ANALISIS CROMATOGRAFICO

Pasos para realizar un análisis cromatográfico:

- Indagar Sobre la Muestra: una idea general sobre los posibles compuestos que la constituyen, para definir si
la muestra requiere tratamiento previo para su conservación o análisis.

- Tratamiento de la Muestra: deben recibir un tratamiento preliminar que puede consistir en una separación,
desecado, pirólisis, esterificación, acilación o un silanizado, extracción en fase sólida,

- Selección de Condiciones para el Análisis. Los posibles compuestos constituyentes de la muestra, permiten
suponer: grupos funcionales presentes, polaridad, pesos moleculares, puntos de ebullición, presión de vapor;
que son propiedades necesarias para definir: tipo de columna, soporte, fase líquida estacionaria, temperatura
del inyector, temperatura de la columna, gas portador, velocidad del gas, detector, amplificación y cantidad de
muestra para realizar la primera inyección.

- Condiciones Instrumentales: calibración y operación del equipo de acuerdo con las instrucciones y normas
de seguridad recomendadas por el fabricante según la marca y modelo del cromatógrafo disponible.

- Inyección y corrida de la muestra: puede ser necesario un análisis previo para modificar las condiciones
como: temperaturas, cantidad de muestra, flujo y tipo de gas, columna, tipo de detector.

- Interpretación del cromatograma: el cromatograma depende de variables tales como: velocidad de la carta,
si se usa un registrador, amplificación, poder de resolución de la columna, cantidad de muestra inyectada,
temperatura, presión, velocidad flujo, etc.

No siempre sucede que el resultado de una primera inyección sea un cromatograma perfecto, por lo cual es
necesario interpretarlo, variar condiciones para optimizarlo y hacerlo útil para los fines analíticos. Con tal
propósito se deben considerar los siguientes factores que afectan los picos:

1. Presión del gas de arrastre: En una columna cromatográfica para gas las partículas de empaquetamiento
ofrecen una resistencia al flujo del gas de arrastre debido a la viscosidad finita del gas por lo cual hay un
gradiente de presión a lo largo de la longitud de la columna. Este gradiente no tendrá efecto sobre el volumen
de retención pero si sobre el tiempo de retención debido al hecho de que el gas es compresible por tanto la
rata volumétrica de flujo es más grande a la salida que a la entrada. Así el gradiente de velocidad es inevitable
cuando hay un gradiente de presión en la columna.

Se ha demostrado que una relación de presión muy grande entre la entrada y salida de la columna (Pi/Po)
tiene un efecto adverso en el trabajo de la columna y lo más deseable para el diseño de las columnas es que la
relación de presiones se aproxime a la unidad.

Esta es la razón por la cual las columnas trabajan mejor con presiones en exceso de atmósferas que bajo vacío.

2. Temperatura un cambio en la temperatura afecta:

a) El coeficiente de partición,
b) La rata de flujo volumétrico para una relación dada de Pi/Po,
Como resultado de estos factores, se puede demostrar que los tiempos de retención relativos son más
grandes a bajas temperaturas que a altas temperaturas y así la reducción en la temperatura aumenta la
eficiencia de la columna. Por otro lado el uso de las bajas temperaturas resulta en un tiempo de análisis mayor
y fácilmente se sobrecarga la columna, siendo necesario inyectar cantidades pequeñas de muestra.

Resumen de los factores que afectan el análisis cromatográfico

ALGUNOS PROBLEMAS ANALIZADOS

1. La figura muestra un cromatograma obtenido de una primera inyección, y la temperatura de la columna ha

sido considerablemente más alta que la temperatura ambiente. Los picos están sin resolver y aparecen en un
tiempo muy corto después de la inyección.

¿Cuál de los siguientes factores se debe cambiar en primer lugar para mejorar considerablemente la
resolución de los picos en el cromatograma?

a. Reducir la presión del gas de arrastre

b. Reducir la temperatura de la columna
c. Cambiar la fase estacionaria
d. Incrementar la longitud de la columna.
2. La figura muestra un cromatograma que se ha obtenido de una inyección

La resolución es pobre y los picos están muy confusos aunque el tiempo de análisis y los tiempos de retención
son razonables. Una causa de una resolución muy pobre es la falta de selectividad en el proceso
cromatográfico. Para mejorar la resolución en este caso, para incrementar la separación de los picos, qué seria
lo aconsejable?

a. Reducir la presión del gas de arrastre.

b. Reducir la temperatura de la columna.
c. Usar una columna con una fase estacionaria diferente.

3. Consideremos el cromatograma presentado en la figura, la resolución todavía no es suficiente para dar

completamente una separación de los dos picos mayores, un mejoramiento en la eficiencia de la columna ayudará
a este efecto. Esto se puede lograr bajando la temperatura del horno y encontrando una nueva rata de flujo de gas
por ensayo y error (haciendo ensayos de exceso y defecto en la presión del gas). Una columna más larga mejoraría
las cosas aún más. Desafortunadamente estos pasos prolongan el tiempo de análisis que de por sí ya es largo.

Para el caso en descripción, puesto que conocemos el área de cada pico que representa la cantidad de cada
componente particular en la mezcla, cuál sería una alternativa para mejorar la resolución?

a. Usar menos muestra en la inyección

b. Usar más muestra en la inyección
c. Usar una columna conteniendo menor fase estacionaria.

4. Algunas veces los picos en el primer cromatograma aparecen en forma asimétrica y también la asimetría
puede ser tal que la parte posterior del pico es más inclinada que la parte anterior.
Este tipo de asimetría resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de
asimetría pueden ser:

1. Una columna sobre cargada, la cual se puede corregir inyectando menos muestra.
2. Por descomposición térmica de la muestra en la columna.

Cómo podría rectificarse la descomposición térmica de la muestra?

a. Bajando la temperatura del horno.

b. Aumentando la rata volumétrica (velocidad de flujo) del gas de arrastre.
c. Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria.

5. La asimetría de los picos no deberá confundirse con la cola de los picos como en la figura

Esto puede interferir con el análisis, y puede con frecuencia ser eliminado por uso de un eliminador de cola, y/o
usarse una columna conteniendo más material inerte de soporte. La causa de la cola puede ser:

a. Temperatura muy alta

b. Uso de fase estacionaria incorrecta (equivocada)
c. Inyección de mucha muestra. Este tipo de asimetría resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos
platos. Otras causas de asimetría pueden ser:
d. Una columna sobrecargada, lo cual se puede corregir inyectando menos muestra.
e. Por descomposición térmica de la muestra en la columna.