecuada que mide la
relación señal / ruido fue de 59.80 para la respuesta, lo Dextrano, Y (g / L)= + 7.74158 + 2.53475 A + 4.20790 si
16.06833 C + 31. 56590 D− 0.064381 A +2.01786 B +
-

2
que indica una señal adecuada. Una relación de> 4 es 8.49386 C +4.32424 D +0.26934 AB + 0.13703 AC− 2
2 2
deseable. Este modelo se puede utilizar para navegar2 por 0.62919 AD − 5.38001 BC - 9.64957 BD− 12.62393 CD

el espacio de diseño para la respuesta Y. La 'Pred R' de 2

0.9457 está en razonable acuerdo con la 'R ajustada' de
0.9958 para Y. La ecuación del modelo se puede mostrar
como
Dextrano, Y (g/L)= +21.63741
6.87685 K HPO +64.94444 MgSO +75.09259 MnSO
244
Donde A = sacarosa, B = extracto de carne de res, C =
extracto de levadura, D = acetato de sodio
Los resultados de ANOVA para la ecuación cuadrática de
RSM para la respuesta Y se muestran en la Tabla 4. De acuerdo
2 2
- 0.23762 sacaros a + 1.57412 peptón bacteriológico − 2.06711 extracto de levadura − 2.04781 extracto de carne − 8.08981 citrato de triammonio +
con el presente modelo A, C, D, A, C, AD, BD y CD son
4
términos significativos del modelo. ANOVA para la
4
producción de dextrano (Y, g / L) indicó que el 'valor F'
era 21.31, lo que implicaba
-

modelo para ser

tienen valores designificativo. Términos modelo que
4.27685 acetato de sodio - 0.49458 pH
2
La optimización usando sacarosa RSM, extracto de carne
La producción de dextrano está relacionada con la cantidad de res, extracto de levadura y acetato de sodio se
de dextransucrase producida en el medio. La sacarosa es seleccionaron como las variables más importantes que
afectan la producción de dextrano de los experimentos de
una fuente esencial de carbono para la dextransucrasa y la
Plackett-Burman.
2 Niveles óptimos de los anteriores.
síntesis de dextrano. El extracto de levadura y el extracto de
carne se seleccionaron como fuente de nitrógeno, ya que
resultaron significativos para la producción de dextrano de
las especies de Leuconostoc (10,33). La sacarosa, el
extracto de carne de res, el extracto de levadura y el acetato
de sodio se seleccionaron como componentes significativos 2

para una mayor optimización por RSM.

'Prob> F' menor que 0.05 se considera significativo,
mientras que aquellos mayores que 0.10 son
insignificantes. La 'falta de ajuste del valor p' de 0.0591
implica que la 'falta de ajuste' no es significativa en
relación con el error puro y que el modelo se ajusta.
ANOVA indicó el valor R de 0.9521. Esto nuevamente
aseguró un ajuste satisfactorio del modelo cuadrático a
los datos experimentales, e indicó que este modelo
podría explicar la variabilidad de respuesta del 95%. La
precisión adecuada que mide la relación señal / ruido
fue de 22.45. El 'Pred R' de 0.7456 está razonablemente
de acuerdo con el 'R ajustado' de 0.9074 para Y. Una
buena correlación entre los resultados observados y los
pronosticados refleja la precisión y aplicabilidad del
diseño central compuesto para la optimización del
proceso.
476 SD Sawale y SS Lele

Tabla 4. Resultados del análisis de varianza (ANOVA) para el modelo cuadrático de diseño giratorio compuesto central (CCRD) para la
respuesta1)

