FUNDACIÓN UNIVERSITARIA NAVARRA-UNINAVARRA

GUÍA PRÁCTICA DE LABORATORIO PARA SOLUCIÓN MULLIGAN

NEUROANATOMÍA

AUTORES: BARRERA SCARPETA JOSÉ MILLER, CALDERÓN GARCÍA

NORMA, DÍAZ TRUJILLO JULIÁN FELIPE, FIESCO RAMÍREZ JHON
SEBASTIÁN, NAVARRO CALDERÓN MARÍA PAULA, PIZA ÁLVAREZ ALICIA
VICTORIA, PIZO CARDONA SKARLET, PRADA GONZÁLEZ MARA PAMELA,
SANTAMARÍA MUÑOZ VALENTINA, ROA OLAYA JOSÉ RICARDO.

Introducción.
La presente guía se desarrolló con el propósito de esclarecer el procedimiento de
la solución Mulligan, como una de las técnicas neuroanatómicas más llamativas
aunque menos practicada precisamente por la escasa información que se provee
y el grado de dificultad para la consecución de algunos de los materiales. Como
pioneros en la práctica de esta solución en el departamento del Huila, se tomó la
decisión de realizar el paso a paso del desarrollo de esta tinción, que permite
diferenciar y visualizar las diferentes estructuras del encéfalo, como la sustancia
gris (predominante) que representa los somas o cuerpos neuronales -zona que
permite el paso de vías aferentes y eferentes-, y la sustancia blanca constituida
por los axones.
Instalaciones.
Para la construcción de la malla, deben buscarse espacios amplios en los cuales
se puedan unir las piezas. Por otro lado, para la realización de esta técnica, se
hace obligatoria la utilización de un laboratorio estéril, libre de microorganismos
que puedan afectar al órgano y la tinción.
Materiales.
De sustancias químicas empleadas:

Tipo de preparación Solución Mulligan

Material requerido Cantidad Imagen
Fenol en cristal. 40 gr

Sulfato de cobre 5 gr

Ácido clorhídrico 1,25 ml

Tipo de solución Cloruro férrico

Agua destilada 1000 ml
 Cloruro férrico 10 gr

Ferrocianuro de potasio 10 gr

Materiales de laboratorio:
Material Cantidades y medidas Imagen
Estufa eléctrica con 1
temperatura controlada.

Vaso precipitado de 1 1
litro.
Guantes de látex o nitrilo 6 pares (cambio para
cada lavada y disección)

Pinzas de disección PONER CANTIDAD

Bisturí para disección 1

Recipientes amplios tipo 1 para cada solución con

cubetas de plástico o 35 cm de ancho x 45 cm
bandejas de material de largo.
quirúrgico.

Rejilla para montaje de  6 palos de balso FOTO DE LA REJILLA

cortes. ( dos para el REALIZADA POR
NOSOTROS.
marco y 2 de
sostén) forrados
Nota: debe construirse en plástico.
con las mismas medidas  Malla jardinera.
de la cubeta.  Tela mosquitera
de plástico
montada en el
marco.
Cuchillo de hoja ancha y 1
borde filoso.
Guantes de caucho 2 pares

Tabla de corte 1 tabla de 20 cm x 20 cm

y 2 cm de espesor.

*Ver preparación al
terminar el presente
cuadro.
Vidrio de reloj 2

Balanza analítica 1

Termómetro 1

Ph-metro 1
 Pipeta 1

Pera 1

Mezclador de vidrio 2

Alcohol etílico 1
 *Construcción tabla de corte
Materiales Cantidad y medidas
Tabla de madera  1 tabla.
 20 cm x 20 cm y 2 cm de
espesor.
Palos de balso  2 palos de balso.
 8 mm de diámetro.
Preparación de la tabla. Los caños se fijan en dos de sus lados
y en forma paralela. Se usan para
deslizar el cuchillo en forma pareja en
el momento de hacer los cortes, y
obtener cortes de dimensiones y
superficies uniformes.

Metodología.
Paso 1 Fijación.
1. Se utiliza solución de formol al 10%,
el encéfalo debe permanecer
inmerso en ella de 2 a 3 semanas, se
aconseja colocar la solución en una
bolsa de plástico para luego
introducir el material y evitar que el
material se deforme.
2. Después de las 2 ó 3 semanas, el
encéfalo deberá mostrar una
consistencia firme que permita su
fácil manipulación. Para verificar la
correcta fijación el encéfalo deberá
haber perdido el color rojizo de los
vasos sanguíneos contenidos en la
cubierta meníngea.
Paso 2 Lavado 1
3. Luego de la fijación lavar el encéfalo
durante una (1) hora dejando correr
libremente el agua por la superficie
del órgano, y de manera manual,
eliminar los restos del formol
desprendido en el proceso.
Paso 3 Limpieza y disección
4. Retirar los restos de meninges y
vasos sanguíneos que permanecen
en el encéfalo tras su extracción.
5. La disección se realiza con un bisturí
abriendo con éste las meninges a
 nivel de los surcos y cisuras.
6. Se lavan los cortes obtenidos con
agua corriente durante 5 minutos.
7. Los restos de meninges se retiran
con mucho cuidado usando pinzas
de disección, para no dañar el tejido
nervioso en el proceso.
8. Se debe lavar frecuentemente para
evitar la desecación de la pieza y
para lograr la limpieza de la
misma.
9. Una vez finalizada la limpieza del
encéfalo se realiza una inspección
minuciosa desde una vista ventral,
lateral y dorsal.

