EXTRACCIÓN DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES

Materiales: una fruta como manzana, plátano o una verdura como zanahoria,
papa, cebolla, brócoli, etc.

Preparación del tampón con anterioridad:

240 mL de agua

3 g de sal común

10 g de bicarbonato de sodio

10 mL de jabón líquido o shampoo

Enfriar a 0° C. El tampón contiene una concentración muy alta de iones que

permite romper las membranas de las células y del núcleo.

Preparación del material bilógico, mejor en frio. Se trocean las verduras o frutas,
se les añade un poco de agua bien fría y a continuación se trituran utilizando una
licuadora. Para triturarlo se dan 3 pulsos de 10 segundos cada uno, si es posible
hacerlo en frio. Lo que hacemos es romper las membranas de muchas células con
lo que liberamos su contenido (orgánulos, núcleos, proteínas, ADN, ARN…) y se
cuela con un colador.

Mezcla del “puré” con el tampón frio.

Se cogen 5 mL del triturado y se depositan en un tubo de ensaye 18 x 150. A

continuación, se le añaden 10 mL del tampón frio. Se agita vigorosamente durante
2 minutos en el vórtex. Al mezclar el “puré” con el tampón conseguimos que se
rompan las membranas de las células y los núcleos sin que se estropee el ADN
que queremos obtener. Además, el detergente que lleva el tampón ayuda a
terminar de romper las membranas de los núcleos celulares en los que se
encuentra el ADN y se eliminan proteínas que se encuentran protegiendo el ADN.

Centrifugación por 5 minutos. El contenido del tubo de ensayo se separa en los

dos tubos de ensayo 13 x 100 de manera que los dos tengan la misma masa. A
continuación estos tubos se ponen en la centrifuga durante 5 minutos. Con la
centrifugación se separan los materiales más grandes, como células enteras,
membranas, grandes orgánulos (se quedan en el fondo del tubo) y los materiales
más pequeños como proteínas, pequeños orgánulos, ADN, ARN (se quedan en el
líquido sobrenadante). Recoger el sobrenadante. Tras la centrifugación se recoge
el sobrenadante (con cuidado de no coger el precipitado) de cada uno de los tubos
de ensayo; para ello nos ayudamos de una pipeta Pasteur. Este sobrenadante lo
pondremos en un tubo de 18 x 150. Añadir 3 mL de alcohol isopropílico frio.

Se añaden sobre la muestra con mucho cuidado: para ello se va dejando caer el
alcohol isopropílico sobre las paredes del tubo de ensaye. Esto hace que el ADN
precipite en la interfase propanol-agua, mientras que el resto de los materiales se
quedan en el fondo.

Tras añadir el alcohol isopropílico en la muestra han quedado dos fases, una
superior (contiene el alcohol) y la otra inferior (buffer/agua). Después se añaden 2
gotas de azul de metileno al tubo de ensaye.

El ADN teñido se puede observar en la interfase entre el alcohol isopropílico y el

resto de la muestra.

En los laboratorios de biología molecular se añadiría una enzima que destruye el

ARN de modo que sólo obtuviéramos ADN. El método que hemos utilizado para
extraer el ADN no es todo lo eficiente que quisiéramos, con lo que en la muestra
todavía queda ARN sin extraer

NOTA: A pesar de que no es mucha la eficiencia del método que hemos usado es
posible utilizar el ADN obtenido para realizar otros experimentos.

Bibliografía.

Carlson, S. (1998). Deshilando el tejido de la vida. Investigación y Ciencia. 266,

84-85.

Para más información:

http://learn.genetics.utah.edu/es/extraction/

http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_cie
ncia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm

http://www.edvotek.com/

web2.thesphere.com/SAS/WebX.cgi