Componente Microbiologia de Suelos

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Componente microbiologia de suelos
Microbiologia Ambiental (Universidad Nacional Abierta y a Distancia)
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Componente práctico del curso Microbiología de Suelos - 303019

Grupo: 303019_1141
Presentado por:
Carlos Arturo Plata Plata
Presentado a:
Javier David Buitrago Villamil
Tutor
Universidad Nacional Abierta y a Distancia - UNAD

Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y de Medio Ambiente – ECAMPA
Microbiología de suelos 303019A
Mayo de 2022

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INTRODUCCIÓN
La microbiología es la ciencia que se encarga del análisis y estudio de los
microorganismos, los cuales son seres vivos que no son visibles al ojo humano, es decir, aquellos
organismos que son solo visibles a través del microscopio. Los microorganismos cumplen
funciones importantes en todos los ecosistemas; estableciendo relaciones entre ellos como lo son
mutualistas, parasitarias, neutras, entre otras. Entre los tipos de microbiología se encuentra la
microbiología de suelo, siendo su objetivo principal el estudiar la población microscópica del
suelo y como estos participan en las diversas transformaciones que ocurren en el suelo. Esta
ciencia es de vital importancia para la agronomía a la hora de querer comprender las relaciones
que establecen estos microorganismos entre sí, y como estas relaciones y microorganismos en
general, contribuyen al buen desarrollo de los suelos destinados para plantaciones agrícolas.
Dentro de esta ciencia encontramos la técnica de tinción de Gram, técnica implementada
para saber la cantidad de membranas presentes en una bacteria según la distribución del
peptidoglicano de la pared celular, teniendo como resultado de este proceso bacterias Gram -, las
cuales poseen una pared celular más fina y las Gram +, las cuales poseen una pared celular más
gruesa. En el componente se desarrollarán los medios de cultivo de agar de papa y agar nutritivo,
se realizará la siembra de microorganismos y luego, por medio de la tinción de Gram
analizaremos a través del microscopio los resultados obtenidos de la siembra y técnicas
realizadas.

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OBJETIVOS
Objetivo principal
- Apropiar las técnicas básicas de microbiología de suelos para el reconocimiento de las
formas y cuerpos comunes de diferentes microorganismos encontrados en un medio de
cultivo.
Objetivos secundarios
- Realizar la preparación de los agares para los medios de cultivos y el agua peptona de
acuerdo a las recomendaciones dadas por la casa comercial.
- Realizar la siembra en cada uno de los medios de cultivo y brindarles las condiciones
necesarias para que los microrganismos que se encuentran en la muestra puedan crecer.
- Conocer la técnica de tinción de Gram, desarrollar su proceso y aplicarlo con los
microorganismos que se desarrollaron en los medios de cultivo.
- Observar por medio del microscopio los resultados obtenidos de la siembra y la técnica
de tinción de Gram en las muestras utilizadas, reconocer de manera general las formas de
las bacterias y los hongos vistos microscópicamente y encontrados en los medios de
cultivo.

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METODOLOGÍA
Para el correcto desarrollo del componente práctico se llevaron a cabo los siguientes procesos:
1. Preparación de los medios de cultivo y agua peptonada.

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Se inicia con la preparación de los medios de cultivo, los cuales serán el agar de papa y el
agar nutritivo, para su preparación se deberá tener en cuenta las indicaciones de la casa
comercial. Se empieza con el agar nutritivo. Para ello, se procede sabiendo que cantidad de agar
nutritivo es necesario preparar de acuerdo a la
cantidad de agua a utilizar, por lo tanto, se
tiene que, para preparar 28 gramos de agar
nutritivo, se necesita 1 litro de agua destilada,
entonces para saber qué cantidad de agar es
necesario para preparar en 0,4 litros de agua
destilada se aplicara la ley de tres de la siguiente manera:
Ahora, se realiza la preparación del agar de papa o dextrosa (PDA), donde se tiene que
para preparar 39 gramos de agar de papa es necesario 1 litro de agua destilada, entonces, se debe

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saber cuántos gramos de agar de
papa son necesario para 0,4 litros
de agua destilada, así que se aplica
la regla de tres:
Con los datos obtenidos, se
prepararán los medios de cultivo con las cantidades requeridas utilizando la balanza, vasos
precipitados, la placa de calentamiento o de agitación con el fin de utilizar las cantidades
necesarias para cada tipo de agar, tanto nutritivo como de papa y disolverlas de la mejor manera
en el agua destilada. Después, se llevarán los medios de cultivo al auto clave durante 25 minutos
a 121 °C con el fin de esterilizar y finalizado este tiempo, se servirán los medios en las
respectivas cajas de Petri.