Paso 4 Cortes
10. Una vez finalizada la limpieza se
procede a realizar los cortes usando
a tal fin la tabla preparada, y usando
un cuchillo de filo liso para evitar
dejar huellas del corte.
11. Sujetar con firmeza la pieza para
lograr cortes parejos y uniformes
evitando desgarrar las estructuras
nerviosas.
12. Los cortes se pueden realizar en un
plano frontal o coronal, sagital y
horizontal. Estos cortes se realizan
teniendo en cuenta que estructuras
se van a estudiar

Paso 5 Lavado 2
13. Lavar los cortes con agua corriente
durante 5 minutos para extraer todo
el formol y material sobrante.
Resultado de este procedimiento
Al final se obtienen 10 cortes transversales y 6 cortes coronales.

Preparación de soluciones químicas empleadas

 Tipo de solución: Solución Mulligan
Paso a paso Imagen
 Pesar únicamente el vidrio de
reloj en la balanza analítica (sin
ningún tipo de material).
 Anotar el peso, para restarlo
posteriormente al peso de los
materiales que serán utilizados
durante la práctica.
En la balanza analítica:
 Pesar 40 gr de fenol en
cristales, puestos sobre el
vidrio de reloj. (Recordar que al
peso total se le debe restar el
peso del vidrio de reloj para
obtener una mayor exactitud en
las medidas).
En la balanza analítica:

 Pesar 5 gr de sulfato de cobre.

Con la pipeta:

 Medir 1,25 ml de ácido

clorhídrico.
Con la pipeta:

 Medir 1000 ml de agua

destilada, mezclar los
materiales en el vaso
precipitado y calentar a una
temperatura de 70° c.
Tipo de solución: Cloruro férrico
En la balanza analítica y sobre un
vidrio de reloj pesar:

 10 gr de cloruro férrico.
 Diluir en 1000 ml de agua
destilada.
Tipo de solución: Ferrocianuro de potasio al 1%
En la balanza analítica y sobre un
vidrio reloj pesar:

 10 gr de ferrocianuro de
 potasio.
 Diluir en 1000 ml de agua
destilada.

Fundamentos del método de coloración

Paso a paso Imagen
1 Los cortes colocados en la rejilla
se sumergen en la solución de
Mulligan durante 4 minutos.

 Deben estar totalmente

sumergidos en la solución
y NO tomar contacto unos
con otros, con el fin de
lograr una mejor perfusión
de la solución en el
material anatómico.

 Esta solución debe estar a

70° y puede ser usada
varias veces mientras
conserve dicha
temperatura.

 En este paso es donde se

produce la tinción en sí,
permitiendo los pasos
sucesivos hacerla visible.

 El fenol (cloruro férrico), al

estar en un medio ácido
(HCL), reduce el Cu de
cúprico a cuproso,
uniéndose a grupos
aminos de las proteínas.
La especificidad de la
tinción de la sustancia gris
esta dada por su mayor
concentración proteica
respecto a la sustancia
blanca (Norton, W.T;
1981).
2 Retirar la rejilla del recipiente y
dejar escurrir la solución.
3 Lavar los cortes con agua
corriente durante 2 minutos
(contados con cronómetro), para
retirar la solución en la que
estuvieron sumergidas
previamente.
3 Colocar los cortes en la solución
de cloruro férrico durante 2
minutos (contados con
cronómetro).
 Esta solución es la que
oxida el cobre cuproso
depositado a cobre cúprico
a la vez que reduce el
hierro de férrico a ferroso.

 El cobre y el hierro se
intercambian entre sí,
quedando depositado el
hierro en lugar del cobre
(reacción de sustitución).
4 Dejar escurrir la solución y lavar
los cortes con agua corriente
durante 2 minutos (contados con
cronómetro).
5 Colocar en la solución de
ferrocianuro de potasio durante 2
minutos. En este paso los cortes
comienzan a tomar una
coloración azul que se va
intensificando con el tiempo.

 Esta reacción requiere

para producirse de
condiciones precisas de
temperatura y pH.

 La solución de
ferrocianuro de potasio
que es una sal del ácido
cianhídrico donde el
cianuro es parcialmente
saturado por el hierro.
  Aquí el ferrocianuro de
potasio se transforma en
ferrocianuro férrico al
reaccionar con el hielo
depositado en la
preparación y queda fijado
en la misma.

 Esta es la que da el color

azul intenso sobre la
sustancia gris.
6 Retirar la rejilla, dejar escurrir la
solución de los cortes y lavarlos
durante 5 minutos.
Nota: La cantidad de solución que se describe en este trabajo de investigación
está diseñada para teñir 60 cortes aproximadamente.

 Esto es así mientras las soluciones no se contaminen demasiado con el

traslado de los cortes de un recipiente a otro.

 Para ello se sugiere escurrir y lavar los cortes con abundante agua
corriente antes de transferirlos de una solución a otra.
Conservación: Una vez finalizada la tinción de las piezas, se deben envolver
por separado en tela en un recipiente con suficiente alcohol etílico, evitando de
esta manera la deformación del material.

 Las muestras se envuelven en porciones de tela de toldillo y se enumeran

en trozos de papel según el orden del corte realizado.

 Se colocan en recipientes de plástico con agua destilada y se rotula el

recipiente con la fecha del procedimiento.