UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE

Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2003

Resumen: M-016

Preparacin anatmica de encfalo bovino

con fines didcticos.
Refojos, Manuel - Morley, Gabriela - Trindade de Veglia, H. M.
Ctedra de Anatoma - Licenciatura en Enfermera - Facultad de Medicina - UNNE.
Sargento Cabral 2001 - (3400) Corrientes - Argentina.
Tel./Fax: +54 (03783) 423478
E-mail: hildatv@yahoo.com.ar
ANTECEDENTES

El propsito de ste trabajo es proporcionar preparaciones anatmicas de encfalo para el aprendizaje de las estructuras
nerviosas, que son difciles de comprender para el alumno sino cuenta con piezas anatmicas que posibiliten visualizar
lo explicado en forma terica.
Ante la escasez de material humano, se recurri a material bovino.
MATERIAL Y METODO

Encfalos bovinos frescos obtenidos en el matadero municipal inmediatamente posterior al sacrificio del animal.
Soluciones qumicas empleadas:
Solucin de Mulligan.
40gr de fenol en cristales; 5 g. de sulfato de cobre; 1,25 ml. de cido clorhdrico; 1000 ml. de agua destilada
Solucin de Cloruro frrico.
10 g. de cloruro frrico en 1000 ml. de agua destilada
Solucin de Ferrocianuro de Potasio al 1%
10 g. de ferrocianuro de potasio en 1000 ml. de agua destilada
Materiales de laboratorio:
Estufa con temperatura controlada . Vaso precipitado de 1lt. Guantes de ltex. Pinzas de diseccin. Estiletes.
Recipientes amplios tipo cubetas de plstico una para cada solucin Rejilla para montaje de cortes: construida con un
marco de cao rectangular, de aluminio forrado en plstico, y tela mosquitera de plstico montada en el marco..La
rejilla se har del mismo tamao que la cubeta.
1 cuchillo de hoja ancha y borde filoso.
Tabla de corte: Construida con una tabla de madera de 20 x 20 cm y 2 cm de espesor. Dos caos de aluminio de 8 mm.
de dimetro fijados a sta en dos de sus lados y en forma paralela . Los caos se usan para deslizar el cuchillo en forma
pareja en el momento de hacer los cortes, y obtener cortes de dimensiones y superficies uniformes.
METODOLOGIA

Este proceso se debe seguir rigurosamente.

Obtencin del material anatmico: se aconseja recurrir a un frigorfico o matadero para la obtencin de los encfalos
frescos, que no hayan sido congelados ni lesionados durante la matanza.
La extraccin del encfalo desde la cavidad craneal debe ser cuidadosa y realizarse inmediatamente despus de la
muerte del animal para minimizar los procesos de autlisis frecuentes en el sistema nervioso central.
Fijacin: Se utiliza solucin de formol al 10% , el encfalo debe permanecer inmerso en ella de 2 a 3 semanas, se
aconseja colocar la solucin en una bolsa de plstico para luego introducir el material para evitar que el material se
deforme, transcurrido el tiempo mencionado, el encfalo deber mostrar una consistencia firme que permita su fcil
manipulacin.
Para verificar la correcta fijacin el encfalo deber haber perdido el color rojizo de los vasos sanguneos contenidos en
la cubierta menngea.
Lavado: Luego de la fijacin lavar el encfalo durante seis horas dejando correr libremente el agua por la superficie del
rgano, eliminando de esa manera los restos del fijador o material desprendido en el proceso.
Limpieza y diseccin: Consiste en retirar los restos de meninges y vasos sanguneos que permanecen en el encfalo tras
su extraccin. La diseccin se realiza con un estilete abriendo con ste las meninges a nivel de los surcos y cisuras. Se
lavan los cortes obtenidos con agua corriente durante 5 minutos. Los restos de meninges se retiran con mucho cuidado
usando pinzas de diseccin, para no daar el tejido nervioso en el proceso. Se debe lavar frecuentemente para evitar la
desecacin de la pieza y para lograr la limpieza de la misma.
Una vez finalizada la limpieza del encfalo se realiza una inspeccin minuciosa desde una vista ventral , lateral y dorsal.

