EFECTO DE LA TEMPERATURA

SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Químicas, Carrera de Bioquímica y Farmacia
Asignatura: Bioquímica I, Cuenca – Ecuador, Fecha de entrega: 03/01/2023

Resumen

En la presente practica mantuvimos los factores de la concentración de la enzima, concentración

del sustrato, pH y tiempo. Pero alteramos las temperaturas de la reacción sometiendo primero una
reacción espontánea a 0ºC, 22ºC, 50ºC y 80ºC que será el blanco, para luego someter la reacción
catalizada enzimáticamente a las mismas temperaturas. A continuación, se realizó la titulación de
las reacciones con HCl, se construyó una gráfica de micro moles de urea vs la temperatura con los
datos corregidos, observamos un descenso de la actividad enzimática ya que la concentración es
menor en las regiones donde se aleja mucho de la temperatura óptima teórica de los 50ºC,
confirmando así que la temperatura es un factor que afecta directamente a la velocidad de
reacción.

Objetivo

Demostrar el efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción catalizada por una enzima

Equipos, instrumentos y reactivos

MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS

Baño María a 0, 22, 50 y 80Cº Sol. Úrea 0.25 M
Tubos de ensayo Sol. de Ureasa
Erlenmeyer de 50 ml Buffer pH 7.2
Gradilla de tubos Sol. HgCl2 1%
Pipetas serológicas Indicador Rojo de Metilo
Bureta HCl 0.1M
Soporte de hierro
Pinza de bureta
Exposición

Sabiendo que los factores determinantes que afectan directamente a la reacción enzimática son: la
concentración de la enzima, concentración del sustrato, pH, tiempo y temperatura. Si se mantienen
constantes todos los factores a excepción de la temperatura se debe considerar el hecho que cada
enzima catalizadora de reacción tiene su temperatura optima en la cual su rendimiento es máximo,
si la temperatura varía puede ocasionar la desnaturalización de la enzima; como es el caso de
temperaturas extremas como 0º y 80º; pero si se vuelve a la temperatura óptima la enzima
regresaría a su estado original y por lo tanto su rendimiento mejoraría; pero es necesario recalcar
que cuando se aumenta la temperatura sobre los límites (dependiendo de la naturaleza de la
enzima) tiene lugar dos eventos: el primero se trata del aumento inicial de la velocidad refiriéndose
a que la enzima se activa para mejorar su rendimiento, el segundo evento es la ya conocida
desnaturalización térmica de la enzima ya que la enzima es una proteína que fácilmente se
desnaturaliza y con eso pierde su actividad. Esto se ve reflejado en la gráfica de micro moles de
enzima vs la temperatura. En cada reacción existe un coeficiente térmico Q 10 que mide la variación
de la tasa en sistemas químicos o biológicos por cada incremento de 10 grados en la temperatura.
En el caso de las reacciones enzimáticas el Q 10 es de aproximadamente 2, es decir que la
velocidad de reacción se duplica por cada 10º de temperatura aumentada. Para calcular Q 10 se
necesita la fórmula: Q 10 =¿ (Yaniel, 2010; Plumier, 1981).

Procedimientos
  Blanco

 Problemas

Tubos 1 2 3 4
Urea 0.25 M (ml) 7.5 7.5 7.5 7.5
Buffer pH 7.2 (ml) 4.5 4.5 4.5 4.5
Incubar por 5 min 0ºC 22ºC 50ºC 80ºC
Ureasa (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar por 30 min 0ºC 22ºC 50ºC 80ºC
HgCl2 (gotas) IV IV IV IV

Resultados

Elaborar un cuadro de datos, en el que consten los ml de HCl corregidos y la temperatura de

incubación

Hidrolisis Total=Hidrolisis enzimatica+ Hdrolisis espontánea

Hidrolisis enzimatica=Hidrolisis total− Hidrolisis espontánea
 N° Tubo Hidrolisis Hidrolisis Hidrolisis Micro moles Temperatura
Total Espontanea Enzimática/ml de urea de
corregidos hidrolizados incubación
1 4.4 4.3 0.1 5 0°C
2 4.5 4.4 0.1 5 22°C
3 4.6 4.4 0.2 10 50°C
4 4.4 4.3 0.1 5 80°C

Haga una gráfica con los micro moles de urea hidrolizada contra la temperatura

Micro moles de urea hidrolizados vs. Tem-

peratura
12
10
10
micro moles de urea

65 5 5

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Temperatura

Calcule Q10 para distintos intervalos de temperatura, entre 10 y 20°C, entre 20 y 30°C, entre 30
y 40°C, entre 40 y 50°C y entre 50 y 60°C.

Q 10=¿ )(10/T2-T1)=

Intervalo de temperaturas Calculo Q10:

10-20°C Q 10=¿ )(10/20-10)=1

20-30°C Q 10=¿ )(10/30-20)=1.3

30-40°C Q 10=¿ )(10/40-30)=1.23

40-50°C Q 10=¿ )(10/50-40)=1.25

50-60°C Q 10=¿ )(10/60-50)=0.8

¿A qué se debe que la curva corresponde a la de una campana asimétrica?

La curva interpreta la velocidad en la reacción enzimática, donde el punto bajo a la izquierda
corresponde a una reacción lenta debido a la baja temperatura, el pico más alto corresponde a la
temperatura óptima para la reacción y el punto bajo a la derecha corresponde a la perdida en la
actividad enzimática debido a la desnaturalización por altas temperaturas.

En relación a las reacciones catalizadas por enzimas. ¿Las velocidades de reacción son
dependientes de la temperatura?

Si puesto que a una menor temperatura la velocidad de la reacción es lenta y a una mayor
temperatura evitando la desnaturalización, la velocidad de reacción es más rápida.

A que corresponde la temperatura óptima para una enzima

Es el valor de temperatura en la que la reacción se lleva a cabo con mejor eficacia y a una óptima
velocidad.
Conclusiones y recomendaciones

De de acuerdo a la gráfica de micro moles de urea vs la temperatura observamos un descenso de

la actividad enzimática ya que la concentración es menor en las regiones donde se aleja mucho de
la temperatura óptima teórica, por eso concluimos que el rendimiento de la ureasa se ve afectada
por la temperatura de la reacción y por consiguiente la velocidad de reacción varía. Demostramos
con éxito que la temperatura afecta de manera directa a la velocidad de reacción y comprobamos
que la temperatura óptima de la ureasa es 50ºC.

Las recomendaciones para esta serían las de mantener constante la temperatura a la se debe
trabajar, los materiales de vidrio que se utilizarán en la práctica deben estar cuidadosamente
lavados y secados para que no haya interferencias en la reacción.

Bibliografía

Yaniel, D. (2010). Química Bio-Orgánica ITS Paysandú Factores que afectan la actividad
enzimática. 1–2.

Plumier David T. (1981) Bioquímica práctica Colombia: Editorial McGraw-Hill latinoamericanas S.

A.