ENZIMAS

El centro activo comprende:

• Un sitio de unión formado
por los aminoácidos que
están en contacto directo
con el sustrato
• Un sitio catalítico, formado
por los aminoácidos
directamente implicados en
el mecanismo de la
reacción.
• Formación de producto.

1.- El enzima y su 2.- Unión al centro 3.- Formación de

sustrato activo productos
 Un catalizador acelera la
reacción al disminuir la
energía de activación.

E+S ES E+P
Algunas enzimas actúan con la ayuda
de estructuras no proteicas:

• Cofactor. Cuando se trata de

iones o moléculas inorgánicas.

• Coenzima. Cuando es una

molécula orgánica.

Muchas vitaminas funcionan como

coenzimas; y realmente las
deficiencias producidas por la falta
de vitaminas responde más bien a
que no se puede sintetizar un
determinado enzima en el que la
vitamina es el coenzima.
 Reacciones espontáneas

Na O2 O2
H2 O2 O2

O2 O2
O2
H2O

Na + 2H2O 2NaOH + H2 (C6H1206)n+ 6O2 6CO2+ 6H2O

DG = Negativo DG = Negativo
A B + C A----B----C*
A + B C

ABC *

Ea

AB + C DG

A + BC
C u r s o d e la r e a c c ió n
 COMPARACIÓN DE LA
ENERGÍA DE ACTIVACIÓN

Ea

Na + H2O
_______ Ea

NaOH + H2
________ _______
(C H 0 ) + O
6 12 6 n 2

Curso de la reacción
________
CO + H O
2 2

Curso de la reacción
 TRANSFORMACIÓN DE
ACETALDEHÍDO EN ETANOL

H+
NADH NAD+
O
H OH
C C
H CH3 H CH3

Acetaldehído Etanol
 Transformación de acetaldehído en etanol:
necesita la presencia de un catalizador

Zn+2
Zn+2 Zn+2

O H - +
O H H OH
NADH
C NAD+ C NAD+ C
H CH3 H CH3 H CH3
ALCOHOL DESHIDROGENASA
 En la industria de alimentos

 En la industria de limpiadores

 En Medicina

 En Investigación
Sustratos y Productos

H+
NADH NAD+
O
H OH
C C
H CH3 H CH3

Acetaldehído Etanol
SITIO ACTIVO
ESPECIFICIDAD ENZIMÁTICA
ESTEREOESPECIFICIDAD

O O-
O O-
C
C
L a c ta to d e s h i d r o g e n a s a
HO C H
C O
C H3
C H3
L - L a c ta to P i r u v a to

O O-
C

H C OH N o re a c c io n a

C H3
D - L a c ta to
 NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE
LAS ENZIMAS

1. Oxido-reductasas
2. Tranferasas
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
http://www.expasy.ch/enzyme
6. Ligasas

ATP + D-Glucosa ADP + D-Glucosa 6-fosfato

ATP:glucosa fosfotransferasa
Hexoquinasa
 1. OXIDO-REDUCTASAS
Participan en reacciones de oxido-reducción, es decir en
aquellas reacciones en las que se presenta transferencia de
electrones.

R CH2 CH2 CH2 C S CoA

FAD

FADH2
O

R CH2 CH CH C S CoA
 2. TRANSFERASAS:
Transfieren grupos funcionales como grupos fosfato,glucosilo,
aldehídicos o cetónicos, acilos, de un átomo de carbono.

ADP
H2C OH ATP H2C OH

HC OH HC OH
Glicerol
quinasa
H2C OH H2C OPO32-

Glicerol Glicerol 3-fosfato

 3. HIDROLASAS:
Catalizan reacciones de hidrólisis, es decir, rompimiento de
enlaces con adición de una molécula de H2O.
NA G NA M NAG NAM
CH2 O H
CH2 O H
o CH2 O H
o o CH2 O H
OH o
O OR
O O H
O OR
H N H H N H H
N H H N H
O C
O C
O C
O C
CH2
CH2
CH2 R = H2C C H
CH2

H2 O CO O

NAG NA M NAG NAM

CH2 O H CH2 O H
o CH2 O H CH2 O H
o OH o
OH o
O OR OH
HO O OR
H
H H
N H H N H
N H H
N H
O C O C
O C O C
CH2 CH2
CH2 CH2
 4. LIASAS:

Intervienen en reacciones en las que existe adición de grupos a dobles

enlaces, o formación de dobles enlaces por remoción de grupos.

