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OBJETIVO:

2. COLORANTES EN BIOLOGIA

Realizar coloraciones que permitan visualizar detalles estructurales al microscopio.

GENERALIDADES:

El uso de colorantes en las observaciones microscópicas se hace indispensablemente; por

que permiten diferenciar estructuras biológicas, sin los cuales se hace muy difícil su

observación, si se tiene en cuenta que las estructuras biológicas no son coloreadas.

COLORANTE, es una sustancia que transmite su color a las estructuras con las cuales se

pone en contacto, actúan selectivamente y no se pierde al ser lavadas con agua.

CLASIFICACIÓN DE COLORANTES:

1. Naturales: De origen animal ejemplo el carmín.

orceína, azafrán, hematoxilina.

2. Artificiales:

De origen vegetal ejemplo la

a. Ácidos: Tienen afinidad por las estructuras citoplasmáticas. Son sales cuyo ácido

es coloreado y la base es incolora ejemplo eosina, Fucsina ácida etc.

b. Básicos: Tienen afinidad por estructuras nucleares. Son sales cuya base es

coloreada y el ácido incoloro, ejemplo el Azul de metileno, Hematoxilina.

c. Neutros: Son sales con ácido y base coloreados, tiñen estructuras citoplasmáticas

y nucleares, ejemplo Giemsa, Wright, Leishmans.

COLORACIÓN: Es el proceso por el cual una materia toma el color del colorante y

puede ser:

1. Simple: Hace uso de un solo colorante y se colorean sólo algunos elementos.

2. Compuesta: Se hace uso de dos colorantes, ácido y básico, que contrasten en

colorantes. Una coloración de uso frecuente es Hematoxilina-Eosina.

3. Neutra: Hace uso de colorantes neutros.

MATERIALES QUE SE REQUIEREN:

 Microscopios

Goteros y pipetas

 Láminas porta objetos (4)

Alcohol éter

 Láminas cubre objetos (4)

Hematoxilina

 Palitos de dientes

Eosina

 Lanceta hematológica

Azul de metileno

 Alcohol

Wright

 Algodón

Leishmans

 Aceite de inmersión

Agua destilada

 Safranina

PROCEDIMIENTO:

A. COLORACIÓN SIMPLE: EN MUCOSA LABIAL

1. Con un palito de dientes raspe ligeramente la parte interna del labio.

2. Divida el porta objeto en tres partes imaginariamente, extiende la mucosa obtenida

en el tercio medio de la lámina.

3. Secar el preparado al medio ambiente, o con la ayuda de un mechero.

4. Fijar la lámina con dos gotas de alcohol, durante 2 minutos.

5. Agregar dos gotas de colorante ácido o básico sobre el preparado y esperar de 2 a

3 minutos.

6.

Lavar con agua de caño, a chorro fino, hasta que ya no arrastre colorante.

7.

Secar la lámina al medio ambiente o al mechero.

8.

Observar al microscopio a 10X, 40X, y 100X.( Use aceite de inmersión )

9.

Esquemas de las observaciones.

B.

COLORACIÓN COMPUESTA: EN MUCOSA LABIAL

1.

Proceda como en el caso anterior, hasta el paso número 7.

2.

Agregar colorante de contraste ( 2 gotas durante 2 a 3 minutos )

3.

Lavar con agua de caño.

4.

Secar la lámina al mechero o al medio ambiente.

6.

Esquema de las observaciones.

C.

COLORACIÓN NEUTRA: EN EXTENSIÓN SANGUÍNEA

1.

Desinfectar con alcohol, la yema del dedo mayor.

2.

Mediante una lanceta extraiga una gota de sangre y colóquela en el extremo de un

porta objeto limpio.

3. Con la ayuda de otro porta objeto, colocado sobre la gota de sangre y con una

inclinación aproximada de 45º. Proceda a extender la sangre hacia adelante, con

movimiento continuo.

4. Secar la lámina al medio ambiente.

5. Cubrir el extendido con 2 ó 3 gotas del colorante Leishmans o Wright, durante 1 a

2 minutos.

6. Sobre la lámina con el colorante, agregar agua destilada, hasta cubrir la lámina y

esperar 7 minutos.

7. Lavar con agua de caño.

8. Secar al medio ambiente o al mechero.

9. Observar al microscopio a 40X y 100X.

10. Esquema de las observaciones.

D. COLORACIÓN DE MUESTRAS VEGETALES

1. Con la ayuda de una navaja realizar el corte transversal de un tallo de geranio, u

otra planta dicotiledónea (se deberán realizar varios cortes los que se depositan en

una placa petri con agua destilada, se realizan los cortes hasta obtener uno que sea

sumamente delgado).

2. Colocar una gota de agua sobre el portaobjeto

3. Colocar la muestra más delgada de la placa petri

4. Añadir una gota de safranina

5. Observar a 100X y a 400X

6. Esquema de las observaciones

ESQUEMAS

Granulocitos neutrófilos.

ESQUEMAS Granulocitos neutrófilos. Observaremos ahora un neutrófilo y un eosinófilo en la misma imagen (figura 9)

Observaremos ahora un neutrófilo y un eosinófilo en la misma imagen (figura 9)

neutrófilo y un eosinófilo en la misma imagen (figura 9) Ahora pasamos a ver los leucocitos

Ahora pasamos a ver los leucocitos sin gránulos. Comenzaremos con los linfocitos

(figuras 11-13).

misma imagen (figura 9) Ahora pasamos a ver los leucocitos sin gránulos. Comenzaremos con los linfocitos

Finalizaremos los agranulocitos con las imágenes de monocitos (figuras 14-16):

con las imágenes de monocitos (figuras 14-16): Un granulocito basófilo Tejidos vegetales coloreados (Haces

Un granulocito basófilo

con las imágenes de monocitos (figuras 14-16): Un granulocito basófilo Tejidos vegetales coloreados (Haces conductores)

Tejidos vegetales coloreados (Haces conductores)

con las imágenes de monocitos (figuras 14-16): Un granulocito basófilo Tejidos vegetales coloreados (Haces conductores)