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Después de preparar los medios de cultivos, se debe preparar el agua peptonada según las
indicaciones de la casa comercial. Para este caso, se debe preparar 3 gramos de peptona en 200
ml de agua, siendo necesario el uso de los implementos anteriormente utilizados, como la
balanza y la placa de calentamiento o agitación para disolver bien el agua peptonada. Luego,
debe llevarse a auto clave por 25 minutos a 121°C.
2. Aislamiento de microorganismos de muestra de suelo:
Con la muestra de suelo que se llevó al laboratorio, se realizara el siguiente
procedimiento:
a) Pesar 1 gr de tierra.
b) Agregar el gramo de tierra en una probeta y
se diluirá en 9 ml de agua peptona estéril y
será la primera muestra (1), se homogenizará
y se dejará reposar un momento para que los
sólidos se decanten. A partir de esta solución,
se realizarán dos soluciones más, donde se
pasarán 3 ml de la muestra número 1 a
otra probeta para formar la muestra 2, en
esta probeta se le agregará 3 ml más de
agua peptonada y se dejará reposar por
un momento, siendo está la muestra
número 2. Finalmente, se pasarán 3 ml de
la muestra número 2 a otra probeta y de

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igual forma que en la anterior, se
agregarán 3 ml de agua peptonada a la
tercera probeta formándose así la
muestra número 3 y se dejara reposar.
Todo este procedimiento se realiza
dentro de la cabina UV.
c) Ahora se debe realizar la siembra en los
medios de cultivo. En este momento, los
medios de cultivos serán de un color
diferente, el agar nutritivo se tornará en un color oscuro y el agar de papa en color claro.
La siembra se realizará de la siguiente forma:
- La siembra de microorganismo se realizará utilizando la cabina UV esterilizar, radiación
ultravioleta.
- Se llevarán los medios de cultivo a la cabina, las tres muestras de cada agar, un asa de
drigalsky y como opcional, un gotero,
esto para facilitar la extracción de la
muestra necesaria para realizar la
siembra.
- Se utilizaran tres medios de cultivo del
agar nutritivo y tres medios del agar de
papa.

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- Para cada muestra, habrá un medio de cultivo tanto nutritivo como de papa. Se tomará
una pequeña cantidad de muestra con el gotero, y se colocará en la mitad de cada uno de
los medios de cultivo, luego se debe expandir la muestra con el asa de drigalsky por todo
el medio y finalmente, se cerrará la caja de Petri. Se debe realizar este mismo proceso
con cada uno de los medios y con cada una de las muestras, iniciando con la muestra uno
hasta la muestra tres.

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Se
marcará cada medio con una cinta de enmascarar, el medio de la muestra 1 se marcará
como 2-1, el medio de la muestra 2 será 2-2 y el medio de la muestra 3 será 2-3, el 2 es
debido a que en el laboratorio fuimos el grupo 2. Dependiendo de medio de cultivo en el
que se realice la siembra de la muestra, sea el agar de papa o el agar nutritivo, se
colocara en la cinta especificando que agar y que muestra es.