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Cortes: una vez finalizada la limpieza se procede a realizar los cortes usando a tal fin la tabla preparada, y usando un
cuchillo de filo liso para evitar dejar huellas del corte. Sujetar con firmeza la pieza para lograr cortes parejos y
uniformes evitando desgarrar las estructuras nerviosas.
Los cortes se pueden realizar en un plano frontal o coronal, sagital y horizontal.
Estos cortes se realizan teniendo en cuenta que estructuras se van a estudiar.
Lavado. Se lavan los cortes con agua corriente durante 5 minutos para extraer todo el formol y material sobrante.
Tcnica de Mulligan: La importancia de esta tcnica para el estudio del sistema nervioso central radica en la
posibilidad de diferenciar las estructuras enceflicas en forma macroscpica, de manera que permita apreciar su
anatoma en toda su dimensin. La afinidad de la solucin de Mulligan por las protenas de la sustancia gris permite,
junto con la de otras soluciones, teir de azul intenso (Prusian Blue) dicha sustancia y as diferenciarla de la sustancia
blanca.
Fundamentos del mtodo de coloracin:
Esta basado en una serie de reacciones qumicas que producen los elementos que constituyen la solucin de Mulligan.
El primer paso consiste en sumergir la preparacin en una solucin de Mulligan calentada a 70 . En esta solucin el
fenol, actuando como mordiente, en un medio cido ( por el HCl ) reducir el Cu de cprico a cuproso, permitiendo la
unin del cobre cuproso a los grupos aminos de las protenas. La especificidad de la tincin por la sustancia gris estara
dada por la mayor concentracin proteica de la sustancia gris con respecto de la blanca ( Norton, W.T; 1981). Esta
reaccin requiere para producirse de condiciones precisas de temperatura y pH. En este paso es donde se produce la
tincin en s, permitiendo los pasos sucesivos hacerla visible.
Los cortes impregnados con la solucin de Mulligan se llevan a una solucin de cloruro frrico, la cual oxida el cobre
cuproso depositado a cobre cprico a la vez que reduce el hierro de frrico a ferroso. El cobre y el hierro se
intercambian entre s, quedando depositado el hierro en lugar del cobre. ( reaccin de sustitucin)
El siguiente paso, es llevar los cortes a una solucin de ferrocianuro de potasio que es una sal del cido cianhdrico
donde el cianuro ha sido parcialmente saturado por el hierro. El ferrocianuro de potasio se transforma entonces en
ferrocianuro frrico al reaccionar con el hierro depositado en la preparacin y queda fijado en la misma. Esta sustancia
da un color azul intenso en los sitios en que se ha depositado (sustancia gris).
Tcnica del Mtodo de coloracin: Consiste en una serie de pasos en los que el material anatmico ser sumergido en
distintas soluciones contenidas en diferentes recipientes, respetando una secuencia que se detalla a continuacin
1 los cortes colocados en la rejilla se sumergen en la solucin de Mulligan durante 4 minutos. Deben estar totalmente
sumergidos en la solucin y no tomar contacto unos con otros, con el fin de lograr una mejor perfusin de la solucin en
el material anatmico. Esta solucin debe estar a 70 y puede ser usada varias veces mientras conserve dicha
temperatura.
2 retirar la rejilla del recipiente y dejar escurrir la solucin. Lavar los cortes con agua corriente durante 2 minutos, de
manera de retirar la solucin en la que estuvieron sumergidas previamente.
3 Colocar los cortes en la solucin de cloruro frrico durante 2 minutos.
4 Dejar escurrir la solucin y lavar los cortes con agua corriente durante 2 minutos.
5 Colocar en la solucin de ferrocianuro de potasio durante 2 minutos. En este paso los cortes comienzan a tomar una
coloracin azul que se va intensificando con el tiempo.
6 Retirar la rejilla, dejar escurrir la solucin de los cortes y lavarlos durante 5 minutos.
Nota: La cantidad de solucin que se describe en este trabajo es apta para teir 60 cortes aproximadamente. Esto es as
mientras las soluciones no se contaminen demasiado con el traslado de los cortes de un recipiente a otro. Para ello se
sugiere escurrir y lavar los cortes con abundante agua corriente antes de transferirlos de una solucin a otra.
Conservacin: Una vez finalizada la tincin de las piezas, se conservan en alcohol etlico. Se deben envolver las piezas
en telas y luego embeber las mismas con el conservante, evitando de esta manera la deformacin del material.
RESULTADOS

Una vez concluidos todos los pasos explicados en la tcnica se obtienen los cortes con la sustancia gris de color azul y
la sustancia blanca de color blanco, lo que nos permite estudiar las estructuras enceflicas y reconocerlas fcilmente
Es necesario destacar que la tincin se realiza superficialmente, de manera que se deben realizar cortes numerosos para
apreciar la tincin ya que si se intentara disecar despus de teidas las estructuras se obtendra un tejido sin teir por
debajo de la superficie.
DISCUSION

La tcnica empleada es algo complicada, los pasos a seguir tienen que ser rigurosamente respetados para obtener el
resultado deseado, de otra manera no se lo obtiene.
Tambin los materiales a utilizar en las soluciones deben ser puros y no estar contaminados porque de o sino los
resultados obtenidos varan, logrando otra cosa
La ventaja de contar con cortes seriados de piezas teidas radica en la posibilidad de seguir las relaciones de cada una
de las estructuras con facilidad, y comprender as mejor su forma y ubicacin dentro del encfalo.

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CONCLUSIONES

El material obtenido es util para la enseanza dado que facilita el reconocimiento de las estructuras enceflicas

La sustancia gris es reconocida por su color azulado.

El encfalo bovino utilizado es de fcil obtencin

Los elementos qumicos necesarios para desarrollar esta tcnica son accesibles y no son peligrosos.

BIBLIOGRAFIA

Oackley Bruce, Schafer Rollei Experimental neurobiology: a Laboratory Manual The University of Michigan
Press 1978

Skinner James Neurociencia : Manual de Laboratorio Editorial Trillas Mxico 1983.

Norton WT, Formation, Struture and biochemistry of myelin en George Siegel et al Basic Neurochemistry.
American Society for Neurochemistry 1981.

Kappers Arin , Huber GC, Crosby EC The comparative Anatomy of the nervous System of Vertebrates ,
including man New York Hafner Publishing Co. 1960

Ctedra de Anatoma Humana Facultad de Medicina U.N.T.