R CH2 CH CH C S CoA

H2O

H O

R CH2 CH CH C S CoA

OH
 5. ISOMERASAS:

Catalizan la transferencia de grupos dentro de las moléculas,

para producir isómeros.

R CH2 CH CH CH2 C S CoA

R CH2 CH2 CH CH C S CoA

 6. LIGASAS:

Catalizan reacciones de condensación acopladas al

rompimiento de ATP.

O O
O
CH3 C S CoA + ATP + HCO3- C CH2 C S CoA + ADP + Pi + H+
O
 LACTOSA COMO ÚNICA FUENTE DE
CARBONO EN BACTERIAS

Lactosa = Glucosa-Galactosa

b- Galactosidasa
Lactosa Glucosa + Galactosa

Cepa A Cepa B Mutante

 Determinación experimental de
los Parámetros Cinéticos de una enzima

¿Cuál es la velocidad con la cuál la b –

galactosidasa cataliza la hidrólisis de la Lactosa?

Enzima Enzima
S S P
pH óptimo
Temperatura óptima

• Medición de la velocidad de:

Aparición de P

• Medición de la velocidad de:

Solución
Disminución de S
Amortiguadora
 Determinación experimental de
los Parámetros Cinéticos de una enzima

b- galactosidasa
Lactosa Glucosa + Galactosa
Incoloro Incoloro Incoloro

b– galactosidasa
ONP-Galactosa ONP + Galactosa
Incoloro Amarillo Incoloro

ONP: o-Nitro fenol

 Determinación experimental de
los Parámetros Cinéticos de una enzima

S E

0.0’ 0.5’ 1.0’ 1.5’

S: ONP- Galactosa E: b- Galactosidasa P: ONP
 Determinación experimental de
los Parámetros Cinéticos de una enzima

S E Tiempo Para [S]= 2mM

(minutos) [P] M

0,0 0,0
P 0,5 2,0
1,0 3,9
1,5 5,6
CONCENTRACIÓN DE ENZIMA CONSTANTE
 d[S] d[P]
V 
dt dt
S E Tiempo Para [S]= 2mM
(minutos) [P] M

0,0 0,0
P 0,5 2,0
1,0 3,9
1,5 5,6

Tiempo Para [S]= 4mM

E
S
(minutos) [P] M

0,0 0,0
0,5 3,5
P
1,0 7,2
1,5 10,5
S E Tiempo Para [S]= 2mM
(minutos) [P] M

0,0 0,0
0,5 2,0
P 1,0 3,9
1,5 5,6

S E Tiempo Para [S]= 4mM

(minutos) [P] M

0,0 0,0
0,5 3,5
P
1,0 7,2
1,5 10,5
S E
Tiempo Para [S]= 6mM
(minutos) [P] M

0,0 0,0
0,5 6,0
P
1,0 12,1
1,5 18,0
CURVA DE PROGRESO

[S] = 6mM
[P]
[S] = 4mM
[S] = 2mM

Tiempo
 Tiempo Para [S]= 2mM V eloc idad
(minutos ) [P] M inic ial
M/minuto
0,0 0,0 4,0
0,5 2,0
1,0 3,9
1,5

Tiempo
5,6

Para [S]= 4mM V eloc idad

[S] Velocidad
(minutos ) [P] M inic ial

0,0 0,0
M/minuto
7,0
mM inicial
M/minuto
0,5 3,5
1,0 7,2
1,5 10,5

2,0 4,0
Tiempo Para [S]= 6mM V eloc idad
(minutos ) [P] M inic ial
M/minuto
0,0 0,0 12,0
0,5
1,0
1,5
6,0
12,1
18,0
4,0 7,0
Tiempo
(minutos )
Para [S]= 8mM
[P] M
V eloc idad
inic ial
6,0 12,0
M/minuto
0,0
0,5
1,0
0,0
9,5
18,7
19,0
8,0 19,0
1,5