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- Finalmente, se tomarán los tres medios de cultivo del agar nutritivo, se sellarán bien con
cinta de enmascarar y se colocarán en una lámina de aluminio para introducirlos en la
incubadora a una temperatura de 37°C durante 48 horas, así, los microorganismos se
desarrollarán correctamente.
- Se debe saber que, en la siembra, en el agar nutritivo se desarrollaran en mayor medida y
cantidad las bacterias y en el agar de papa se desarrollaran en mayor cantidad y medida
los hongos. Se pueden desarrollar otros microorganismos en ambos agares, pero serán

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seculares, debido a que ambos medios se han preparado para obtener bacterias en el agar
nutritivo y hongos en el agar de papa.
3. Tinción de Gram
La tinción de Gram, es una tinción diferencial que se emplea para dividir las bacterias en
dos grandes grupos en función a la estructura de su pared celular, las Gram positiva (Gram +)
que se tiñen de rojo y las Gram negativa (Gram -) que se tiñen de azul oscuro o violeta. Para esto
se realiza el siguiente procedimiento:
- Cuando se inicie a tomar la muestra, se debe tener en cuenta que, para tomar la muestra
de hongos, se realizará tomando con el asa de la mitad del medio de cultivo, y para las
bacterias, con el asa, se tomará la muestra por los bordes.

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- Es importante saber que para manejar
muestras de hongos se debe utilizar el
asa puntuda o de aguja y para
manejar bacterias se utilizara el asa
de drigalsky.
- Siempre se esteriliza el asa al rojo
vivo utilizando el mechero, además,
se debe esterilizar el asa cada vez que
está se utilice, luego se deja enfriar al
lado de la muestra.
- Se añadirá una cantidad de la muestra
sobre una gota de agua que se tiene
en un portaobjetos, se expande con la
ayuda del asa y se deja secar al aire.

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- Se fija la muestra por calor a
la llama, teniendo cuidado de
no sobrecalentar la muestra.
- Se comienza la tinción con la
implementación del colorante
básico, en este caso, el cristal
violeta, el cual tiñe todas las
células de color morado, se
añade sobre la superficie de
la muestra y se espera por un
minuto.
- Se retira el cristal violeta y
se añade Lugol como
mordiente (fija el colorante),
se cubre la zona de tinción y
se espera nuevamente un
minuto.
- Se retira el Lugol, se
decolora con alcohol y se
espera durante 30 segundos.
- Se retira el alcohol con agua
destilada y seguidamente se
añade el colorante de

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contraste que puede ser fucsina o safranina.
- Se espera un minuto medio, pasado este tiempo, se retira la safranina o fucsina y se
procede a limpiar con agua y se pasa a observar la muestra en el microscopio de menor a
mayor objetivo.

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la observación de los medios de cultivo y la observación microscópica, se logro observar de
manera general lo siguiente:
- Agar nutritivo

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Bacterias

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Gram negativas (Gram -)

esferas (coccus) Gram positivas (Gram +)
Bastones (bacillus)
Bacillus
Cocos
Bacteria cocos en colonia Bacteria Espirilos

Bacteria sarcinas

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Bacterias sarcina
Es una bacteria coco Gram positiva que pertenece a la familia de los clostridiaceae.
Con las imágenes observadas, se puede decir que, de manera general, debido a las
características que presentan los medios de cultivo, en el medio de cultivo del agar nutritivo se
pueden llegar a encontrar posiblemente bacterias como la Enterococcus faecalis, la Pseudomonas
aeruginosa, la Staphylococcus aureus o hasta la Escherichia coli.
- Agar de papa
Hongos
Moho
Penicillium
Penicillium
scrysogenum
Moho negro Levaduras
Aspergillus niger
Penicillium
Fusarium oxysporum

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Penicillium Scrysogenum: Colonia oval verde oscuro y borde blanco, textura
polvorienta. Reverso con anillos de color blanco crema, amarillo naranja y borde blanco crema.
Levaduras: Colonia circular de color blanco con borde irregular ondulado y textura
algodonosa. Reverso amarillo blanquecino
Stahyvotys: Colonia circular de color café oscuro y borde plomo, textura lanosa. Reverso
con anillos café oscuro, café, café oscuro y café claro, con estrías en todo su interior.
Espiral
Coccus Streptobacillus Bacillus