Fuente Suma de cuadrados DF Cuadrado medio Valor F Prob> F

Modelo 3.175,81 14 226,84 21,31 <0.0001
UNA 641,36 1 641,36 60,26 <0.0001
si 5,71 1 5,71 0,53 0.4751
C 1.122,20 1 1.122,20 105,43 <0.0001
re 67,62 1 67,62 6.35 0,0235
2
A 666,43 1 666,43 62,61 <0.0001
2
B 6.30 1 6.30 0,59 0,4533
C2 111,76 1 111,76 10.50 0.0055
D2 28,96 1 28,96 2,72 0.1198
AB 21,11 1 21,11 1,98 0.1793
C.A. 5.46 1 5.46 0,51 0,4846
ANUNCIO 115.25 1 115.25 10,82 0.0050
antes de Cristo 26.15 1 26.15 2,45 0.1378
BD 84,14 1 84,14 7,90 0,0131
discos 144,01 1 144,01 13,53 0.0022
compactos
Residual 159,64 15 10,64
Falta de ajuste 143,19 10 14,31 4.35 0,0591
Error puro 16,45 55 3.29
1) R2 = 0.9521; R2 ajustado = 0.9074; Pred R2 = 0.7456; CV = 9.99

El rendimiento de dextrano para diferentes niveles de un menor rendimiento de dextrano. Una concentración más
variables significativas se predijo a partir de los gráficos de alta de sacarosa muestra una acción inhibitoria para los
respuesta de superficie respectivos. Cada gráfico representa rendimientos de dextrano debido al aumento de la viscosidad
un número infinito de combinaciones de 2 variables de durante la fermentación, lo que da como resultado una
prueba con las otras 2 mantenidas en sus respectivos valores limitación de la transferencia de masa de nutrientes (10,33).
centrales. Cuando todas las variables se mantuvieron en sus
valores centrales, el rendimiento de dextrano fue de 35.15
g / L. La respuesta para los factores interactivos, sacarosa y
extracto de carne de res, donde el extracto de levadura y el
acetato de sodio se mantuvieron a nivel central, el
rendimiento de dextrano para esta interacción fue de 36.75 g
/ L; correspondiente a la gran cantidad de sacarosa y
extracto de carne. La interacción entre sacarosa y acetato de
sodio, donde el extracto de carne y el extracto de levadura
se mantuvieron en valores centrales. El aumento en la
concentración de sacarosa y acetato de sodio da como
resultado 39.60 g / L de dextrano. Interacción entre el
extracto de carne y el acetato de sodio para el dextrano,
donde la sacarosa y el extracto de levadura se mantuvieron
en valores centrales. El aumento en la concentración de
acetato de sodio y extracto de carne de res da como
resultado un rendimiento de dextrano de 39.74 g / L. La
interacción entre el acetato de sodio y el extracto de
levadura. La concentración de acetato de sodio y extracto de
levadura, respectivamente, da como resultado una alta
producción de dextrano, es decir, 48,33 g / L, cuando la
sacarosa y el extracto de carne se mantienen a valores
centrales. Se puede ver en las gráficas tridimensionales que
a concentraciones más bajas y más altas de acetato de sodio,
extracto de levadura, sacarosa y extracto de carne resulta en
acetato de sodio 1.69% fue óptimo para la producción de
dextrano. La validación se realizó en matraces de agitación
en las condiciones predichas por el modelo. El rendimiento
previsto fue de 60,73 g / L. En la experimentación, se
obtuvo 60,30 g / l de producción de dextrano. Se encontró
que los valores experimentales estaban muy cerca de los
valores predichos y, por lo tanto, el modelo fue validado
con éxito.
Para evaluar el potencial del nuevo aislado UICT / L18
como productor de dextrano, el rendimiento de dextrano
obtenido en este trabajo se comparó con la literatura (9-
15). Dependiendo de la cepa, las condiciones de cultivo
tales como aireación, agitación, temperatura, pH y
nutrientes utilizados, la actividad enzimática, la producción
de dextrano y biomasa varía de 3.2 a 782.68 DSU / mL,
4.78 a 55 g / L, y 4.04 a 6.04 g / L, respectivamente. Sin
embargo, la cepa UICT / L18 obtenida por nuestro método
produce 60,30 g / L de dextrano, que es mejor que los
informes anteriores. Por lo tanto, se puede decir que el
aislado UICT / L18 es un excelente productor de dextrano.
Un trabajo de investigación informa que la producción de
dextrano supera los 55 g / L, sin embargo, no se obtuvo la
reproducibilidad de los resultados utilizando las mismas
condiciones (10).