Tiempo
27,3

Para [S]=10mM V eloc idad

10,0 26,0
(minutos ) [P] M inic ial
M/minuto
0,0 0,0 26,0
0,5 13,0
1,0 25,9
1,5 38,5
 k 1 k 3
E + S E S E + P
k 2
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

V max[S]
Vo 
Km [S]
Cuando Vo = 1/2Vmax, Km = [S]

Km es la [S] a la cuál la enzima cataliza la

reacción a la mitad de la Vmax.

Km es un indicador de la afinidad de una

Enzima por su sustrato.
 Km es un indicador de la
afinidad de una Enzima por su
sustrato

Enzima A Enzima B

Vmax = 100 mM/minuto Vmax = 100 mM/munito

Km = 40 mM/minuto Km = 60 mM/minuto
 Transformación de la ecuación de
Michaelis- Menten en la ecuación de los
dobles recíprocos

1 Km 1 1
 
Vo V max [ S ] V max

y = mx + b
ECUACIÓN DE LOS DOBLES RECÍPROCOS
INHIBICIÓN NO
COMPETITIVA
 INHIBICIÓN
COMPETITIVA
 INHIBICIÓN
ACOMPETITIVA
INHIBICIÓN
ALOSTERICA
 Enzimas Alostéricas:
Otro sitio de unión

V0

[S]
 TAREA:
ENZIMA
Completar
SINTESIS FUNCIÓN
el siguiente
REACCIÓN
VALORES cuadro
ENFERMEDAD
ASOCIADA
NORMALES

Aspartato
aminotransferasa
Alalina
aminotransferasa
Alfa- Amilasa
Creatin
fosfoquinasa
(CPK)
Fosfatasa ácida
(ACP)
Fosfatasa alcalina
(ALP)
Gama glutamil
transpeptidasa
(GGT)
Lactato
deshidrogenasa
(LDH)
5’ nucleotidasa
(NTP)
CINETICA ENZIMATICA

[ET] = [E] + [ES]

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

• A concentraciones de sustrato pequeñas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM)
[S], resultando un proceso cinético de primer orden.

• A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La

velocidad de reacción es independiente de la concentración del sustrato, y
por tanto, la reacción es un proceso cinético de orden cero.

• Tanto k3 como [ET] son constantes, y permite definir la velocidad

máxima de la reacción (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que
se alcanzaría cuando todo la enzima disponible se encuentra unido al
sustrato.
La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-
Menten es una hipérbola.
La Vmax corresponde al valor máximo al que tiende la curva
experimental, y la KM corresponde a la concentración de
sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la
Vmax.
• Es la concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción
es la mitad de la velocidad máxima.

• El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A

menor KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM,
menor afinidad.

Así, si KM es grande, el complejo ES es inestable y predomina la tendencia a

destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si KM es pequeña, el complejo
ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia
el sustrato).

• La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos análogos.

Si dos sustratos de la misma enzima tienen distinta KM, el que presente
mayor KM tiene menor afinidad por el enzima, y la reacción transcurre
siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor KM, salvo a
concentraciones saturantes de sustrato, donde la v = Vmax.

• Los valores de KM de muchos enzimas son próximos a los de la

concentración fisiológica de sus sustratos, de forma que pequeñas
variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de
toda una ruta metabólica.
1. Efecto del pH. Al comprobar experimentalmente la influencia del pH en
la velocidad de las reacciones enzimáticas se obtienen curvas que
indican que los enzimas presentan un pH óptimo de actividad.

El centro activo puede contener aminoácidos con grupos ionizados que

pueden variar con el pH. La ionización de aminoácidos que no están en
el centro activo puede provocar modicaciones en la conformación de la
enzima. El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.
2. EFECTO DE TEMPERATURA: En general, los aumentos de temperatura
aceleran las reacciones químicas: por cada 10ºC de incremento, la velocidad
de reacción se duplica.
Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin
embargo, al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor.
La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama
temperatura óptima.