BENEMÉRITA UNIVERSIDAD

AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LIC. QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA I

PRACTICA No.4

CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Pseudomonas

IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

ALUMNO:

RODRÍGUEZ MUÑOZ EMMANUEL

PROFESORA:

PATRICIA SUAREZ ALBORES

 Identificación de
Pseudomonas aeuroginosa
Agar sangre MacConkey

Sé tomara una pequeña

porción del cultivo con la
asa esterilizada y enfriada.

MORFOLOGIA
GRAM - TINCION DE GRAM

+ FORMA: AGRUPACION:
Bacilo Cadena
MIO

CATALASA

+
OXIDASA

TSI

OXIDATIVO
METABOLISMO

Pseudomonas sp. Crecimiento

Agar cetrimida

P. aeuroginosa
 IDENTIFICACION:
1. Tinción de Gram:

Los microorganismos se Se puede observar

colorearon de color igualmente que su
rosado lo que dice que forma es en
no tuvieron afinidad por “bacilos” que están
el cristal violeta por lo agrupados en
que se le considerara “cadenas”
como GRAM -.

2. Crecimiento en agar MacConkey y agar Sangre.

Se pueden observar en agar

sangre colonias, grandes, β
hemolíticas y con brillo
metálico.

Fig. 1. Pseudomonas sp
en cultivo de Agar sangre.

Se observan colonias de 2-3

mm, planas, lisas, sin
fermentación de lactosa con
margen regular, se observa
un color plata o gris.

3. MIO

Fig. 2. Pseudomonas sp en
cultivo Agar MacConkey
 Se observan que esta
bacteria tiene movilidad +
debido hay que hay turbidez y
crecimiento más allá de la
línea de siembra original.

4. CATALASA (+)

Se observo un burbujeo al agregar

peróxido de hidrogeno a la muestra
ya que nuestra bacteria esta mediante
la enzima catalasa descomponiendo
al peróxido de hidrógeno en Agua +
Oxigeno:

5. OXIDASA (+)

Se agrego una gota del reactivo

Fig. 3. Prueba positiva de presencia
de c citocromo oxidasa.
de Kovac’s en el papel y
posteriormente tome una parte
de mi bacteria con el asa de
siembra, que frote sobre el
papel y este tomo una
coloración a los pocos
segundos, lo cual significa que
hay presencia de la enzima “c
citocromo oxidasa” (Figura 3).

6. TSI:
 Se puede observar que el
microorganismo es no
fermentador ya que este no
fermento a los carbohidratos del
medio y no cambio de color el
rojo de fenol.

Fig. 4. TSI

7. O/F

Se puede observar que el

A B
microorganismo es “no
fermentativo” debido a que en
ambos ambientes (Figura 5) no
se observó un cambio solo en la
parte superior lo que no sindica
que no hubo acidificación y la
bacteria es “Oxidante”.

Fig. 5. Medio O/F con identificar de azul

de bromotimol.

8. Estas caracterizan a la familia de las bacterias “Pseudomonas sp” ya

que esta tiene movilidad positiva al igual que su oxidasa y están son
distintivas de esta especie, ahora solo faltaría saber a que subespecie
pertenece.

9. AGAR CETRIMIDA

Es un Agar selectivo de P.
aeruginosa por lo que solo esta
especie puede en este tipo de
cultivo por lo que descartaríamos
automáticamente al haber
crecimiento a P. fluorescens y P.
putida.
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia del género Pseudomonas?
La contaminación microbiológica del sistema de tratamiento y de distribución
constituye un problema actual de interés sanitario. Uno de los aspectos más
importantes es la limpieza y desinfección de estos y la persistencia de
determinados microorganismos tales como Pseudomonas aeruginosa.
Es de ahí la relevancia ya que estos son la mayoría de casos en nosocomios y
como oportunistas empeoran la salud del paciente por lo que es importante
detectarlas a tiempo para un diagnostico oportuno.

2.- ¿Qué pruebas de laboratorio permiten diferenciar una enterobacteria del

género Pseudomonas?
Prueba de metabolismo (pseudomonas oxidativo, enterobacteria fermentativa)
Prueba de OXIDASA
Prueba de crecimiento anaerobio

3.- ¿Para qué es útil el medio O/F y cuál es su fundamento?

El medio OF o de fermentación de glucosa es un agar semi-sólido especialmente
diseñado para el estudio del metabolismo oxidativo y fermentativo de los
carbohidratos en un grupo importante de microorganismos diferente a las
enterobacterias, denominados bacilos Gram negativos no entéricos.
Fundamento: El carbohidrato proporciona energía y a la vez sirve para estudiar el
comportamiento del microorganismo frente a él, es decir, permite clasificar a la
bacteria como un organismo oxidativo, fermentativo o no sacarolítico.

El medio OF contiene una relación de peptona/carbohidrato de 1:5 a diferencia de

los medios convencionales de 2:1. Esto garantiza que la cantidad de aminas
alcalinas formadas a partir de la degradación de las peptonas no neutralice la
formación de ácidos débiles. Por otra parte, el medio contiene cloruro de sodio y
fosfato dipotásico. Estos compuestos estabilizan osmóticamente al medio y
regulan el pH respectivamente. El azul de bromotimol es el indicador de pH, el
cual hace virar el color del medio de verde a amarillo con la producción de ácido.

Algunos microorganismos pueden utilizar los carbohidratos por la vía oxidativa o

por la vía fermentativa, mientras que otros no toman ninguna de las dos vías. Esto
depende de la característica de cada microorganismo.

4.- ¿Por qué es importante utilizar el medio Seller´s, en la identificación de

Pseudomonas?
Aunque este tipo de medio ya esta descontinuado era importante ya que nos daba
resultados precisos sobre el tipo de pigmento que producía la bacteria y al crecer
ahí un organismo con las características de Pseudomonas sp podríamos afirmar
en ese momento y junto con los resultados de la pigmentación que nuestro
microorganismo era Pseudomonas aeruginosa.

5.- ¿Qué pruebas de laboratorio son útiles para diferenciar especies de

Pseudomonas?
Cultivo Agar cetrimida
Cultivo en Agar Sellers
Piocianina
Pieverdina

BIBLIOGRAFÍA:
 Cowan, S. T., Steel, K. J., Barrow, G. I., & Feltham, R. K. A. (2003). Cowan
and Steel's manual for the identification of medical bacteria. Cambridge:
Cambridge University Press.
 Koneman, E. W. (2008). Koneman diagnóstico microbiológico: Texto y atlas
en color. Buenos Aires [etc.: Panamericana.
 González González, M., García Melián, M., & Mariné Alonso, M. (2020).
Importancia sanitaria de Pseudomonas aeruginosa en agua de hemodiálisis
y su desinfección. Revisado el 13 de septiembre de 2020, en
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-
34662014000200005#:~:text=Pseudomonas%20aeruginosa%20pertenece
%20al%20g%C3%A9nero,de%20importancia%20en%20infecciones
%20nosocomiales.
 Agar cetrimida: fundamento, preparación, usos - Lifeder. (2020). Revisado
el 13 de septiembre de 2020, en https://www.lifeder.com/agar-cetrimida/