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Coccusbacillus
CONCLUSIONES
En el desarrollo de esta actividad se apropiaron y practicaron algunas de las técnicas
básicas de microbiología de suelos como lo es la técnica de preparación de cultivos, método de
siembra y tinción de Gram. Por medio de la tinción de Gram y la observación microscópica se
lograron analizar a manera general las diferentes estructuras en las que se presentan las bacterias
y detallar los nombres de las posibles bacterias u hongos que se pueden presentar en el medio de
cultivo, según las características que presenta el medio y la estructura observada.
Se logro realizar el reconocimiento de los equipos necesarios a la hora de realizar la
preparación de medios de cultivo, siembras de muestra, tinción de gran y observación de
microorganismos, además de aprender a dar el uso adecuado a cada uno de estos equipos.
Finalmente, se logró distinguir desde el conocimiento teórico y el fundamento práctico, la
cuantificación y demostración de la actividad microbiana del suelo, además de comprender cuál
es su importancia para nuestro programa académico.

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REFERENCIAS
López, H. OVI Microorganismos en la Agricultura. [Archivo de video]. Recuperado de
https://repository.unad.edu.co/handle/10596/10791
Madigan, M. (2015). Brock. Biología de los microorganismos (14a. ed., pp. 610-636). Pearson
Educación. Recuperado de https://247902d4-f226-46cf-9dd9-
854f2b412e78.filesusr.com/ugd/661266_096435a8aa35448d97ba6663fbaa9c9e.pdf
Madigan, M. (2015). Brock. Biología de los microorganismos (14a. ed., p. 30). Pearson
Educación. Recuperado de https://247902d4-f226-46cf-9dd9-
854f2b412e78.filesusr.com/ugd/661266_096435a8aa35448d97ba6663fbaa9c9e.pdf

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microbiología de suelo, siendo su objetivo principal el estudiar la población microscópica del

Dentro de esta ciencia encontramos la técnica de tinción de Gram, técnica implementada

se realizará la siembra de microorganismos y luego, por medio de la tinción de Gram

analizaremos a través del microscopio los resultados obtenidos de la siembra y técnicas

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formas y cuerpos comunes de diferentes microorganismos encontrados en un medio de

acuerdo a las recomendaciones dadas por la casa comercial.

- Conocer la técnica de tinción de Gram, desarrollar su proceso y aplicarlo con los

microorganismos que se desarrollaron en los medios de cultivo.

las bacterias y los hongos vistos microscópicamente y encontrados en los medios de

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1. Preparación de los medios de cultivo y agua peptonada.

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nutritivo es necesario preparar de acuerdo a la

cantidad de agua a utilizar, por lo tanto, se

tiene que, para preparar 28 gramos de agar

nutritivo, se necesita 1 litro de agua destilada,

entonces para saber qué cantidad de agar es

necesario para preparar en 0,4 litros de agua

destilada se aplicara la ley de tres de la siguiente manera:

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saber cuántos gramos de agar de

papa son necesario para 0,4 litros

de agua destilada, así que se aplica

Con los datos obtenidos, se

precipitados, la placa de calentamiento o de agitación con el fin de utilizar las cantidades

respectivas cajas de Petri.

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ml de agua, siendo necesario el uso de los implementos anteriormente utilizados, como la

debe llevarse a auto clave por 25 minutos a 121°C.

2. Aislamiento de microorganismos de muestra de suelo:

Con la muestra de suelo que se llevó al laboratorio, se realizara el siguiente

b) Agregar el gramo de tierra en una probeta y

se diluirá en 9 ml de agua peptona estéril y

será la primera muestra (1), se homogenizará

y se dejará reposar un momento para que los

sólidos se decanten. A partir de esta solución,

se realizarán dos soluciones más, donde se

pasarán 3 ml de la muestra número 1 a

otra probeta para formar la muestra 2, en

esta probeta se le agregará 3 ml más de

agua peptonada y se dejará reposar por

un momento, siendo está la muestra

número 2. Finalmente, se pasarán 3 ml de

la muestra número 2 a otra probeta y de

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igual forma que en la anterior, se

agregarán 3 ml de agua peptonada a la

tercera probeta formándose así la

muestra número 3 y se dejara reposar.

Todo este procedimiento se realiza

dentro de la cabina UV.

c) Ahora se debe realizar la siembra en los

medios de cultivo. En este momento, los