Análisis estructural del polisacárido Cada polisacárido tiene

sus picos característicos específicos con una posición e
intensidad específicas que permiten su posible identificación
en el análisis espectral FT-IR. Los carbohidratos muestran
una alta absorbancia en la región de la huella digital, es decir,
1.200-950 / cm. Un pico fuerte a 3.362 / cm muestra
vibración de estiramiento -OH con alifático
-CH pico de vibración de estiramiento a 2.926 / cm. El
pico a 1,638 / cm muestra la presencia de agua unida.
Picos de absorcióna
Optimización estadística de medios para dextrano Producción 477

1 13
Tabla 5. Asignación de desplazamiento químico de H y C-NMR de polisacáridos
Schouche y su equipo en NCCS, Pune, India, por los
Protón / carbono C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6
estudios de secuenciación de rSNA 16S.
1H-NMR
4.96 3,53 3.73 3.85 4.10 4.18
13C-NMR
98,41 74,10 72,10 70,88 70,24 66.25

870 y 922 / cm muestra la presencia de configuración α de

unidades de azúcar. Sin embargo, no se observó el pico
característico para la configuración β a 890 / cm. Los picos
característicos a 1.155, 1.124 y 1.015 / cm indican un
residuo de glucosa que tiene α-piranosa. Se observó un
puente glucosídico y un pico de estiramiento -COC- a 1.155
/ cm. Los picos característicos a 1.124 y 1.015 / cm del
polisacárido pertenecen aenlaces α- (1 → 6) y α- (1 → 4)
respectivamente (34,35).
La configuración para dextrano se confirmó
1 13
adicionalmente por los espectros de H-NMR y C-NMR
(Tabla 5). Señal de protones anoméricos a 5,25 y 4,96 ppm
asignados a α- (1 → 4) y α- (1 → 6) Glcp, respectivamente.
Los cambios químicos de 3.53 a 4.18 ppm indican protones
en el carbono C-2 a C-6 del anillo glucosídico. Debido a la
fuerte señal de agua (HOD) a 4.79, la señal anomérica a
4.96 se oscureció (34).
Sobre la base de los valores de la literatura, se puede
predecir que la resonancia a 104.88 y 98.41 ppm
corresponde a C- 1 de los residuos de Glcp α- (1 → 4) y α-
(1 → 6), respectivamente. Las principales resonancias de la
región anomérica se producen en
98,41 ppm indica el enlace de C-1, así como la señal en
66,25 ppm indican el enlace de C-6 (16,35,36).
Conforme a FT-IR, 1H-NMR y 13C-NMR se observó la
presencia de enlaces α- (1 → 6) y α- (1 → 4) en el
polisacárido. Sobre la base de las intensidades máximas (16),
se encontró que la abundancia de α- (1 → 6) es el principal
contribuyente con respecto a la unión de α- (1 → 4) en el
polisacárido. El peso molecular del dextrano fue de 9.7 × 105
Da, determinado por cromatografía de permeación en gel.
En resumen, las técnicas estadísticas secuenciales,
Plackett-Burman y RSM se utilizaron con éxito para
encontrar los valores óptimos de los factores
significativos para lograr la producción máxima de
dextrano para la cepa de L. mesenteroides, aislada de la
masa idli fermentada tradicional india. El FT-IR, Los
espectros de 1H-NMR y 13C-NMR indicaron la presencia de
enlaces α- (1 → 6) y (1 → 4) en este polisacárido. Los
polisacáridos que tienen tales enlaces pueden usarse como un
posible agente antitumoral. Por lo tanto, la cepa aislada de
Leuconostoc puede considerarse para la producción de
dextrano que tiene tales enlaces estructurales para diversas
aplicaciones farmacéuticas.

Agradecimientos Los autores desean agradecer al

Departamento de Biotecnología, Nueva Delhi, India, por el
apoyo financiero para este trabajo y al Dr. Yogesh
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